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咖啡因对体外培养U251人胶质瘤细胞的影响
目的 观察咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞存活及凋亡的影响.方法 采用MTT和Annexin V/PI流式细胞法观察不同浓度和作用时间的咖啡因对U251神经胶质瘤细胞的影响.结果 (1)咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的存活;(2)咖啡因在体外使U251细胞早期凋亡发生的时间较晚,且在1～ 10 mmol/L浓度范围内,出现浓度依赖性瘤细胞早期凋亡增加,大于10 mmol/L时,瘤细胞迅速出现大量坏死.结论 实验初步证明了咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的增殖活性并在一定浓度范围内(1～ 10 mmol/L)可促使其凋亡,为进一步的动物实验及新药开发提供实验依据.
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自噬与癌症的治疗
自噬是溶酶体降解途径之一,细胞利用自噬维持着胞内大分子和细胞器的循环利用.自噬的功能主要是在营养缺乏状态下维持着细胞代谢的平衡以及在环境压力下清除损伤的细胞器以利于细胞的存活.如今,自噬又显示出其抑制肿瘤的作用.自噬的缺失经常伴随着肿瘤的发生,比如在乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中出现自噬调节基因beclin 1 的缺失,而beclin1基因敲除的小鼠更表现出癌变倾向.自噬是怎样抑制肿瘤发生的是当前生命科学界感兴趣的课题之一,到目前为止,人们已发现细胞自发机制(涉及染色体完整性和稳定性的保护)和非细胞自发机制(涉及坏死和炎症的抑制)参与其中.在治疗过程中,自噬的作用也非常复杂,一方面,由于肿瘤细胞能够依赖自噬功能来缓解由药物和射线诱导的压力而利于自身存活,所以,在化疗和放疗的同时应用自噬的抑制剂被视为当今癌症治疗的一个新手段,另一方面,诱导自噬可以维持细胞内蛋白质和细胞器的更新、抑制DNA的损伤和染色体的突变并且能限制由坏死引起的炎症而实现细胞的适应性,因而,诱导自噬可能在癌症的预防中扮演着重要的角色.
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缺血性脑卒中与睡眠呼吸暂停低通气综合征关系的临床研究
睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)是一种睡眠期各种原因所致上气道不通畅疾病,发生反复频繁的呼吸暂停和低通气,长期夜间低氧血症,从而使机体发生一系列病理生理改变的临床综合征.脑血管病(CVD)是一组急性发病,可造成患者死亡或症状持续24 h的局部脑血管病变,又称卒中,根据病理过程导致局部脑血流不足以维持脑功能和脑细胞存活时,称缺血性脑卒中.我们对我院收治的缺血性脑卒中(包括脑梗死,短暂性脑缺血)100例与健康人100例作对照研究进行临床观察,现报告如下.
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非冻存低温下维持贴壁培养细胞
目的 建立非冻存低温条件下维持贴壁培养细胞的方法.方法 常规培养贴壁生长的小鼠成纤维细胞L929,然后接种12瓶细胞,第二天封口后分别放置室温和4℃冰箱,间隔3d各取1瓶细胞观察细胞存活比率.连续5次,后两瓶继续培养.结果 细胞存活率随时间延长降低,15d后存活率分别为90%和85%,并且存活传代.结论 非冻存低温条件下可以短期维持贴壁培养细胞,该方法丰富了细胞培养技术.
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神经营养因子的作用研究进展
神经营养因子是指机体产生的能够促进神经细胞存活、生长、分化的一类蛋白质因子.在神经系统发育过程中,那些获得了充分神经营养作用的细胞得以存活,而另一些则自然死亡,神经细胞的死亡伴随着神经系统的发育而发生.神经细胞的非自然死亡(例如一些退行性神经病变),可以通过获取外界神经营养因子而得以缓解.神经营养因子已成为当前神经科学领域激动人心的研究热点之一.
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氯化锰致PC12细胞损伤的研究
目的:探讨氯化锰(MnCl2)对PC12细胞的损伤作用.方法:构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,用MTT法检测细胞存活率,用荧光分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)和活性氧(ROS)生成量,用化学比色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:MnCl2诱导的PC12细胞存活率明显下降,并与诱导时间和浓度呈正相关;MnCl2使PC12细胞LDH外溢量和ROS生成量显著增加,同时细胞内MDA含量增加,SOD活性下降.结论:MnCl2可导致PC12细胞的氧化损伤.
