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槲皮素通过Akt-mTOR途径上调高糖培养RSC96细胞的自噬
目的 探讨槲皮素对高糖离体培养的RSC96细胞自噬变化规律的影响.方法 RSC96细胞培养于含有槲皮素的高糖培养基中,超微结构应用透射电子显微镜观察,用免疫荧光法、Western blot法检测Beclin1、LC3Ⅱ、磷酸化的Akt及磷酸化的mTOR蛋白表达,用实时荧光定量PCR法检测Beclin1 mRNA和LC3B mRNA的转录.结果 高糖造成RSC96细胞Beclin1和LC3Ⅱ的表达下调,增加Akt和mTOR的磷酸化水平(P＜0.05,P＜0.01),造成病理形态改变,减少自噬体数量.槲皮素能够上调Beclin1和LC3Ⅱ的表达,下调Akt和mTOR的磷酸化水平(P＜0.05,P＜0.01),修复病理损伤,增加自噬体数量.结论 槲皮素通过下调Akt-mTOR途径磷酸化水平而增加高糖培养RSC96细胞的自噬.
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槲皮素联合放射线抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成
目的 比较槲皮素、放射线以及二者同时干预对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响. 方法 体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,MTT法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞干预前后的生长曲线;比色法检测细胞上清液中羟脯氨酸含量;免疫细胞化学检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原;RT-PCR及Real-time PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达. 结果 ①槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;②槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平;③放射线联合槲皮素作用后抑制作用更明显. 结论 槲皮素可增强放射线对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的抑制效应,其作用机制之一是抑制了TGFβ-1基因的转录.
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槲皮素增强肠易激综合征模型大鼠肠屏障功能的实验研究
目的:探讨槲皮素(Que)改善肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠上皮屏障功能的机制.方法:选择出生后2 d的新生SD乳大鼠100只,随机分为对照组20只和模型组80只.模型组采用新生期乳大鼠母源性分离(NMS)联合醋酸(AA)灌肠法制作IBS模型(NMS + AA).造模结束后4～5周,选择满足条件的雄性幼鼠作为研究对象.其中对照组随机选择8只(生理盐水,10 ml/kg);模型组在造模成功者中随机选分成4组,即盐水组(10 ml/kg)、培菲康组(210 mg/只,含活菌数0.1×108CFU)、Que低剂量组(50 mg/kg)和Que高剂量组(200 mg/kg),每组8只.各组均予相应药物灌胃处理,每天1次,连续2周.采用腹壁撤退反射(AWR)评分评估结肠敏感性,51Cr-EDTA检测全消化道通透性,HE染色法检测结肠粘膜炎症细胞浸润,ELISA法检测结肠细胞因子TNF-α水平,Western blot法检测结肠上皮紧密连接蛋白(TJs)occludin和claudin-l的表达.结果:采用NMS+AA法可制作IBS大鼠模型,造模成功率达86.3%.模型鼠内脏敏感性提高,结肠通透性增加,大量炎细胞浸润远端结肠粘膜固有层,TNF-α含量增加,claudin-1和occludin表达下降.Que在结、直肠扩张(CRD)一定压力范围内可降低模型鼠的内脏敏感性(AWR评分降低)(P＜0.05);高剂量Que可降低模型鼠全消化道通透性(P＜0.05),减少结肠粘膜炎细胞的浸润水平和TNF-α含量(P＜0.05),并上调结肠claudin-1和occludin的表达(P＜0.05).结论:采用NMS + AA法可成功制作内脏高敏感伴结肠通透性增加的IBS大鼠模型.Que可通过调节IBS模型大鼠细胞因子TNF-α的含量和紧密连接蛋白claudin-1、occludin的表达,减少结肠粘膜炎症,降低消化道通透性,进而增强肠屏障功能,并可改善IBS模型大鼠的痛觉过敏.
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槲皮素代谢的研究进展
槲皮素(quercetin)及其衍生物是膳食成分中常见的类黄酮物质之一,也是一些中草药的有效成分,具有清除自由基、抑制炎症反应、抗癌防癌等多种生物活性,日益成为国内外研究的热点.本文综述了近几年国外有关槲皮素及其衍生物代谢方面的研究,包括其吸收形式、吸收部位和吸收机制,以及在体内各器官的转化、运输和排泄等.
