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藻蓝素减轻大鼠脓毒症性急性肺损伤及其分子机制
目的 观察藻蓝素(CPC)对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用及其分子机制.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组和CPC干预组.其中模型组采用盲肠结扎穿刺建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型.CPC干预组在模型组基础上分别腹腔注射给予20、40和60 mg/kg CPC.术后72 h后获取血液及肺组织标本,检测PaO2/FiO2、肺湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1 β和IL-6水平,以及肺组织中丙二醛(M DA)水平及髓过氧化物酶(MPO)活性;比色法检测血红素氧合酶(HO)-1活性,用RT-PCR检测mRNA表达.结果 与对照组相比,模型组PaO2/FiO2含量显著降低(P＜0.05),W/D比值以及MDA和MPO显著高于对照组(p＜0.05).不同浓度CPC干预后,PaO2/FiO2进一步增高,肺湿干重、MDA和MPO水平随之降低(P＜0.05);模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-1p和IL-6含量、HO-1活性及其mRNA表达水平增高(P＜0.05),而CPC能进一步降低TNF-α、IL-1 β和IL-6含量,同时能增加HO-1的酶活性以及上调其mRNA水平(P＜0.05).此外,HO-1激动剂锡原卟啉(CoPP)处理后,能协同CPC降低TNF-α、IL-1β和IL-6含量,而HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)能进一步促进细胞因子产生(P＜0.05).结论 CPC可能通过上调HO-1表达,从酊减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺部气体交换功能和炎性反应.
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氧化型低密度脂蛋白对小鼠树突状细胞功能影响的研究
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)对树突状细胞(DC)功能的影响,为了解DC在动脉粥样硬化中的作用提供实验基础.方法 采用免疫磁珠和流式细胞仪分选技术,分选小鼠脾脏DC、动脉壁DC和初始T细胞.采用实时荧光定量PCR技术,检测DC Chop、Caspase-3、HMOX-1、TLR、CD36和CD86基因的表达.采用DC与T细胞共培养技术和流式细胞术,分析DC对T细胞分化的调控作用.结果 OxLDL促进小鼠脾脏和动脉壁DC Chop、Caspase-3和HMOX-1基因的表达且能被活性氧(ROS)的抑制剂NAC所抑制.OxLDL能够诱导小鼠脾脏和动脉壁DC高表达CD36、TLR4和CD86.OxLDL能够促进小鼠脾脏DC诱导初始T细胞向Th17细胞分化.结论 OxLDL通过ROS依赖的途径促进DC Chop、Caspase-3和 HMOX-1基因的表达.OxLDL能够诱导DC高表达CD36、TLR4和CD86.OxLDL作用于DC能够诱导初始T细胞向Th17细胞分化.
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血红素氧合酶1对肺上皮细胞自噬和凋亡的影响及机制
目的 探讨血红素氧合酶1(HO-1)对肺泡上皮细胞自噬和凋亡的影响及机制.方法 采用前瞻性研究体外培养人源肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,利用体外设计合成的小分子RNA(siRNA)沉默A549细胞HO-1基因的表达.实验分为:对照组(Control组)、siRNA-Con空载组(Con组)、HO-1 siRNA沉默组(siRNA组).Control组不作任何处理,Con组和HO-1 siRNA组分别转染siRNA-Con和HO-1 siRNA 48 h后取样本检测.采用荧光定量PCR(QT PCR)检测HO-1 mRNA水平;采用Western Blot法检测 HO-1、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、微管相关蛋白轻链3B(LC-3B)蛋白的表达变化;采用免疫荧光结合荧光显微镜观察各组细胞内HO-1和LC3B表达定位;采用JC-1结合流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位情况.结果 与Control组相比,Con组HO-1、LC3B、PI3K蛋白表达,JC-1单体所占比率差异无统计意义(P >0.05);与Con组相比,HO-1 siRNA组细胞HO-1、LC-3B、PI3K蛋白表达明显下降(P <0.05);HO-1 siRNA组JC-1单体所占百分比升高,早期凋亡细胞增多(P <0.01).结论 血红素氧合酶1有介导细胞自噬、下调细胞凋亡的作用,该调节作用可能与PI3K信号通路有关.
