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代谢综合征患者大网膜脂肪组织中胰岛素受体底物-1和葡萄糖转运蛋白-4m RNA表达的研究
代谢综合征(MS)的病理生理基础是胰岛素抵抗,其发生机制十分复杂,迄今尚未完全阐明.本研究采用一步法半定量逆转录(RT)-PCR技术,测定MS患者大网膜脂肪组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)和葡萄糖转运蛋白-4(Glut4)mRNA的表达水平,探讨其在MS发病中的作用.
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人脂肪组织脂肪水孔蛋白表达与体重关系的研究
脂肪水孔蛋白(AQPap)是一种由脂肪细胞特异表达的分子量为28 000的膜蛋白,它属于甘油水孔蛋白一类,主要生理功能是运转甘油.有研究表明具有胰岛素抵抗的肥胖糖尿病小鼠脂肪组织AQPap表达量上调,并伴有高甘油血症[1].为评价和比较体重变化对人脂肪组织AQPap基因及蛋白质表达的影响,本研究应用半定量逆转录PCR(RT-PCR)及Western blot技术,探讨AQPap表达异常与肥胖2型糖尿病发病的关系.
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肺耐药蛋白基因在多发性骨髓瘤中的表达及意义
到目前为止,多发性骨髓瘤(MM)的治疗仍以化疗为主,但是治疗效果并无质的飞跃,多药耐药的产生可能是一条重要的原因,肺耐药相关蛋白(LRP)基因于1995年被克隆并定位,我们用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了41例MM患者LRP基因的表达,探讨其表达与化疗反应及预后的关系,旨在进一步研究MM的耐药机制,指导其治疗.
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特发性脊柱侧凸患者椎间盘中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因mRNA的表达
目前,特发性脊柱侧凸(idiopathic scoliosis,IS)的确切原因尚不清楚.椎间盘中胶原质和(或)量的改变可能导致脊柱的稳定性降低,从而产生侧凸等畸形.本研究采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测IS患者椎间盘组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原基因mRNA的表达情况,探讨其在IS发生发展过程中的作用.
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急性白血病bcl-2和bax mRNA表达及其临床意义
本研究应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA印迹技术,探讨了32例急性白血病(AL)患儿bcl-2和bax mRNA表达及其比值对AL发病、治疗和预后的临床意义.
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急性淋巴细胞白血病端粒酶催化亚单位表达的检测及其应用
急性淋巴细胞白血病(ALL)是小儿时期常见的恶性肿瘤.目前研究表明,人端粒酶逆转录酶(hTERT,又名端粒酶催化亚单位)表达可能是肿瘤发生、发展的关键步骤[1,2].我们采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALL患儿外周血 hTERT的表达,试图探讨其临床意义.
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三磷酸胞苷合成酶基因在鼻咽癌纯瘤组织中的表达
三磷酸胞苷合成酶(cytidine triphosphate synthetase,CTPS)基因是从全基因组表达谱中筛选出的鼻咽癌候选癌基因[1].本组实验利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,sqRT-PCR)研究CTPS基因在纯化鼻咽组织中的表达,并与芯片杂交结果相比较,以进一步揭示CTPS基因在鼻咽癌发生、发展过程中的变化规律.
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急性白血病患者AML1a基因的表达
AML1基因又称为CBFα或RUNX1,其编码的产物是一种重要的转录因子,参与体内多种重要物质转录表达的调节.AML1功能缺失影响胚胎期定向造血[1],并在急性白血病(AL)的发生和发展中起着重要作用[2,3].AML1a是AML1的一种选择性剪接体,缺乏正常的转录调节功能,且具有更强的靶基因亲和力,能干扰AML1的正常功能,可能与AL的发生、发展有关[4].我们应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对AL患者AML1基因的表达进行研究,从分子水平探讨该基因在AL发生中的作用机制.
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Autotaxin基因在人胃癌中的表达及其意义
本研究采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Autotaxin(ATX)mRNA在胃癌中的表达,分析其表达水平与胃癌临床病理特征的关系,探讨ATX基因表达在判断胃癌浸润、转移及预后中的意义.
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紫杉醇诱导Jurkat细胞凋亡及其机制探讨(摘要)
目的观察抗微管药物紫杉醇对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl-2基因家族在此过程中的作用。方法将不同浓度的紫杉醇作用于Jurkat细胞,观察其作用的时间效应及剂量效应;在光镜和电镜下观察其形态变化;用流式细胞术分析细胞DNA含量的改变并作DNA片段分析;用免疫组织化学及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察在紫杉醇作用过程中凋亡调节基因bcl-2家族的mRNA和蛋白表达的变化。结果紫杉醇能抑制Jurkat细胞生长,在一定剂量和时间范围内,主要引起细胞凋亡,并显示剂量和时间效应,在这个过程中bax转录及蛋白表达增加,并出现bel-xs的转录。结论紫杉醇能特异地诱导Jurkat细胞凋亡,这为紫杉醇应用于T细胞淋巴瘤的治疗提供了依据,并为研究淋巴瘤细胞凋亡的基因调控提供了极好的模型,bax和bel-xs参与了紫杉醇诱导Jurkat细胞凋亡的基因调控。[全文刊登于中华血液学杂志2000,21(6):298]
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逆转录-聚合酶链反应检测人脑星形细胞瘤中短蛋白聚糖mRNA的表达
胶质瘤是中枢神经系统常见的原发性恶性肿瘤,以星形细胞瘤为常见.胶质瘤具有侵袭性生长的特点,手术难以彻底切除,且复发率高,预后不良.以往的研究表明,胶质瘤的侵袭性与神经系统细胞外基质密切相关.短蛋白聚糖(brevican)是脑内丰富的细胞外基质分子之一.有研究表明,短蛋白聚糖在人脑胶质瘤中显著增高,且与胶质瘤的侵袭性相关.本研究采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测短蛋白聚糖在人脑星形细胞瘤中的表达,探讨其与星形细胞瘤恶性程度的关系.
