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抗凝药在妊娠期高血压疾病中的应用
1妊娠期高血压疾病与凝血功能异常
正常妊娠期间，母体血液循环中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ含量高于非孕期水平，血小板计数轻度减少，而凝血因子Ⅺ、降低，妊娠晚期凝血酶原时间及活化部分凝血酶原时间轻度缩短，而血浆纤维蛋白原含量比非孕期增加50%，红细胞沉降率增快，纤溶酶原显著增加，表明妊娠期妇女血液纤溶活性降低，处于高凝状态，这可能是正常机体对于预防产后出血一种保护机制[1]。 -
人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定
目的 研究人纤溶酶原 kringle 区缺失突变体(PLGΔK)的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达、产物纯化及理化性质鉴定.方法 采用7.5 L发酵罐对工程菌 PLGΔK/GS115 进行高密度培养、甲醇诱导表达,培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥.等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测 PLGΔK 等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403 分别测定PLGΔK 激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性.结果 7.5 L高密度发酵可获得约为400 mg/L培液的表达量,经三步纯化后制备的PLGΔK纯度大于96%.理化分析显示PLGΔK的等电点为7.5～7.8,分子量:27.787 kD,比活性:23.6 U/mg.结论 初步建立了PLGΔK的酵母高密度发酵及纯化工艺,所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近,具备放大生产和应用的潜力.
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人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化
[目的]构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础.[方法]以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5mutl基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定.[结果]PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mutl基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量M1≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L.[结论]成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白.
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急性心肌梗死溶栓治疗进展
急性心肌梗死(AMI)是病变的冠状动脉并发粥样斑块破裂出血、血管腔内血栓形成,使冠脉闭塞而至引起心肌严重缺血、坏死.现代医学治疗MAI是建立在心梗的发病机制上,即通过静脉注入纤维蛋白溶解药,使内源性纤溶酶原转变为纤溶酶从而由纤溶酶水解形成的纤维蛋白来溶解血块,使冠脉再通.快速冠脉溶栓可限制梗死范围扩大,减少左室功能不良,提高生存率,这一方法已被临床广泛接受.但不同的溶栓制剂,临床效果不同.本文旨在对近年来溶栓治疗上使用的一些新的特异的溶栓药进行综合分析,比较其应用前景.
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肝癌患者D-二聚体、纤溶酶原、蛋白C检测的临床意义
目的 检测肝癌患者血浆D-二聚体、纤溶酶原(PLG)、蛋白C(PC)水平变化,探讨它们在肝癌病人病情进展、疗效观察及预后的临床意义.方法 以免疫比浊和发色底物法检测22例正常对照、43例肝癌患者血浆中D-二聚体含量、PLG、PC活性水平在治疗前、缓解后、病情进展时的水平变化.结果 肝癌治疗前血浆D-二聚体升高、PLG降低、PC水平降低,与正常对照组有显著差异(P值均<0.01);缓解组D-二聚体明显低于初发组,PLG、PC高于初发组.结论 肝癌患者存在不同程度的高凝状态和纤溶亢进,血浆D-二聚体含量、PLG活性水平对病情和预后的评估有一定的参考价值,血浆PC水平降低是反映病情危重的指标.
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大剂量尿激酶溶栓治疗急性脑梗死28例
尿激酶是一种溶血栓药,它能激活体内纤溶酶原转为纤溶酶,从而水解纤维蛋白使血栓溶解.我科1996年1月至1998年12月应用大剂量尿激酶静脉溶栓治疗急性脑梗死28例,疗效较好,现报告如下.
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心痛舒胶囊治疗不稳定型心绞痛临床研究
目的观察在西医常规处理基础上加用中药心痛舒胶囊对不稳定型心绞痛的临床疗效及其对患者纤溶酶原 (PLG)、α 2-抗纤溶酶 (α 2- AP)水平的影响.方法将患者 100例随机分为治疗组和对照组,两组均予西医常规处理,治疗组加用心痛舒胶囊;观察两组治疗前后心电图、硝酸甘油服用量和心绞痛发作情况及血浆 PLG与α 2- AP水平.结果治疗组临床疗效及心电图疗效均优于对照组,其治疗后血浆 PLG、α 2- AP水平均高于对照组.结论在西医常规处理基础上加用心痛舒胶囊疗效较好,并可升高 PLG、α 2- AP.本方法安全性较好.