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槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究
目的探讨黄酮类化合物槲皮素(Que)对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用.方法应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用;AO/PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系;诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加;将细胞特异性地阻滞在S期,出现凋亡峰.结论槲皮素能抑制U937细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性.
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槲皮素抗肿瘤作用的研究
槲皮素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物.本文从抑制肿瘤细胞增殖,逆转肿瘤细胞多药耐药和与其他药物联用增强抗肿瘤作用等几方面,对槲皮素的抗瘤作用一综述.
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槲皮素对柔红霉素所致心肌损伤的保护作用
目的观察槲皮素(QUE)对柔红霉素(DNR)所致小鼠心肌损伤的保护作用.方法 52只小鼠分5个实验组,1组作为空白对照组.1组用DNR诱导小鼠心肌损伤;1组用QUE灌胃给药后再用DNR诱导心肌损伤作为保护组;1组只给QUE灌胃作为保护对照组;1组给予DMSO灌胃作为溶剂对照组.观察各组小鼠的血清心肌酶谱、心肌和血清中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.观察心脏大体改变,并制备病理切片,HE染色后,光镜下观察心肌形态学变化.结果 DNR组小鼠的血清心肌酶谱显著升高,血清和心肌中MDA含量显著增高,SOD活性降低,引起心脏充血、水肿,心肌颗粒变性,灶性出血、坏死.而QUE保护组的心肌酶升高程度明显降低、血清和心肌组织中MDA含量无明显增加,SOD活性不降低,心肌无明显出血灶及颗粒变性.结论槲皮素对柔红霉素诱导的小鼠心肌损伤有保护作用.其机理可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关.
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槲皮素对HaCat细胞增殖及β-防御素和谷胱甘肽过氧化物酶表达的影响
目的 研究槲皮素(quercetin)对人永生化上皮细胞(HaCat细胞)增殖及其非特异性免疫分子表达的影响.方法 利用MTT法检测不同浓度槲皮素溶液作用对HaCat细胞增殖的影响,利用ELISA法检测在不同浓度槲皮素干预下的HaCat细胞培养上清液中β-防御素(β-DF)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的含量. 结果 100 μmol/L槲皮素对HaCat细胞的增殖有抑制作用,50 μmol/L以下的槲皮素对HaCat细胞的增殖无明显影响.HaCat细胞经过不同浓度的槲皮素处理48、72 h后,其细胞上清液中谷胱甘肽过氧化物酶的浓度与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但β-防御素的表达在50.00 μmol/L和25.00 μmol/L槲皮素处理组上调. 结论 槲皮素具有增强细胞非特异免疫功能作用,其机制可能通过上调β-防御素的表达来实现.
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槲皮素增敏阿霉素抗白血病效应的实验研究
本研究采用槲皮素作用于P388白血病移植瘤裸鼠模型,探讨其在体内抗白血病机制及增强阿霉素化疗效果的机制.取对数生长期的P388白血病细胞注入BALB/e裸鼠皮下,建成白血病皮下移植瘤裸鼠模型;采用槲皮素、阿霉素及二者联合用药作用于白血病小鼠,观察小鼠生存期的变化;定期复查血象,计数外周血细胞数;通过流式细胞术测定细胞周期,观察槲皮素对细胞增殖的影响;通过ELISA法检测Caspase-3蛋白表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western-blot技术检测NF-κB、BCL-2、BAX基因及蛋白的变化.结果表明,槲皮素和阿霉素均能显著延长P388白血病移植瘤裸鼠的生存期,且两者联合作用于动物的生存期较单一药物组的延长更明显;槲皮素和阿霉素单独及联合应用均可使白血病小鼠瘤组织G0/G1期细胞比例减少,S期及G2/M细胞比例增加,且槲皮素、阿霉素联合用药组作用更显著;槲皮素可激活Caspase-3酶,诱导白血病小鼠白血病细胞的凋亡;同时,槲皮素可以下调抗凋亡基因BCL-2及NF-κB的表达并上调促凋亡基因BAX的表达.结论:槲皮素可在体内通过调控凋亡相关基因的表达来抑制白血病细胞增殖,促进癌细胞凋亡,并可增敏蒽环类药物阿霉素的化疗效果,具有进一步研发为高效抗白血病药物的潜能.