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KLK5 mRNA表达与乳腺癌发生和临床病理因素的关系
我们采用实时定量逆转录-聚合酶链反应( real-time RT-PCR)方法检测乳腺正常组织、乳腺良性肿瘤组织、乳腺原发癌和淋巴结转移癌组织中KLK5的mRNA表达量,分析其在乳腺发生和进展中的变化以及其在原发癌中的表达量与临床病理因素的关系.
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邻苯二甲酸二丁酯致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节发育异常的研究
我们通过对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕鼠染毒后子代尿道下裂雄性大鼠生殖结节进行病理学检查,并应用定时定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对生殖结节中Sonic hedgehog(Shh)信号通路中的关键因子:Shh、骨形态发生蛋白4(Bmp4)和受体补片1(Ptch1)的mRNA表达水平进行检测,从病理学和分子水平探讨DBP致尿道下裂的作用机制.
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RNA结合蛋白Sam68mRNA在原发性肝癌中的表达及意义
本研究旨在通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察3RNA结合蛋白Sam68 mRNA在人原发性肝癌中的表达,探讨其意义.
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RASSF1A基因在膀胱癌组织中的转录表达及其启动子甲基化状态的研究
Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是2000年从3号染色体短臂(3p21.3)上克隆出来的新型候选抑癌基因[1].我们采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测正常膀胱组织及膀胱癌组织中RASSF1 A基因的表达及其启动子甲基化的状态,探讨RASSF1A基因与膀胱癌生物学行为间的关系.
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运用低密度表达谱芯片检测原发胶质母细胞瘤中相关基因表达
我们应用选取目前胶质瘤相关基因调节通路中的95个基因制成的低密度表达谱芯片(MFC)通过高通量实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对胶质母细胞瘤中的基因表达进行分析,以期进一步阐明胶质母细胞瘤的发病机制,并希望能找到一种更简单、有效的能高通量检测肿瘤组织基因表达的方法.
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假基因PTENP1通过调控PTEN蛋白的表达影响胃癌进展的研究
目的:长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们缺乏蛋白编码的潜能。近年来,大量证据表明lncRNAs能以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达,从而在细胞增殖、细胞周期、分化和凋亡等多种生物学进程中发挥重要的作用。假基因转录得到的RNA也属于lncRNA的一类,以前被认为没有生物学功能,然而近一些假基因被证实在肿瘤的发生中发挥着关键的作用。PTENP1被发现在几种肿瘤细胞中发挥着抑癌作用,然而它在胃癌中的表达和生物学功能仍不清楚。本文主要研究胃癌组织和细胞系中PTENP1的表达水平及其与临床病理资料的关系,并探索PTENP1在胃癌细胞中发挥的生物学功能及相关机制。方法:通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测68例胃癌组织及4个胃癌细胞系中PTENP1的表达水平;通过去甲基化药物处理,研究PTENP1启动子异常甲基化与其表达的关系;分别转染pLJM-3'UTR或pLJM空质粒进入胃癌细胞系MGC-803及SGC-7901,通过CCK-8及平板克隆实验研究PTENP1对胃癌细胞增殖能力的影响,通过流式细胞分析及Hoechst staining实验研究PTENP1对细胞凋亡的影响,通过细胞划痕实验和transwell研究PTENP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;通过qRT-PCR及Western blot分析质粒转染后PTEN的表达变化。结果:qRT-PCR检测结果显示PTENP1表达在胃癌组织和细胞系中显著下调,其表达下调可能部分与DNA超甲基化有关。而且,PTENP1的低表达与肿瘤的大小、胃癌病人临床分期、胃癌浸润深度及淋巴结转移有关。另外,结果显示PTENP1能够调节胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。并且,PTENP13'UTR的表达升高能够提高PTEN蛋白的表达水平。结论:PTENP1在胃癌中表达显著下调,并能通过调节PTEN蛋白的表达发挥抑癌作用。
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急性脊髓损伤后胶质细胞源性神经营养因子的表达变化
胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)[1]是迄今为止所发现的对脊髓运动神经元营养活性强的神经营养因子.为进一步了解GDNF基因在急性脊髓损伤后的表达规律,笔者应用Allen坠击脊髓损伤模型,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、原位杂交等技术,观察GDNF在损伤脊髓中的分布,并半定量分析急性损伤期脊髓组织中GDNF表达水平的变化.