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流式细胞术外周血样品的直标法及其全血用量的探讨
流式细胞术(FCM)以其快速、简便和准确的检测, 而广泛应用于细胞生物学、肿瘤学与免疫学等领域.特别是多种识别白细胞抗原的单克隆抗体的出现, 使FCM在外周血白细胞分析的基础研究和临床诊断中得到了广泛的应用[1],因而优化一种快速、简便和准确的外周血白细胞的FCM免疫荧光标记法显得尤为重要.本文通过对三种直接荧光标记法的比较及其样品用血量的探讨, 旨在建立一种用于FCM的佳直接荧光标记法.
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山东地区汉族人 HLA-DPB1基因单核苷酸多态性
使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA-DPB1引物序列,由PCR技术扩增人HLA-DPB1基因第二外显子.产物纯化后,直接核酸序列分折确定个体的HLA-DPB1外显子核酸序列.使用基因定型软件与由国际上公布的HLA-DPB1核酸序列构建的基因型核酸序列数据库进行比较,确定个体的基因型别、确定等位基因类型.研究结果提示中国人HLA-DPB1第二外显子基因序列与国际上公布的序列基本一致,但有不同之处, 多处存在单核苷酸多态性(SNP),提示存在有新的等位基因.对51例个体研究显示,出现频率高的等位基因是DPB1*02012.
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应用鼻咽癌家系资料评估HLA三座位单倍型软件推算方法的研究
目的 通过家系资料,对比分析不同统计学单倍型推算方法在HLA-A-B-C三基因座位单倍型推算运用中的准确性及有效性.方法 选择558例有完整家系资料的个体,通过SAS/Genetics、Arlequin遗传学分析软件的EM算法、ELB算法分别进行单倍体确认,计算个体单倍型频率,并与家系分析结果相比较.结果 558例研究个体中,SAS/Genetics、Arlequin遗传学分析软件的EM算法、ELB算法分别估算得到248、247和238种单倍型,推算准确率分别为88.5%、89.1%,90.3%.3种软件推算方法得到的单倍型推算准确性、常见单倍型分布差异无统计学意义.结论 运用统计学推算软件进行群体数据的单倍型推算可获得较高的准确性,3种算法得到的常见单倍型频率差异无统计学意义.但总体来说,ELB算法更加准确.
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强直性脊椎炎免疫功能检测及临床意义
强直性脊椎炎(AS)是一种致残率很高的自身免疫性疾病,其免疫功能改变对AS的发病具有重要意义,本试验检测195例AS患者的12项免疫学指标,现报道如下.1.研究对象:195例AS患者均符合AS的诊断标准[1],并排除患有其他疾病,其中男164例,女31例,年龄19~46岁,病程3个月~21年.正常对照组30名,其中男18名,女12名,年龄20~35岁.待测者均作白细胞抗原-B27(HLA-B27)、抗链O(ASO)、类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP)、T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)及补体C3、C4的检测.
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基因芯片在人白细胞抗原A19组基因快速分型中的应用研究
目的建立基因芯片快速检测人白细胞抗原A19(HLA-A19)分型方法.方法利用基因芯片技术,根据HLA-A位点不同基因亚型的独特序列设计探针,制成分型芯片;待检测样品经聚合酶链反应(PCR)标记上荧光之后,与芯片进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值,分析确定样品A位点的基因亚型.对120份移植供受者的HLA-A基因分型,并对11份样品作基因测序.结果仅用2.5 h,HLA-A19基因分型芯片可准确分辨出A19抗原9大类(A2901、A29XX、A3001、A3006、A30XX、A31、A32、A34和A74).结论 HLA-A19组基因芯片分型方法,分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便、结果直观,适于临床应用.
