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中医药防治肝脏疾病的分子机制研究
自从分子生物技术开展以来,中医药治疗各种肝脏疾病的机理研究已经取得了不少进展,现综述如下.中医药防治肝癌的分子生物学基础1 抑制肿瘤细胞DNA合成吴万垠等(1)用莪术油进行小鼠肝癌HepA抑制实验,以病理细胞图像分析仪分析莪术油对小鼠细胞DNA含量的影响,结果其抑瘤率明显高于对照组(P<0.01),能显著降低小鼠肝癌细胞的DNA光密度值、核面积及DNA指数,同时能提高肝癌细胞中二倍体细胞的比例,降低超五倍体细胞比例,提示其抗癌活性与抑制肿瘤细胞DNA合成有关.
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生物技术药物中宿主DNA残留Q-PCR检测法的方法验证
自20世纪50年代,用于生产生物技术药物的细胞基质一直因其安全性而备受关注,生产用基质细胞经历了从原代细胞,二倍体细胞到传代细胞的发展历程,人们对其潜在风险的认识也在不断变化。虽然,至今没有因为生物制品中 DNA残留量而引发不良反应或安全事故,但其用量随着临床治疗的需求越来越大,需要长期反复用药的生物制品也越来越多,同时,疫苗的使用者为健康人群,这些都使得药品监管部门更加重视生物技术产品的安全性,其中 DNA残留量的质量控制一直是人们关注的热点。几十年来对于残余 DNA问题的争论一直在继续,有的观点认为应将残余 DNA作为一种重要危险因素[1],也有人倾向于将残余 DNA作为一般杂质控制。各国研究机构围绕着残余 DNA问题都做了大量的工作,国内外也有很多有关细胞基质及残余 DNA的文献和技术指南发表[2-4]。但根据现有研究结果,现在认为应将其视为一般杂质,并控制其在生物制品中的含量达到纯化工艺可控制的低量。
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长距离等位特异性PCR法直接分析T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因-574和-4529位点分子单体型
单体型为位于1条染色体上或某一区域的一组相关联单核苷酸多态性(SNPs)等位位点的集合.它在基因作图研究中,特别是复杂性疾病相关研究中比单个SNP可提供更多的信息[1-3].常规基因分型工具不能在1个二倍体细胞提供单体型信息,因此,单体型分析已经成为疾病相关性研究中的一个普通工具[4].
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凋亡素在人体消化道肿瘤中的作用
细胞凋亡是细胞在其基因的调控下有序的死亡方式,是生物细胞的一种生理性死亡过程,对于维持整个机体的正常生理过程、保证个体正常发育起着重要作用.一旦细胞的增生和/或凋亡异常,均可导致细胞的恶性转化.凋亡素(VP3)来源于鸡贫血病毒,由366 bp组成,编码121个氨基酸序列的小分子物质,能够特异性诱导肿瘤细胞的凋亡,不依赖于p53,同时Bcl-2不仅不能抑制其活性,而且具有加速VP3诱导凋亡的作用,令人兴奋的是VP3对正常的人和鼠的二倍体细胞无任何毒副作用,其原因在于VP3特异性的核定位及其磷酸化所致.多种载体(细菌或质粒)具有独特的安全性能和/或免疫佐剂作用,经过分子生物学改造以后,能够表达外源基因并具有生物学活性,可以作为VP3释放系统,利用VP3在正常细胞和肿瘤细胞以及转化细胞中定位的不同以及VP3激酶在肿瘤细胞和正常细胞中表达的差异,对癌前病变或易于癌变的细胞进行检测,对预测肿瘤发生的倾向性和肿瘤的治疗具有重要的意义.因此VP3在抗肿瘤方面具有巨大的潜在优势和广阔的应用前景,对VP3进行深入细致的研究可能为恶性肿瘤的治疗开辟一条新的、有效的、安全的途径.
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奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长
目的:研究奥曲肽(octreoticde,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用,并探讨其作用机制.方法:采用MTT比色分析法测定OCT 10-2,10-3,10-4,10-5,10-6g.L-1对MKN45细胞生长的调控作用;采用流式细胞术分析OCT 10-3g·L-1对MKN45细胞的周期分布的影响.结果:OCT 10-2,10-3,10-4g·L-1对MKN45细胞的生长均有抑制作用,以10-3g·L-1浓度的抑制作用显著,为10.4%;10-3g·L-1这一浓度可诱导MKN45出现G0/GI阻滞,于加入OCT后6h开始,为(64±4)%,24h显著,达(75±3)%,36h已消失;与对照组(7±1)%相比,24h G2/M期细胞比例亦减少,为(2±2)%,但OCT未改变亚二倍体细胞的比例.结论:OCT可抑制人胃癌细胞株MKN45的生长,其作用机制之一是诱导细胞出现GO/GI阻滞.