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槲皮素对人急性B淋巴细胞白血病NOD/SCID小鼠细胞周期及黏附分子表达的影响
目的:探讨槲皮素对人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL) NOD/SCID小鼠的细胞周期及黏附分子的影响.方法:对48只NOD/SCID小鼠于尾静脉注射5×106 Nalm-6细胞,建立ALL NOD/SCID小鼠模型,模型15d后将ALL NOD/SCID小鼠随机分为3组:对照组(腹腔注射生理盐水(0.2 ml/只),环磷酰胺组(腹腔注射环磷酰胺100μg/kg)及槲皮素组(腹腔注射槲皮素3 mg/kg),治疗21d后用流式细胞术检测Nalm-6细胞在G1、G2、M和S周期细胞百分率;计数治疗前后全血B淋巴细胞、Nalm-6细胞、中性粒细胞百分率及白细胞总数;采用双抗体夹心法测定治疗前后细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和P-选择素(P-selectin)蛋白表达.结果:与治疗前比较,治疗后槲皮素组ICAM-1、VCAM-1和P-selectin蛋白表达降低.血象显示,外周血中性粒细胞明显升高,而B淋巴细胞、白细胞和Nalm-6细胞明显降低;G0/G1期细胞增殖比例减少,S期和G2-M增多(P＜0.05).结论:槲皮素可能通过抑制ICAM-1蛋白表达而降低细胞间的粘附性,并将Nalm-6细胞阻滞在S期和G2-M期,对急性淋巴细胞白血病有明显的抑制作用.
关键词： NOD/SCID小鼠 槲皮素 人急性B淋巴细胞白血病 粘附分子 细胞周期 -
槲皮素对慢性髓系白血病伊马替尼耐药细胞株的作用及机制研究
目的:探讨槲皮素对慢性髓系白血病伊马替尼耐药细胞株的生长抑制作用及其机制.方法:台盼蓝染色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测相关蛋白的表达水平.结果:25 μmol/L槲皮素对伊马替尼耐药的K562细胞株K562R和K562G具有与伊马替尼敏感细胞株K562相似的生长抑制和诱导凋亡作用,且不改变BCR-ABL的表达水平.25 μmol/L槲皮素处理24 h后,K562、K562R和K562G细胞的G2/M期百分比明显增加.槲皮素能使γ-H2AX水平明显增高,且上调JNK的磷酸化水平.结论:槲皮素单药对伊马替尼耐药细胞株具有生长抑制和诱导凋亡作用,使细胞停滞于G2/M期,其机制可能与上调JNK磷酸化水平导致DNA双链损伤相关.
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槲皮素对阿霉素诱导HL-60细胞MDR1基因表达的影响
目的:本研究探讨槲皮素对阿霉素诱导人急性髓系白血病细胞株(HL-60细胞)多药耐药基因1(MDR1)mRNA和环氧化酶2(COX2)mRNA共表达的影响.方法:采用RT-PCR检测HL-60细胞MDR1和COX2 mRNA的表达;酶联免疫吸附法测定HL-60细胞前列环素E2(PGE2)的释放;MTT法检测阿霉素的细胞毒作用.结果:阿霉素可诱导HL-60细胞MDR1和COX2 mRNA过表达;槲皮素可下调阿霉素诱导的COX2依赖的MDR1 mRNA过表达,显著降低阿霉素诱导的PGE2释放,增加阿霉素的细胞毒作用.结论:阿霉素诱导COX2和MDR1的共表达存在相关性;阿霉素诱导的MDR1上调可能依赖于COX2转录后的激活,槲皮素对COX2表达的调节作用不仅增加白血病细胞对阿霉素的敏感性,而且可以预防白血病化疗中多药耐药的产生.
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槲皮素逆转白血病细胞系K562/A多药耐药性及相关基因表达的研究
本课题研究槲皮素(quercetin,Que)对白血病细胞系K562/A多药耐药的影响及机制.体外培养的K562和K562/A细胞经不同浓度的Que处理,采用MTT法检测Que对细胞的生长抑制率及对阿霉紊(adriamycin,ADR)的增敏倍数;流式细胞术检测Que作用后细胞内ADR浓度的变化,Annexin V/PI双染色法观察细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR基因芯片检测药物转运蛋白基因及凋亡相关基因表达的变化.结果表明,Que在5-160μmol/L的浓度范围内对K562和K562/A细胞均有剂量依赖性的生长抑制作用,低毒剂量的Que使K562/A对ADR的敏感性显著增强;在ADR为5 μmol/L时,Que与细胞共培养2小时细胞内ADR浓度则明显增加;Que可剂量依赖性地诱导K562和K562/A细胞的凋亡;Que可下调ABC、SLC家族药物转运蛋白相关基因的表达,并可调节BCL-2、TNF等凋亡相关基因的表达.结论:Que可通过多种机制逆转白血病细胞系K562/A的多药耐药性,逆转效果与剂量呈正相关.
