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血清质谱结合多反应监测方法应用于慢性乙肝肝纤维化分期相关小分子蛋白标志物的筛选
目的 通过血清蛋白组学方法,筛选慢性乙肝肝纤维化的血清诊断标志物.方法 建立126例慢性乙肝患者的前瞻性临床队列,行肝活检确定组织纤维化程度(Scheuer病理学分期S0-S4)并留取血清标本.应用二维凝胶电泳(2-DE)分离20例轻度肝纤维化患者(S0-S1)和20例重度肝纤维化患者(S3-S4)血清蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白;质谱多反应(MRM)定量检测86例不同肝纤维化程度患者(S0-S4)的差异蛋白分子解离产生的肽离子对的峰面积总和比(SPAR)数值.结果 2-DE筛选出7个差异表达蛋白(质谱峰m/z＜ 800),由MRM定量检测它们解离的14个肽离子对.计算肽离子对的SPAR值,行组间统计学分析,仅差异蛋白1、4、8(血清转铁蛋白载脂蛋白,补体C3c和转铁蛋白)产生的离子对在S1-S4组比S0组的差异具有统计学意义(P＜0.05).3个差异蛋白的肽离子对建立的诊断模型在区分显著肝纤维化S2-S4和轻度肝纤维化S0-S1时的受试者工作特征曲线下面积(AU-ROC)值范围是0.801～0.827.此方法建立的诊断模型在预测显著肝纤维化的诊断效力与APRI、FIB-4和Forn's指数比较,具有相似的高敏感性和特异性.结论 血清蛋白组学的质谱结合多反应监测方法筛选和验证血清小分子蛋白:血清转铁蛋白载脂蛋白、补体C3c和转铁蛋白可以初步诊断慢性乙肝患者的肝纤维化程度.
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miRNA-93在PCOS大鼠血清中的表达
目的 运用脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型,研究模型大鼠的生殖表型和代谢表型.通过检测多囊卵巢综合征大鼠血清中miRNA-93及血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达水平,探讨循环miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS发生发展过程中的作用机理与诊断价值意义.方法 选取3～4周龄雌性(SD)大鼠40只,随机分为观察组和对照组,每组20只,观察组每日每100 g体质量颈背部皮下注射DHEA 6mg;对照组每日颈背部皮下注射0.2 mL注射油剂.28 d后观察两组大鼠动情周期、卵巢形态学、性激素、体质量、卵巢体积、OGTT血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血脂等代谢相关指标的变化.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测大鼠血清中miRNA-93的表达量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中VEGFA的表达.结果 观察组大鼠失去规律的动情周期,卵巢体积增大,呈多囊样变,血清FSH、T、LH升高,糖耐量异常,空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数明显高于对照组,血清胆固醇、甘油三酯高于对照组.RT-PCR、ELISA等实验结果显示miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS大鼠模型的血清中表达显著升高(P＜0.05).结论 DHEA可诱导SD大鼠出现与PCOS患者相似的生殖和代谢异常的改变,是研究多囊卵巢综合征生殖及代谢异常的较理想的动物模型.miRNA-93在PCOS大鼠模型血清中高表达,可能通过调控其靶基因VEGFA在PCOS发生发展中起重要作用,在PCOS诊断中循环miRNA-93可以作为一种新型非侵入性诊断标志物.
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胆管癌分子生物学的研究现状及其意义
近年来,胆管癌的发病率有明显增高的趋向,手术切除被认为是治疗胆管癌为有效的方法.但由于其解剖部位特殊、起病隐匿、缺乏有效的早期诊断标志物,确诊时多已是中、晚期,失去了根治性切除的机会,故预后极差.随着蛋白组学、生物芯片和纳米技术等的广泛应用,胆管癌基础研究的范围也逐渐扩大.以下就胆管癌当前的研究现状及其意义作一简要的介绍.
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miR-221在胰管内乳头状黏液性肿瘤患者血浆中的表达及其意义
已有研究证实微小RNA( miRNA)在人类肿瘤中表达异常,其中miR-221在结直肠癌中表达显著增高,可能作为肿瘤标志物[1].我们采用定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胰管内乳头黏液性肿瘤(IPMN)和胰腺导管腺癌患者血浆中miR-221的表达,探讨其作为IPMN诊断标志物的可能性.