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青海藏族人群HLA-DRB1基因与乙型肝炎预后的相关性
目的:研究HLA-DRB1基因与青海藏族乙型肝炎病毒(HBV)感染预后的相关性.方法:应用PCR-SSP对30例乙型肝炎后肝硬化患者(B组)、55例慢性乙型肝炎患者(C组)和15名健康体检者(A组)进行HLA-DRB1基因位点的检测,并比较分析.我们选取HLA-DRB1*03、*07、*12、*13、*15检测基因位点.结果:55个基因位点中只有HLA-DRB1*12差异显著,具有统计学意义,而其他基因位点差异不显著;而对HLA-DRB1*12 3组人群的两两比较,B组基因频率为90%,与A组(6.7%)相比显著性升高(P<0.0125,RR=13.5);C组基因频率为98.2%,与A组(6.7%)相比显著性升高(P<0.0125,RR=14);与B组(98.2%)相比,差异不显著(P>0.0125).结论:HLA-DRB1*12可能是藏族人群乙型肝炎易感基因,同时也可能是该人群乙型肝炎进展为肝硬化的关键位点.
关键词: 白细胞抗原 白细胞抗原-DRB1等位基因 序列特异性PCR 乙型肝炎 预后 -
丙型肝炎病毒非结构蛋白5A结合蛋白37小鼠同源基因的克隆化及结构分析
目的:克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)结合蛋白37(NS5ABP37)的小鼠同源基因,为阐明小鼠NS5ABP37基因的生物学功能奠定基础,探索HCV NS5A蛋白与NS5ABP37蛋白之间的结合在慢性丙型肝炎的发病机制中可能的作用.方法:利用酵母双杂交系统3,以HCV NS5A蛋白作为诱饵,筛选肝细胞cDNA文库,首先获得HCV NS5A结合的人肝细胞蛋白的新的编码基因.利用生物信息学(bioinformatics)技术确定NS5ABP37的小鼠同源基因序列.利用GenBank在线分析软件,对小鼠NS5ABP37蛋白一级结构特点进行分析.结果:通过酵母双杂交技术获得了人NS5ABP37的编码基因.利用生物信息学技术确定了小鼠NS5ABP37的基因序列.利用分子生物学技术获得了小鼠的NS5ABP37的基因克隆,小鼠NS5ABP37基因开放读码框架(ORF)为l 488 nt,编码产物由495 aa组成.计算分子量为54 583.67道尔顿,预测等电点(pI)为4.70.小鼠NS5ABP37与白细胞抗原相关(leukocyte antigen related,LAR)蛋白前体蛋白(LAR protein precursor)同源.小鼠HCV NS5ABP37基因序列被美国核苷酸数据库GenBank收录,收录号为AY234860.结论:成功确定、克隆了小鼠的NS5ABP37基因序列,并证实与白细胞抗原相关蛋白前体蛋白具有一定的同源性.这一结果,为进一步阐明小鼠的NS5ABP37基因的功能,阐明HCV感染的发病机制奠定了坚实的基础.
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脐血造血干细胞的归巢缺陷与修复研究进展
20世纪70年代以来,从静脉输注入白细胞抗原相合的同胞骨髓造血干细胞的造血干细胞移植就已经成功开展[1],移植的成功与输入的造血干细胞是否能顺利定位于受者骨髓并增殖、分化、重构造血和免疫功能密切相关.
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关键词:
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原发性肾上腺恶性淋巴瘤二例
原发性肾上腺恶性淋巴瘤罕见,笔者报告2例如下.例1 男,35岁.患者于4个月前出现右侧腹痛,疼痛局限,无放射,无恶心呕吐、腹胀,伴有反复发热(38~39 ℃),经抗炎治疗无明显改善.1周前出现右下肢肿胀,皮温升高,主动脉搏动正常.CT平扫示右肾上腺区见一11 cm×7 cm×6 cm巨大不规则软组织肿块,边界尚清,密度均匀(图1),增强后肿块呈中等度不均匀强化(图2),肿块向前生长推移并包绕下腔静脉,致其以下至右侧髂总静脉水平管腔内均见明显瘤栓形成(图3),腹膜后未见明显肿大淋巴结影.术后巨检示:肿块切面呈灰白色,部分质韧,肾上腺正常结构消失,被瘤细胞弥漫浸润,核分裂象易见.免疫组织化学检查示:白细胞抗原(LCA)阳性,全B-淋巴细胞标记抗体(L26)阴性,全T淋巴细胞标记抗体(UCHL-1)阳性,碳水化合物抗原(CD15)部分阳性,嗜铬素(CHG)阴性,甲胎蛋白(AFP)阴性,单核细胞(CD68)组织细胞阳性.病理诊断:(右肾上腺)非霍奇金恶性淋巴瘤,弥漫型,T细胞型,大细胞型.