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ω-3鱼油脂肪乳对肝细胞氧化损伤的修复作用及其机制
目的：观察ω-3鱼油脂肪乳对肝细胞氧化损伤的修复作用，并探讨其机制。方法体外培养人肝细胞系HL7702细胞。取对数生长期的HL7702细胞分成对照组、模型组和观察组，每组9孔。对照组仅加培养基常规培养；模型组、观察组在培养基中加入500μmol ／L过氧化氢（H2 O2），培养1 h后观察组加入0．5％ω-3鱼油脂肪乳；另设空白对照组，只加培养基，无细胞。各组继续培养4h后收集细胞，油红O染色观察各组细胞内脂滴变化， CCK-8法测算各组细胞存活率，DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞内活性氧簇（ROS），比色法检测各组细胞培养上清液丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST），COD-PAP单试剂比色法检测各组细胞内甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC），硫代巴比妥酸法检测各组细胞内丙二醛（MDA），黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD），实时荧光定量PCR法检测各组细胞中过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR）αmRNA，Western blotting法检测各组细胞中肝型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）相对表达量。结果光镜下可见脂滴染为橘红色。对照组组HL7702肝细胞排列紧密，仅见少许橘红色脂滴。模型组肝细胞可见大量橘红色脂滴并伴有脂滴融合现象。观察组肝细胞可见较多橘红色脂滴，但与模型组比较显著减少。对照组、模型组、观察组细胞存活率分别为67．25％±4．68％、71．72％±2．47％、100％。观察组细胞存活率高于模型组（P＜0．05），但低于对照组（P＜0．05）。与对照组比较，模型组细胞内ROS增高（P＜0．05），细胞培养上清液ALT、AST增高（P均＜0．05），细胞内TG、TC 、MDA增高（P均＜0．05），细胞内 SOD 降低（P＜0．05），PPARαmRNA 降低（P＜0．05），L-FABP 相对表达量降低（P＜0．05）。与模型组比较，观察组细胞内ROS降低（P＜0．05），细胞培养上清液ALT、AST均降低（P均＜0．05），细胞内TG、TC 、MDA均降低（P均＜0．05），细胞内SOD活性增高（P＜0．05），PPARαmRNA增高（P＜0．05），L-FABP相对表达量增高（P＜0．05）。结论ω-3鱼油脂肪乳可修复人肝HL7702细胞氧化损伤，其机制可能与其上调L-FABP ／PPARα信号通路相关因子的表达、维持肝细胞脂质稳态有关。
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白细胞介素7对多发性硬化症患者不同亚群自然杀伤细胞的影响
目的：观察白细胞介素7（IL-7）对多发性硬化症（MS）患者不同亚群自然杀伤（NK）细胞的影响。方法抽取10例MS患者的静脉血，提取外周单个核细胞后体外培养，采用流式细胞术检测NK细胞亚群及IL-7受体α（ IL-7Rα）；分别加入50 ng/mL的IL-7或等体积培养液，检测分泌干扰素（IFN-γ）的NK细胞比例及细胞存活率。结果本组MS患者NK细胞分为CD-3 CD＋56、CD-3 CD＋16、CD-3 CD＋573个亚群，其IL-7Rα表达的荧光强度分别为185．0±38．56、139．30±14．30、137．60±23．03；CD-3 CD＋56与CD-3 CD＋16、CD-3 CD＋57亚群比较，P均＜0．05。 IL-7刺激后，CD-3 CD＋56亚群分泌IFN-γ的细胞比例增长了9．71％±2．59％、细胞存活率增长了4．80％±1．88％，均高于CD-3 CD＋16亚群的1．91％±0．93％、2．49％±1．00％和CD-3 CD＋57亚群的2．90％±1．09％、1．87％±0．57％，P均＜0．01。结论 IL-7可以促进各亚群NK细胞分泌IFN-γ并提高其存活率，且对CD-3 CD＋56亚群的影响高于CD-3 CD＋16和CD-3 CD＋57亚群。
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BCL-2基因研究进展
