药物分析杂志
Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国药学会
- 影响因子： 1.03
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-1793
- 国内刊号： 11-2224/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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岗松、大叶桉及其药对中挥发油透皮成分的气相色谱-质谱联用分析
目的:对岗松、大叶桉及其药对中的挥发油进行透皮实验,考察配伍、透皮前后化学成分的变化.方法:采用水蒸气蒸馏法提取岗松、大叶桉药对及单味药材的挥发油,再采用Franz扩散池法进行体外透皮实验,并用GC-MS法进行分析.结果:透皮接收液中鉴定出岗松11个成分、大叶桉17个成分、药对12个成分,分别占挥发油总量的97.03％、91.77％、98.62％;1,8-桉叶素(28.63％)、芳樟醇(14.50％)、4-松油醇(31.83％)、α-松油醇(15.80％)等是岗松油的主要透皮成分;α-蒎烯(41.86％)、1,8-桉叶素(12.48％)、α-松油醇(13.99％)、4-松油醇(6.49％)等是大叶桉油的主要透皮成分;1,8-桉叶素(50.81％)、4-松油醇(16.98％)、α-松油醇(17.43％)、芳樟醇(5.79％)等是药对油的主要透皮成分.结论:药对油的成分不是两味药油的直接相加;岗松油、大叶桉油及药对油的化学成分的相对含量在透皮前后均有较大变化,氧化芳樟醇、1,8-桉叶素、芳樟醇、4-松油醇、α-松油醇等醇类物质更容易透过皮肤,而烯类透过性差.
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高效液相色谱法同时测定复方罗布麻片Ⅰ中7个成分的含量
目的:应用高效液相色谱技术,建立同时测定复方罗布麻片Ⅰ中绿原酸、氢氯噻嗪、金丝桃苷、防己诺林碱、粉防己碱、蒙花苷和盐酸异丙嗪含量的方法.方法:采用Waters XBridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速0.5 mL· min-1,柱温30 ℃,检测波长为210、256、325 nm.结果:7个化学成分分离度良好,绿原酸、氢氯噻嗪、金丝桃苷、防己诺林碱、粉防己碱、蒙花苷、盐酸异丙嗪质量浓度分别在1.814～45.36 μg·mL-1(r=1.000)、48.64～1 216 μg·mL-1(r=0.999 8)、4.14～103.5μg· mL-1(r=1.000)、3.338～83.46 μg· mL-1(r=1.000)、6.68～167 μg· mL-1(r=1.000)、0.710 4～17.76μg· mL-1(r=1.000)和3.128～78.2 μg·mL-1(r=1.000)与峰面积呈良好的线性关系;精密度良好,相对标准偏差(RSD)小于0.90％;回收率良好,3个加样浓度的平均回收率(n=3)为98.5％～101.0％,RSD为0.38％～1.8％;稳定性良好,7个成分在24h内保持稳定,RSD小于0.80％.8批样品中绿原酸、氢氯噻嗪、金丝桃苷、防己诺林碱、粉防己碱、蒙花苷、盐酸异丙嗪的含量测定结果分别为0.056 88～0.237 5、1.447～1.582、0.065 48～0.147 7、0.055 33～0.103 7、0.124 2～0.233 1、0.013 74～0.045 01和0.916 0～1.041 mg·片-1.结论:该方法经方法学验证,可同时测定复方罗布麻片Ⅰ中7个化学成分的含量,可用于该药品的质量控制.
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基于一测多评法对小儿豉翘清热颗粒中9个成分的质量控制
目的:建立一测多评(QAMS)法测定小儿豉翘清热颗粒中栀子苷、芍药苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素9个成分的含量.方法:采用超高效液相色谱法,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液为流动相(B),梯度洗脱;流速0.25 mL· min-1,柱温25℃,检测波长220 nm.以黄芩苷为内参物,建立栀子苷、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素与内参物黄芩苷的相对校正因子(f),通过f计算小儿豉翘清热颗粒中9个成分的含量,并进行验证,将该方法与外标法(ESM)的测定结果进行对比分析,以验证QAMS方法的准确性、重复性及可行性.结果:栀子苷、芍药苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的质量浓度分别在9.953～199.1 μg· mL-1、5.994～119.9 μg·mL-1、4.390～87.80 μg· mL-1、9.819～196.4μg·mL-1、1.802～36.04 μg· mL-1、1.408～28.17 μg· mL-1、2.551～51.02 μg· mL-1、0.140 2～2.804 μg·mL-1、0.361 3～7.225μg·mL-1范围内线性关系良好;加样回收率在95.7％～102.5％;以黄芩苷为内参物,测得的f值分别为4.621 1、4.105 5、1.825 3、1.796 5、1.040 2、1.339 8、0.647 4、0.888 7,且建立的QAMS法计算结果与外标法(ESM)的计算结果之间无显著性差异.结论:本实验建立的QAMS法可作为一种简便快捷的质量评价模式,用于小儿豉翘清热颗粒中9个成分的质量控制.