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单倍体相合造血干细胞移植
目前,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT),已成为治疗多种血液及非血液系统疾病主要手段之一.对于那些没有HLA完全相合供者的患者单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical hematopoietic stem cell transplantation)不失为一种好方法.什么是单倍体相合?人体细胞都是二倍体细胞(为双链DNA),只有生殖细胞为单倍体(为单链DNA).
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吸烟对精液DNA指标影响的研究
目的 探讨吸烟对精液DNA指标的影响,以促进男性生殖健康.方法 选择322例合格的研究对象,其中195例为吸烟者,127例为不吸烟者,通过问卷调查方法收集对象的背景信息、吸烟暴露情况以及可能的混杂因素,同时收集所有研究对象的精液标本,分析吸烟对精液DNA指标的影响.结果 吸烟使精液中单倍体精子的比例降低,同时使二倍体细胞以及多倍体细胞的比例升高.结论 吸烟对精液质量可能有不良影响,且精液DNA指标可能对烟的作用更为敏感.对大量或长期吸烟者,其影响更为深远,应当广泛提倡戒烟.
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胚胎干细胞分化研究的价值探讨
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)是由哺乳动物早期胚胎分离培养的一类未分化二倍体细胞,具有自我更新和全能分化的潜能.虽然对于ESC的研究涉及到一些敏感的伦理问题,它为治疗人类严重疾病带来的希望及同时潜在的经济价值仍然激励着科学工作者孜孜探究.在取得各方面进展的同时,这类研究也面临着许多问题,尤其是目前看来定向分化研究将是一个长期的探索过程,其所需的巨大投入和结果的难以预测形成强烈反差,引发了相关领域工作者对胚胎干细胞分化研究价值的思考.本文就普遍关心的问题试分析如下.
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人二倍体细胞对不同病毒感染过程的生物学效应比较分析
目的 分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制.方法 用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态学特征;比较两种病毒在人二倍体细胞上的增殖动力学及两种病毒感染后细胞酶谱的变化;采用基因芯片检测两种病毒感染后人二倍体细胞基因反应的差异.结果 感染细胞的光镜或电镜的超微结构观察均表现出许多相同的特点,包括细胞变圆、肿胀、折光性增强,以及细胞细微结构的受损,大多数细胞器的破坏等.两种病毒在人二倍体细胞上具有不同滴度峰值的增殖动力学过程;对细胞超氧化物歧化酶的动力学改变趋势有不同影响,但对乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶动力学变化趋势无明显影响;两种病毒感染引起人二倍体细胞出现不同的基因反应,其中与信号转导及与天然免疫反应有关的mRNA转录效率具有一定的差异.结论 人二倍体细胞对EV71、HSV-1感染过程表现不同的生物学效应.
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流行性乙型脑炎病毒在二倍体细胞上的适应性
目的 研究流行性乙型脑炎病毒在二倍体(2BS)细胞上的传代适应性,确定在2BS细胞上培养乙脑病毒的条件和方法.方法 通过病毒毒力和免疫原性检测,观察在不同培养条件下乙脑病毒在2BS细胞上的增殖情况.结果 pH值在7.4~7.6之间、人血白蛋白含量为0.2%、病毒稀释度为1:1 000时,病毒维持液培养的病毒滴度高.在2BS细胞上传50代的病毒滴度均在7.0 logLD50.以上,且差异无显著意义.连续传代后病毒的免疫原性下降.结论 建议用于建立病毒种子库的流行性乙型脑炎病毒,在2BS细胞上传代不应超过3代.
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麻腮风水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴定方法的比较
目的 探讨麻腮风水痘联合减毒活疫苗(measles,mumps,rubella and varicella combined vaccine,live,MMRV)中水痘病毒在人二倍体细胞(MRC-5和2BS)上蚀斑的形成情况,建立不中和法检测MMRV中水痘病毒滴度,并进行验证.方法 观察麻疹、腮腺炎和风疹病毒在人二倍体细胞上形成的细胞病变形态,以及风疹病毒对水痘病毒蚀斑形成的影响;通过完全中和、部分中和以及未中和等方法,检测MMRV中水痘病毒的滴度,终建立不中和法检测水痘病毒滴度,并对方法进行重复性和准确性验证.结果 风疹病毒不高于4.0 lgCCID50/孔时,水痘病毒在MRC-5或2BS细胞中产生的蚀斑形态发生微小改变,但蚀斑数量与完全中和风疹病毒后差异无统计学意义(P>0.5).采用完全中和、部分中和以及未中和等方法检测MMRV中水痘病毒的滴度差异无统计学意义(P>0.5),且不中和法检测水痘疫苗病毒滴度的重复性(RSD为2.3%)和准确性(回收率为97.8%~100%)均较好.结论 在人二倍体细胞(2BS或MRC-5)上,不使用抗血清中和直接进行四联疫苗中水痘病毒的滴度检测完全可行,可替代MMRV中经典的使用抗体中和的病毒滴定方法.