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血清AFP、AFU、5'NPD-V联合检测对原发性肝癌诊断价值研究
血清甲胎蛋白(AFP)是诊断原发性肝癌(PHC)常用的肿瘤标志物,以AFP＞400 ug/L为诊断肝癌临界值,其假阳性率为43%[1].为了提高PHC诊断率,对200例PHC进行AFP、α-L岩藻糖苷糖(AFU)、5'核苷酸磷酸二酯酶同工酶V(5'NPD-V)三者联合检测对PHC的诊断标志物进行探讨,以提高血清检测对PHC的诊断价值.
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WISP1基因多态性与肺癌易感性及铂类药物化疗敏感性的关系
Wnt诱导信号通路蛋白1（Wnt inducible signaling pathway protein 1, WISP1）是生长因子CCN家族的成员。前期研究发现WISP1基因多态性与多种肺疾病的发生发展相关，包括哮喘、急性肺损伤等。本研究旨在探索WISP1基因多态性是否与肺癌易感性及肺癌铂类药物化疗敏感性相关。我们在中南大学湘雅医院收集了325例肺癌患者及254例健康对照血样。根据实体瘤化疗敏感性评价指南(RECIST)筛选出118例化疗敏感和174例化疗耐药的患者。所有血液样本均用Promega公司生产的基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。我们根据以下原则挑选了47个候选单核苷酸多态性位点（single nucleotide p olymorphism, SNP）：(1)在中国人群中小等位基因频率（Minor Allele Frequency, MAF）不小于5％；(2)基因区域的标签SNP；(3)位于启动子、3’非翻译区（UTR）和外显子区的SNPs。基因区域的标签SNPs（r2≥0.8）运用Haploview 4.2软件来挑选，所有SNPs都通过飞行质谱（sequenom）方法进行分型。所有SNP位点都进行Hardy-Weinberg平衡检验，并通过非条件Logistic回归计算OR值来评价多态与肺癌易感性及化疗敏感性的关系。OR值的计算校正了以下因素：年龄、性别、吸烟状况、肿瘤病理类型、肿瘤分级和化疗方案，并且运用Bonferroni校正法进行多重检验校正。所有统计分析采用SPSS 13.0和PLINK 1.07软件完成。经统计学分析，我们发现rs2977549与非小细胞肺癌患者化疗敏感性显著相关（P≤0.001），并且与小细胞肺癌患者化疗敏感性（P=0.017）及肺癌易感性（P=0.026）也具有相关性，但后两者经校正后差异无统计学意义。因此，我们认为WISP1 rs2977549有可能是非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的一个诊断标志物。
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外泌体来源的分子诊断标志物在癌症检测中的研究进展
外泌体是一种大小约30～100 nm的膜性小囊泡,包含多种蛋白质、脂质、信使RNA(mRNA)和微小RNA(microRNA)等.外泌体作为细胞间交流的媒介在一些重要的生物学进程上具有重要的作用,同时外泌体在癌症的发生发展过程中也发挥着重要的调控作用.由于外泌体携带有来源细胞特异的蛋白质、mRNA和microRNA等成分,这些遗传信息能够反映癌症细胞遗传或信号改变,因此外泌体在癌症早期检测和预后检测方面大有可为.目前已发现多个肿瘤细胞外泌体来源的蛋白质和microRNA可以作为癌症诊断标志物.笔者对外泌体来源的分子诊断标志物在癌症检测和治疗中的研究进展进行综述.
