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钙敏感受体的研究及临床应用进展
目前,关于治疗受体蛋白异常疾病的研究不断深入,研究的主要靶点之一是G-蛋白偶联受体(GPCRs).GPCRs是受体蛋白中的一类大家族,GPCRs结构的特殊性为疾病的诊疗开辟了新的思路.钙敏感受体(CaSR),作为GPCRs中的一员,自1993年首次发现以来,已经在很多组织器官中进行了研究,发现其表达量的改变与某些疾病的发生发展相关联.另外,针对CaSR的相关试剂已在一些疾病中进行了初步尝试.本文就CaSR与疾病的关系及其在疾病诊疗中的潜力进行了综合叙述.
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钙敏感受体通过ERK信号通路参与低氧诱导的人气道上皮细胞黏液高分泌
目的 探究钙敏感受体(CaSR)在低氧诱导的气道黏液高分泌中的信号通路.方法 低氧培养箱(37℃,94％N2-1％ O2-5％ CO2)培养人气道上皮细胞16HBE复制细胞低氧模型.分为对照组、低氧组、CaSR特异性激动剂CaCl2+低氧组、对照siRNA+低氧组、CaSR-siRNA+低氧组、细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性抑制剂U0126+低氧组.RT-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC的转录水平,Western blot检测CaSR、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白相对含量,ELISA检测MUC5AC的分泌水平,四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞的活性.结果 CaSR表达于人气道上皮细胞,转染特异性的CaSR-siRNA明显抑制CaSR的表达.低氧组p-ERK1/2、MUC5 ACmRNA和MUC5AC蛋白的相对含量分别为(0.63±0.11、0.51 ±0.03、0.56±0.07)较对照组(0.27 ±0.04、0.18±0.04、0.25 ±0.06)显著增加(P＜0.05).CaSR的激动剂CaCl2可进一步增强低氧引起的上述作用(P＜0.05),而转染CaSR-siRNA及给予ERK信号通路特异性抑制剂U0126可抑制低氧引起的上述效应(P＜0.05).结论 CaSR可通过MEK/ERK1/2信号通路参与低氧诱导的气道黏液高分泌.
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钙敏感受体及其激动剂在甲状旁腺机能亢进治疗中的应用进展
慢性肾功能衰竭患者继发甲状旁腺机能亢进(SHPT),在临床上表现为血清甲状旁腺激素(PTH)水平升高,骨盐代谢紊乱,控制不好可出现骨骼病变、心脏瓣膜钙化,并增加患者的死亡率.迄今为止,SHPT的控制在临床上仍是个很棘手的问题,特别是在活性α-D3效果不好的情况下.近年来发现的钙敏感受体(CaSR)及其激动剂为临床控制甲状旁腺机能亢进(原发或继发性)提供了新的希望.
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FGF23-Klotho及下游信号通路在继发性甲状旁腺功能亢进发病中的作用
继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)是慢性肾衰竭(chronic rehal failure,CRF)患者的常见并发症.随着肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)的下降,SHPT的发生率逐渐升高.在GFR为60～90m1/min/1.73m2的慢性肾脏病患者中,SHPT发生率为17％,当GFR降至20ml/min/1.73m2以下时,SHPT发生率增加至85％[1],其特征是甲状旁腺增生及甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)过度合成和分泌.PTH水平过高可导致骨过度重吸收,使钙磷代谢进一步紊乱,导致血管钙化、心血管疾病等严重并发症[2].SHPT的发生与多种因素有关,高血磷、低血钙、活性维生素D缺乏、肠道钙吸收不良、甲状旁腺维生素D受体(VDR)和钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)表达下调、PTH转录水平改变等均可引起SHPT的发生.近年来,国内外学者将目光聚焦于研究成纤维细胞生长因子-23 (fibroblast growth factor,FGF-23)-Klotho及其下游信号转导通路在SHPT发病机制中的作用.
