中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子: 0.41
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1004-5503
- 国内刊号: 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析
目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒(HPV)33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003~2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.
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产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因的构建及表达
目的 构建产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白基因表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 利用PCR技术,从含α毒素基因的质粒pXCPA02中扩增出α毒素基因,经NcoⅠ酶切,回收0.95kb的α基因片段,再与经NcoⅠ酶切并含融合基因β1-β2的质粒pXETB1B2连接,获得重组质粒pXETAB2B1,经Nco Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pXETAB2B1含有α-β2-β1融合基因.表达产物相对分子质量约为95 000,并可被特异性抗体识别.结论 已获得高效表达α-β2-β1的重组菌株.
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HLA-DR/DQ等位基因与HBV感染的相关性
目的 对大连地区不同人群的HLA-DR/DQ基因型与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性进行初步分析.方法 利用微量聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,分别检测乙型肝炎后肝硬化患者、乙型肝炎病毒携带者和正常对照人群的HLA-DR/DQ基因型.结果 随机选择的乙型肝炎后肝硬化患者的HLA-DR7的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P<0.05);乙型肝炎病毒携带者的HLA-DQ8的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P<0.05);乙型肝炎后肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者比较,后者的HLA-DQ8抗原频率明显高于前者,差异有显著意义(P<0.05).其它HLA等位基因频率在不同人群中差异无显著意义(P>0.05).结论 HLA-DR7/DQ8基因型与HBV感染之间可能存在一定相关性.
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红系造血相关转录因子在红系诱导分化中表达的变化
目的 探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化.方法 利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化.绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化.结果 HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调.结论 红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调.
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乙型肝炎病毒X基因DNA竞争子的构建及鉴定
目的 构建乙型肝炎病毒X基因DNA(xDNA)竞争子L180,为竞争PCR定量分析xDNA打下基础.方法 以扩增的xDNA片段为模板,用引物1434和Lx PCR扩增竞争子DNA,并将扩增产物克隆到pUCm-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,酶切鉴定和测序,筛选阳性竞争子质粒,并建立竞争PCR定量分析xDNA的方法.结果 所构建xDNA竞争子L180,经测序及PCR定量分析证实,PCR扩增的产物即为目的xDNA.初步建立了竞争PCR定量分析xDNA的方法.结论 已成功构建乙肝病毒xDNA竞争子.
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治疗性乙型肝炎病毒载体疫苗的构建
目的 研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗.方法 将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒.经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量.结果 获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达.结论 已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒.
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重组人红细胞生成素二聚体工程细胞的建立
目的 建立重组人红细胞生成素二聚体工程细胞株.方法 用重组人红细胞生成素二聚体表达载体转染COS-7细胞,通过dot blot进行检定.然后对CHO-dhfr-细胞进行稳定转染,再经过稀释克隆和MTX的加压扩增,筛选二聚体工程细胞株并进行传代及无血清培养基培养、目的蛋白纯化及检测.结果 瞬时转染70 h细胞有目的蛋白表达.稳定转染后选取表达量高的细胞株为工程细胞株.该细胞株连续传15代及经无血清培养基培养,目的蛋白表达量均无明显下降.所表达的目的蛋白相对分子质量为70 000,并具有高度特异性.结论 已获得稳定高效表达重组人红细胞生成素二聚体的工程细胞株.
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Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白的表达及纯化
目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.
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幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性
目的 构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性.方法 用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性.将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性.结果 SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65 000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.72 mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性.结论 VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件.
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转基因人参细胞中HBsAg的表达及稳定性研究
目的 对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析.方法 提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性.采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性.结果 CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2.024 mg/g,HBsAg含量为504 ng/g,占总蛋白含量的0.025%.表达的目的蛋白相对分子质量约为25 000,具有HBsAg特异性.经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性好.结论 所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg.
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结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.
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pET28a-Chaperonin 10重组载体的构建及SARS-CoV蛋白高效表达
目的 建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统.方法 PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体.在该载体Chaperonin 10基因的3'端克隆SARS-N、SARS~E、SARS-S和SARS-M基因,在BL2.1(DE3)中进行诱导表达.结果 SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达.结论 该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达.
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丙型肝炎病毒C区和NS3区嵌合基因的克隆及表达
目的 获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量.方法 应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性.结果 SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达.经鉴定,其相对分子质量约为75 000,并具有高度特异性.结论 已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础.