B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因于1984年由Tsujimoto首先发现.1988年试验报告Bcl-2基因可使细胞存活时间延长.1990年进一步确证Bcl-2基因具有抗细胞凋亡的功能后,Bcl-2基因作为重要的凋亡抑制基因,在多种肿瘤中得到研究.近年来的研究表明,Bcl-2基因的异常表达,与肺癌的发生、发展及预后密切相关.1 Bcl-2基因的分子生物学1.1 Bcl-2基因家族已发现的Bcl-2基因家族成员包括:抑制细胞凋亡的Bcl-2、Bcl-X2、BHRF1和Ced9,促进细胞凋亡的Bax、Bcl-Xs、Bad和Bak,以及参与细胞存活的Mcl-1、Al和LMW5HL等.人的Bcl-2基因是从大多数滤泡型非霍奇金B细胞淋巴瘤中,首先在第14和18号染色体易位断裂点t(14,18)(q31～q21)分离获得的.正常Bcl-2基因位于18q21.3染色体上,约含230kb,该基因有3个外显子和2个启动子,在外显子2和3之间,有一个大约225kb的内含子.在B细胞滤泡型淋巴瘤中,Bcl-2基因常易位至14q32染色体,正常与易位的基因均表达分子质量为26kD的蛋白,含有229个氨基酸.染色体易位使14号染色体上的免疫球蛋白重链基因与位于3′端的Bcl-2基因并列形成头尾结构,这一异常融合基因导致Bcl-2蛋白的过度表达,它编码26kD的蛋白定位于线粒体膜、核膜和内质网,能在各种不同的正常组织和细胞(如T细胞、B细胞和造血细胞)的激活过程中表达.Bcl-2基因及其表达蛋白可抑制多种组织细胞的凋亡,并延长细胞寿命,所以称其为凋亡抑制基因.1993年,Boise等发现了另一类与Bcl-2有44%同源并参与调节细胞死亡的蛋白质Bcl-X.Bcl-X分两种,即Bcl-Xl和Bcl-Xs.研究证实,Bcl-Xl蛋白可抑制细胞凋亡,其功能与Bcl-2蛋白相似而作用强度较弱.Bcl-Xs的作用则与Bcl-2、Bcl-Xl相反,即通过抑制后两者的作用而促进细胞的程序性死亡.近年来认为,Bcl-Xs可能是作为Bcl-2的结构抑制子,通过对其下游的细胞凋亡调节因子作用而抑制Bcl-2基因的功能.Oltvai等于1993年用免疫共沉淀法测到Bax蛋白,与Bcl-2有21%的同源性.研究发现,Bax蛋白有对抗Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡的作用.Bcl-2/Bax两蛋白之间的比例,是决定对细胞凋亡抑制作用强弱的关键因素,Bcl-2＞Bax,细胞趋于存活;Ba＞Bcl-2,细胞趋于凋亡.因此Bax被认为是极重要的促细胞凋亡基因之一.Bak是新近发现的基因,对Bcl-2有抑制作用,类似Bax/Bcl-Xs.Bak蛋白对Bcl-2的抑制作用,可能是通过其它蛋白质信号传递途径中介.在酵母细胞中,Bak蛋白与Bcl-Xl或E1B19K蛋白形成异源二聚体.大量实验证明,这种异源二聚体的形成可能具有细胞特异性.由于Bak可与E1B19K蛋白相互作用,而后者参与核骨架中核纤层作用,Bak可能通过E1B19K蛋白或其他蛋白与核物质作用调控细胞死亡.由于Bcl-Xl的分布不如Bak广泛,推测在细胞中可能存在与Bak相互作用的Bcl-2家族新成员.
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CNE1、CNE2、C666-1和Hone-1细胞的放射生物学特性测定
目的:测定人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、Hone-1及C666-1的放射牛物学特征参数.方法:采用平板集落形成法测定CNE1、CNE2、Hone-1及C666-14种鼻咽癌细胞在0、1、2、3、 4、 6、8、10 Gy照射后的存活分数;通过单击-多靶模型和线性-二次模型分别拟合细胞存活曲线;并计算Do、Dq、N、α、β、α/β值及2 Gy照射时的存活分数(SF2)等放射生物学参数值.结果:4种细胞在2种数学模型拟合的细胞存活曲线差异均有统计学意义(P均<0.05);其参数Do、Dq、N、α、β、α/β和SF2分别在1.818～2.379、0.192～0.880、1.276～2.388、0.085～0.392、0.026～0.036、2.36～15.08和0.416～0.733.结论:较大的放射敏感性差异可能存在于不同甚至相同分化程度的鼻咽癌细胞之间,提示临床鼻咽癌放疗剂量的个体化需求.
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C-myc基因在供体小肠缺血再灌注损伤中的作用
以大鼠模型模拟供体小肠热缺血、冷缺血及再灌注损伤过程,并采用逆转录定量聚合酶链反应(RT-Q-PCR)技术检测C-myc基因mRNA转录水平,以探讨C-myc基因在缺血再灌注损伤中的作用.结果表明,C-myc基因mRNA转录水平在热缺血1小时无明显改变,冷缺血1小时未检出;热缺血及冷缺血后再灌注其水平逐渐增高,并分别于再灌注后6小时、12小时达到高峰,而于12小时、24小时恢复正常.认为RT-Q-PCR是一种灵敏、准确、快速的检测方法;缺血再灌注损伤早期C-myc基因mRNA转录水平增高,可促进细胞发生凋亡;单纯短时冷缺血使细胞处于休眠状态,可降低细胞凋亡相关基因C-myc的mRNA转录水平,减轻细胞损伤.
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脊髓损伤的细胞移植治疗
目前,神经科学的发展已经改变了以往认为脊髓损伤(SCI)后神经轴突不可能再生的观点,并将脊髓损伤的修复分为四个方面:(1)细胞存活;(2)神经轴突的再生;(3)再生轴突的正确走向;(4)正确的、有功能的神经突触联系的建立.近年来,应用活细胞和组织移植修复脊髓损伤并提供治疗因子是研究热点.现将细胞移植治疗脊髓损伤的概况综述如下.
