端粒酶在干细胞研究中的主要进展

端粒酶的表达对于维持干细胞自我更新能力和复制潜能具有重要意义.影响干细胞中端粒酶表达的因素包括生长因子、基因调控及其它物理化学因素.利用人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因修饰干细胞,可有效地体外长期扩增并维持某些干/祖细胞的多向分化潜能特性;通过异位表达hTERT使干细胞永生化,可为干细胞基础研究及临床应用提供药物筛选模型或细胞模型.

大肠癌组织中端粒酶催化亚单位的表达及临床意义

目的:探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)在大肠癌患者中的表达情况及与及临床病理类型、淋巴结转移和复发之间的关系.方法:免疫组化法测定大肠癌组织(n=45)、腺瘤组织(n=16)及正常大肠黏膜(n=10)hTERT表达情况,并将hTERT表达情况与大肠癌临床病理类型、淋巴结转移和肿瘤复发之间的关系进行总结.结果:大肠癌患者癌组织中的hTERT阳性率为77.8%,显著高于腺瘤组(2/16)和正常大肠黏膜组(0/10),有显著性差异(P＜0.05).hTERT表达强度与淋巴结转移呈高度相关性(r=5.2,P＜0.05).大肠癌复发转移平均时间阳性组为34±5 mo,阴性组为20±6 mo,差异有显著性(P＜0.05).结论:hTERT在大肠癌组织中有高表达,hTERT免疫组化检测结果可以作为大肠癌早期诊断和淋巴结转移的一个重要参考指标.

大肠癌hTERT和P16表达与端粒酶活性的关系

目的:探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)和P16基因表达与端粒酶活性的关系及其在大肠癌发生过程中的作用.方法:采用原位逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化SP法分别检测46例大肠癌及其相应正常组织中hTERTmRNA与P16蛋白表达.用端粒重复序列扩增法(TRAP)测定上述组织标本中的端粒酶活性.结果:hTERTmRNA与端粒酶活性在大肠癌组织中阳性率分别为87.0%和80.4%,而在相应正常组织中均为阴性.大肠癌中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(r=0.70,P<0.01).P16蛋白在大肠癌与正常组织中阳性表达率为41.3%和93.5%,二者比较差异有非常显著性(P

胆囊癌hTERT、c-myc的表达及相关性的研究

端粒酶(telomerase)与细胞恶变、肿瘤的发生发展密切相关[1].而端粒酶催化亚单位(hTERT)可能在端粒酶活性调节中起重要作用[2].

小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit, hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用.方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5 510 bp)和含有鼠U6启动子pU6 (3 300 bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒.应用LipofectamineTM2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果.设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒.LipofectamineTM2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞.分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况.结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3 300 bp和约300 bp条带,而后者出现3 300 bp和约350 bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符.说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒.K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少.定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制.结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达.

人端粒酶逆转录酶、bcl-2蛋白在病理性瘢痕组织中的表达及其相关性

目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase revere transcriptase,hTERT)、bcl-2蛋白在病理性瘢痕组织中的表达及其在瘢痕发生、发展中的作用和意义.方法 采用链霉亲和素-过氧化物酶免疫组织化学法,对18例瘢痕疙瘩组织、18例增生性瘢痕和18例正常皮肤标本中成纤维细胞hTERT和bcl-2蛋白表达进行检测,用SPSS统计软件进行相应统计学分析.结果 hTERT和bcl-2蛋白在瘢痕疙瘩组织中有较强的表达,阳性表达率分别为72.2%和83.3%.在增生性瘢痕和正常皮肤组织中表达较弱,前者显著高于后两者,其差异具有统计学意义(P＜0.01).增生性瘢痕hTERT的表达高于正常皮肤组织,其差异有统计学意义(P＜0.05),但bcl-2表达两者差异无统计学意义(P＞0.05).hTERT蛋白和bcl-2蛋白在病理性瘢痕组织中的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 端粒酶和bcl-2与病理性瘢痕的发生、发展及其演变过程密切相关,两者可能存在某种相互调控机制.设想减少hTERT和bcl-2在病理性瘢痕成纤维细胞的过度表达或许是抑制瘢痕增生的新途径.