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继发性甲状旁腺功能亢进症患者维生素D受体和钙敏感受体的免疫组化研究
目的 通过研究维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)和钙敏感受体(calciumsensing receptor,CaSR)在继发性甲状旁腺功能亢进症(Secondary hyperparathyroidism,SHPT)患者甲状旁腺组织中的表达,探讨VDR和CaSR与SHPT甲状旁腺组织病理改变的关系.方法 用免疫组化的方法 计数CaSR和VDR阳性细胞,比较其在不同程度SHPT中甲状旁腺组织及正常甲状旁腺组织的阳性表达.结果 VDR阳性细胞表达几乎存在于所有主细胞的细胞核,呈黄褐色,胞膜和胞浆不着色.SHPT组较对照组明显下调,分别为(39.0±19.7)%和(78.0±2.5)%,差异有统计学意义(P<0.01).SHPT弥漫性增生组、结节性增生组和腺瘤样增生组表达分别为57.1%、(31.0±6.7)%和(23.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.01).CaSR阳性细胞表达主要定位于主细胞的胞膜和胞浆,呈黄褐色.SHPT组较对照组明显下调,分别为(48.0±17.9)%和(79.0±1.0)%,差异有统计学意义(P<0.01).弥漫性增生组、结节性增生组和腺瘤样增生组的CaSR表达分别为51.0%、(47.0±9.8)%和(29.0±10.1)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 VDR和CaSR表达均随甲状旁腺组织增生的程度增高而下调.VDR和CaSR的表达下调可能是活性维生素D治疗无效的病理基础.上调VDR和CaSR表达水平以及进一步激活受体功能是内科治疗SHPT的研究方向.
关键词： 继发性甲状旁腺功能亢进症 免疫组织化学 维生素D受体 钙敏感受体 -
维持性血液透析患者甲状旁腺全切除加前臂移植的护理
维持性血液透析为慢性肾衰竭的终身替代疗法之一,血液透析技术的发展,使得维持性血液透析患者生存时间不断延长,出现继发性甲状旁腺功能亢进症(secondary hyperparathyroidism,SHPT)的患者也逐渐增多.文献报道SHPT与活性维生素D水平下降、钙磷代谢紊乱及相应的钙敏感受体、钠磷转运子、维生素D的核受体等密切相关[1].SHPT直接影响着患者的生活质量,大约50%的严重SHPT患者对内科药物保守治疗不敏感 [2],我院从2008年～2010年对部分SHPT患者开展了甲状旁腺全切除加自体前臂移植术,取得了一定的疗效.现将护理体会报告如下
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西那卡塞的临床应用以及研究进展
继发性甲状旁腺功能亢进症(secondary hyperparathyroidism,SHPT)是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)常见的并发症之一.近年的研究发现,钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)是SHPT发病机制中的重要环节[1].拟钙剂是早被报道的G-蛋白偶联受体的变构激活剂,它可以活化甲状旁腺和其它组织中的细胞外CaSR,参与维持钙离子(Ca2+)的动态平衡.CaSR存在于甲状旁腺、肾脏和骨骼中,其作用主要是增强对血Ca2+水平变化的感知并产生相应的反应,从而维持血中Ca2+水平的相对稳定[2].
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一个早发高血压遗传家系钙敏感受体基因突变点分析
目的 应用第二代测序方法筛查一早发高血压遗传家系致病基因突变点, 并探讨临床意义.方法 选择早发特征的一高血压家系, 先证者进行Illumina Miseq目标区域捕获测序及生物信息分析, 包括对单基因高血压相关的43个致病基因的编码区及侧翼区进行了检测.之后, 对小等位基因频率 (MAF) ≤1％的突变多态位点进行聚合酶链反应 (PCR) 并Sanger测序验证, 并与高血压表型连锁分析.结果 在家系高血压患者中发现钙敏感受体 (CaSR) 基因外显子7的2156位置鸟嘌呤 (G) 突变为腺嘌呤 (A), 导致第719位的氨基酸由色氨酸 (Trp) 变为终止密码子, 为新发的无义突变, 呈杂合型 (c.G2156A, p.W719X), 预测该突变导致所编码的蛋白质发生截短从而丧失其正常功能.而在无高血压病史家系成员中未发现携带此突变点.家系高血压患者临床表型特点有:面部潮红、易激动, 头胀晕, 发病年龄18～30岁;舒张压高, 舒张压对药物反应不佳;血压对天气变化敏感;在应激状态下 (如感染) 会出现轻度高血钙症;而在无高血压病史家系成员中未发现这些特点, 也没有应激性高血钙症表现.结论CaSR基因的c.G2156A (p.W719X) 新发的无义突变可能是此早发高血压家系或应激性高血钙症的遗传病因.