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乙型肝炎人免疫球蛋白的应用研究
本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述.
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钩端螺旋体外膜蛋白致病性及免疫性研究进展
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
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破伤风抗毒素细菌内毒素检查方法的建立
目的 建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法.方法 确定内毒素限值和供试品溶液的大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较.结果 检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符.结论 凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测.
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乳鼠心肌细胞的原代培养方法的改进
目的 对乳鼠的心肌细胞进行原代培养方法的改进.方法 参照乳鼠心肌细胞原代培养方法,并进行改进,选用Ⅱ型胶原蛋白酶及IMDM培养液进行消化和培养,减少了消化及离心时间,差速贴壁分离纯化后,加入5-溴脱氧核苷抑制成纤维细胞污染.结果 本方法培养的心肌细胞存活率为95.6%,培养2~5 d观察,视野中绝大多数为已搏动的心肌细胞和心肌细胞团,成纤维细胞无明显增殖.结论 本方法是一种较为理想的乳鼠心肌细胞原代培养方法.
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PC12细胞体外培养法测定蛇毒神经生长因子活性
目的 建立PC12细胞检测蛇毒NGF活性的方法.方法 在有血清条件下,观察NGF诱导PC12细胞分化情况.在无血清条件下,以SRB染色定量NGF维持PC12细胞存活数量,计算NGF效价,并与鸡胚背根神经节法比较.结果 在有血清条件下,NGF能诱导PC12细胞分化,出现神经突触样生长.在无血清条件下,NGF浓度对数值与PC12细胞数呈直线相关,标准品与样品的生物效应平行性良好,以量反应平行线法可计算样品的NGF平均效价为1 108.3 U/ml,与鸡胚背根神经节法检测结果相符.结论 该法简便易行,定量准确,重复性好,实验周期短.
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碘化钾与酚/氯仿提取外周血基因组DNA方法的比较
目的 建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法.方法 采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定.结果 此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定.结论 该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位特异性抗体检测方法的建立与评价
目的 建立并评价幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)特异性抗体的检测方法.方法 应用纯化的重组Hp UreB作为包被抗原,建立检测Hp UreB特异性抗体的ELISA间接法.以Hp抗体Western blot检测作为"金标准",评价所建立方法的真实性和可靠性.结果 检测血清特异性IgG的灵敏度为100.0%,特异度为97.7%,阳性预测值为97.2%,阴性预测值为100.0%,约登指数为0.977,符合率为98.7%,试验的一致率为98.5%;检测血清中总的特异性Ig灵敏度为97.1%,特异度为95.3%,阳性预测值为94.4%,阴性预测值为97.6%,约登指数为0.925,符合率为96.2%,试验的一致率为97.8%;检测唾液中特异性sIgA的灵敏度为96.2%,特异度为94.5%,阳性预测值为89.3%,阴性预测值为98.1%,约登指数为0.907,符合率为95.1%,试验的一致率为97.5%;检测粪便标本中的特异性sIgA的灵敏度为92.0%,特异度为90.2%,阳性预测值为85.2%,阴性预测值为94.9%,约登指数为0.822,符合率为90.9%,试验的一致率为98.6%,CV值均小于15%.结论 该检测方法真实性、可靠性、重复性良好,能满足临床标本检测的要求.
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软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的比较
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
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重组人白介素-12生物学活性检测方法的建立
目的 建立重组人白介素-12(rhIL-12)的生物学活性检测方法.方法 采用重组人白介素-12刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ,并用国际标准品校正,进行生物学活性检测.结果 用该方法对重组人白介素-12成品及原液进行检测,成品比活性平均值为1 037 460 IU/mg,变异系数为26.0%(n=5);原液比活性平均值为1 262 270 IU/mg,变异系数为16.8%(n=5).结论 该方法检测结果准确、客观,重复性好,可用于重组人白介素-12生物学活性的常规检测.
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食管癌细胞中热休克蛋白70-多肽复合物的分离
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
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细菌生物膜酶学消解的新方法
细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体.生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状,它通过黏附、定量、抗吞噬和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且对常用抗菌素都不敏感.
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天花疫苗的规模化制备
目的 建立大规模制备天花疫苗的方法.方法 用SPF鸡胚细胞培养痘苗病毒,经细胞破碎、膜过滤提取痘苗病毒,加保护剂制得天花疫苗.结果 疫苗经检测,动物免疫效果和疫苗稳定性良好.结论 此方法可以用于大规模制备天花疫苗,疫苗质量符合1979版<中国生物制品规程>要求.