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纤维支气管镜活检组织 Musashi2基因的检测对肺癌的诊断价值
目的：探讨纤维支气管镜（纤支镜）活检组织标本中干细胞标志物Musashi2 mRNA的检测在肺癌中的诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测112例肺癌患者和18例良性肺疾病患者纤支镜活检标本中Mu-sashi2 mRNA的表达水平，并分析其在肺癌诊断中的潜在价值。结果 Musashi2 mRNA在肺癌组织中的表达量显著高于非癌肺组织（ P＜0.05）。 ROC曲线下面积为0.759，临界值取0.596时，其敏感度和特异度分别为73.2％和77.8％。即使纤支镜活检组织病理检查未找到癌细胞，Musashi2 mRNA的诊断敏感度仍有69.2％。结论纤支镜活检组织标本Musashi2 mRNA可能是肺癌诊断的有效指标。
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循环microRNAs作为心肌梗死特异性标记物的研究进展
microRNAs(miRNAs)是一种在进化上高度保守的非编码小分子单链RNA分子,调节细胞的生长、发育、分化及凋亡,对于维持内环境稳态起着重要作用[1].近年来,在人血浆/血清中检测到稳定性良好的miRNAs称之为循环miRNAs,它在正常人和各种疾病患者体内的表达谱存在明显的差异,因此很可能成为多种疾病的新型诊断标志物.鉴于急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)起病急,发病率高等特点,控制AMI的发生发展,更需要早预防,早诊断,以及科学地评估预后等多个环节探索研究.因此,深入研究AMI新的高灵敏度、特异度的实验室标记物不仅具有学术价值,更具有应用前景.现就循环miRNAs作为心肌梗死后特异性标记物的相关研究作如下综述.
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血清外泌体miR-21在肺癌中的表达水平及其诊断效能
目的 探索外泌体miR-21在肺癌患者血清中的表达水平及诊断效能.方法 收集南方医院肺癌患者94例,肺结核患者29例,健康对照26例.纯化鉴定血清外泌体,提取miRNA,进行RT-PCR,比较各组间miR-21表达水平.利用ROC曲线评价外泌体miR-21诊断效能.结果 纯化样品具备已有报道的外泌体的典型特征.外泌体miR-21表达水平在肺癌、肺结核、健康对照3组间存在显著性差异;外泌体miR-21在肺癌组中显著升高,肺结核组显著降低.肺癌组中,早、晚期肺癌患者外泌体miR-21与健康对照间均存在显著性差异.外泌体miR-21的ROC曲线的曲线下面积为0.702,且具有较好的特异性.结论 血清外泌体miR-21具有较高的诊断效能,有望作为诊断标志物,辅助肺癌临床诊断.
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miR-4770作为结直肠癌的诊断标志物研究
目的：从微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱中筛选出具有结直肠癌诊断潜能的miRNA。方法：通过实时荧光定量 PCR 阵列法检测结直肠癌组织和癌旁组织 miRNA 表达水平，筛选具有统计学意义的miRNA。通过受试者特征曲线分析 miR-4770诊断结直肠癌的特异性与敏感性。结果：从结直肠癌样本中筛选出差异具有统计学意义的miRNA共102个，其中92个下调，10个上调。 miR-4770对结直肠癌的诊断特异性是71．43％，敏感性为95．24％，曲线下面积为0．9524。结论：miR-4770具有结直肠癌筛查和提示预后的潜能。
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Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义
目的：探讨Nanog 和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化检测50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织中Nanog和CD44蛋白的表达，并分析二者与肺癌临床病理因素的关系。结果：Nanog 在肺癌中的表达显著高于良性病变肺组织和正常肺组织（P＜0．05）；CD44在肺癌、良性病变肺组织和正常肺组织中的表达无统计学差异（P＞0．05）；Nanog 和CD44在肺鳞癌中的表达显著高于肺腺癌和小细胞肺癌（P＜0．05）；Nanog 和CD44在肺癌中的表达与淋巴结转移相关（P＜0．05），与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期和肿瘤分化无关（P＞0．05）。 Nanog 和CD44在肺癌中的表达呈正相关（r＝0．564，P＜0．05）。结论：Nanog和CD44蛋白可能共同参与了肺癌的发生发展，Nanog蛋白是一潜在的肺癌诊断标志物及治疗靶点。
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使用三合一心梗快速诊断法在心肌梗死早期诊断中的意义
急性心肌梗死(AMI)早期诊断标志物的检测,越来越受到临床医生的重视,在早期诊断AMI病人过程中,肌红蛋白(Mb)和肌磷酸激酶同工酶(CKMB)敏感性较高,但特异性较低,肌钙蛋白I(cTnI)特异性高为1.0,早期其敏感性较低为0.769[1].因此,我们开展了三合一心梗快速诊断这一实验项目,并结合其检测结果探讨它在早期诊断AMI的意义.