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内源性一氧化碳在哮喘中的变化与机制
目的 探讨内源性一氧化碳(CO)在哮喘中的变化及其调节机制。方法 50只豚鼠随机分成5组，建立哮喘豚鼠模型，其中3组分别使用地米松、血红素氧合酶1(HO-1)特异性激动剂血晶素和抑制剂锡原卟啉，余为哮喘组和正常对照组。用分光光度法检测血一氧化碳血红蛋白(COHb)含量和肺组织HO-1活性，免疫组化染色观察肺组织HO-1蛋白表达等。结果 哮喘组全血COHb为4.94±2.15%；肺HO-1活性为881±361 pmol/(mg.protein*h)，分别较正常组有显著性差异(t=4.58～10.19，P＜0.01)，肺HO-1蛋白增加。血晶素激动组较哮喘组略高(P＞0.05)。锡原卟啉抑制和地塞米松预防组较哮喘组明显降低(t=4.43～8.83，P＜0.01)。血COHb与肺组织HO-1活性水平呈正相关(r=0.90，P＜0.001)。结论 哮喘时体内HO-1蛋白和活性增加，导致内源性CO水平升高。
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丹酚酸A通过Nrf2/HO-1途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
研究丹酚酸A (SAA)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制.SD大鼠随机分组,线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,缺血1.5 h,再灌注24 h,对神经行为学缺损程度评分,TTC法测定大鼠脑梗死体积,Western blot测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量.PC12细胞系制备缺糖缺氧复糖复氧(OGD/R)模型,缺糖缺氧6h,复糖复氧24 h,MTT法检测细胞存活率,免疫荧光法测定Nrf2和HO-1表达,应用Nrf2 siRNA对SAA的作用机制进行研究.MCAO/R导致脑组织出现病理性损伤,OGD/R导致PC12细胞存活率显著降低.SAA(10和20 mg·kg-1)可使脑组织神经细胞损伤明显减轻,并且SAA (0.5和5μmol·L-1)能增加PC12细胞存活率.同时SAA能够促进脑组织及PC12胞核和胞浆中Nrf2蛋白表达,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强.SAA具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关.
关键词： 丹酚酸A 脑缺血再灌注 转录因子E2相关因子2 血红素氧合酶1 -
高糖条件下forskolin诱导胰岛系INS-1细胞血红素氧合酶1的表达
目的 观察PKA信号通路的激动剂forskolin对大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞中血红素氧合酶1蛋白表达的调节作用及细胞保护机制.方法 体外培养INS-1细胞,分别采用不同葡萄糖浓度再加入10 μmol forskolin共培养,持续4h或19 h后,用蛋白印迹法检测forskolin对INS-1细胞中血红素氧合酶1( HO-1)、超氧化物岐化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(Catalase)的蛋白表达作用.结果 高糖孵育INS-1细胞4h,HO-1与Catalase的表达较正常对照组减少(P＜0.05).高糖孵育19 h后,SOD2的表达也减少.而forskolin处理细胞上调这些抗氧化酶的表达(P＜0.05),尤其是预防了高糖诱导的抗氧化酶表达降低.结论 forskolin可能通过增强PKA通路对核因子E2相关因子2(Nrf2)的磷酸化作用,从而使得Nrf2-ARE通路下游的抗氧化酶表达增强,增强胰岛细胞对抗氧化应激造成的损伤作用.
