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清除聚合酶链反应扩增产物污染的方法探讨
聚合酶链反应(PCR)具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点.但也常因标本受PCR扩增产物污染而产生假阳性结果.因此,控制外源性DNA污染已成为各实验室非常关注的问题.近年来,人们采用了许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物[1-5],但结果报导不一.为选择一种消除实验室DNA污染的佳方法,我们选用六种传统的消毒法进行对比研究.现将结果报告如下.
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应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的初步研究
常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定,常规方法通常需要24 h左右才能获得较确切的结果,会延迟正确的诊断和治疗,因此对于临床而言,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的.生物芯片是一种新兴的高通用技术,在面积较小的载体,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1].本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨.
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单克隆抗体及基因工程抗体在医学诊断上的应用
一、传统的单克隆抗体及其应用1975年德国学者Kohler和美国学者Milstein将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞在体外进行两种细胞融合,形成的部分杂交瘤细胞(hybridoma),既具有大量无限生长的特性,又具有合成和分泌抗体的能力.它们是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体,称为单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAb),从而开创了抗体技术的新纪元,被称为第二代抗体.它的特点是特异性针对单一抗原决定簇,理化性状高度均一、生物活性单一,与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质量控制,并且来源容易.这些优点使它一问世便受到高度重视,并广泛应用于生物学和医学研究领域.
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沙眼衣原体聚合酶链反应检测研究进展
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是重要的性传播疾病的病原体之一,它不仅会导致阴道、尿道感染;上行的生殖道感染还可能累及子宫内膜、输卵管和邻近的盆腔结构,也能导致盆腔炎、输卵管损伤直至不孕[1,2] .此外,此种病原体还与人乳头瘤病毒(HPV)[3,4]和人类免疫缺陷病毒(HIV)[5]的感染有关.由于相当一部分感染者为无症状携带者,因此需要建立高度敏感的实验室诊断方法控制该疾病的传播.作为CT检测"金标准"的细胞培养方法操作复杂、技术要求高[6],且所用时间较长无法进行快速检测,某种程度上限制了其在临床诊断实验室的应用.聚合酶链反应(PCR)技术具有耗时少、扩增效率高、特异性强的特点,显示出了其在CT感染临床诊断中的优越性.但是由于受核酸突变、扩增抑制物的影响,以及核酸提取效率等方面的差异尚存在检测效率降低甚至漏检的问题,而且由于其仍能检测出已经死亡的病原体,所以尚不能作为临床治疗效果的评价方法.
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介绍一种乳糜尿的定性方法
乳糜尿是乳糜微粒分散于尿液中而形成的乳浊尿液,而乳糜微粒的主要化学成分是甘油三酯,笔者根据甘油三酯酶法(GPO-PAP法)测定原理,取酶试剂1 ml于试管中,滴加尿液1滴,混匀,置37℃,10min观察结果,显红色为阳性,不变色为阴性,本法与传统的乙醚抽提后苏丹Ⅲ染色法比较,具有操作简便、特异性强,试剂易得等优点,值得同行一试。
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丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义
丙型肝炎病毒(HCV)为嗜肝性慢性病毒.HCV感染后,患者的起病和临床症状极不典型,以亚临床感染为多见,容易造成漏诊.HCV感染的慢性化发生率明显高于乙型肝炎,较乙型肝炎易早期出现肝硬化、肝癌,死亡率较高.因此HCV的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义.目前用于HCV感染诊断的两项主要指标为抗-HCV和HCVRNA,现多采用的第三代检测抗-HCVEIA试剂增加了HCV基因组NS5区表达的蛋白作为抗原,进一步提高了试剂的敏感性,但还存在"窗口期"漏检的问题.HCV RNA检测灵敏度高、特异性强,具有早期诊断的意义,但检出率较低,检测复杂,也可出现假阳性.作为抗-HCV检验的补充试验,HCV核心抗原的检测对处于HCV感染"窗口期"的个体检测有很大价值.