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液质联用法筛查降压类中成药和保健食品中添加的54种化学药物
目的:建立液相色谱-串联质谱法测定降压类中成药和保健食品中54种非法添加的化学药物.方法:样品以甲醇为溶剂超声提取后,采用Agilent Poroshell EC-C18(100 mm×2.1 mm,2.7 μm)色谱柱分离,以0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源正、负离子模式,多重反应监测(MRM)检测.结果:所有化合物在定量范围内相关系数均大于0.995,检测下限均在0.1～16ng· mL-1范围内,3个浓度平均加标回收率均高于50％.用本法筛查12批降压类市售样品,检出4批含有非法添加物.结论:该方法专属、灵敏、快捷,可用于筛查降压类中成药和保健食品中非法添加的化学药物.
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酪氨酸对映体的柱前手性衍生高效液相色谱-化学发光联用法研究
目的:建立酪氨酸对映体的柱前手性衍生高效液相色谱-化学发光联用新方法,并用于体内外酪氨酸对映体的高效检测.方法:利用柱前手性衍生高效液相色谱法对酪氨酸对映体进行分离,联用化学发光检测器对酪氨酸对映体进行检测.考察了色谱流动相配比、流速、柱温以及化学发光条件对酪氨酸对映体分离结果的影响.采用柱前手性衍生高效液相色谱-化学发光联用法对生物样品中的酪氨酸对映体进行分离分析.结果:佳色谱条件下,流动相为甲醇-0.01 mol· L-1磷酸二氢钾溶液(35∶65,pH 6.0),流速为0.7 mL· min-1,柱温为室温;优化学发光体系为氢氧化钠、鲁米诺和高锰酸钾,其浓度分别为0.15、4.0×10-5和4.0×10-5 mol·L-1.在此优化条件下,酪氨酸对映体可以达到完全分离(RS＞2.0),线性检测范围为2.5×10-7 ～3.2×10-5 g·mL-1,L-/D-酪氨酸的检测下限分别为2.96×10-8、3.59×10-8 9·mL-1.结论:柱前手性衍生高效液相色谱-化学发光联用法可对酪氨酸对映体进行高选择性、高灵敏度检测.
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GC-MS/MS法和LC-MS/MS法对玉竹根茎和白茅根茎中224种农药多残留的测定
目的:建立玉竹根茎及白茅根茎中农药多残留的检测方法.方法:以乙腈为溶剂,高速匀浆提取,检测方法:气相色谱-串联质谱法,采用DB17MS弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),电子轰击电离源(EI);液相色谱-串联质谱法,采用十八烷基硅烷键合硅胶柱(CORTECSTM UPLC C18,2.1 mm×150 mm,1.6 μm),以0.1％甲酸(含5 mm0l·L-1甲酸铵)溶液和95％乙腈(含5 mmol·L-1甲酸铵、0.1％甲酸)溶液为流动相,电喷雾电离源(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM).结果:224种农药质量浓度在1～100ng· mL-1范围内线性关系良好,相关系数在0.99以上的占95％,高、中、低三水平回收率试验(0.01、0.1、0.5mg· kg-1)98％的回收率在67.5％～121.0％之间,RSD在1.9％～20.8％之间.结论:本方法能快速有效地检测玉竹根茎和白茅根茎中的农药多残留,为其他药用植物中的农残检测提供借鉴.