急性淋巴细胞白血病端粒酶催化亚单位表达的检测及其应用

急性淋巴细胞白血病(ALL)是小儿时期常见的恶性肿瘤.目前研究表明,人端粒酶逆转录酶(hTERT,又名端粒酶催化亚单位)表达可能是肿瘤发生、发展的关键步骤[1,2].我们采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALL患儿外周血 hTERT的表达,试图探讨其临床意义.

非小细胞肺癌端粒酶活性与端粒酶RNA、端粒酶催化亚单位的相关性及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)端粒酶活性(telomerase activity,TA)、端粒酶RNA(telomerase RNA,hTR)、端粒酶催化亚单位(telomerase catalytic subunit,hTRT/hEST2)编码基因的表达,彼此间相关性及其预后意义.方法 TRAP-PCR(telomerase repeat amplification protocol PCR)检测TA,RT-PCR检测hTR,原位杂交检测hTRT/hEST2 mRNA表达.结果非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2 mRNA阳性率分别为68.4%(26/38)、55.2%(32/58)和74.1%(43/58),TA与hTRT/hEST2阳性相关(r=0.84,P=0.01),与hTR无相关性(r=0.16,P=0.23).低分化以及有淋巴结或远处转移者TA及hTRT/hEST2阳性率增高;TA及hTRT/hEST2阳性组中位生存期(10.4个月,7.5个月)低于阴性组(13.5个月,14.7个月;P=0.074,P=0.01),hTR阳性组中位生存期(12.9个月)略高于阴性组(11.5个月,P=0.23),仅hTRT/hEST2阳性与阴性组生存期差异有显著性;多因素Cox回归分析hTRT/hEST2对生存期有影响.结论非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2表达高于癌旁正常组织;hTRT/hEST2够能反应TA活性,二者为NSCLC恶性表型增高的标志;hTRT/hEST2具有独立的预后意义.

胃黏膜端粒酶活化与细胞凋亡的关系

目的研究胃癌及胃癌前病变组织端粒酶催化亚单位的表达,探讨端粒酶活性与细胞凋亡的关系,以揭示端粒酶活化和细胞凋亡在胃癌发生中的作用.方法选择64例慢性胃炎及胃癌患者,其中慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠上皮化生者15例,伴中、重度异型增生者14例,胃癌19例.采用SP法检测hTERT蛋白表达,采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡.结果萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织hTERT蛋白表达率分别为25.0%、46.7%、64.4%和78.9%,呈递增趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05).萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织细胞凋亡指数(%)分别为11.54±2.28、17.05±2.88、7.41±1.32和5.03±2.23,呈递减趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05).hTERT蛋白阳性患者细胞凋亡指数为8.45%±5.30%,显著低于hTERT蛋白阴性患者(11.86%±4.24%,P<0.05).结论胃癌前病变至胃癌的演化过程中,端粒酶激活并诱导细胞凋亡异常,二者同时存在,破坏了胃黏膜上皮的稳定性,这可能是胃黏膜细胞癌变的机制之一.

幽门螺旋杆菌感染AGS胃癌细胞后对其表达hTERT和Bcl-2的影响

目的 研究幽门螺旋杆菌(Hp)感染对AG8胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2的影响.方法 培养Hp,感染培养的AGS细胞,RT-PCR检测hTERT和Bcl-2 mRNA的表达情况.结果 与阴性对照组相比,Hp感染24h后可诱导AOS细胞表达hTERT,48h后表达高;Hp感染4h后,能明显诱导Bcl-2表达.结论 Hp感染能激活端粒酶,并能促进Bcl-2的表达,因而可能是胃癌发生的机制之一.