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血清外泌体miRNA-193b诊断阿尔茨海默病的价值
目的 探讨血清外泌体miR-193b在阿尔茨海默病(AD)早期诊断的应用价值.方法 以2015年9月至2016年8月就诊于首都医科大学宣武医院的患者为研究对象,使用荧光定量PCR法检测主观认知障碍(SCD)、轻度认知障碍(MCI)、痴呆期(DAT)患者及正常对照组血清外泌体miR-193b水平并进行组间比较,用ROC曲线来评价分析miR-193b对SCD的诊断能力.结果 SCD、MCI和DAT患者血清外泌体内miR-193b水平均低于对照组,且DAT组低于MCI组,MCI组低于SCD组,差异有统计学意义(P<0.05).诊断SCD时,AUC为0.947(95％CI:0.886～0.981),当诊断临界值为1.83时,特异度为94.7％,灵敏度为83.3％.结论 血清外泌体miR-193b有望成为AD早期诊断的生物标志物.
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异位妊娠早期诊断标志物的研究进展
异位妊娠是妇产科常见的急腹症之一,早期诊断可以降低孕产妇死亡率,为临床提供更多的治疗选择余地,将几种标志物联合检测可以明显提高早期诊断异位妊娠的准确性.本文就目前早期诊断异位妊娠的几种标志物,如绒毛膜促性腺激素、孕酮、肌酸激酶、CA125、血管内皮生长因子和细胞因子等的研究进展作一综述.
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乙型肝炎病毒核心抗体定量水平的临床意义
乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)是乙型肝炎病毒(HBV)感染者产生的针对病毒核心蛋白的抗体,在感染早期即发生阳转,且常持续存在终生.抗-HBc的定性检测已在临床实践中应用多年,但其定量水平的临床意义尚不十分清楚.近年发展起来的基于双抗原夹心法的抗-HBc检测技术,为阐释抗-HBc定量水平(qAnti-HBc)在HBV感染中的变化规律及其临床意义奠定了基础.近年多项研究表明,qAnti-HBc与肝炎活动程度及药物治疗应答高度相关,有望成为抗病毒治疗药物选择、方案优化及疗效预测的重要依据.
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早期结直肠癌的新生物标记——Dermokine-β/γ
结直肠癌早期血清生物标记的确定,对结直肠癌早期诊断具有重要意义.Tagi T、Matsui T、Kikuchi S等通过应用免疫组织化学等方法比较了结直肠癌不同阶段的dermokine和普通诊断标志物(CEA、CA19-9和血清p53)的敏感度,并对25名健康志愿者的血清dermokine-β/γ水平进行了检测.
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几种肺癌诊断标志物与肺癌的关系
肺癌是当今全世界常见的恶性肿瘤之一.抑制肿瘤生长的分子靶向治疗为肺癌提供了新的治疗手段.关于肺癌的研究很多,但肺癌分子诊断标志物的研究却很少.
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昆山地区入托儿童心肌酶谱检测结果分析
天冬门氨酸氨基转移酶（AST），肌酸激酶（CK）及其同工酶（CK-MB），乳酸脱氢酶（LDH）和α-羟丁酸脱氢酶（HBD H ），作为常用的心肌损伤诊断标志物称为心肌酶谱。心肌酶谱作为临床常用的生化指标，其正常成人参考范围已有报道，但对正常儿童的心肌酶谱则因较少采静脉血进行健康体检而报道较少。为此，我们对827例从2周岁～6周岁年龄段的正常儿童进行了调查，现报告如下。
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乳腺肿瘤诊断标志物-乳腺球蛋白
乳腺球蛋白由于其乳腺组织特异性作为一个有希望的乳腺肿瘤标志物已讨论了近十年.该文综述了其分子结构,在肿瘤组织及其它组织中的表达、经淋巴结转移及检测方法.说明乳腺球蛋白的检测可能成为乳腺癌诊断及提示预后的重要工具.