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二维超高效液相色谱-QTof质谱联用技术在来氟米特片杂质谱研究中的应用
目的:建立二维超高效液相色谱-QTof质谱联用研究来氟米特片杂质谱的方法.方法:通过二维液相色谱在线脱盐技术,在不改变一维液相色谱条件的基础上,将目标化合物通过阀切换转换至二维液相色谱柱,在二维液相流动相的带动下进质谱,进行结构鉴定.一维色谱柱为Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm 5μm),流动相为0.025 mol· L-1的磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(57∶43),检测波长为210 nm;二维液相色谱柱为Waters BEH C18(50 mm×2.1 mm 1.7 μn),流动相A为0.1％甲酸溶液,流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液,梯度洗脱;采用ESI负离子模式进行质谱扫描,离子源温度120℃,雾化气温度500℃,雾化气流速900 L·h-1,采集模式为MSE.结果:对样品中存在的杂质进行分析,解析出可能杂质结构4个,部分结构片段3个;对杂质的毒性预测显示,杂质7具高毒性风险,所有杂质遗传毒性均属5级,没有警示结构.结论:本法建立了二维超高效液相色谱-QTof质谱联用技术测定、分析来氟米特片杂质的方法,可快速实现杂质定性,结合软件解析结构更便捷;国内产品与参比制剂Sanofi产品相比,杂质谱更复杂,建议生产企业优化处方、生产工艺,保证药品的质量稳定性.
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蒙药材黄花黄芩定性定量方法研究
目的:建立蒙药材黄花黄芩定性定量方法,为提高黄花黄芩药材的质量控制水平提供依据.方法:参照《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2015年版附录相关方法及《国家药品标准工作手册》要求,对黄花黄芩药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物进行测定;以聚酰胺薄膜为薄层板,甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)为展开剂,以黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素为指标成分,在紫外灯365 nm处检视,建立薄层色谱鉴别方法;采用HPLC法建立黄花黄芩中黄芩苷的含量测定方法,使用Waters HHS T3(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.4％磷酸水溶液(47∶53)为流动相进行洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长为280 nm处,柱温40℃,进样量为10 μL.结果:在上述薄层色谱条件下,供试品色谱中与指标成分色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,斑点Rf值适宜,显色清晰,色谱分离好,且信息量多.在HPLC条件下,黄芩苷质量浓度在10.32～103.2 μg·mL-1范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均加样回收率为93.7％～103.2％,RSD为0.78％～1.7％(n=9).7批次黄花黄芩测定结果表明,黄芩苷的百分含量为5.65％～12.76％,水分为5.62％～6.65％,酸不溶灰分为0.33％～0.59％,醇溶性浸出物为44.10％～48.28％,以干燥品计算,黄花黄芩中黄芩苷的含量以不少于8.0％为佳.结论:建立的蒙药材黄花黄芩定性定量方法专属性强,准确度高,操作简便,可用于黄花黄芩的质量控制.
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盐酸溴己新注射剂的质量标准研究
目的:评价盐酸溴己新注射剂(粉针、输液和水针)的质量标准现状及存在的问题.方法:采用法定检验方法结合药物含量测定及杂质分析等探索性研究进行各药品企业样本的研究.结果:粉针的统一标准主要对水分(或者干燥失重)检查、有关物质检查和含量测定等项目进行,研究结果表明,统一后的粉针制剂执行标准有效、可行;输液制剂标准中可能存有争议的5-羟甲基糠醛检查,UV法更简便、快速;而水针制剂的国家标准许久未更新,但新获批的企业更新标准值得推荐.结论:粉针制剂标准方面,众多获批企业标准统一后的现行质量标准可以有效评价本制剂的质量,输液制剂标准的5-羟甲基糠醛检查建议保持现行的UV法,而水针制剂的国家标准建议尽快更新.
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使用LC-MS/MS方法进行生物样本分析时对溶血样本的处理策略
在进行生物样本分析时,临床生物样本发生溶血是较常见现象.临床血浆/血清样本在发生溶血后会不同程度地改变其物理、化学性质,使得其基质与正常血浆/血清样本有所不同,对溶血样本中的目标化合物进行测定时,可能会造成浓度测定的不准确.一般而言,溶血的发生会影响待测物的色谱分离,溶血基质中可能会有一些特有的、与待测物质的共流出的内源性干扰;也可能影响待测物在质谱检测中的基质效应,甚至红细胞中释放出的酶可能影响待测物的稳定性.评价溶血基质对于生物分析的影响具有重要意义,虽然关于溶血基质效应的考察已在我国的生物分析实验室中引起了重视,但关于溶血基质效应的研究尚未达成共识.本文从生物分析行业研究的现状调查入手,探讨溶血对生物分析结果的影响以及溶血基质效应考察的规定等,结合多方面的考虑,给出了使用液相色谱-质谱联用方法进行生物样本分析时对溶血样本处理可行性的策略.
