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蜚蠊防制中的高科技新生物技术——利用信息素诱引的蜚蠊病毒生物防制技术
蜚蠊防制一般采用环境治理、物理防治和化学防治,然而由于其生存的隐蔽性和常在夜间活动的生活规律,使环境治理和物理防治应用受到局限,化学防治虽然应用较广,但由于多年使用化学杀虫剂,使蜚蠊的抗性越来越高,增加了防制难度,且由于化学杀虫剂污染环境,对人类健康有一定危害,特别是毒饵易使儿童误服等问题,使化学杀虫剂在当今人们普遍追求健康,需求绿色环保产品的时代,渐渐不受欢迎.而生物防治特别是微生物防治,其特异性强,对非靶标生物无毒,不污染环境,具有连锁杀灭作用,害虫不宜产生抗药性等,符合当今社会发展绿色环保产品的潮流.
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血液肿瘤的分子诊断
随着分子生物学及其相关技术的迅速发展，血液系统肿瘤的诊断已进入“精确诊断”时代。目前血液学实验室中主要的分子生物学平台包括聚合酶链反应（ PCR）技术、测序技术和基因芯片等；这些技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点，在血液肿瘤的诊断、分型、预后判断、疗效评估、微小残留病的监测及个体化治疗等多个方面发挥了重要作用。我们简要概述分子生物学在血液肿瘤诊断中的应用和进展。
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荧光原位杂交技术在组织芯片中的应用
荧光原位杂交（ FISH）是原位杂交技术的一种，不仅可以检测多个靶序列存在与否，还可以显示其存在的位置，它具有敏感度高、特异性强、无创性等优点。组织芯片技术具有体积小，信息含量大，一次性实验即可获得大量的结果，因此在建立疾病特别是肿瘤生物分子文库方面是一个强有力的工具，具有广阔的应用前景［1］。我们以检测HER2基因为例将FISH检测技术应用在组织芯片中，希望能为科研及临床工作者提供一些参考价值。
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荧光定量聚合酶链反应检测石蜡包埋组织结核杆菌的应用价值
在病理学形态上有多种疾病在光镜下都表现为上皮样肉芽肿性病变,如结核病、结节病、麻风病等慢性感染性疾病,在不同部位、不同患者及不同病变时期,其上皮样肉芽肿病理表现的典型性也不同,在病理诊断中常难以鉴别这类疾病,容易引起误诊.在病理形态上主要表现为上皮样肉芽肿性病变的疾病在临床上常见的是结核病,故在病理诊断中应特别注意结核病的诊断与排除诊断.目前结核病病理诊断的主要辅助检测是抗酸染色,但其灵敏度较低[1];文献报道针对结核分枝杆菌特定DNA序列进行荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测痰液、胸腹水标本中结核分枝杆菌的敏感性高、特异性强,且省时、易操作,用于诊断肺结核病取得较好效果[2].
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循环引物介导原位标记技术在结直肠癌检测中的应用
引物介导的原位DNA标记(PRINS)是分子生物学领域近年来发展的一项新技术,具有方便、特异性强、敏感性高的优点[1-4].然而,我们在实验中发现单纯的PRINS技术对检测样本拷贝数有着较高的要求,尤其是石蜡切片中mRNA拷贝数量很低,阳性信号表达较弱.为提高检测效果,我们采用PRINS与PCR技术相结合的新方法--循环引物介导的原位标记(cycling-PRINS,C-PRINS),生物素连接辣根过氧化物酶标记,DAB显色法,以提高石蜡切片检测mRNA表达的敏感性.
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免疫组化技术诊断肾综合征出血热病毒的研究
肾综合征出血热病毒(hemorrhagic fever with renal syndrome virus,HFRSV)在我国广泛流行,其发病率和病死率均高,对人群的生命健康造成严重危害.目前,特异性诊断方法多为ELISA和免疫荧光技术,现在广泛应用尚存在一定难度,采用高效价优质抗原片进行酶免疫组化法检测,能早期快速诊断,方法简便易行,敏感性高,特异性强.
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McAb胶乳凝集试验检测流行性出血热抗原研究与临床应用
McAb胶乳凝集试验具有特异性强、敏感性高、反应速度快、作用时间短、结果稳定、重复性好等特点.我们自1990年开始研究McAb胶乳凝集试验检测EHF抗原的方法,经多年来在当地市、县级医院和疾病控制中心共计收到的541份标本检查结果表明,McAb胶乳凝集试验检测EHF抗原具有简便、快速、特异、敏感等特点,特别适合基层医院推广.