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植物雌激素协同化疗药的抗白血病作用体外研究
异黄酮类的Genistein及daidzein和黄酮类的quercetin是天然的植物雌激素,具有抗癌特征.本研究探讨植物雌激素在急性和慢性粒细胞性白血病中的抗增殖作用及与化疗药的协同作用.用台盼蓝染色法分析genistein单独应用和与化疗药联合应用在NB4和HL-60白血病细胞中的抗增殖作用;用MTT法分析quercetin对K562及K562/A细胞的生长抑制作用;确定genistein与化疗药联合应用中同时及顺序给药的佳作用次序;观察联合作用24、48、72小时后细胞的生长状态,研究genistein的凋亡诱导作用和细胞周期阻滞作用.结果表明:Genistein对NB4和HL-60白血病细胞有剂量、时间依赖性的增殖抑制作用,可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.Crenistein和化疗药联合应用对细胞生长有协同抑制作用,且与作用次序相关.Quercetin对白血病敏感株和耐药株均有明显的抑制作用.结论:本研究报道genistein和化疗药联合有协同抗白血病细胞增殖作用,具有作用次序相关性特性,这种联合应用有可能为白血病临床治疗提供新的思路.
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广枣黄酮槲皮素和山萘酚促人白血病HL-60细胞系凋亡及其机制探讨
本研究旨在探讨广枣黄酮主要成份槲皮素及山萘酚的抗白血病作用及其可能的作用机制.采用MTT法测定槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测药物对HL-60细胞周期的影响及其诱导凋亡作用;通过Western blot观察药物诱导的HL-60细胞凋亡中survivin蛋白表达情况.结果表明,槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增长有显著的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(槲皮素相关系数r=0.77,山萘酚相关系数r=0.76).给药后HL-60细胞发生G2/M期阻滞和凋亡.药物诱导HL-60细胞survivin蛋白表达下调.结论:广枣黄酮的主要成份槲皮素及山萘酚有明显的抗白血病作用,且槲皮素诱导凋亡作用强于山萘酚.其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、细胞周期阻滞、抑制survivin蛋白而诱导细胞凋亡.
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宇香色酮和槲皮素体外抑制水痘-带状疱疹病毒作用机制比较
目的：应用基于水痘-带状疱疹病毒( VZV)报告细胞系MV9G建立的报告细胞法比较宇香色酮和槲皮素体外抑制VZV的作用机制。方法测定宇香色酮、丁子香酚、桑色素、姜黄素、杨梅黄酮、槲皮素等中药或植物成分体外抑制 VZV 的选择指数( SIs )，进一步应用无细胞病毒(CFVs)直接感染法和带细胞病毒(CAVs)共培养法分析SIs较高的化合物在直接灭活CFVs、抑制CFVs黏附和穿透、抑制CAVs细胞内复制、抑制病毒即刻早期基因62( IE62)转录和表达等方面的作用。结果宇香色酮和槲皮素SIs相对较高，分别为5.82和8.97。宇香色酮部分灭活CFVs并抑制CFVs黏附和穿透MV9G细胞，槲皮素无此作用。宇香色酮和槲皮素可逆性抑制CAVs细胞内复制以及病毒IE62基因转录及IE62抗原表达，但宇香色酮需在感染12 h内加入。结论宇香色酮和槲皮素体外抑制VZV作用机制有差异，抑制病毒IE62基因转录和表达是其共同机制之一。
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槲皮素对内毒素急性肺损伤的保护作用
目的探讨槲皮素(quercetin)对内毒素急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法 24只SD大鼠,随机分成ALI模型组、槲皮素干预组、正常对照组(n＝8只).各组大鼠均于注射LPS或生理盐水6 h后测定PaO2、pH值、PaCO2,血清TNF-α、IL-8、P-选择素浓度和肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)含量及TNF-α、IL-8、P-选择素浓度;观察肺病理改变、肺湿/干重比(W/D).结果与ALI模型组比较,槲皮素干预组的肺水肿病理改变明显减轻,PaO2改善,MPO、P-选择素及TNF-α、IL-8降低(P＜0.01).结论槲皮素能改善ALI大鼠的气体交换功能,抑制炎性介质的释放,对内毒素诱导的ALI有保护作用.