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钙通道和细胞内钙信号对小肠葡萄糖吸收的调节作用及机制
迄今为止葡萄糖在小肠黏膜的吸收机制已被系统地阐明和接受,即经典的钠葡萄糖同向转运体(SGLT1)介导的主动转运机制.此外,当肠腔葡萄糖浓度高于SGLT1的转运饱和度时,葡萄糖转运蛋白2(GluT2)可能一过性易位于小肠黏膜上皮细胞顶膜来参与葡萄糖的异化扩散吸收,但小肠黏膜上皮细胞葡萄糖吸收的调节机制仍然不是完全清楚.近年来钙离子通道(CRAC)及细胞内钙信号对葡萄糖的吸收调节作用备受关注,二者可通过调节肠道葡萄糖转运体SGLT1和GluT2的表达及功能来调节小肠葡萄糖的吸收.本文以CRAC及细胞内钙信号对小肠黏膜上皮细胞葡萄糖的吸收调节作用及其分子机制进行论述,希望能为肥胖及其相关疾病的防治提供新的视野及潜在的新药研发靶点.
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钙敏感受体激活对缺血再灌注兔心脏电生理特性的影响
目的：钙敏感受体（CaSR）是G蛋白耦联受体，近期研究发现其参与了心肌缺血再灌注损伤过程，但是对于缺血再灌注心律失常的影响还不得而知。本研究旨在通过给予钙敏感受体激活剂R-568观察其对在体缺血再灌注及体外模拟兔心室肌的恶性心律失常诱发率、动作电位时程、跨壁复极离散度及兴奋恢复性质的影响。
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钙敏感受体对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制研究
目的：研究钙敏感受体（CaR）在巨噬细胞中的表达情况及对巨噬细胞转化为泡沫细胞的影响。方法：通过免疫荧光和蛋白印迹（Western Blot）检测巨噬细胞中CaR的表达情况；氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）100 mg/L作用48 h，使巨噬细胞转化为泡沫细胞；实验分组为CaR激动剂组、CaR抑制剂组、空白对照组，分别作用泡沫细胞48 h：采用油红O染色检测阳性细胞数量；高效液相色谱观察细胞内胆固醇代谢情况；酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中炎性因子的分泌情况；Western blot检测细胞内CD36和胆固醇酰基转移酶（ACAT-1）蛋白的表达情况。结果： Western blot和免疫荧光结果显示在巨噬细胞中存在CaR的表达。油红O染色和高效液相色谱检测泡沫细胞的结果显示：与空白对照组比较，CaR激动剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显下降（P<0.05），而CaR抑制剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显升高（P<0.05）；ELISA 检测结果显示：与空白对照组比较，CaR激动剂组促炎因子肿瘤坏死因子-（TNF- a）、巨噬细胞游走抑制因子（MIF）含量明显降低（P<0.05），抗炎因子白细胞介素-10（IL-10）含量明显升高（P<0.05），而CaR抑制剂组促炎因子TNF- a、 MIF 含量明显升高（P<0.05），抗炎因子IL-10含量明显降低（P<0.05）；Western blot检测各组泡沫细胞结果发现：与空白对照组比较，CaR激动剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显下降，而CaR抑制剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显升高。结论：在巨噬细胞中存在CaR的表达，并且高表达的CaR可以抑制巨噬细胞泡沫化的形成。
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北京地区汉族青年女性钙敏感受体基因多态性分布及其与骨密度相关性的研究
目的 了解北京地区汉族青年女性钙敏感受体(Calcium-sensing Receptor,CaSR)基因多态性的分布,探索其与汉族妇女峰值骨密度的相关性.方 法分别采用突变分离PCR和错配PCR-RFLP方法检测北京地区202名无亲缘关系的汉族青年健康女性(20～35岁)受试者CaSR基因A986S、G990R基因型,测定其血钙(Ca)、磷(P)及甲状旁腺素(PTH)水平,以及肝肾功能等指标,应用双能X线骨密度仪(OXA)测定腰椎、股骨上段部位的骨密度(BMO).结果 (1)北京地区汉族女性中存在CaSR基因A986S、G990R多态性,从、AS基因型频率分别为95.0%和5.0%,等位基因A和S的频率分别为97.5%和2.5%;RR、GR及GG基因型频率分别为21.3%、51.0%和27.7%,等位基因R和G的频率分别为46.8%和53.2%.(2)校正年龄、身高、体重、BMI及血Ca、P、PTH水平后,多因素协方差分析显示从、AS基因型组之间L2-4、股骨颈、ward's三角及大转子部位的BMD无显著差异(P=01090～0.671);GG、GR及RR基因型组之间L2-4、股骨颈、ward's三角及大转子部位的BlVID也无显著差异(P=0.089～0.493).结论 (1)北京地区汉族青年女性中CaSR基因A986S、G990R多态性的分布频率,以A、G等位基因频率较高.(2)未发现CaSR基因A986S、G990R多态性与北京地区汉族青年女性峰值骨密度相关.
