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恶性血液病FLT3基因突变的检测及临床意义
为了探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复(ITD)突变与恶性血液病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病(AML)、18例急性淋巴细胞白血病(ALL)、2例急性杂合性白血病(AHL)、12例骨髓增生异常综合征(MDS)、10例慢性粒细胞白血病(CML)、3例非何杰金淋巴瘤(NHL)及9例多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效.结果表明:在32例AML患者中5例FLT3/ITD(15.6%)阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例;而在18例ALL、2例AHL、12例MDS和10例CML患者中未检测到FLT3/ITD突变;在3例非何杰金淋巴瘤(NHL)、9例多发性骨髓瘤(MM)患者中亦未检测到FLT3基因.对2例特征性突变进行了测序,其结果显示,ITD位于外显子14,长度为27-63 bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括有2个SH2-结合结构域(YEYV与YEYDLK),其中1例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架.临床研究表明,FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高(p＜0.01),骨髓原始细胞比例高(p＜0.01),化疗后有低缓解率趋势.结论:FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变.FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞比例高,伴低缓解率趋势.FLT3/ITD基因突变可作为预测AML预后的一个指标.
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双重PCR检测急性髓系白血病FLT3-ITD和NPM1基因突变
本研究旨在建立一种同时筛查FLT3-ITD突变和NPM1突变的检测方法.设计2对引物,分别扩增NPM1基因的外显子12和FLT33基因的外显子14、内含子14、外显子15,以覆盖几乎所有已知突变位点.对双重PCR体系的反应程序和引物浓度比例进行优化,将双重PCR产物通过毛细管电泳分离,根据野生型产物和突变型产物的大小差异来判断突变存在与否并利用产物的峰面积对突变比例进行定量,并对突变阳性标本进行测序验证.结果表明,在93例标本中NPMl突变者17例(18.5%),FLT3-ITD突变者15例(16.3%),NPMl突变和FLT3-ITD突变双阳性6例.17例NPM1突变中7例M2、4例M4、5例M5、1例M6,其中10例男性、7例女性;有15例为A型,1例为B型.1例为Nm型;有1例CML急变为AML的标本中带有NPM1基因A型突变.15例FLT3-ITD阳性中1例M1、8例M2、2例M3、1例M4、3例M5,其中5例男性、10例女性.扩增产物测序结果进一步证明了该检测体系的准确性和可靠性.结论:建立了同时筛查FLT3-ITD突变和NPM1突变的检测体系,该体系以基因组DNA为模板.具有方便、快捷、准确、可定量的优点.
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PCR分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变
目前研究发现约30%急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者FLT3基因近膜区发生内部串联重复(ITD)突变,称为FLT3/ITD基因突变,该突变与ANLL的预后存在密切关系[1].为进一步研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变,采用PCR技术分析63例ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变.
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FLT3突变急性淋巴细胞白血病的临床特征
目的：探讨急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）患者FLT3（Fms-like tyrosine kinase）基因内部串联重复（internal tandem duplication，ITD）与其ASP835（D835）突变（mutation in the tyrosine kinase domain，FLT3-TKD）的发生情况及临床意义。方法采用聚合酶链反应法（polymerase chain reaction， PCR）扩增产物，采用限制性酶切产物分析法分析初诊患者基因易突变区的突变情况。结果147例ALL患者中，11例（7.5%）存在FLT3突变。FLT3突变患者与无突变患者在年龄、性别、骨髓原始细胞计数和外周血原始细胞计数的比较均无统计学意义（均P＞0.05）。T细胞型ALL（T-ALL）患者中FLT3突变的发生率为17.2%，其他类型ALL患者中FLT3突变的发生率为5.1%，差异具有非常显著的统计学意义（P＜0.001）。结论 ALL患者存在FLT3突变，且T-ALL患者的FLT3突变率高于其他类型患者。
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急性髓细胞白血病NPM1和FLT3-ITD突变检测临床意义分析
目的:研究核仁磷酸蛋白1(NPM1)FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变在急性髓细胞白血病(AML)中发生的情况,并了解其临床特征及预后意义.方法:分别应用高分辨熔解曲线(HRM)和变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测103例初诊AML患者NPM1和FLT3-ITD突变情况,并结合临床资料进行分析.结果:103例初诊AML患者中,31例发现NPM1基因突变,20例发现FLT3-ITD突变,阳性率分别为30.1％和19.4％,而在核型正常组中所占的比例分别为47.6％(20/42)和26.2％(11/42).FLT3-ITD突变型外周血白细胞计数高,t=2.21,P=0.037；骨髓原始细胞比例高,t=2.44,P=0.023；NPM1突变型亦表现为高外周血白细胞计数,t=2.24,P=0.034.在非M3患者中,NPM1突变型的CR与野生型差异无统计学意义,但第1次化疗的CR(76.9％)明显高于野生型患者(35.0％),x2=12.78,P=0.000 35；FLT3-ITD突变型患者的CR为58.8％,野生型患者为82.6％,两者比较,x2=4.48,P=0.034；FLT3-ITD突变型患者第1次化疗的CR为17.6％,而野生型患者为55.1％,两者比较,x2=6.23,P=0.012.31例NPM1基因突变中有6例合并FLT3-ITD突变,NPM1+/FLT3-ITD-组的CR高(85.0％),1年内RR率低(17.6％)；NPM1-/FLT3-ITD+组的CR低(54.5％),1年内RR率高(50.0％).结论:NPM1和FLT3-ITD突变是AML患者常见的分子遗传学异常,与预后密切相关,可成为目前细胞遗传学预后分组的重要补充,对于指导AML患者的个体化治疗具有重要的临床价值.