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LC-MS/MS法测定大鼠脑组织中奥拉西坦的浓度
目的:建立一种简便、快速的LC-MS/MS法测定大鼠脑组织中奥拉西坦的浓度,并对SD大鼠静脉注射奥拉西坦后的脑组织分布进行研究.方法:SD大鼠脑组织样品用0.9％氯化钠溶液匀浆后,以吡拉西坦为内标,用乙腈沉淀蛋白,采用LC-MS/MS系统进行分离和测定.色谱柱为Agilent Poroshell 120 SB-C18柱(100 mm×4.6 mm,2.7 μn),流动相为30％甲醇-70％水(含10 mmol·L-1甲酸铵,0.1％甲酸),流速为0.2 mL· min-1,柱温为30℃.质谱条件:电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应离子监测(MRM),检测离子为奥拉西坦m/z 158.6→113.6,内标吡拉西坦m/z 142.6→125.4.SD大鼠分别单次静脉注射奥拉西坦500、1 000、2 000 mg·kg-1,于不同时间点分别采集脑组织,测定脑组织中奥拉西坦的浓度.结果:SD大鼠脑组织匀浆液质量浓度在1.0～100.0 μg·mL-1范围内线性关系良好,定量下限为1.0 μg· mL-1,批内和批间精密度RSD均小于5.7％,准确度为96.3％～105.2％.大鼠分别单次静脉注射500、1 000、2 000 mg· kg-13个剂量的奥拉西坦后,主要药动学参数t1/2分别为(3.56±0.27)h、(3.36±0.49)h、(3.60±0.79)h,Cmax分别为(24.78±16.06) μg·g-1、(50.79±25.92) μg·g-1、(82.21±19.33) μg· g-1,MRTo-t分别为(2.54±0.02)h、(2.38±0.30)h、(2.57±0.08)h,AUCo-t分别为(48.59±10.92) μg· h· g-1、(94.54±9.30) μg·h·g-1、(201.35±18.87) μg·h·g-1.结论:本测定方法可用于大鼠奥拉西坦药代动力学在脑组织中的分布研究;大鼠分别单次静脉注射3个剂量的奥拉西坦后,奥拉西坦进入脑组织的时间较快,浓度较高,持续时间较长,利于发挥活化和改善脑组织功能的作用.
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基于液质联用技术的苍术炮制前后苍术苷A的尿排泄动力学研究
目的:采用液质联用技术对大鼠灌胃生、麸炒苍术提取物后苍术苷A的尿排泄动力学规律进行研究.方法:将SD大鼠随机分为2组,分别灌胃给予生、麸炒苍术提取物,收集给药前后不同时间段大鼠尿液,采用多反应监测(MRM)模式对尿液中苍术苷A的浓度进行测定.以DAS 3.2.8软件计算排泄动力学参数,绘制累计排泄率以及排泄速率曲线,比较炮制前后尿排泄规律的异同.结果:生、麸炒苍术中苍术苷A的t1/2分别为(12.88±1.85)h和(12.44±2.41)h,排泄速率峰值分别为(1.32±0.32) μg·h-1和(1.99±0.59) μg·h-1,36 h累积排泄量分别占总排泄量的88.55％和90.34％.结论:苍术麸炒后,其主要成分苍术苷A的尿排泄动力学参数t1/2和ke值均无显著变化,但总排泄率明显高于生品.