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ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异
目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法.方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5'TTTAAA3'),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.同时PCR扩增2份已行HBVRT区基因测序证实未出现rtN236T变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒,扩增产物经DraI酶切,30 g/L琼脂糖凝胶电泳后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析.结果:所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高,可以检测到106copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致.结论:ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用,适用于ADV耐药变异的临床监测工作.
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单光子发射计算机断层显像诊断冠心病的进展
单光子发射计算机断层显像(Single photon emission computed tomography,SPECT)是一种能显示体内放射性核素立体分布图象的无创伤性检查技术,其灵敏度高,特异性强,能较准确的确定心肌缺血的部位及范围.这种显示心脏生理、病理和生化功能与代谢过程的检查方法愈来愈受到临床的重视.核素心脏检查可以提供心肌血流灌注、左心功能和心肌代谢活性等信息而成为冠心病的早期诊断、估计预后、确定进一步治疗方案的重要方法.现将SPECT在冠心病诊治中的应用作简要综述.
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趋化因子SDF-1及其受体CxCR4在胰腺导管腺癌中的研究进展
胰腺导管癌(简称胰腺癌)是消化系统中恶性程度高的肿瘤之一.尽管近年来随着检测手段的进步,胰腺癌的诊断有了明显的提高,但由于其临床表现隐匿,缺乏敏感性高、特异性强的早期诊断手段,大多数患者就诊时已属中、晚期,其病情进展迅速,预后差,因此本病的诊断及治疗仍面临着严峻的考验.
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ELISA法检测HBsAb产生钩状效应2例临床分析
ELISA检测抗原抗体因其成本低、灵敏度高、特异性强等优点被实验室广泛应用。由于目前多采用一步法检测,当血清中抗原抗体浓度过高时可能会产生钩状效应(HOOK效应),而引起假阴性[1-14]。在采用一步法检测时,钩状效应很难被发现。对此效应的报道主要集中在HBsAg的检测。本课题组在临床工作中遇到两例体检者,应用ELISA一步法检测结果均提示HBsAb阴性,但被检测对象均对结果表示异议,自述3个月前曾检测HBsAb为弱阳性,并于当时分别注射过10μg乙肝疫苗。后经倍比稀释[15]用ELISA一步法检测,确认其HBsAb为阳性,现报告如下。
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白三烯受体拮抗剂孟鲁司特治疗轻中度哮喘疗效和安全性评价
孟鲁司特(商品名:顺尔宁)是一个特异性强效白三烯(LTD4)受体拮抗剂,对治疗哮喘具有显著疗效.多项临床研究显示其能改善肺功能,哮喘症状和减少吸入糖皮质激素和沙丁胺醇(商品名:全乐宁)用量.在美国等多个国家已用于哮喘的临床治疗.为评价孟鲁司特治疗哮喘的有效性和安全性,我们对174例哮喘患者进行了临床验证.
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肿瘤靶向治疗及其相应分子靶点检测
20世纪70年代后期,肿瘤生物学研究深入到分子水平,并发现肿瘤中癌基因突变和扩增;抑癌基因失活和丢失;基因转录和蛋白产物异常;信号转导通路异常活化;细胞周期调节失控,导致肿瘤细胞不受控制地增殖;细胞凋亡抑制肿瘤新生血管形成.肿瘤分子生物学研究阐明了肿瘤发生发展中的许多以前不为人知的分子机制,为肿瘤的药物治疗提供了一种新的模式,即依据已知肿瘤发生中涉及的异常分子和基因,设计和研制针对这些已知的特定分子和基因的靶点药物,选择性杀伤肿瘤细胞,这种治疗方法称为肿瘤的靶向治疗[1].靶向药物只作用于有特定靶点的肿瘤,特异性强,能选择性杀伤肿瘤细胞,治疗效果明显,对正常细胞损害较小,不良反应通常少而轻微,不同于传统的化学治疗.