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N-乙酰半胱氨酸对慢性肝损伤大鼠Nrf2及HO-1和γ-GCS表达的影响
目的：观察小剂量N-乙酰半胱氨酸（NAC）注射液对慢性肝损伤大鼠核因子相关因子2（Nrf2）及下游分子血红素氧合酶1（HO-1）和γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响。方法雄性SD大鼠sc给予25%CCl4橄榄油溶液（1 mL·kg-1），每周3次，连续4周。4周末，将造模成功的大鼠分别ip给予NAC 45，90和180 mg · kg-1及阳性对照谷胱甘肽（GSH）54 mg · kg-1，每日1次连续4周。检测血清中谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）活性及肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、GSH、羟脯氨酸（Hyp）含量或活性；HE染色法观察肝组织病理变化；免疫组化检测肝组织Nrf2，HO-1和γ-GCS蛋白表达。结果与正常对照组相比，模型组大鼠血清GPT，GOT，MDA和Hyp明显升高（P<0.01），Nrf2，HO-1和γ-GCS蛋白表达及SOD活性和GSH含量无明显变化；模型组肝细胞广泛脂肪变性，肝组织可见许多大小不等的圆形空泡，部分肝细胞水肿，汇管区伴炎症细胞灶性浸润；与模型组相比，NAC各治疗组大鼠血清GPT和GOT活性明显降低（P<0.01），肝组织SOD活性、GSH和Hyp含量下降（P<0.01，P<0.05），Nrf2，HO-1和γ-GCS蛋白表达增加（P<0.01，P<0.05）。与阳性对照组比较，NAC 45，90和180 mg·kg-1组肝组织Hyp明显降低（P<0.01），NAC 45 mg·kg-1组肝组织Nrf2蛋白表达明显升高（P<0.01）。与NAC 45 mg·kg-1组比较，90和180 mg·kg-1组Nrf2蛋白表达较低（P<0.01）。结论小剂量NAC可能通过调节Nrf2及下游因子HO-1和γ-GCS的表达发挥抗氧化应激作用进而发挥防治慢性肝损伤进展的目的。
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上调血红素氧合酶1对糖尿病大鼠心功能的影响及可能机制
目的 探讨上调血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)对糖尿病大鼠心脏功能的影响及可能机制.方法 将48只Wistar大鼠随机分为对照组(A组,16只),糖尿病大鼠组(B组,16只),应用钴原卟啉CoPP(HO-1诱导剂)上调HO-1的糖尿病大鼠组(C组,16只).测量各组大鼠尾静脉葡萄糖、胰岛素及脂联素水平,采用Langendorff装置测量各组大鼠心肌和冠脉功能,采用色谱技术测量心肌组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、丙二酰辅酶A及乙酰辅酶A的含量,液体闪烁计数器测量心肌中超氧化物水平,采用免疫印迹法测定心脏裂解液中信号分子、一氧化氮合酶(诱导型一氧化氮合酶iNOS和内皮型一氧化氮合酶eNOS)活性及HO活性水平.结果 糖尿病大鼠组葡萄糖水平显著高于对照组(P＜0.01),而胰岛素水平、脂联素水平显著低于对照组(P＜ 0.01,P＜0.05),应用CoPP后C组的葡萄糖水平及脂联素水平均升高(P＜ 0.05,P＜0.01).糖尿病大鼠离体心脏Langendorff灌注模型的左心室功能较对照组有所下降,而冠脉阻力(coronaryresistance,CR)明显升高.而上调HO-1后,糖尿病大鼠的心脏功能显著升高(P＜0.01)且CR明显降低(P＜0.01).上调HO-1后,糖尿病动物体内的HO-1蛋白水平升高并伴有心脏超氧化物O2-和丙二醛水平的显著降低(P＜0.05).另外,糖尿病大鼠体内信号分子明显降低(P＜0.05),上调HO-1后显著升高(P＜0.05).结论 上调血红素氧合酶1可抑制氧化应激反应,恢复eNOS/iNOS平衡,升高HO-1水平,提高内皮功能和胰岛素敏感性,达到了改善心肌功能和冠脉灌注效果的目的.