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急性心梗患者溶栓治疗前后血浆纤维蛋白原、纤溶酶原和D-二聚体水平变化及临床意义
目的：探讨急性心肌梗死（AMI）患者溶栓治疗前后血浆纤维蛋白原（Fib）、纤溶酶原（Plg）和D-二聚体水平变化，为AMI的治疗及预后判断提供依据。方法选择确诊为AMI患者93例，其中再通组77例，未通组16例；并选取同期非溶栓治疗的心肌梗死患者30例作为对照组。检测各组患者不同时间段血浆Fib、Plg和D-二聚体水平。结果AMI患者溶栓治疗前Fib和D-二聚体水平高于对照组（P＜0．05）。与溶栓前比较，AMI患者溶栓治疗6h后Fib和Plg水平明显降低（P＜0．01），48h后基本恢复正常水平；AMI患者溶栓治疗6h后D-二聚体水平明显升高（P＜0．01），7d后基本恢复正常水平。治疗前再通组与未通组比较，Fib、Plg和D-二聚体水平差异无统计学意义（P＞0．05）；溶栓治疗6h后，再通组Fib、Plg水平较未通组明显降低，D-二聚体水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论检测血浆Fib、Plg和D-二聚体水平的变化对AMI患者进行溶栓治疗效果监测具有重要的参考价值。
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血浆纤溶指标对脑出血血肿的影响
目的 探究血浆纤溶指标对脑出血血肿的影响,为脑出血血肿的治疗提供依据.方法 选取2015年3月至2017年3月在该院行颅内血肿微创穿刺清除术的152例脑出血患者为观察组,选取同期到该院体检的148例健康体检者为对照组.分别检测并比较观察组患者血肿和外周血标本,以及对照组健康者外周静脉血标本中的D-二聚体、纤溶酶原水平.结果 观察组患者外周血和血肿中测得D-二聚体和纤溶酶原水平比较,差异均有统计学意义(P＜0 .05) ;观察组与对照组外周血中D-二聚体和纤溶酶原水平比较,差异无统计学意义(P＞0 .05) ;观察组血肿和对照组外周血中D-二聚体和纤溶酶原的水平比较,差异均有统计学意义(P＜0 .05) ;观察组患者血肿和外周血中纤溶酶原呈正相关,D-二聚体无相关性.结论 血浆中纤溶酶原的检测在一定程度上能够反映血肿内的纤溶酶原水平,对临床上脑出血血肿的治疗具有重大意义.
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人胎盘纤溶酶原的分离纯化
目的 建立从人胎盘组织中分离纯化天然型纤溶酶原的方法.方法 采用Lys-sepharose 4B亲和层析和 Sephadex G-25层析法分离纯化纤溶酶原.采用发色底物法测定纤溶酶原活性,SDS-PAGE鉴定纤溶酶原纯度.结果 获得电泳纯天然型纤溶酶原(Glu-plg),比活441.520%/mg.结论 该法原料来源丰富、成本低廉、操作简单,为获取纤溶酶原提供了新方法.
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遗传性易栓症对母婴不良结局的影响
遗传性易栓症(inherited thrombophilia)一词,初是由Egeberg于1965年报道1例遗传性抗凝血酶Ⅲ缺陷时提出的.目前,其含义已扩大到因遗传性或基因突变所致的持续高凝状态而引起血栓形成风险增加的一类疾病.遗传性易栓症包括:蛋白S(PS)、蛋白C(PC)和抗凝血酶(AT)缺乏、促凝因子的异常如FV Leidn和凝血酶原基因G20210A突变、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T突变和纤溶酶原活化抑制物-1(PAI-1)基因多态性等.