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核医学医务人员的职业风险分析与放射防护措施
核医学是利用非密封性放射性核素进行诊断和治疗的一门科学.其特点是安全可靠,灵敏度高,特异性强,检测准确,具有动态与静态结合的特点.研究表明放射性核素即使小剂量暴露,长时间接触也会因蓄积作用而致畸、致癌.因此核医学医务人员的放射防护尤为重要.
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分子病理学技术应用原理和适用范围
1 Southern杂交:Southern杂交是1975年由Southem提出,并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点,已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的常用手段之一[1]。Southern杂交的基本方法是,从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化,通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段,然后使这些DNA片段在原位发生变性,并以凝胶转移到另一种固相支持物如硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,同时保持各个DNA片段的相对位置不变。再用已标记的(通常为放射性同位素标记,也可用非放射性标记)DNA或RNA探针与固着于固相支持物上的DNA杂交。经放射自显影或化学显色的方法确定与探针互补的电泳条带的位置,从而达到检测和分析的目的。
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肾癌靶向治疗研究进展
随着肾癌生物学和遗传学研究进展,对肿瘤细胞信号传导途径的研究不断深入,针对肿瘤特异性分子靶点设计的治疗方案具有治疗特异性强、效果显著、基本不损伤正常组织的优点.
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微小残留病检测在儿童急性淋巴细胞白血病中的临床价值及应用
近三十年来,联合化疗方案的进展使得儿童急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia, ALL)的疗效有了显著提高,5年无病生存率(Event Free Survival, EFS)达到80%以上,但仍不能避免20%~25%的患者终出现复发[1-2].复发已是ALL儿童获得长期生存的主要障碍,是死亡的重要原因,因而它已成为儿童血液肿瘤研究中的一个严峻挑战.研究显示,复发的主要原因之一为化疗完全缓解后体内残存的微量白血病细胞即微小残留病(Minimal Residual Disease, MRD)[3].这些微量白血病细胞从形态学上无法辨认,只能通过免疫学、分子生物学等方法,采用灵敏度高、特异性强的技术进行检测.
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微波加干扰素针治疗尖锐湿疣
为减少术后复发,我们采用微波加干扰素针联合治疗尖锐湿疣,取得较好疗效,报道如下.1资料与方法1.1病例选择我院妇产科门诊1998年1月~1999年1月,经临床及病理切片组织学加敏感度高且特异性强的免疫组化检查方法确诊为尖锐湿疣的患者40例,年龄在20~42岁之间.病变部位:外阴、阴道,随机分两组,其中微波组22例,微波加干扰素治疗组18例.
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反兴奋剂检测的新挑战——基因兴奋剂
20世纪末伴随生物科技不断发展而出现的"基因治疗"(genetic therapy)技术,因其所具备的特异性强、副作用小、能够有效治疗或防止疾病的特点,而被寄希望于能够解决严重威胁人类生命健康的一些遗传性或传染性疾病.
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ELISA法乙肝两对半定性检测影响因素探讨
医学检验中普遍应用ELISA法检测乙肝两对半,由于该法灵敏度高、特异性强、易操作、重复性好、试剂稳定等优点,多年来一直被推广使用.但在ELISA法乙肝两对半检测实际工作中,各实验室环境条件存在一定差异,不同厂家生产的试剂盒质量也不尽相同;检测者对实验方法操作的掌握熟练程度等多种因素,都对乙肝两对半测定准确性造成干扰.
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免疫诊断(主要是ELISA)试验操作的几点体会
免疫诊断(主要是ELISA)试验由具有灵敏度强、特异性强、操作简便、试剂稳定的特点,已经在临床检验中获得了广泛应用.但免疫试验操作中的各个环节对试验的检测效果影响很大,如不注意有可能导致结果不准确,造成假阴性或假阳性结果.现将各个环节的操作体会总结如下.