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北京地区汉族年轻妇女钙敏感受体基因多态性分布及其与血钙水平相关性
目的 了解北京地区汉族年轻妇女钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CASR)基因多态性的分布,探索其与血钙、甲状旁腺素(PTH)水平的相关性.方法 分别采用突变分离PCR和错配PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测北京地区202例无亲缘关系的汉族年轻健康妇女(20～35岁)CASR基因A986S、G990R基因型,测定其血钙、经白蛋白校正后的血钙、磷及PTH水平,以及肝肾功能等指标.结果 (1)北京地区汉族妇女中存在CASR基因A986S、G990R多态性,AA、AS基因型频率分别为95.0%和5.0%,等位基因A和S的频率分别为97.5%和2.5%;RR、GR及GG基因型频率分别为21.3%、51.0%和27.7%,等位基因R和G的频率分别为46.8%和53.2%.(2)AA、AS基因型组血钙分别为(2.46±0.09)、(2.45±0.08)mmol/L,经白蛋白校正后的血钙为(2.31±0.10)、(2.30±0.09)mmol/L,血磷为(1.23±0.14)、(1.24±0.11)mmol/L,血PTH为(41.6±18.6)、(50.0±25.1)ng/L,上述指标差异无统计学意义.(3)GG、GR及RR组的血钙分别为(2.44±0.10)、(2.46±0.08)及(2.48±0.08)mmol/L,经白蛋白校正后的血钙分别为(2.30±0.10)、(2.32±0.09)及(2.32±0.10)mmol/L,血磷分别为(1.22±0.13)、(1.24±0.15)及(1.20±0.15)mmol/L,血PTH分别为(37.6±16.0)、(42.1±20.2)及(45.9±18.1)ng/L,各组间血钙、校正后的血钙及PTH水平间差异有统计学意义(P值分别为0.042、0.020及0.014).结论 (1)北京地区汉族妇女中CASR基因A986S、G990R多态性的分布频率,以A、G等位基因频率较高,初步显示其分布与高加索人群不同.(2)在健康人群中G990R多态性与血钙、PTH水平相关,R等位基因对应较高的血钙和PTH水平.未发现A986S多态性与血钙、PTH水平相关.
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慢性肾衰竭继发性甲状旁腺功能亢进患者的甲状旁腺钙受体mRNA的表达
已证实胞外Ca2+可通过激活甲状旁腺主细胞的钙敏感受体(CaR)来调节甲状旁腺激素(PTH)的释放[1].在继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)患者,血PTH常明显增高,与血Ca2+变化不平行.本研究旨在探讨CaR是否在SHPT的发病过程中起重要作用.
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抑制钙敏感受体对慢性心力衰竭大鼠室性心律失常易感性的影响
目的 探讨抑制钙敏感受体(CaSR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠室性心律失常(VA)的影响.方法 雄性SD大鼠48只,采用数字表法随机分为对照组、CHF组和干预组(n=16),分别给予生理盐水、异丙肾上腺素(ISO)及ISO+CaSR特异性抑制剂(NPS2143)连续腹腔注射2周.完成药物注射2周后行超声心动图评价心功能.在整体心脏Langendorff灌流条件下行程控增频刺激,记录左心室前壁基底部(LAB)单相动作电位,评价动作电位时限(APD)电交替及VA的诱发阈值,并构建电整复性(APDR)曲线.急性分离大鼠心室细胞,采用钙荧光指示剂Fura-2AM进行孵育后记录各组心肌细胞钙瞬变(CaT);Western blot法检测左心室CaSR、三磷酸肌醇受体(IP3R)及蛋白激酶C(PKC)表达.结果 与对照组相比,CHF组心室CaSR、IP3R及PKC表达量、90％动作电位复极时限(APD90)、APDR曲线大斜率(Smax)及舒张期Ca2+水平均显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05),而心肌细胞CaT幅度、APD电交替及VA的诱发阈值均显著减小,差异有统计学意义(P＜0.05);与CHF组相比,干预组心室IP3R及PKC表达量、APD90、APDR曲线Smax及舒张期Ca2+水平均减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而心肌细胞CaT幅度、APD电交替及VA的诱发阈值均显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).CHF组和干预组心室CaSR表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制CaSR可降低CHF大鼠VA易感性,CaSR可作为CHF后VA潜在干预靶点.