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基于多元药效成分综合分析川麦冬适宜采收期研究
目的:考察不同采收期川麦冬内在多元药效成分的动态变化规律,探讨川麦冬佳采收期.方法:采用《中华人民共和国药典》2015年版规定的冷浸法对麦冬水浸出物含量进行测定;采用超声提取,以HPLC-MS对麦冬皂苷D、D',麦冬黄烷酮C、E,甲基麦冬黄烷酮A、B,甲基麦冬黄酮A的含量进行测定,用主成分分析法进行综合评价.结果:不同采收期川麦冬内在多元药效成分的含量呈现动态变化规律,综合评价显示,3月下旬采收的样品综合评价指数高,与当地传统采收期基本相符.结论:本文为揭示川麦冬中多元药效成分的动态积累规律及确定其药材的适宜采收期提供基础资料,同时也为川麦冬内在质量的综合评价提供一定科学依据.
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基于指纹图谱分析和多成分同时定量的护肝片质量评价研究
目的:建立护肝片的HPLC指纹图谱,并测定其主要成分的含量,为护肝片的质量控制提供可靠方法.方法:采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 nn,5μm),以乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～6 min,6％A;6～9 min,6％A→40％A;9～30 min,40％A→50％A;30～45 min,50％A;45～65 min,50％A→75％A),流速1.0 mL· min-1,检测波长250 nm,柱温30℃;建立护肝片HPLC指纹图谱,并对(R,S)-告依春、柴胡皂苷a、五味子醇甲、柴胡皂苷d、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法进行方法学考察.结果:在指纹图谱研究中,共确定护肝片HPLC指纹图谱20个共有峰,通过与混合对照品比较,指认其中7个指标成分,分别是(R,S)-告依春(1号峰)、柴胡皂苷a(3号峰)、五味子醇甲(5号峰)、柴胡皂苷d(6号峰)、五味子酯甲(8号峰)、五味子甲素(17号峰)和五味子乙素(20号峰),利用相似度软件对23批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.95以上.在建立的色谱条件下测定7个成分,分离度良好,方法精密度和重复性的RSD均＜1.5％,供试品溶液在24 h内稳定,各成分具有良好的线性关系和较宽线性范围;6批护肝片中(R,S)-告依春、柴胡皂苷a、五味子醇甲、柴胡皂苷d、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素质量分数分别为0.07～0.12、0.13～0.20、0.51～0.58、0.06～0.13、0.07～,0.14、0.10～0.17和0.18～0.23 mg·片-1.结论:所建立的护肝片HPLC指纹图谱检测和定量测定分析方法快速、准确,可以有效地评价护肝片的质量.
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正交试验优选知母酒制工艺
目的:优选酒制知母的炮制工艺,确定其工艺参数.方法:以知母皂苷B Ⅱ和芒果苷含量为考察指标,选取黄酒用量、焖制时间、炒制温度和炒制时间4个因素,应用L9(34)正交设计表,采用方差分析对知母的酒制工艺优选.知母皂苷B Ⅱ色谱分离条件:色谱柱为CAPCELL PAK C18(5μm,4.6 mm×250 mm),乙腈-水(25∶75)为流动相,流速1.0 mL· min-1;芒果苷的色谱分离条件:色谱柱为Waters Symmetry C18(5 μm,4.6 mm×150 mm),乙腈-0.2％乙酸溶液(15∶85)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长258 nm.结果:佳炮制工艺参数:黄酒用量15 g,焖制时间90 min,炒制温度190℃,炒制时间25 min.结论:优选的炮制工艺稳定可行,为酒制知母提供实验基础.
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重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的分析与评价
目的:分析重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的形成原因及其对结构功能的影响.方法:通过分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)结合多角度激光散射仪分离聚合物并测定其相对分子质量;将含有聚合物的蛋白进行还原及非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),确定聚合物的形成是否与二硫键有关;通过液质联用仪鉴定聚合物中存在的二硫键;通过测定圆二色谱评价聚合物的形成对蛋白二级结构的影响;通过多角度激光散射仪测定二硫键形成对蛋白稳定性的影响;通过酶活性测定评价聚合物形成对酶活性的影响.结果:重组假丝酵母尿酸酶正常以同源四聚体的形式存在,37℃条件下可通过链间二硫键形成更高级别的聚合物,高级聚合物的形成对蛋白二级结构及稳定性的影响不大,但会降低酶活性.结论:本文综合多种手段对尿酸酶中聚合物的成因及影响进行分析,测定结果可为该制品的后续研究及质量控制提供依据.