喉鳞状细胞癌组织中HPV16/18感染与hTERT、c-myc蛋白表达的关系及意义

目的 研究喉鳞状细胞癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染与端粒酶催化亚单位(hTERT)和c-myc蛋白表达的关系及意义.方法 在39例喉鳞癌组织、10例声带息肉组织中应用原位杂交法检测HPV16/18的感染情况,同时应用免疫组化法检测hTERT和c-myc蛋白的表达情况,并分析喉鳞癌组织中HPV16/18感染、hTERT和c-myc蛋白表达之间的相关性.结果 39例喉鳞癌组织中HPV16/18感染阳性表达率48.7%(19/39),hTERT、c-myc蛋白阳性表达率分别为84.6%(33/39)、82.1%(32/39).10例声带息肉组织中HPV16/18感染、hTERT蛋白均未见阳性表达,c-myc蛋白阳性表达率为10%(1/10).经统计学分析HPV16/18感染、hTERT和c-myc蛋白在喉鳞癌组织与声带息肉组织间的表达差异均有统计学意义.喉鳞癌组织中HPV16/18感染与hTERT和c-myc蛋白阳性表达之间均存在显著正相关关系.结论 喉鳞癌组织中hTERT和c-myc蛋白表达的改变可能与HPV16/18感染有关,且三者相互作用,共同影响喉鳞癌的发生、发展.这些指标综合分析可能为阐明HPV16/18的恶性转化机制以及为喉鳞癌早期诊断和基因治疗提供参考依据.

端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤中的表达

目的:探讨端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤发生中的作用.方法:应用免疫组织化学方法检测60例骨肉瘤、12例骨软骨瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc的表达,采用显微图像分析系统进行平均灰度值测定.结果:骨肉瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc蛋白的平均灰度值均低于骨软骨瘤中两者的平均灰度值,且有统计学意义(P＜0.01).骨肉瘤中端粒酶催化亚单位与c-myc蛋白平均灰度值间无相关性(P＞0.05).结论:端粒酶催化亚单位、c-myc蛋白分别与骨肉瘤的发生有关.

端粒酶催化亚单位在细胞学诊断肺癌中的表达

目的:检测支气管镜涂片中端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达,探讨其与肺癌发生的关系,探索细胞学诊断肺癌的新途径.方法:应用免疫组化和原位杂交的方法检测137例支气管镜涂片中hTERT和hTERT mRNA的表达,并与临床病理资料及细胞学诊断进行相关性分析研究.结果:137例病例中,hTERT和hTERT mRNA表达阳性率在细胞学诊断为癌细胞组分别为67.86%(57/84)和79.76%(67/84);疑癌或异型细胞组分别为46.67%(7/15)和60.00%(9/15);未见癌细胞组分别为5.26%(2/38)和39.47%(15/38).二者的表达在癌细胞组明显高于其他2组(P＜0.05).其中有组织学对照的105例,hTERT和hTERT mRNA阳性表达率与细胞学诊断阳性率相一致.hTERT和hTERT mRNA的阳性表达率呈正相关性(r=0.994,P＜0.05),但这二者的表达率与组织病理类型及其他临床特征差异均无显著性(P＞0.05).结论:端粒酶在支气管涂片中的阳性表达与肺癌的发生密切相关.hTERT和hTERT mRNA在癌组织中均存在高表达,且比传统形态学诊断更敏感.而hTERT蛋白的表达在细胞学涂片中更可靠(假阳性率低).因此检测这二者的表达有助于提高肺癌的细胞学检出率,对早期发现、诊断肺癌有重要意义.

胃癌组织中端粒酶催化亚单位检测的临床意义

端粒酶是一种核糖核蛋白酶，广泛存在于永生化细胞和肿瘤细胞中。在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用。hTERT是端粒酶的催化亚单位，可以催化端粒酶复制并延长端粒的作用，对于维持端粒酶的活性具有决定性作用。因此，hTERT与肿瘤的关系比端粒酶更为密切，有望代替端粒酶活性检测成为肿瘤诊断的指标之一。目前国内对于hTERT的研究很少。我们应用RT-PCR方法检测胃癌组织中hTERTmRNA的表达，结合其组织病理学资料进行初步分析，以了解hTERT检测在肿瘤诊断中的临床意义。

端粒酶催化亚单位在涎腺腺样囊性癌中表达的研究

目的探讨端粒酶催化亚单位(即端粒酶逆转录酶,hTRT)在涎腺腺样囊性癌中表达及意义.方法选用32例腺样囊性癌标本,管状型9例,筛孔型17例,实体型6例,癌旁正常腺体作为对照组.采用原位杂交技术检测hTRT的表达,并观察hTRT分布与患者年龄、肿瘤大小和组织学分型间关系.结果 32例腺样囊性癌hTRT阳性表达率为87.5%.结论 hTRT在腺样囊性癌中高表达,其在不同的组织学分型等组别间无差异.