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大鼠心肌钙敏感受体蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系
目的 观察大鼠心肌组织和心肌细胞钙敏感受体(CaSR)蛋白表达与心肌细胞凋亡及相关信号传导途径的关系.方法 Western blot检测心肌CaSR蛋白和ERK1/2、BCl2及Caspase3的表达.免疫荧光和流式细胞仪观察细胞凋亡.结果 心肌组织和心肌细胞表面可检测到CaSR蛋白的表达.CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)能促进心肌细胞凋亡,并使ERK1/2的磷酸化增加、BCl2表达及Caspase3活化.加入酪氨酸蛋白激酶阻断剂PD98059后,心肌细胞凋亡率增加,ERK1/2磷酸化降低,BCl2表达消失,Caspase3活化增强.结论 CaSR蛋白在心肌细胞膜表面表达,其激活通过Caspase 3活化,促进心肌细胞凋亡.同时亦可激活酪氨酸蛋白激酶途径.
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钙敏感受体在甲状旁腺功能亢进中的作用
钙敏感受体(CaSR)主要表达于甲状旁腺细胞和肾小管七皮细胞,它可通过细胞内信号传导通路改变甲状旁腺激素(PTH)的分泌和肾小管对电解质和水的处理,调节体内钙平衡,同时CaSR也参与了骨重塑的过程.其遗传性的基因异常可引起各种不同的疾病,包括CaSR失活突变引起的良性家族性低尿钙高钙血症和新生儿期重度甲状旁腺功能亢进,激活突变可引起常染色体显性遗传性低钙血症,与原发性甲状旁腺功能亢进的发病也存在一定的联系.这也为CaSR靶向治疗提供了依据.
关键词： 甲状旁腺功能亢进症 钙敏感受体 自身抗体 基因突变 Cinacalcet -
骨相关细胞中钙敏感受体研究进展
钙平衡对机体的正常生理功能至关重要.骨组织是人体重要的钙库,维持骨组织的动态平衡有利于机体的钙平衡.钙敏感受体在多种细胞中都有表达.研究发现在成骨细胞中,钙敏感受体促进细胞增殖、分化以及矿化作用;而在破骨细胞中,钙敏感受体介导高浓度钙离子引起细胞分化和凋亡.此外,钙敏感受体还能协助造血干细胞的准确定位.而肿瘤细胞中钙敏感受体的高度表达,提示该肿瘤细胞具有骨转移的倾向.笔者综述了钙敏感受体在成骨细胞、破骨细胞、造血干细胞、肿瘤骨转移中的研究进展.
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钙敏感受体对新生大鼠心肌细胞生长的影响
钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)属G蛋白偶联受体超家族C家族成员,于1993年被Brown等[1]首先从牛的甲状旁腺克隆出.随着研究的不断深入,发现CaSR除分布于甲状旁腺、甲状腺C细胞、肾脏、骨、胃肠等,对维持机体钙稳态起重要作用外[2-3],也广泛表达于肝、胰腺、乳腺等组织,参与调节细胞分泌、增殖、凋亡等[4-5].
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钙敏感受体参与乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究
目的 观察钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)乳鼠心肌细胞内钙的影响,探讨CaSR参与缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的机制及信号传导途径.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,建立A/R乳鼠心肌细胞模型(采用95%N2+5%CO2饱和2 h的低糖、无血清DMEM液孵育60 min,再更换成正常氧合细胞培养液孵育30 min的方法).心肌细胞随机分为6组:(1)正常对照组;(2)A/R组;(3)A/R+GdCl3组:在复氧开始时给予GdCl3(CaSR激动剂)300 μmol/L;(4)A/R+NiCl2+CdCl2+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10 mmol/L NiCl2(Na+-Ca2+交换阻断剂)和200 μmol/L CaCl2(L-Ca2+阻断剂)孵育10min,再加入300/μmol/L GdCl3;(5)A/R+U73122+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L磷脂酶C(PLC)阻断剂U73122孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3;(6)A/R+thapsigargin+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L肌浆网三磷酸肌醇(IP3)敏感Ca2+泵阻断剂thapsigargin孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3.应用Fluo-3/AM荧光指示剂负载心肌细胞,激光共聚焦显微镜连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化.结果 A/R使心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+];)增加,GdCl3使A/R乳鼠心肌细胞[Ca2+]?I进一步增加;NiCl2和CdCl2对GdCl3引起的心肌细胞[Cd2+]I增加无影响;而U73122和thapsigargin则抑制了GdCl3引起的心肌细胞[Ca2+]I增加.结论 CaSR通过磷脂酶C-三磷酸肌醇途径参与了A/R所致心肌细胞钙超载.