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重组人C1酯酶抑制剂中rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH含量检测
目的:分析重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中相关蛋白rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量.方法:采用反相高效液相色谱法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对4批样品中的相关蛋白进行检测.结果:低浓度下,rhC1INH对照品、rcc-rhC1INH对照品和ox-rhC1INH对照品能够较好分离.rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH 2种对照品质量浓度为0.2、1和1.4 mg· mL-1时的回收率均在85％～115％的范围内.对同1批3个待测样品进行测定,rcc-rhC1INH含量为(0.082±0.008)％,RSD为9.8％;ox-rhC1INH含量为(0.35±0.05)％,RSD为14.3％,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度.4批测试样品中,rcc-rhC11NH的含量分别为0.083％、0.021％、0.033％、0.042％,ox-rhC1INH的含量分别为0.34％、0、0、0.结论:经方法学验证,RP-HPLC方法可用于rhC1INH中rcc-rhC1INH和Ox-rhC1INH的含量检测.
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国产重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子原液中制品相关蛋白的定性定量分析
目的:分析鉴定国产重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白,为《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)标准提高提供依据.方法:采用欧洲药典方法测定所征集的样品中制品相关蛋白的含量;采用液相质谱联用法对制品相关蛋白进行鉴定,色谱柱为Waters BEH300 C4(2.1 mm×150mm,1.7 μm),以0.1％的三氟乙酸水溶液(A)-0.1％的三氟乙酸90％乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1.质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,Cone电压40V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围(m/z):500～3 000.结果:对4家生产企业的7批原液进行了检测,其中3家企业的5批原液符合欧洲药典标准,2家企业的2批原液不符合欧洲药典标准;相对分子质量测定结果显示,样品中普遍存在的制品相关蛋白为氧化形式及乙酰化形式,个别批次中存在相对分子质量不一的肽段.结论:本次征集的样品有71％符合欧洲药典标准,可以考虑将制品相关蛋白检测纳入新版《中国药典》,以提高国产重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的产品质量.
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重组人C1酯酶抑制剂中异天门冬氨酸含量检测
目的:检测重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中异天门冬氨酸(IsoAsp)的含量.方法:采用异天冬氨酸甲基转移酶催化结合反相高效液相色谱的方法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对3批样品的IsoAsp含量进行检测.结果:浓度分别为10、30、60 pmol/60 μL的SAH标准品的检测结果均在90％～110％范围内.对同一批3个待测样品进行测定,IsoAsp含量为(0.413±0.020) μmolIsoAsp/g rhC 1INH,RSD为4.8％,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度.3批测试样品中,IsoAsp含量分别为0.633、0.827、0.487 μmol IsoAsp/g rhC1INH.结论:经方法学验证,异天门冬氨酸检测试剂盒结合RP-HPLC方法适用于rhC1INH中IsoAspr的含量检测,可为类似蛋白制品中该项目的检测提供借鉴.
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重组人粒细胞刺激因子的N端氨基酸序列异质性分析
目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的N端异质性.方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中N端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4 (2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1％三氟乙酸水溶液(A)-0.1％三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL· min-1.分别收集各组分并冷冻干燥,采用N端测序仪测定各组分的N端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对N端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围(m/z)500～3 000.结果:色谱分离得到3个组分;N端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个N端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与N端测序结果一致.结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的N端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持.
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重组人C1酯酶抑制剂中聚合物含量的测定
目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法.方法:rhC1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol· L-1磷酸缓冲液(pH 6.8)为流动相,流速0.5 mL· min-1进行洗脱.结果:在25.0～85.0μg·mL-1浓度范围内,rhC1INH标准品的峰面积与浓度的线性关系良好(R2平均值为0.997).rhC1INH样品中分离到3个聚合物峰,采用面积归一法计算6次进样的聚合物的平均含量分别为0.11％、0.15％和0.60％,RSD分别为10.7％、9.0％和3.9％.4批次rhC1INH样品中总聚合物的含量分别为0.82％、1.01％、0.97％和0.92％.结论:SEC-HPLC方法适用于rhC1INH中聚合物的检测,为其聚合物质量标准的建立和产品评价奠定了基础.