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急性淋巴细胞白血病FLT3基因突变的发现及临床意义
目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况.方法 采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLF3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意义.结果 61例ALL患者中,2例出现FLT3-ITD,1例出现FLT3-TKD.结论 少数ALL患者体内存在FLT3突变.
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FLT3-ITD突变检测及其临床意义
Fms样酪氨酸激酶-3(fns-like tyrosine kinase-3,FLT3)是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员,在约20%～30%的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中FLT3基因中外显子14和15存在内部串联重复(FLT3 internal tandem duplication,FLT3-ITD),近年来对于FLT3突变的检测、预后意义以及FLT3抑制剂的应用研究比较深入,本文对此作一综述.
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FLT3基因内部串联重复突变与急性白血病的关系及临床意义
目的研究FLT3基因的内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义.方法采用PCR方法分析143例急性髓系白血病(AML)、25例急性淋巴细胞白血病(ALL)、2例急性杂合性白血病(AHL)、17例骨髓增生异常综合征(MDS)和7例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子14和15中ITD突变,分析FLT3-ITD阳性AML患者的临床特征及疗效.结果143例AML患者中37例(25.9%)FLT3-ITD阳性,其中53例M2中10例、40例M3中15例、20例M4中4例、23例Ms中8例.在25例ALL、2例AHL、17例MDS和7例CML-BC患者中未检测到FLT3-ITD突变.对其中5例特征性突变测序结果显示,ITD位于外显子14,长度为21～60 bp,3例为单纯串联重复,2例同时出现插入序列,均未改变FLT3阅读框架.临床研究表明,FLT3-ITD突变在染色体核型正常患者中占有较高比例(P＜0.05),FLT3-ITD阳性患者外周血白细胞数高(P＜0.05),化疗后完全缓解率低(P＜0.05).结论FLT3-ITD突变多见于M3、M5患者,为框内突变(In frame mutation).FLT3-ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,化疗后完全缓解率低.
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急性髓系白血病FLT3与NPM1基因突变的研究
FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)是近年在急性髓系白血病(AML)患者中发现的常见突变类型,在AML中的发生率为15%～35%,大量研究显示,FLT3突变与外周血高白细胞、骨髓高白血病细胞比例有关,是AML的重要预后影响因素[1-2],核仁磷酸蛋白(NPM1)基因突变也是AML患者常见的一种基因突变,突变率为25%～35%,在正常核型AML患者中突变率更高,研究显示单独NPM1突变往往预后较好,但当合并FLT3-ITD突变时预后较差[3-6].我们观察了FLT3和NPM1突变在100例AML患者中的发生情况,分析其临床特征、疗效及预后的关系.
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白血病患者Flt-3基因突变检测及临床意义
Flt-3基因是近年来发现的早期造血细胞生长因子受体基因,属Ⅲ型受体酪氨酸激酶.Flt-3与其配体(FL)结合后能通过信号传导途径对造血干/祖细胞的增殖和分化起重要的调节作用.Flt-3基因突变已经被公认是急性髓系白血病(AML)中发生率高的一种基因改变,与白血病的发生和发展存在密切关系[1],且为预后不良的独立指标.我们在前期研究中,发现了急性白血病细胞株Flt-3基因存在近膜区突变型内部串联重复(internal tandem duplication,ITD).在此基础上对118例恶性白血病患者外周血单个核细胞(MNC)的Flt-3基因突变情况进行了检测.
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FLT3 I836/M837位三碱基缺失的急性髓系白血病1例报告
FLT3属Ⅲ型受体酪氨酸酪激酶成员,对造血发育起重要调节作用.近年研究发现急性髓系白血病(AML)患者常带有FLT3突变,其中内部串联重复(FLTE-ITD)约占成人急性AML 20%,酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变约占7.7%,常位于D835及其附近.关于FLT3D835/I836缺失突变国外偶见报道[1],国内尚未见报道.近发现1例AML-M4患者涉及ELT3 I836/M837位点三个碱基缺失,报告如下.