关键词: 麻腮风水痘联合减毒活疫苗 二倍体细胞 水痘病毒 病毒滴度 蚀斑法 -
应用二倍体细胞培养脊髓灰质炎病毒适宜条件的研究
目的为用KMB17细胞制备口服脊髓灰质炎减毒活疫苗提供适宜条件.方法检测不同培养液、不同代次、不同细胞龄和不同病毒感染量等因素对病毒滴度及产量的影响.结果细胞对脊髓灰质炎病毒的敏感性随细胞龄的增加而降低,培养后24、48、72和96h单个细胞中脊髓灰质炎病毒产量分别为986、745、594和237 LogTCID50;细胞感染脊髓灰质炎病毒后出现细胞病变时间跨度大于48h,早期从病变细胞释放出的病毒在培养上清中不稳定,感染性滴度每24h降低0 .25 LogTCID50以上.结论 KMB17细胞培养脊髓灰质炎病毒的感染性滴度和产毒量受培养液营养成分和病毒接种时细胞龄等条件的影响.
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疫苗生产溶液管道化输送智能无菌配液终端的设计及应用
通常二倍体细胞培养采用细胞工厂静置培养或大瓶旋转培养技术,规模化生产溶液的输送量非常大,转运所使用的移动罐也较多,跨越洁净区域培养液的输送、溶液分配过程的保温以及使用后转运容器的清洗灭菌等均存在问题,且需花费大量人力物力.使用管道化输送系统可解决上述问题,而分配终端的清洗灭菌及控制是该系统的关键.本文介绍了一种疫苗生产程序化溶液管道输送及智能无菌配液终端的设计方法,对疫苗产业化推广应用具有一定意义.
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Apoptin-肿瘤基因治疗的新选择
人类肿瘤是在各种致瘤因子的作用下,局部组织的细胞在基因水平上对其生长失去正常调控,导致克隆性异常增生而来.其机制,一般认为是由于细胞原癌基因的激活和/或抑癌基因的失活造成的.当上述基因非正常表达的时候,细胞的正常增殖、分化和凋亡等一系列生命过程出现异常,既表现为细胞的无限增殖、分化不良与凋亡减少.结果新生细胞不断产生、细胞的生存期延长.凋亡率下降使细胞数目不断增加导致局部生长优势,形成肿瘤.除了肿瘤细胞自身过度增殖以外,凋亡的异常在肿瘤发生、发展、结局等过程中起重要作用.因此,促进肿瘤的凋亡可能是肿瘤的一有效治疗途径.Apoptin由鸡贫血病毒(CAV)基因组中Vp3基因编码,可特异性的诱导转化细胞和肿瘤细胞凋亡且其凋亡作用不依赖于野生型p53也不受Bcl-2过渡表达的影响.Apoptin不杀伤人类正常二倍体细胞亦无毒副作用.此种特性向我们展示了其在肿瘤治疗领域诱人前景.
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涎腺多形性腺瘤的DNA测定与分析
在正常细胞中,染色体的数目和形状是相对稳定的,每一体细胞具有46条(23对)染色体,称为二倍体细胞(2C,Component).
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不同牛血清对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的 探讨不同级别的牛血清对人胚肺二倍体细胞KMB17增殖的影响.方法 用不同级别的牛血清培养KMB17细胞,每天作细胞计数,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间,MTT比色法测定细胞增殖能力.结果 用胎牛血清培养,细胞增殖能力强,倍增时间短;其次为类胎牛血清、特级新生牛血清、优级新生牛血清.结论 不同级别的牛血清对KMB17细胞增殖效果不同,进行细胞培养时宜选择级别较高的牛血清.
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柏查氏综合征一例
患者,女,29天,因“腹痛、双下肢浮肿2月,加重伴腹胀、胸闷、气促7天”,于2000年10月8日入院.查体:生命征平稳,一般情况可,浅表淋巴结不大,巩膜轻度黄染,右肺叩浊,呼吸音低,未闻音,心脏无特殊发现,腹膨隆,腹壁静脉无曲张,肝脾未扪及,移浊(+),双下肢轻度凹陷性水肿.血常规:WBC10.3×109/L、Hb133g/L、PLT161×109/L,尿常规:尿胆原(2+),RBC、WBC正常范围,肾功能正常,肝功能:ALT856u/L、AST639u/L,甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒标记物均为(-),RF(-),抗ANA(-),抗ds-DNA(-),ENA多肽抗体谱(-),PPD(+),胸水,腹水为渗出液,抗酸染色(-),未见恶性细胞,流氏细胞学DNA倍体周期分析为正常二倍体细胞.经抗炎、利尿、抽胸腹水后胸腹水很快消退,症状缓解.