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槲皮素调控EGFR/AKT/mTOR信号通路影响人乳腺癌细胞株T47D增殖、凋亡的实验研究
目的 对槲皮素调控表皮生长因子/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(EGFR/AKT/mTOR)信号通路影响人乳腺癌细胞株T47D增殖、凋亡进行分析.方法 人乳腺癌细胞株T47D随机分为三组:对照组、雷帕霉素组和槲皮素组.对照组T47D细胞给予溶剂DMSO孵育,雷帕霉素组T47D细胞给予雷帕霉素(10 μM)孵育,槲皮素组T47D细胞给予槲皮素(20 μM)孵育.分析各组T47D细胞的凋亡蛋白及EGFR/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达.结果 与对照组相比,槲皮素组和雷帕霉素组细胞增殖受到明显地抑制(P ＜0.05);槲皮素组和雷帕霉素组T47D细胞的促进凋亡分子Bax、Caspase3和Caspase9蛋白及mRNA水平明显高于对照组而抑制凋亡分子Bcl2蛋白及mRNA水平明显低于对照组(P ＜0.05);槲皮素组和雷帕霉素组T47D细胞EGFR、AKT及mTOR蛋白及荧光强度均明显低于对照组(P ＜0.05).结论 槲皮素能够通过抑制EGFR/AKT/mTOR信号通路促进人乳腺癌细胞株T47D的细胞凋亡过程.
关键词： 乳腺癌 槲皮素 EGFR/AKT/mTOR信号通路 增殖 细胞凋亡 -
ADMA引起肾小球内皮细胞内质网应激及槲皮素的抑制作用
目的 探讨槲皮素对非对称性二甲基精氨酸(ADM)A引起的内质网应激的影响.方法 对肾小球内皮细胞进行培养,细胞分为5组,阴性对照组,ADMA组,槲皮素组,ADMA+槲皮素组,阳性对照组,经过加入相应刺激后继续培养细胞24 h,通过Western blot方法检测内质网应激蛋白PERK、ATF4及CHOP的水平.结果 ADMA组较阴性对照组P-PERK、ATF4及CHOP的表达明显升高,而ADMA+槲皮素组较ADMA组P-PERK、ATF4及CHOP的表达水平明显下降.结论 ADMA可以引起肾小球内皮细胞内质网应激,而槲皮素可以抑制ADMA引起的内质网应激.
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HSP70的表达在不同预处理下星形孢菌素诱导的大鼠神经细胞毒性应激损伤模型中的意义
目的评估不同预处理对抑制星形孢菌素（STS）诱导的神经细胞毒性应激损伤的作用。方法选取 SD大鼠乳鼠120只，分为对照组（n =20）、STS 模型组（n =20）、姜黄素组（n =20）、槲皮素+ STS 模型组（n =20）、姜黄素+STS 预处理组（n =20）、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组（n =20）6个组。取乳鼠海马神经细胞，利用 STS 诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型。对照组研究期间不作任何特殊处理，STS 模型组、槲皮素+ STS 模型组、姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组、姜黄素组分别加入终浓度为20μmol/ L 的 STS、终浓度为10μmol/ L 槲皮素+20μmol/ L ；STS、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为10μmol/ L 的槲皮素+20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素。利用噻唑蓝（MTT）法、乳酸脱氢酶（LDH）释放率和 WesternBlot 法分别测定各组细胞存活率、细胞毒性损伤程度和 HSP70表达量。结果姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素组细胞存活率明显高于 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组和姜黄素组神经细胞毒性率明显低于 STS 模型组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组 HSP70表达量高于 STS 模型组和姜黄素组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 模型组神经元存活率高于槲皮素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 预处理组和 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论姜黄素能增强 HSP70的表达并抑制 STS 诱导的 SD 乳鼠神经元细胞毒性损伤，而槲皮素通过阻断 HSP70表达使姜黄素的抑制作用被抵消。