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FLT3突变,FLT3表达水平在急性髓系白血病中的意义
目的 研究FLT3基因长度突变(FLT3-LM)及FLT3受体在初诊AML患者中骨髓单个核细胞(MNC)的表达水平在急性髓系白血病(AML)的临床意义.方法 采用基因组DNA聚合酶链反应(PCR)技术检测95例初诊AML患者FLT3-LM,采用流式细胞仪(FCM)检测分析其中68例FLT3的表达水平.结果 初诊AML患者中FLT3-LM阳性率为15.8%;FLT3-LM+存在于AML-M1(3/18),M2(4/24),M3(2/17),M5(5/25),M6(1/4)亚型中(P＞0.05);22例ALL和10例正常对照中均未检测到FLT3-LM阳性;FLT3-LM在正常染色体核型组和伴t(15;17)核型异常患者中突变率分别为23.0%(10/52例)和16.7%(2/12例),较其他核型组突变率4.3%(1/23例)高,但无统计学差异;FLT3-LM组与非突变组在年龄,性别,诱导缓解率方面无统计学差异(P＞0.05);FLT3-LM阳性患者外周血白细胞高,骨髓原始细胞高(P＜0.05).AML患者FLT3表达水平为(11.48%±14.87%),高于10例正常对照组水平(1.10%±0.31%)(P＜0.05);FLT3表达水平在12例FLT3-LM+组为(5.86%±6.85%),低于56例非突变组(14.14%±16.25%)(P＜0.05);临床资料显示,诱导治疗后缓解组的FLT3表达水平为(5.52%±2.67%),低于非缓解组FLT3表达水平(25.53%±22.60%)(P＜0.05).结论 FLT3长度突变是AML中发生频率较高的一类突变;突变患者临床特征表现为外周血高白细胞,骨髓高原始细胞;FLT3受体在AML患者单个核细胞中呈高水平表达;FLT3受体高表达与低诱导缓解率有关.FLT3突变与FLT3受水平检测可能有助于白血病诊断,预后判断和靶向治疗.
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稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定
构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型.筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长.然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞.收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况.207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长.双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证.慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增.同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况.通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型.
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FLT3基因突变与急性髓细胞性白血病的关系及临床意义
目的 研究FLT3基因内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性髓细胞性白血病(AML)的关系及临床意义.方法 采用基因组PCR及RT-PCR方法检测126例AML患者的FLT3/ITD突变.结果 106例初治AML患者检出FLT3/ITD突变者18名,突变率17.0%,在20例完全缓解期患者及对照组中均未检测到FLT3/ITD突变,基因组PCR及RT-PCR两种方法检测FLT3/ITD突变的结果一致,对其中3例特征性突变测序结果显示,ITD主要位于外显子14,亦可累及内含子14和外显子15,长度为21～42bp,均为框内突变.FLT3/ITD阳性患者外周血白细胞计数高(P＜0.01),骨髓白血病细胞比例高(P=0.039),早期病死率高(P=0.036).在M3患者中,FLT3/ITD阳性者完全缓解率低(P=0.015).在非M3患者中,FLT3/ITD阳性者的完全缓解率与阴性者比较,差异无统计学意义(P＞0.05),FLT3/ITD阳性患者完全缓解后检测FLT3/ITD转阴性.结论 FLT3/ITD阳性AML患者早期死亡率高,FLT3/ITD阳性M3患者预后差,FLT3/ITD突变检测对于AML患者疗效评价、预后估计具有重要意义.
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儿童急性髓系白血病FLT3-ITD突变分析及其临床意义
目的 探讨FLT3-ITD在AML患儿的临床意义.方法 收集我院2013年-2015年收治的45例AML患儿骨髓样本,提取全基因组DNA,采用PCR扩增产物克隆测序法检测FLT3-ITD基因突变情况,解析序列,整理并分析其插入的重复序列,同时分析FLT3-ITD阳性患儿的临床特征及对预后的影响.结果 45例初诊AML患儿中,FLT3-ITD突变阳性患儿4例(8.9%),表现为杂合突变和纯合突变,解析出4条插入序列,插入长度范围为18-99bp.阳性患儿伴染色体正常核型1例,异常核型3例,突变型患儿白细胞及骨髓原始细胞比例高于野生型患儿,差异有统计学意义,但在性别、年龄、血红蛋白、血小板无显著差异.结论 FLT3-ITD突变检测有助于急性白血病基因分型,是儿童AML预后不良的一个危险因素,可作为预后的分子标志物.