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中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法 TaqMan 荧光定量RT-PCR 检测方法的建立
流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是黄病毒科黄病毒属的单股正链 RNA 病毒,三带喙库蚊是其主要的传播媒介,感染人体后可引起流行性乙型脑炎(乙脑)。人群对本病普遍易感,15岁以下儿童发病率较高。大多数人感染后不会出现任何症状或只会引起一些轻微的症状；若治疗不及时,少部分感染者会发展为急性脑炎,病死率为20%~30%,30%~50%的康复者会留下严重的神经系统损伤后遗症,以儿童多见[1]。本病主要流行于亚洲地区,中国是乙脑的主要流行区域,每年都有病例报道。2013年,乙脑在山东省暴发流行,造成11人死亡。因此建立一种快速、准确的 JEV 特异检测方法对该病的早发现、早诊断、早治疗仍具有重要意义。 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 具有敏感性高、特异性强、快速定量检测等优点。因此,本研究针对中国大陆地区已上传的91株乙脑全基因组序列进行比对分析,选取保守的区域设计引物及探针,利用荧光定量技术建立乙型脑炎病毒的一步法 TaqMan qRT-PCR 检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。
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经血传播肝炎患者卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒感染的血清学研究
卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)，为近来发现的一种新的疱疹病毒，又称人类疱疹病毒8型(HHV-8)。国外研究发现该病毒主要经性途径传播，作者近报道了我国静脉吸毒者中有较高的KSHV感染，KSHV可经静脉吸毒传播。为进一步摸清我国KSHV的感染情况和感染途径，我们用抗原性、特异性强的KSHV ORF65基因重组蛋白作抗原，用ELISA法对1999年3月～12月间浙江省部分经血传播肝炎患者144例(乙型肝炎病人52例，丙型肝炎病人32例，非甲-庚肝炎病人60例)，正常献血员241例进行了KSHV感染的血清学研究，并初步分析KSHV感染与HBV、HCV复制的关系。
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DNA芯片快速检测急症感染细菌
细菌性感染对重症监护中心(ICU)的患者常造成较高的死亡率和致残率.早期诊断和治疗具有重要意义,本研究利用DNA芯片技术,研制出可用于常见细菌感染的DNA检测芯片,能够一次性检测出标本中的多种细菌感染,它具有检测时间短(4～6 h)、灵敏度高、特异性强并可重复使用的特点.
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D-3-羟丁酸检测与临床应用
近年来糖尿病发病率逐年上升,现在全世界大约有1.35亿糖尿病患者,到2025年将达到3亿[1];随之由于各种因素引起的并发症也相继增多.糖尿病酮症酸中毒是糖尿病常见的严重急性并发症,是糖尿病患者的主要死亡原因.为了及时、准确判断病情,非常需要一个高灵敏度且特异性强的指标,D-3-羟丁酸的测定不仅满足了上述要求,而且还可作为糖尿病昏迷的诊断及鉴别诊断指标;近几年发现,D-3-羟丁酸测定对糖尿病的早期诊断有重要意义[2];还被用作肝移植后肝能量代谢的指标[3].
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药物对胶体金层析法检测尿中吗啡的影响观察
改革开放进入二十一世纪以来,吸食毒品者已增至约350万～400万人,危害极大.因此我国为了选拔优秀青年应征入伍,近年在征兵体检中增加了对吸食毒品的检测与排查,海洛因、单乙酰吗啡、可待因、福尔可定等常用毒品吸食后的代谢产物吗啡,必从尿中排出,吸食数天内仍可检出[1,2].胶体金层析法是一种特异性强的抗原抗体免疫层析技术,然而笔者在工作中却发现某些常用药物同样可以导致胶体金层析试验阳性,因此本文对400例吗啡尿检初检阴性体检青年全部分组服药试验进行研究,报告如下.
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外部性脑积水超声诊断及诱发电位检查分析
目的:探讨外部性脑积水(EH)超声诊断的价值以及脑干听觉诱发电位(ABR)检查必要性.方法:应用实时超声显像仪,先用低频率探头,观察颅内各结构及脑室形态大小,再用高频线阵探头测量额顶部蛛网膜下腔深度,大脑纵裂宽度.采用脑干听觉诱发电位检查,观察脑电波形、波幅、阈值及潜伏期Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ波并进行记录.结果:347例经前囱扫查,冠状切面上,大脑纵裂宽度＞3mm;矢状切面上,额顶部蛛网膜下腔深度＞3mm;部分伴有轻度脑室扩大.347例EH患儿ABR异常177例,占51%;双侧异常109例.单侧异常68例,其中左侧异常38例;右侧异常30例.异常表现为波形延长、缺失、波间期延长,重者为反应阈升高.结论:超声诊断EH是一种价值廉、快速简洁、重复性好、无创的影像技术.同时对EH患儿进行ABR检查,能及时反映脑干功能状态,其优点是无损伤,特异性强,不受年龄和意识水平影响,及时为临床提供治疗信息.
