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miRNA在肾脏纤维化中的研究进展
小RNA(microRNA,miRNA)是一类普遍存在的参与转录后水平基因表达调控的小分子RNA,近年来关于miRNA在细胞增殖、分化和凋亡等方面研究很多,本文主要对miRNA研究中涉及肾脏纤维化的机制进行简要概述.1 miRNA的产生和作用机制1.1 miRNA的定义miRNA是一类具有21~25个核苷酸的单链小RNA,由具有发夹结构的约70~90个碱基大小的单链RNA前体经过酶加工后生成,是一些非编码小分子,靶向性的作用于mRNA参与基因转录后表达的调控,对生命过程中的一系列重要进程有决定性意义.
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缺血皮质神经元DNA单链损伤引发Noxa表达的研究
目的:观察类缺血损伤神经元再灌注不同时间点DNA单链损伤情况和BH3-only家族成员Noxa的表达情况,初步研究DNA单链损伤与Noxa的表达关系.方法:应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定,利用流式细胞仪对培养的皮质神经元类缺血再灌注损伤后Nora的表达情况进行研究.DNA聚合酶-IKlenow片段介导的dATP-生物素切口末端标记方法(Klenow法)对缺血再灌注各时间点培养的神经元进行检测,并应用图象分析仪对Klenow法检测的结果进行平均灰度检测.结果:应用β-Tubulin及Gap-43培养的神经元80%为纯神经元,给予神经元类缺血处理后,在再灌注不同时间点Noxa的表达为在再灌注0.5,1h强,而后随着再灌注时间的延长,Noxa的表达下降.Klenow法检测发现未经缺血处理的对照组神经元平均灰度为72.4±1.0,到达2 h达高峰135.5±1.3,而后又运渐降低,24 h几乎看不到阳性细胞.结论:培养的皮质神经元类缺血再灌注处理后有Noxa的表达,在再灌注0.5 h和1 h为Noxa的表达高峰,DNA单链损伤高峰为2 h,Noxa的表达高峰时间点早于DNA单链损伤高峰的时间点,说明NOXA的表达可能还有其他形式的DNA损伤介入.
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局灶性脑缺血再灌注后DNA单链断裂与凋亡的关系
目的:观察脑缺血再灌注损伤中DNA单链断裂、神经元凋亡的变化,探索其关系. 方法:应用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;采用单细胞凝胶电泳检测细胞DNA单链断裂;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:缺血再灌注10 min皮质(9.4±2.4)%和基底核区(14.3±3.3)%出现DNA单链断裂(t=2.485,P=0.038),12 h达到高峰(P=0.085).缺血再灌注4 h出现细胞凋亡增加,皮质为(6.4±0.9)%,基底核区为(15.0±2.2)%,两者比较差异有非常显著性意义(t=-7.792,P=0.000),24 h达到高峰(P=0.028),48 h仍保持较高的水平(P=0.007).结论:在脑缺血再灌注中DNA单链断裂与细胞凋亡的发生关系密切.
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大鼠大脑中动脉阻塞后DNA单链断裂损伤的实验研究
目的观察大鼠永久性大脑中动脉阻塞( pMCAO)后,相应区域 DNA断裂损伤情况,探讨 DNA单链损伤在 pMCAO所致脑组织损伤中的意义.方法采用常规 HE组织染色明确大鼠 pMCAO模型成功与否及其损伤范围,采用 DNA聚合酶- 1 Klenow片段原位杂交方法检测 pMCAO不同时间点 DNA单链断裂损伤情况.结果损伤区域单链 DNA断裂的 Klenow阳性细胞在 pMCAO后 6 h即有表达( P< 0.01),在 24 h时达到高峰( P< 0.01), 72 h时有所下降( P< 0.01).结论单链 DNA断裂损伤在 pMCAO后 6 h即可出现,并逐渐积累,成为缺血半暗带内细胞损伤发展过程的重要环节,并可能预示半暗带损伤范围的不断扩大.
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高分辨率熔解曲线及其在分子诊断中的应用
通过加热使双链DNA解离为单链是DNA基本特性之一,高分辨率熔解曲线( high resolution melting,HRM)正是基于这一特性,采用荧光饱和染料监测熔链过程,从而获得DNA上的相关信息,例如突变、单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism,SNP)等.由于其快速、高通量、低 成本,已越来越多应用于临床疾病的分子诊断与分型.