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血浆PLG、α2-PI测定及临床应用
纤溶酶原(PLG)和α2-纤溶酶抑制物(α-PI)由肝脏合成,为纤溶系统组成成分,测定其血浆水平可反映机体纤维蛋白溶解系统活性.在肝病时,其活性多有所下降,而其下降的严重程度与肝细胞的损害及其功能的异常呈正相关关系[1].因此,研究肝病患者机体纤溶机制的异常对防治其出血、判断预后和降低病死率均有一定的理论价值和临床意义.现以ACL-200型自动血凝仪、采用发色底物法测定正常健康人和肝病患者血浆中的PLG和α2-PI活性,并对这两个指标的临床意义进行初步探讨.
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低剂量激素替代治疗对绝经后妇女纤溶系统及脂代谢的影响
目的:观察低剂量激素替代治疗对于绝经后妇女纤溶系统及脂代谢的影响.方法:选取在本院门诊就诊的围绝经期妇女34人采用激素替代治疗(治疗组)及门诊正常体检的绝经后妇女33人(对照组组)作为研究对象,所有人空腹10小时后抽取肘静脉血,测血脂水平(TC,TG,LDL-C和HDL-C)、血浆组织纤溶酶原激活物(t-PA)以及血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)水平.结果:与对照组组相比,t-PA抗原明显增加(P＜0.01),PAI-1抗原显著下降(P＜0.01),TC、TG及LDL-C水平显著下降,HDL-C水平无明显改变.结论:长期低剂量激素替代治疗能有效的降低LDL,TC及TG,升高t-PA,降低PAI-1从而达到延缓绝经后妇女动脉粥样硬化及降低粥样硬化发生率的作用.
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组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体兔左心耳内靶向溶栓研究
目的 观察组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因局部转导对特氟隆(Dacron)片(与机械瓣瓣环同质)的溶血栓作用.方法 30只兔建立左心耳内Dacron片植入血栓模型,随机分为PLEGFP-N1-tPA治疗组(n=10)、PLEGFP N1空载体对照组(n=10)、空白对照组(n=10),局部基因转导,于术后2,30 d各组1/2动物取材(6个亚组A1、B1、C1、A2、B2、C2),聚光共聚焦(confocal)观察所取左心耳组织增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达,体视镜和电视镜观察Dacron片表面血栓情况,免疫印迹(Western blot)、血浆平板和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测所取组织tPA表达、溶栓情况.结果 术后2,30 d取材,治疗组所取左心耳组织confocal均观察到多而强的EGFP表达,Plegfp-N1对照组也有EGFP表达,但空白对照组无EGFP表达.30个Dacron片加未植入组5个Dacron片共35个,在体视镜(×160)和电视镜(×500)下观察,未植入组和治疗组Dacron片表面均无血栓,对照组表面均有血栓.治疗组所取静脉Western blot检测均有外源tPA表达,对照组未检测到.血浆平板显示:治疗组均有大的溶解圈,有明显溶栓作用,对照组没有.结论 Plegfp-N1-tPA局部基因转导能有效阻止外源移植物表面血栓形成.
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爱通立溶栓治疗急性心肌梗死患者的护理
急性心肌梗死(AMI)是指在冠状动脉病变的基础上发生冠状动脉血供急剧减少或中断,使相应的心肌严重而持久地急性缺血导致心肌坏死[1].静脉溶栓治疗方法简单、方便、实用,是一种能够使患者血管快速重建的有效方法.爱通立是治疗急性心肌梗死的有效药物,爱通立是一种糖蛋白,可激活纤溶酶原成为纤溶酶,静脉使用时,循环系统中的阿替普酶保持相对无活性状态,当与纤维蛋白结合后阿替普酶被激活,诱导纤溶酶原成为纤溶酶,溶解血块[2].本研究以我院心内科收治的32例用爱通立进行溶栓的急性心肌梗死患者作为研究对象,回顾性分析和总结其护理方法,探讨用爱通立静脉溶栓的急性心肌梗死患者的护理方法.