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利用欧洲药典方法评价国产重组人干扰素α-2原液的制品相关蛋白含量
目的:对不同企业生产的重组人干扰素α-2原液的制品相关蛋白含量情况进行调查分析,为新版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)提高该品种质量标准提供数据支持.方法:采用欧洲药典收载的标准和方法,对全国7家企业生产的20批重组人干扰素α-2原液产品进行相关蛋白含量的检测,分析不同企业产品的质量情况.结果:经过检测分析,其中5家企业的16批产品符合欧洲药典规定,2家企业的4批产品不符合规定.20批产品的相关蛋白总合量低为0.9％,高为58.2％,其中含量大于3％的相关蛋白峰的数量高为5个,单个相关蛋白峰的含量高为19.9％.结论:建议在下一版《中国药典》的重组人干扰素α-2原液质量标准中,增加制品相关蛋白含量检测项目,全面提高产品质量.
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液质联用对重组胰高血糖素样肽-1-Fc融合蛋白中的制品相关蛋白进行定性定量分析
目的:对重组胰高血糖素样肽-1-Fc融合蛋白(rGLP-1-Fc)的制品相关蛋白进行定性及定量分析.方法:利用液质联用法,对rGLP-1-Fc原液中制品相关蛋白的修饰类型进行鉴定;通过胰蛋白酶酶切液质肽图的方法,对修饰位点进行鉴定;采用反相超高效液相色谱法,测定3批原液中制品相关蛋白的比例.结果:该蛋白原液中主要存在3种制品相关蛋白;液质联用检测结果显示:1种为氧化及糖化的修饰产物,另外2种为一条二硫键解链导致的变异体;液质肽图分析发现氧化及糖化发生在第28位赖氨酸残基;对3批原液进行了检测,3种制品相关蛋白的平均含量分别为(2.37±0.04)％、(9.07±0.20)％和(4.03±0.07)％.结论:利用液质联用技术对rGLP-1-Fc原液中的制品相关蛋白进行了初步的定性、定量分析,测定结果可为同类产品的制品相关蛋白分析提供技术支持.
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利用欧洲药典方法评价国产重组人粒细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白含量
目的:分析评价国产重组人粒细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白含量,为《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)标准提高提供依据.方法:对比国际主流药典,选择其中为通用的制品相关蛋白含量分析方法;用该方法对征集的国产重组人粒细胞集落刺激因子原液进行分析检测及结果判定.结果:欧洲药典(EP)所列方法为通用,用该方法对12家生产企业的33批原液进行了检测;结果显示,5家企业的13批原液符合EP标准,其余厂家及批次不符合EP标准.结论:我国已有相当数量的重组人粒细胞集落刺激因子产品符合EP的制品相关蛋白含量标准,可以考虑将该方法纳入新版《中国药典》,以促进该制品质量的提高并与国际接轨.
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重组人干扰素β1b中ox-IFN β1b含量测定
目的:建立重组人干扰素β1b(IFN β1b)中氧化型干扰素(ox-IFN β1b)的测定方法.方法:RP-HPLC色谱条件:RP-C8色谱柱(Grace Vydac,4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40 ℃,0.1％ TFA-10％乙腈-水溶液为流动相A,0.1％ TFA-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-１,检测波长214 nm.结果:ox-IFN β1b峰与峰3的分离度约为4.0,理论塔板数大于20 000;6次进样的RSD小于5.0％;2个厂家共6批IFNβ1b原液中均检出ox-IFN β1b,用面积归一化法计算百分含量为0.47％～0.96％.结论:新建方法可有效分离和测定不同厂家IFNβ1b原液中的ox-IFN β1b,对IFN β1b质量标准的提高具有重要意义.
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重组蛋白药物制品相关蛋白的分析与评价
我国的重组蛋白药物产业经过20多年的发展,建立了一套比较完备的质量控制体系,但是与国外发达国家相比,还存在一定的差距.随着技术的更新和进步,我国重组蛋白药物的质量控制技术也有待加强.2017年,国家药典委员会立项标准提高课题,主要针对重组细胞因子的制品相关蛋白展开研究.作为课题的一部分,本文对制品相关蛋白的分析与评价进行了介绍,内容包括制品相关蛋白的概念、国内外对制品相关蛋白的技术法规要求、制品相关蛋白的产生及其对产品质量的影响、制品相关蛋白的分析方法等.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1997 | 05 |