端粒酶催化亚单位在子宫腺肌病组织中的表达及其意义

目的 探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)与子宫腺肌病发生、发展的可能机制.方法 2006年1月至2009年8月在山西医科大学第一医院采用免疫组化SP法测定并比较70例因子宫腺肌病切除子宫的患者在位及异位子宫内膜和24例因宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ切除子宫的患者在位子宫内膜组织中端粒酶的表达阳性率.结果 子宫腺肌病患者在位、异位子宫内膜组织与CINⅢ患者子宫内膜组织hTERT表达阳性率分别为45.7％、70.0％和20.8％,3组比较差异有统计学意义(P＜0.05).研究组弥漫型与局限型hTERT表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).研究组增殖期与分泌期hTERT表达阳性率分别为90.5％和64.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).hTRET阳性表达率在研究组子宫体积的比较中差异有统计学意义(P＜0.05).研究组有月经改变组和无月经改变组hTERT表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 hTERT的高表达与子宫腺肌病及病变进展程度有关.

端粒酶催化亚单位在大鼠萎缩性胃炎中的表达及叶酸对其的影响

胃癌及癌前病变组织端粒酶催化亚单位mRNA的表达及其临床意义

目前,国内外关于胃癌的发病机制有诸多研究,端粒和端粒酶是近年来肿瘤基础研究的热点之一.端粒酶是一种逆转录酶,能以自身RNA为模板,合成端粒重复序列加至染色体末端,因此在细胞永生化和癌变过程中可能起到重要作用.研究表明,端粒酶在胃癌组织中高表达,在癌前病变组织里有所表达,但两者显著不同[1-5].本文检测了胃癌及癌前病变患者端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达,藉以了解端粒酶在胃癌发生发展过程中所起的作用.

榄香烯对HeLa细胞端粒酶催化亚单位基因表达的作用

目的:探讨HeLa细胞凋亡过程中,人乳头瘤病毒18型E6(HPV18-E6)基因、p53基因、端粒酶催化亚单位(hTERT)基因表达的变化,为临床诊断、治疗宫颈癌提供新思路.方法:用流式细胞仪、电镜证实细胞凋亡;用PCR和RT-PCR方法研究HPV18-E6基因、p53基因、hTERT基因表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系.结果:在榄香烯作用下,HPV18-E6基因、p53基因表达没有变化,但hTERT基因表达受到抑制.结论:榄香烯诱导HeLa细胞凋亡过程中,hTERT基因表达受到明显抑制,对于耐药性肿瘤,端粒酶活性的抑制可能代表一种新的化疗策略.

非小细胞肺癌端粒酶催化亚单位的表达及其与c-myc基因的相关性

目的研究端粒酶催化亚单位(hTERT)在非小细胞肺癌的表达及其与c-myc基因的相关性,并探讨肺癌hTERT激活的可能调节机制.方法应用荧光半定量逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测非小细胞肺癌组织hTERT及c-myc mR-NA表达水平,对两者进行统计学相关分析.结果51例非小细胞肺癌hTERT表达阳性率为86.3%,明显高于癌旁正常肺组织和良性病变组织(分别为14.3%和27.3%).hTERT的表达和肿瘤组织病理类型、分化程度、临床分期、肿块大小及淋巴结转移指标间未见明显相关性.相关分析显示hTERT与c-myc mRNA表达存在显著相关性,相关系数r=0.633(P＜0.001).结论hTERT对肺癌诊断具有潜在临床价值,hTERT的表达与c-myc表达存在显著相关性,进一步支持c-myc的过度表达可能是肺癌端粒酶激活和调节的机制之一.