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微小RNA与肝脏疾病
微小RNA(microRNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA,长度为18~24个核苷酸.在人类基因组中已发现超过500个微小RNA编码基因,预测可调控约5300个基因.
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微小核糖核酸在胃癌中的研究进展
微小核糖核酸(miRNA)是一类保守、短序列、非编码的单链RNA.miRNA在转录后水平负调控mRNA表达,通过调节多种信号分子调控多种生物学过程,例如应激、凋亡,增殖、代谢,个体发育和细胞分化等.近年来提出了原癌miRNA组学这一概念~([1]),成为了关注热点.
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特异性抗肝癌噬菌体单链抗体的应用研究
目的体外观察特异性抗肝癌(HCC)噬菌体单链抗体(ScFv)对HCC细胞生长和凋亡的影响.方法通过构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv库在大肠杆菌HB2151中表达,制备游离ScFv,应用细胞培养、DNA凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)技术检测抗体对HCC细胞生长和凋亡的影响.结果特异性抗HCC噬菌体ScFv处理的HCC细胞的生长速度明显减慢,克隆形成和附壁能力减弱,细胞存活率降低,DNA凝胶电泳可见典型凋亡梯状带;FCM检测发现抗体处理后HCC细胞凋亡率达32.6%,明显高于对照组(P<0.01).结论应用噬菌体表面呈现技术和基因克隆技术构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv具有抑制HCC细胞生长、促进HCC细胞凋亡的功能.
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单链抗体在肿瘤治疗中的应用
单链抗体(single-chain Fv,ScFv)是由抗体轻链和重链可变区基因(VH、VL)通过一段编码连接肽基因拼接后表达形成的重组蛋白,是具有抗原结合能力的小抗体片段.由于ScFv分子量小,仅为IgG的1/6,没有Fc段,所以它与传统单克隆抗体相比具有组织穿透能力强、免疫原性低的优点;而且,作为一种基因工程抗体,ScFv具有较强的可塑性,容易改造,如抗体人源化、构建双功能抗体等.
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MicroRNA是研究肿瘤发生发展与耐药机制的有力工具
MicroRNA(简写为miRNA)是近几年新发现的一类内源性长度为21~25nt的非蛋白质编码的单链小分子RNA,可通过RNA干扰这种独特的方式影响着生命活动中的诸多方面,包括肿瘤的发生、发展、耐药,胚胎的分化、发育,细胞的凋亡及细胞抗病毒感染等.
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miRNA与阿尔兹海默氏病
microRNA(miRNA)是一类新发现的、非编码的、大小为22左右nt的单链小分子RNA,通常在转录后水平调控基因表达.1993年Lee等人发现第一个miRNA以来,已经有大约1000种左右的miRNA被发现.近来研究显示miRNA在许多疾病,如肿瘤、神经退行性疾病和糖尿病中都扮演着重要角色.本文简要介绍miRNA的功能特点及其在阿尔兹海默氏病(Alzheimer's Disease,AD)中的新研究进展.
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miRNAs及其在医学领域的研究进展
1 miRNAs 简介microRNA(miRNA ,微小RNA ,微小核糖核酸)是一类广泛存在于真核生物中、大小约由22(19-25)个核苷酸(nt)组成的内源性非编码小分子单链RNA .在生物进化过程中高度保守,在细胞中具有时空特异性表达模式.
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肿瘤发生发展及多药耐药与microRNA的研究进展
微小RNA(mieroRNA)是近年来在真核生物中新发现的一类长19~25个核苷酸的内源性非编码单链RNA分子,通过碱基配对与相应的靶mRNA的3'UTR结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制~[1,2].
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重组猪单链IL-12的构建及真核表达
目的 克隆猪IL-12 (pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL- 12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达.方法 分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL- 12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达.结果 所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录.结论 成功构建了pcDNA3.1 (+)-pscIL- 12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1 (+)-pscIL- 12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础.
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血清中HCV抗体与HCV-RNA检测在临床中的应用
丙型病毒性肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致,是一种世界性的有严重并发症的传染性疾病.丙型肝炎病毒是单链正股RNA病毒,主要在肝脏中复制,感染1~2周内即可在血清中检出HCV-RNA,而3~4周可检出免疫血清标志物(抗-HCV)[1].