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新等位基因HLA-A*0323的认定
目的 认定一个人类白细胞抗原(HLA)新等位基因.方法 应用多聚酶链反应-序列特异性寡核苷酸技术(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide,PCR-SSO)基因分型发现可能的HLA新等位基因.用PCR直接测序及针对组特异性扩增产物测序.确认与同源HL~等位基因序列的差异.结果 发现一个样本的HLA-A位点结果异常.其核苷酸序列与已知所有HLA-A位点等位基因序列不一致,与同源性高的等位基因A*030103差异是在第2外显子区域的256位碱基发生了C→C的替换,257位碱基发生了A→C的替换.270位碱基发生了T→A的替换,导致相应的62位密码子由CAG→GGG,编码的氨基酸由谷氨酰胺(Gln)→甘氨酸(Gly),导致相应的66位密码子由AAT→AAA.编码的氨基酸由天冬氨酸(Asn)→赖氨酸(Lys).结论 该等位基因为HLA-A位点的一个新等位基因.2006年7月13日被WH0 HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*0323.
关键词: 人 白细胞抗原 新等位基因 多聚酶链反应-序列特异性寡核苷酸技术 序列分析 -
中国北方汉族人群白细胞抗原DRB1及DQA1区基因多态性与乙型肝炎病毒感染结局的关系
目的探讨中国北方汉族人群白细胞抗原(HLA)DRB1及DQA1区等位基因多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染不同结局的关系,分析基因-环境交互在慢性乙肝发生中的作用.方法采用病例-对照研究(慢性乙肝患者207人,HBV携带者212人,自限性HBV感染者148人)方法,比较3组人群检测的HLA等位基因频率并应用交互相乘模型分析基因-环境交互作用.结果慢性乙肝组HLA-DQA1*0301等位基因频率(14.81%)显著低于HBV携带组(25.24%)和自限性HBV感染组(25.00%)(Pc=0.002;Pc=0.007);自限性HBV感染组HLA-DQA1*0102等位基因频率(8.78%)显著高于HBV携带组(1.89%)和慢性乙肝组(2.18%)(Pc=0.000;Pc=0.000);自限性HBV感染组HLA-DQA1*0302等位基因频率(4.05%)显著低于慢性乙肝组(11.41%)(Pc=0.005).经多元logistic回归分析调整年龄、性别、吸烟和饮酒的混杂效应后,HLA-DQA1*0302仍是发展为慢性乙肝的危险因素(OR=3.913,P=0.0006),HLA-DQA1*0102和HLA-DQA1*0301是HBV感染后的保护因素(OR=0.200,P=0.0004;OR=0.258,P=0.0000).饮酒与HLA-DQA1*0102[交互指数(Ⅱ)=1.49]、HLA-DQA1*0302(Ⅱ=12.12)在慢性乙肝的发生中可能存在正交互作用,与DQA1*0301存在负交互作用(Ⅱ=0.78).结论携带HLA-DQA1*0302等位基因者感染HBV后可能增加慢性乙肝发生的风险,而携带HLA-DQA1*0301和HLA-DQA1*0102者可能降低慢性乙肝发生的风险;基因-环境交互作用可能影响HBV感染的结局.
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我国大陆人群HLA新等位基因发现的现状及应注意的问题
人类对白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)系统的发现、认识与应用已近半个世纪,对该系统的不断深入揭示,已极大地推动和改观了基础免疫学、器官移植、骨髓库\脐血库人类遗传学、法医学、肿瘤免疫学、肿瘤疫苗学、自身免疫疾病和传染性疾病遗传易感性等诸多学科的落后局面[1].
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我国骨髓库/脐血库HLA分型应注意的几个问题
众所周知,在进行异基因造血干细胞移植时,首先遇到的大障碍就是难以寻找到一个白细胞抗原(HLA)完全相匹配的供体.这是由于HLA的高度复杂性、多态性、多样性等遗传特点所决定的[1-3].
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人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究
目的 应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究.方法 根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.共检测30份临床样本.结果 所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个.结论 基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行.