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Nrf2-ARE通路在帕金森病大鼠黑质中的表达改变
目的：观察由鱼藤酮制备的帕金森病(PD)大鼠模型黑质多巴胺能神经元中氧化应激参数、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)及其基因产物血红素氧合酶1(HO-1)和±赖还原型辅酶/Ⅱ醌氧化还原酶1(NQO1)的表达变化情况。方法将健康成年雄性Wistar大鼠40只随机分为对照组和实验组，20只对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油[1 mL/(kg·d)]，20只实验组大鼠，按照2.0 mg/(kg·d)背部皮下注射鱼藤酮(鱼藤酮溶解在葵花籽油中)制备PD大鼠模型，共30 d。后一次注射结束后实验大鼠迅速断头取材，采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化，采用Western blot检测两组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1的表达。结果对照组和实验组脑内纹状体中MDA含量分别为(6.51±1.45)、(18.13±2.14)nmol/mgprot，与对照组比较，实验组大鼠纹状体中MDA升高了64.09%(P<0.01)。对照组和实验组纹脑内状体中GSH含量分别为(44.53±4.71)、(26.41±2.52)mg/gprot，与对照组比较，实验组大鼠纹状体中GSH降低了40.69%(P<0.01)。对照组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1与β-actin免疫印迹条带相对吸光度比值分别为(0.81±0.05)、(0.84±0.07)和(0.91±0.15)，实验组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1与β-actin免疫印迹条带相对吸光度比值分别为(0.42±0.06)、(0.49±0.03)和(0.33±0.04)。与对照组比较，实验组大鼠黑质神经元中Nrf2、HO-1和NQO1表达分别降低了48.15%、41.67%和63.74%(P<0.01)。结论氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用，内源性抗氧化损伤通路Nrf2-ARE与PD的发病关系密切，可能是PD新的治疗靶点。
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血浆血红素氧合酶1、氧化低密度脂蛋白水平与冠心病患者冠状动脉病变程度的关系
目的 探讨血浆HO-1及ox-LDL水平与冠心病患者冠状动脉病变程度的关系.方法 根据冠脉造影结果选择126患者作为研究对象,其中对照组36例、冠心病组90例.冠心病组根据病变支数又分为单支病变27例、双支病变30例及多支病变33例.检测各组血浆HO-1及ox-LDL水平并计算Gensini积分.结果 ①冠心病组ox-LDL水平及Gensini积分明显高于对照组,而HO-1水平明显低于对照组(P＜0.01).②血浆ox-LDL水平及Gensini积分随着病变血管数增加而升高,HO-1则明显降低(P＜0.01).③ox-LDL水平与Gensini积分呈正相关(r=0.89,P＜0.01),而HO-1与ox-LDL水平(r=-0.80,P＜0.01)及Gensini 积分(r=-0.76,P＜0.01)均呈负相关.结论 血浆HO-1与ox-LDL水平密切相关,二者与冠脉病变程度相关,可作为冠心病患者冠脉病变程度的预测指标.
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上调血红素氧合酶1对糖尿病心肌梗死大鼠心功能的远期影响
目的:研究上调血红素氧合酶1(HO-1)的表达对糖尿病心肌梗死大鼠心功能的影响及其机制.方法:将60只成年Wistar雄性大鼠随机分为5组(n=12),分别为假手术组、糖尿病组、模型组、诱导剂组、抑制剂组.心梗造模后次日开始给药,1次/周,持续6周,术后28周,应用心脏超声、经颈动脉左心室内插管术等方法观察HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP)及HO活性抑制剂锡中卟啉(SnMP)干预后对心室重构及心功能各项指标的远期影响;测定血糖(GLU)、总胆红素(TB)、C反应蛋白(CRP)、血清肌酐(Cr)、转氨酶(ALT)等指标;采用ELISA测定白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、脂联素、超敏CRP(HsCRP)等水平.结果:应用CoPP上调HO-1水平,能够改善糖尿病心梗大鼠左心室压力大变化速率、左室射血分数、左室短轴缩短率,缩小左室舒张末期内径,升高血清胆红素、一氧化氮和前列环素水平,提高心肌组织磷酸化的内皮型一氧化氮合酶(peNOS)、磷酸化的活化蛋白激酶(pAkt)、磷酸化的腺苷活化的蛋白激酶(pAMPK)的表达,降低血清TNF-α、hs-CRP水平.使用SnMP后,能够阻断CoPP的上述作用.结论:上调HO-1通过peNOS、pAMPK途径能够长期地改善血管内皮功能,抑制炎症反应,提升血清胆红素等,有效抑制心室重塑,改善梗死后糖尿病大鼠远期的心功能.