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人肿瘤坏死因子与人纤溶酶原饼环区5融合基因原核载体的构建
人肿瘤坏死因子α(humantumornecrosisfactor-α,hTNF-α)是由单核巨噬细胞分泌的,杀伤肿瘤细胞活性强的一种细胞因子,特异性强,不损伤正常细胞.我们通过分子生物学技术获得的新型hTNF-α(nhTNF-α)[1]较天然hTNF-α的活性提高了100倍,而毒性却为天然hTNF-α的1/3.人纤溶酶原饼环区5(humanplasminogenkringle5,hPgnK5)蛋白[2]可特异性地抑制肿瘤新生血管内皮细胞的生长,进而达到抑制肿瘤生长,治疗肿瘤的良好效果,是目前通过抑制肿瘤新生血管生长治疗肿瘤的蛋白药物中较有前景的一种.我们通过PCR反应,去除nhTNF-α3′端终止码,再将其连入pGEM3ZF(-)hPgnK5基因位点前,获得nhTNF-α和hPgnK5的融合基因,序列分析正确,为进一步在原核系统中表达该融合蛋白打下了基础.
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反复自然流产妇女凝血指标检测的临床意义
目的 检测反复自然流产妇女凝血指标,探讨其与反复自然流产发病的关系.方法 检测57例反复自然流产患者组和31例对照组凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原,Fg)、抗凝血酶(AT)、D-二聚体(D-D)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、纤溶酶原(PLG)并进行比较.结果 反复自然流产组PAI-1比对照组明显增高(P<0.05),PLG活性、D-D含量则比对照组明显降低(P<0.05),而PT,APTT,Fg,AT与对照组相比无显著性差异(P>0.05).结论 反复自然流产患者纤溶功能降低,其发病可能与纤溶功能受损有关.
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心肌缺血/再灌注损伤时抗凝血酶和纤维蛋白原的变化
目的:探讨心肌缺血/再灌注损伤时抗凝血系统的变化及纳洛酮的影响.方法:利用兔心肌缺血/再灌注模型观察心肌缺血/再灌注损伤时,抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、纤维蛋白原(FIB)和纤溶酶原(PIG)动态变化及用阿片受体拮抗剂-纳洛酮保护时它们的变化情况.新西兰兔27只,随机分成3组(实验组、保护组和对照组),每组9只,对照组分别于拮扎前、后0.5,1,2,4,6 h采血,实验组和纳洛酮保护组分别于结扎前、后30 min松开结扎线恢复灌流时及灌注后0.5,1,2,4,6 h采血.采用发色底物法测定AT-Ⅲ,PLG活性、凝血酶原时间(PT),衍生法测定PIB含量.结果:心肌缺血后各时间段AT-Ⅲ,FIB,PLG的变化不明显,但心肌缺血/再灌注后0.5,1,2,4,6 h实验组与实验保护组AT-Ⅲ,PLG活性、FIB含量均逐渐下降,实验组与纳洛酮保护组各指标的比较无显著性差异.结论:心肌缺血/再灌注损伤早期能使FIB含量及AT-Ⅲ,PLG活性出现消耗性降低,纳洛酮对抗凝血系统的影响不明显.
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人纤溶酶原饼环区5基因的化学合成与原核载体的构建
0 引言抑制肿瘤新生血管生长可以抑制肿瘤生长,这是目前肿瘤治疗中新发展的治疗途径. 血管生长抑制因子是由纤溶酶原中的前四个饼环区构成的,具有抑制肿瘤新生血管进而达到抑制肿瘤的作用[1]. 研究表明,纤溶酶原饼环区5(简称K5,下同),具有比血管生长抑制因子更佳的抑制肿瘤新生血管生长的作用[2]. 我们将人工合成的人纤溶酶原K5基因的8段核酸片段组成为一个完整的K5基因,并连入原核载体中获得成功.
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急性心肌梗塞尿激酶溶栓治疗的护理体会
急性心肌梗塞(acute myocardial infarction，AMI)是急诊常见危重病，是诱发猝死的主要原因之一。快速有效的院前急救可降低患者的死亡率，入院后早期进行溶栓治疗，恢复冠状动脉的血流灌注是降低急性心肌梗塞病死率，改善预后的有效措施。尿激酶能直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统，能催化裂解纤溶酶原成纤溶酶，不仅能降解纤维蛋白凝块，亦能降解血循环中的纤维蛋白原、凝血因子V和凝血因子峪等，且该药费用低廉，因此基层医院在临床上常应用它作为溶栓治疗首选药。在溶栓治疗中，正确及时的病情观察和细致的护理是治疗成功的重要保障。