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强直性脊柱炎患者早期诊断及免疫功能的研究
强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis AS)是一种多部位关节受累的自身免疫性疾病,病程长,临床上早期误诊率较高,疾病中、晚期致残率高。为提高该病的早期诊断率及了解患者免疫状况,我们对165例AS患者进行了12项免疫指标的检测,现报告如下。1 材料与方法1.1 材料 1996年2月-1999年12月,对可疑AS患者常规做骶髂关节X线平片和[或]CT和[或]ECT检查,化验白细胞抗原-B27(HLA-B27)、抗链O(ASO)、类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP),对依诊断标准[1,2]确诊的患者做T淋巴细胞亚群CD3、CD1、CD8,免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及补体C3、C1检查,资料完整者共165例,其中男144例,女21例,年龄6~51岁,平均25岁;病程3个月~21年,另以正常健康体检者30例作对照,其中男18例,女12例,年龄20~35岁。1.2 实验方法 取患者静脉血约8ml分装于2个试管中,1试管用肝素抗凝,常规方法分离淋巴细胞,洗涤备用,用微量法做HLA-B27检查,剩余淋巴细胞按APAAP方法进行洗涤、制片、冷冻保存,批量检测T淋巴细胞亚群,试剂来源于军事医学科学院。另一份全血标本分离血清后做ASO、RF、CRP,将剩余血清低温冻存,批量检测免疫球蛋白、补体,实验采用美国Beckman Array全自动特定蛋白分析系统,进口试剂,速率散射比浊法,结果以均数加减标准差表示,对照组以同样方法处理,用t检验统计,结果以x±s表示。
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家族性2型糖尿病与人类白细胞抗原-Ⅱ类基因
2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是糖尿病中常见的一种形式,具有明显的家族聚集性,随着分子生物学基因分型方法的不断涌现,对T2DM发病异质状况研究逐渐深入,并已发现T2DM及其某些亚群与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-Ⅱ类基因存在一些关联,对家族性T2DM的研究也日益增多,以下介绍近年来国内外关于家族性T2DM与HLA-Ⅱ类基因的关联及研究进展.
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抗中性粒细胞胞质抗体的研究现状及临床意义
抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasm autoantibodies,ANCA)是一种以中性粒细胞和单核细胞胞质成分为靶抗原的自身抗体,当中性粒细胞受抗原刺激后,胞质中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶物质及白细胞抗原生成,刺激机体而产生ANCA[1].目前认为ANCA与某些疾病,尤其是自身免疫病相关,并将其作为诊断系统性血管炎等相关疾病的血清学标志物[2].近年来,国内外学者对ANCA及靶抗原的性质、ANCA相关疾病、致病机制及检测方法等进行了深入的研究.本文就ANCA的研究现状及临床意义作一简要综述
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内蒙古地区蒙古族人HLA-DQA1基因多态性研究
目的:了解内蒙古地区蒙古族HLA-DQA1基因多态性.方法:采用PCR-SSP技术对内蒙古地区97例内蒙古族人群进行HLA-DQA1等位基因型别分析.结果:蒙古族中高频率的HLA-DQA1等位基因为*0301、*0501、*0102,少见的为*0601.结论:蒙古族人群HLA-DQA1基因分布,既有汉族人的特点,又有其独特性.
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HLA-DQA1等位基因与儿童过敏性紫癜的相关研究
目的:研究过敏性紫癜(AP)的发病机理是否有免疫遗传因素的参与.方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物分型技术(PCR-SSP)对70例内蒙古地区的儿童AP病人进行了HLA-DQA1等位基因型别分析,并与90例正常儿童进行比较.结果:发现病人HLA-DQA1*0301等位基因频率较正常对照组明显升高,二者的频率分别为27.9%和10.0%,经统计学检验差异有显著性(p<0.01,RR=5.56,EF=0.45);AP病人HLA-DQA1*0302等位基因频率较正常对照组明显降低,二者的频率分别为6.4%和17.2%,经统计学检验差异有显著性(p<0.01,RR=0.28,EF=0.26).结论:HLA-DQA1*0301等位基因可能是AP易感基因;HLA-DQA1*0302等位基因则可能为保护基因.