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自噬在血红素氧合酶1抑制大鼠肝脏缺血/再灌注损伤中的作用
目的 探讨自噬在血红素氧合酶1(HO-1)减轻肝缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用.方法 按随机数字表法将40只健康雄性SD大鼠分为5组,每组8只.以肝左叶和中叶缺血1 h/再灌注6h制备肝部分I/R损伤模型;假手术(Sham)组只开腹,不进行肝脏I/R.钴原卟啉(CoPP)组于I/R前24h腹腔注射HO-1诱导剂CoPP 5 mg/kg,而锌原卟啉(ZnPP)组和6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)组分别在CoPP预处理后、I/R前1h腹腔注射HO-1抑制剂ZnPP 25 mg/kg或自噬抑制剂3-MA 30 mg/kg.于再灌注6h取下腔静脉血和肝组织,采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织病理学改变并进行病理评分;原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);电镜下观察肝组织自噬体形成情况;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织HO-1、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)及自噬相关基因Beclin-1、Atg-5的mRNA表达;胆红素生成法检测肝组织HO-1活性.结果 与Sham组比较,I/R组血清ALT明显升高(U/L:560.3±73.6比49.1±13.8,P＜0.01),HE染色显示肝组织损伤严重,肝组织病理评分显著升高(分:12.0±2.0比1.3 ±0.9,P＜0.01),TUNEL检测显示凋亡细胞明显增多,AI和caspase-3 mRNA表达明显增加[AI:(19.38±3.07)％比(3.25±1.28)％,caspase-3 mRNA(2-△△CT):4.62±0.40比1.05±0.15,均P＜0.01],而HO-1表达和自噬表达差异均无统计学意义.与I/R组比较,CoPP组肝脏损伤程度明显减轻[ALT(U/L):223.3±34.4比560.3±73.6,病理评分(分):5.6±2.3比12.0±2.0,AI:(11.38±2.39)％比(19.38±3.07)％,caspase-3 mRNA(2-△△CT):2.42±0.33比4.62±0.40,均P＜0.01],HO-1表达及肝细胞自噬增加[HO-1 mRNA (2-△△Cr):3.01±0.71比1.14±0.20,HO-1活性(pmol·mg-1·h-1):259±37比113±26,自噬体计数(个):8.75±0.87比1.25±0.71,Beclin-1 mRNA(2-△△CT):2.85±0.28比1.15±0.11,Atg-5 mRNA (2-△△Cr):2.44±0.25比1.14±0.12,均P＜0.01].给予ZnPP后可消除CoPP预处理增加自噬表达及减轻肝损伤的作用;而给予3-MA则不影响CoPP预处理后HO-1的表达及活性增加,但可抑制自噬表达,同时也消除了CoPP预处理的保护作用.结论 HO-1可调控肝I/R时自噬的表达,而自噬可能介导了HO-1减轻肝脏I/R损伤的作用.
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苦蝶子注射液联合氯吡格雷治疗急性脑梗死的临床研究
目的 探讨苦蝶子注射液联合氯吡格雷治疗急性脑梗死的临床疗效.方法 选取2017年4月-2018年4月在郑州市第六人民医院治疗的急性脑梗死患者190例,根据用药的不同分为对照组(95例)和治疗组(95例).对照组口服硫酸氢氯吡格雷片,50 mg/次,1次/d;治疗组在对照组基础上静脉滴注苦蝶子注射液,40 mL加入5％葡萄糖注射液250mL,1次/d.两组患者均治疗2周.观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者NIHSS、mRS和SF-36评分及血清学指标和脑血流动力学.结果 治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为82.11％和97.89％,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组NIHSS评分和mRS评分显著降低(P＜0.05),SF-36评分升高(P＜0.05),且治疗组NIHSS、mRS和SF-36评分明显好于对照组(P＜0.05).治疗后,两组血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)、嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血小板激活因子(PAF)、血红素氧合酶1(HO1)水平均显著降低(P＜0.05),且治疗组上述血清学指标明显低于对照组(P＜0.05).治疗后,两组相对平均血流量(Qmean)和平均血流速度(Vmean)水平明显升高(P＜0.05),动态阻力(DR)、特性阻抗(ZCV)和脑血管周围阻力(R)明显降低(P＜0.05),且治疗组上述脑血流动力学指标明显优于对照组(P＜0.05).结论 苦蝶子注射液联合硫酸氢氯吡格雷片治疗急性脑梗死可有效促进神经功能恢复,及改善日常活动能力,具有一定的临床推广应用价值.