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黄热疫苗病毒17D株在Vero细胞上的适应性传代
目的 建立黄热疫苗病毒17D株的Vero细胞适应株.方法 将2批鸡胚黄热疫苗病毒在Vero细胞上进行2次蚀斑筛选,并连续传代培养,然后对获得的4株Vero细胞适应株病毒YFV-Vero(5)-A1、YFV-Vero(5)-A2、YFV-Vero(5)-B1和YFV-Vero(5)-B2进行稳定性和免疫原性检测.结果 4株Vero细胞适应株病毒可被黄热病毒(17D)猴免疫血清中和.在传代过程中,不同代次的病毒滴度稳定在6.90LgPFU/ml以上,高峰病变出现时间为5~7 d.家兔和小鼠的免疫血清中和抗体效价分别为1:640~1:5 120和1:640~1:2 560.结论 4株Vero细胞适应株病毒生物学性状稳定,免疫原性良好.
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冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分相容性的研究
目的 研究冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分的相容性.方法 将所制备的联合疫苗与同批单价甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗进行甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力检测,同时分别以联合疫苗与甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗接种恒河猴,检测甲肝抗体和HBsAb阳转率.结果 该联合疫苗与同批单价疫苗的甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力及诱导猴体的甲肝抗体和HBsAb阳转率差异均无显著意义.结论 冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分间无拮抗作用,具有相容性.
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HIV-1 DNA疫苗的构建及免疫原性
目的 构建稳定表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的DNA疫苗,提高目的基因的表达效率.方法 对HIV-1野生型Gag-Pol基因序列进行优化,使用本室构建的表达载体VR,构建重组质粒VR-GPCINS.将构建的重组质粒VR-GPCINS转染HEK293细胞,Western blot鉴定表达产物.用构建的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,Western blot检测体液免疫反应.结果 成功构建能稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的VR-GPCINS质粒,Western blot在免疫小鼠的血清中检测到抗p24的特异性抗体.结论 含优化Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GPCINS在细胞表达和体液免疫方面均明显优于含野生型Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GP.
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黄芪多糖对人用狂犬病疫苗免疫原性的影响
目的 研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响.方法 将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7 d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0.5 ml.BALB/c小鼠于15 d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定.结果 试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义.结论 黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性.
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人用皮内注射布氏菌活疫苗毒理及药效学研究
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的大耐受量为1.0×109个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×109个菌的部位会在48 h后化脓,但在1~2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24~48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.
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大鼠口服核糖核酸的吸收与分布研究
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
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蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)质量稳定性考察
目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2~8℃和20~25℃的条件下,定期取样.依照<中国生物制品规程>(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白(pH4)在2~8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20~25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2~8℃在有效期内质量稳定.
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重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性分析
目的 对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析.方法 以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定.结果 目的 蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30 000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30 780.522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致.Western blot证实rhALR正确表达,等电点5.85~6.85,氨基酸含量与理论值基本符合.动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性.结论 经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性.
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幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备
目的 研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H. Pylori)治疗性抗体奠定基础.方法 用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀.以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度.结果 母鸡初次免疫后76 d,抗体效价达到1:6 400,高可达1:12 800.蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25.66 mg/ml.结论 已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体.
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重组人血白蛋白与小分子药物结合功能研究
目的 研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能.方法 在366 nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25 HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率.结果 重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14.68 mol Diazepam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12.82 mol Diazepam/mol HAS.重组人血白蛋白中华法令的结合率为8.69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6.73%.结论 重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致.
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社区人群乙型肝炎疫苗接种状况及影响因素调查
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003~2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
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乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂的研制
目的 制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测.方法 分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证.结果 试剂对乙型脑炎病毒抗原的佳定量范围是0.131~0.666 ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0.996,平均变异系数CV小于10%.与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P<0.01).对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2.7%和4.4%.结论 试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测.
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关于体外诊断试剂质量研究的建议
体外诊断试剂质量研究工作是产品研发的重要内容之一,也是技术审评中的重点内容.质量研究的结果是制定产品标准的重要依据.同时,其中的部分内容也将收录入使用说明书中,有助于正确使用产品和准确判断检验结果.
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世界卫生组织乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会
2006年6月1至2日,在瑞士日内瓦WHO总部召开了非正式乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会.
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