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溶血磷脂酸在卵巢癌诊断中的作用
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中病死率高的,而且多数早期无明显症状,大概2/3的患者就诊时已是晚期,而晚期卵巢癌的5年生存率不超过30%.传统的指标如CA125敏感性、特异性均不是很理想.因此迫切需要一种敏感性、特异性强的指标来早期诊断卵巢癌,为卵巢癌治疗提供时机.
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免疫印迹法检测抗ENA抗体结果分析
抗ENA抗体是针对核内可提取性核抗原(ex-tractable nuclear antiger,ENA)的一种自身抗体.不同的自身免疫性疾病其抗ENA抗体阳性率有明显差异,有的特异性很高.本组对疑为自身免疫性疾病、风湿病患者采用免疫印迹法(IBT)检测抗ENA多肽抗体.该法将凝胶电泳、蛋白质转运、分子亲和技术、酶免疫测定融为一体,可一次性测定抗Sm、抗U1-RNP 、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗ScL-70和抗核抗体等7种多肽抗体,较传统的对流免疫电泳法(CI-ET)具有特异性强、灵敏度高、简便等优点.
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卵巢癌分子靶向治疗的研究进展
在女性生殖器官恶性肿瘤中,卵巢癌发病率占第三位,但病死率一直居第一位[1] .这是因为大多数卵巢癌发病隐匿,约75%患者一经发现已属于晚期.对于晚期卵巢癌,肿瘤细胞减灭术加铂类/紫杉醇联合化疗,可暂时缓解病情,然而复发率却高达85%以上.复发性卵巢癌耐药性明显增加,使用化疗药物缓解率不足30%,且化疗药物显著的毒副作用限制了使用剂量.因此,迫切需要寻找新的、特异性强而患者可耐受的治疗卵巢癌的有效方法.近年来,分子靶向治疗的飞速发展使这一希望日趋成为可能.
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不同检测系统甲胎蛋白测定结果的可比性及偏倚评估研究
近年来,化学发光免疫分析(CLIA)因具有反应速度快、敏感度高、特异性强、标记物稳定、对人体无放射性危害等特点,而得到临床实验室的广泛应用.目前国内外化学发光免疫分析仪品牌繁多,不同仪器的检测原理也有所不同,同一份标本在不同发光免疫分析系统测定的结果是否存在差异以及测定结果的可比性如何是一个值得关注的问题[1].E170电化学发光免疫检测系统和Architect i2000化学发光免疫检测系统目前常用于肿瘤标志物和内分泌激素等项目的测定,但尚未见这2个分析系统的AFP检测结果可比性的研究报道.为此,笔者按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)指南文件EP9-A[2]的要求对不同化学发光检测系统间的AFP结果进行比对及偏倚的评估,现报道如下.
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免疫磁珠与DNA倍体检测肿瘤患者外周血中癌细胞的初步临床应用
DNA异倍体是恶性肿瘤的重要标志之一[1-2],检测外周血中肿瘤DNA异倍体为无创性肿瘤诊断开辟了一条新途径[3].流式细胞术 (FCM)-DNA倍体分析技术具有特异性强的优点,但该方法在外周血中检测的阳性率不高[4].本研究先用免疫磁珠(IMB)阴性分选富集癌细胞,后用FCM-DNA倍体检测外周血中癌细胞,现报告如下.
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上海地区人巨细胞病毒核酸检测的室间质量评价分析
人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus，HCMV）是属于疱疹病毒β亚科的线状双链DNA病毒，在人群中的感染相当普遍。对免疫功能正常者，HCMV感染常呈潜伏感染而无明显临床症状，但对于免疫力低下（如婴幼儿）或者免疫受抑制者（如器官移植等），通常会造成严重损伤乃至死亡［1-2］。快速准确的诊断早期HCMV感染并进行抗病毒治疗监测，是有效预防和降低HCMV疾病发生率和死亡率的关键。实时荧光定量PCR（real-time PCR）具有特异性强、灵敏度高、定量准确等优点，特别适用于机体HCMV病毒载量动态变化的监测，目前已广泛用于临床HCMV感染性疾病的检测中［3-6］。但近国外多中心研究表明实验室间HCMV核酸检测结果存在显著差异，这在很大程度上影响了real-time PCR在HCMV DNA检测中的临床应用［7-9］。本研究拟选用HCMV质控品（ AD169）作为室间质评样本，首次用于上海地区临床实验室HCMV DNA室间质量评价中，以期评估临床实验室检测结果的一致性，终促进HCMV核酸检测质量的提高。
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纸片法检测革兰阴性杆菌产AmpC酶研究
目前临床实验室通常只能根据耐药表型综合判断推测产AmpC酶细菌,但其假阳性和假阴性较高.Coudron等[1]提出的改良三维试验法以及分子生物学方法等虽然准确可靠,但过程繁琐复杂,需要时间长,只适合实验室研究,难以在临床常规检测中开展.为此,我们采用乙二胺四乙胺(EDTA)浸润纸片法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便的优点.