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COPD肺动脉高压大鼠肺组织血红素氧合酶1的表达及辛伐他汀治疗对其的影响
目的 研究辛伐他汀对COPD所致肺动脉高压的作用,以及对肺组织血红素氧合酶1(hemeoxygenas-1,HO-1)表达的影响.方法 24只大鼠随机分为3组:对照组、烟雾暴露组和辛伐他汀组.右心导管测定大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),以右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)作为评价右心室肥厚的指标.Real time RT-PCR方法测定肺组织HO-1 mRNA的表达,通过免疫印迹法(Western blot)及免疫组织化学方法检测肺组织HO-1蛋白的表达.结果 烟雾暴露组mPAP[(29.1±1.0) mmHg]、RVHI (0.29±0.004)较对照组[(16.1±1.0) mmHg、(0.21±0.005)]升高(P＜0.01),HO-1 mRNA是对照组的(2.82±1.77)倍;与烟雾暴露组相比,辛伐他汀组mPAP [(21.3±0.7)mm Hg]、RVHI (0.25±0.004)明显降低(P＜0.01),HO-1 mRNA明显升高(P＜0.05),是对照组的(7.56±2.91)倍;Western blot及免疫组织化学结果显示烟雾暴露组大鼠HO-1表达增强,辛伐他汀治疗后表达进一步增强.结论 辛伐他汀降低COPD所致肺动脉高压,其机制和诱导HO-1表达增加有关.
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乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对 Nrf2／HO-1通路影响的研究
目的：观察乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注后脑损伤的保护作用及对Nrf2／HO-1通路的影响。方法健康成年雄性CD1小鼠120只，随机分成4组（ n＝30）：假手术组、脑缺血-再灌注组、乌司他丁小剂量组和乌司他丁大剂量组，采用改良线栓法制备大脑中动脉缺血-再灌注模型。缺血60min，再灌注24h后，采用Western blot和RT-qPCR来观察脑缺血后梗死侧皮质Nrf2和HO-1蛋白及基因表达变化，比较各组神经功能，脑梗死体积，脑组织含水量，梗死侧皮质丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）含量。结果乌司他丁能够明显上调缺血脑皮质组织Nrf2、HO-1的表达，增加SOD活性，减少MDA的含量，改善神经功能缺失，减轻脑水肿，减小梗死体积。结论 Nrf2／HO-1通路参与了脑梗死后乌司他丁对缺血脑组织的保护作用。
关键词： 脑缺血 NF-E2相关因子2 血红素氧合酶1 乌司他丁 -
α-硫辛酸对帕金森病大鼠脑内黑质多巴胺能神经元保护机制研究
目的 探讨α-硫辛酸(LA)对帕金森病(PD)大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护机制.方法 60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、实验组和药物干预组,每组20只.对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油,实验组和药物干预组背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型,药物干预组大鼠同时给予LA腹腔注射;采用Western blot检测大鼠中脑多巴胺能神经元中酪氨酸羟化酶(TH)、转录因子NF-E2相关因子-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)和血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化;采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化.结果 实验组大鼠中脑TH蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组中脑TH蛋白在黑质比鱼藤酮组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠Nrf2和HO-1蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组Nrf2和HO-1蛋白表达比实验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显降低(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠纹状体组织中脂质代谢产物MDA含量明显增加(P<0.01),药物干预后纹状体中MDA含量明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增高(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠GSH的含量明显减少(P<0.01),药物干预后GSH明显增加(P<0.05),但较对照组仍显著降低(P<0.05).结论 LA能激活Nrf2-ARE信号通路对PD大鼠模型中脑多巴胺能神经元起到有效的神经保护作用,改善PD样症状.
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草木犀正丁醇提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响
目的:探讨草木犀的正丁醇提取物在炎症中的作用.方法:通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化,实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量.结果:免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色,NF-κB多分布在胞质未被激活;仅有LPS干预时,胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核表达增强.药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高,且呈剂量依赖型关系;Westem blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高.结论:草木犀的正丁醇提取物通过抑制NF-κB的激活,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.