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急性白血病FLT3基因突变的检测及临床意义
为探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复(internal tandem duplication ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病(AML),18例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效.结果 表明:32例AML患者中5例FLT3/ITD(15.6%)阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例.而18例ALL患者中未检测到FLT3/ITD突变.对其中2例特征性突变测序结果 显示,ITD位于外显子14,长度为27～63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括2个SH2-结合结构域(YEYV与YEY-DLK),其中一例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架.临床研究表明FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高(P<0.01),骨髓原始细胞比例高(P<0.01),化疗后有低缓解率趋势.结论 :FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变.FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞比例高,伴低缓解率趋势.FLT3/ITD基因突变可作为预测AML预后的一个指标.
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骨髓异常增生综合征患者FLT3基因的表达及意义
目的 研究骨髓异常增生综合征(MDS)患者FLT3基因表达水平及FLT3基因长度突变(FLT3-LM),以探讨其对MDS的临床意义.方法 收集38例诊断明确的MDS及10例非恶性血液病患者骨髓并提取单个核细胞,应用基因组DNA聚合酶链反应(PCR)技术检测FLT3基因表达水平和FLT3-LM.结果 38例MDS患者骨髓单个核细胞有11例检测到FLT3受体的表达,阳性率为28.9%,10例对照组均无FLT3受体的表达,两者差异有统计学意义(P<0.05).11例FLT3受体表达阳性患者中有2例检测到FLT3-LM,阳性率为18.2%,10例正常对照均无FLT3-LM.两者差异有统计学意义(P<0.05).FLT3/ITD(+)和FLT3/ITD(-)患者在年龄、外周血血红蛋白水平、血小板计数、白细胞计数、外周血原始细胞比例之间无相关性.FLT3/ITD(+)患者倾向于有较高的骨髓原始细胞比例(P=0.102).结论 MDS患者中存在FLT3-LM,FLT3-LM与疾病危重程度相关,可能有助于MDS诊断、预后判断和靶向治疗.
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c-kit 突变在急性髓系白血病中的研究进展
急性髓系白血病（AML）是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病，很难治愈。目前分子靶向治疗正在被研究中，其中酪氨酸激酶发生突变者主要是Ⅲ型受体酪氨酸激酶超家族的成员，常见的受体型酪氨酸激酶突变是 c-kit 突变。c-kit 在60%~80%急性髓系白血病中表达，大部分发生突变。c-kit 突变有点突变及内部串联重复两种类型，突变率接近17%。因此，本研究就 c-kit 的分布、结构、在 AML 中异常表达及 c-kit 抑制剂的治疗价值进行综述。
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变性高效液相色谱技术定量检测急性髓细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变方法学的建立
目的:建立一种应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)相对定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因的内部串联重复(ITD)突变的方法.方法:根据FLT3-ITD突变基因多位于14外显子而设计引物,用聚合酶链反应(PCR)方法特异性扩增121例AML患者FLT3-ITD突变基因,再用DHPLC技术相对定量检测FLT3-ITD等位基因突变的情况;与毛细管电泳法(CE)检测突变的结果对比进行该方法的有效性检验;后与121例样品PCR扩增产物的测序结果进行对比.结果:经DHPLC分析后均能得到特征性的洗脱峰.121例样本中检测到FLT3-ITD突变阳性的样本13例,总阳性率为10.7%,阳性突变等位基因的比例不一,分布范围中位数为34.5%(11.4%-80.2%),为21-87 bp单个插入片段.阳性率和突变比例与CE方法检测结果相比较均无显著差异(P>0.05),并与121例样本FLT3-ITD扩增PCR产物基因测序结果一致.结论:成功建立了一种应用DHPLC相对定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变的方法.
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FLT3-ITD基因突变型和野生型初治原发AML的临床特征
目的 分析FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复突变型(FLT3-ITDmt)和野生型(FLT3-ITD-wt)初治原发急性髓系白血病(AML)患者临床特征的差异.方法 回顾性分析2015年1月至2016年12月河南省肿瘤医院血液科144例初治原发AML住院患者的临床资料,按是否有FLT3-ITD突变分组,其中FLT3-ITDmt组31例,FLT3-ITDwt组113例,根据临床特征数据的类型,分别采用t检验、秩和检验或卡方检验比较两组临床特征的差异.结果 FLT3-ITDmt组外周血WBC、RBC、HGB和DNMT3A基因突变与FLT3-ITDwt组比较,差异均有统计学意义(统计值分别为:705.000;-2.535;-2.290;5.715,P均<0.05).结论 相对于FLT3-ITDwt初治原发AML患者,FLT3-ITDmt初治原发AML患者有较高的外周血WBC,较低的RBC和HGB,更易伴DNMT3A基因突变.
关键词： fms样酪氨酸激酶3 内部串联重复 基因突变 急性髓系白血病 临床特征