关键词： 草木犀 正丁醇 RAW 264.7细胞系 NF-κB 血红素氧合酶1 -
莱菔硫烷诱导胰岛系INS-1细胞血红素氧合酶1的表达
背景:莱菔硫烷可用于氧化应激相关疾病的治疗,血红素氧合酶是一种催化血红素降解的应激蛋白,已经成为预防氧化攻击的首选研究靶标之一.目的:观察核因子E2相关因子2激动剂莱菔硫烷对大鼠胰岛细胞系INS-1细胞血红素氧合酶1蛋白表达作用及细胞保护机制.方法:体外培养INS-1细胞,先用3 μmol/L莱菔硫烷进行干预培养3 h,再分别加入不同的胰岛素抵抗诱导剂葡萄糖氧化酶、地塞米松和葡萄糖胺刺激建立胰岛素抵抗细胞模型.结果与结论:3 μmol/L莱菔硫烷处理INS-1细胞中血红素氧合酶1的表达增加(P < 0.05),其效应在4 h后达到高峰(P < 0.05).3 μmol/L莱菔硫烷的预处理可逆转由胰岛素抵抗诱导剂导致的血红素氧合酶1表达下调(P < 0.05).而且在葡萄糖胺处理的INS-1细胞中,莱菔硫烷对血红素氧合酶1的表达改善与磷酸化PKB的表达上调具有正相关性(P < 0.05,r = 0.23).结果证实,莱菔硫烷可能通过诱导核因子E2相关因子2介导的血红素氧合酶1表达,增强胰岛细胞抗氧化防御功能和抗损伤信号系统,从而达到拮抗胰岛素抵抗诱导剂对胰岛细胞的损伤作用.
关键词： 莱菔硫烷 胰岛细胞 血红素氧合酶1 核因子E2相关因子2 组织工程 -
丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶1表达的影响
背景:器官移植前使用丹参预处理能够保护组织缺血-再灌注损伤,改善移植器官存活率.目的:观察含丹参的冷灌注液对同种异体大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1表达的影响,以及对供体肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:将SD雄性大鼠随机分成UW液组(术中使用UW液灌注保存)、丹参+UW液组(术中使用丹参+UW液灌注保存)、ZnPP预处理组(移植前24 h腹腔内注射ZnPP,术中使用丹参+UW液灌注保存),建立稳定的大鼠同种异体肝移植模型.同时取10只正常大鼠作为正常对照.结果与结论:丹参+UW液组和UW液组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显低于ZnPP预处理组(P < 0.01).血红素氧合酶1mRNA及其蛋白在丹参+UW液组中较UW组表达更明显,在ZnPP预处理组中表达明显受到抑制(P < 0.05).丹参+UW液组肝脏Suzuki标准评分明显低于ZnPP预处理组及UW液组(P < 0.05).表明丹参能上调同种异体的大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1 mRNA及其蛋白的表达,减轻供肝缺血-再灌注损伤,保护移植大鼠肝脏.
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血红素氧合酶1提高骨髓间充质干细胞在梗死后心脏的存活
背景:移植骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)修复梗死后心功能受到围移植期移植细胞大量死亡的限制.因此寻找一种保护因子对移植细胞提供保护至关重要.目的:观察血红素氧合酶1(heme oxygenase,HO-1)对BMSCs在梗死后心脏生存的影响.方法:体外分离扩增培养大鼠BMSCs,Adv-hHO-1、Adv-GFP分别转染,移植前DAPI标记.结扎左前降支1 h后,分别将DAPI-hHO-1-BMSCs、DAPI-GFP-BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区周边,对照组注射等量PBS.结果与结论:Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达.仅hHO-1-BMSCs组稳定表达hHO-1 mRNA;hHO-1-BMSCs组血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子表达均高于其他两组(P < 0.01);存活BMSCs数量在第3,7天均明显高于GFP-BMSCs组(P < 0.05);大鼠心功能各项参数明显优于其他两组(P < 0.01).移植4周后,HO-1-BMSCs组梗死区周边毛细血管密度明显高于GFP-BMSCs组和对照组(P < 0.01),且胶原蛋白沉积减少,心室壁变厚,梗死面积较其他两组明显缩小(P < 0.01).提示HO-1提高移植到梗死心脏BMSCs的存活,HO-1协同BMSCs抑制心室重构,改善心功能.