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经GM1处理的肾上腺髓质植入帕金森病大鼠脑后的作用
据报道,神经生长因子和单涎酸神经节苷脂(GM1)等活性物质,能明显提高嗜铬细胞存活,减轻帕金森病的症状.本实验通过体视学方法测量、分析GM1处理的肾上腺髓质的嗜铬细胞在宿主脑内形态结构变化,为GM1在脑移植方面的应用提供理论和实验方面的依据.
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腺病毒介导的Akt1基因转染大鼠胰岛对其生存的影响
Akt亦称蛋白激酶B(ptotein kinaseB,PKB)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员,在细胞存活、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等活动中扮演着关键角色[1].Akt1是Akt蛋白3种主要亚型之一.
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微重力培养对大鼠胰岛细胞存活及形态的影响
我们应用微重力组织细胞旋转培养系统(RCCS)培养大鼠胰岛细胞,并观察其存活率及形态结构的变化.
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腹腔镜中不同膨腹气体抑制肿瘤细胞生长的体外对比研究
本实验旨在研究CO2、He、N2O等不同膨腹气体在模拟气腹条件下，对肿瘤组织体外生长的影响，结果报道如下。 一、材料与方法 肿瘤细胞为人类肝癌细胞株SMMC7721(购于中国科学院细胞研究所)，体外培养于RPMI 164 0完全培养液(含体积分数为10%小牛血清及10万U/L青链霉素)中。传2～3代(至少1周以上)后，以台盼蓝染色后在荧光显微镜下记数，制成5×102个/L的单细胞悬液。悬液分别注入4个( 4组)无菌医用引流袋(带防漏阀)中，用自动气腹仪(Laproflator electronic 3509，WE STGmbH，Germany)自引流袋入口管分别注入CO2、He及N2O，对照组不附加任何气体。 3个实验组气体压力达15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)，于37 ℃孵育箱中维持模拟气腹状态45 min，对照组为大气压力，37 ℃孵育箱中孵育45 min。取出后的细胞悬液用台酚蓝染色后在荧光显微镜下记数4个组存活细胞的比值，同时4个组细胞悬液分别加入96 孔板内。每孔细胞数为5×104个，每组做12复孔，于模拟气腹后24、48、72 h分别用四唑蓝(MTT，美国Sigma公司，微量酶反应于分光光度计在波长为570 nm测定比色值以检测细胞抑制率。 统计学方法：各组间比色值用Student t检验。 二、结果 “气腹’后4个组细胞存活百分比差异无显著性(P＞0.05)，其中CO2组为(92.3±1.2)%，He组为(89.6±2.5)%， N2O组为(90.5±±3.1)%，对照组为(90.7±3. 1)%。在观察的72 h中，肿瘤细胞均生长。气腹后测定各组pH值结果: CO2组为6.6, He组为9.8, N2O为8.2, 对照组为7.3。以MTT法对细胞进行抑制率测定(图1), CO 2组在“气腹”后第24小时与He组、N2O组和对照组相比， MTT值(对照孔-用药孔 /对照孔×100)上升，差异有非常显著性(P＜0.01)； He组较 N2O组和空白组明显下降(P＜0.05)， N2O和对照组之间MTT值差异无显著性(P＞0.05)。第48小时CO2组与其他3个组相比，MTT值亦上升，其中较 H e组差异有非常显著性(P＜0.01)，较N2O和对照组差异有显著性(P＜0.05)，He组较N2O和对照组下降，差异有显著性(P＜0.05)，N2O和对照组之间差异无显著性(P＞0.05)。第72小时，各组MTT值差异均无显著性(P＞0.05)。
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恒河猴脑内人胚神经细胞移植的实验研究
临床脑移植研究常无法直接观察到移植后的组织学变化。我们应用未发育成熟的人胚脑皮质组织制备成细胞悬液移植于恒河猴脑组织内，尽可能接近地反映人脑内移植的组织形态变化，探讨脑移植细胞存活、生长发育的适宜条件及其相关机理。 一、材料和方法 恒河猴3只，雌性，年龄7～13岁（平均10.3岁），体重平均5.8 kg（福建医科大学实验动物中心提供）。12～16周胎龄的水囊引产胚胎，娩出后30 min内取大脑额、顶、颞叶皮质组织，制备成细胞悬液立即备用移植。按文献［1］方法进行移植，移植术前及术后分别进行CT和同位素CT(ECT)扫描。于术后4周、8周、12周处死恒河猴，移植区脑组织进行组织学检查。免疫组化特异性神经元烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及尼氏(Nissl)染色等用以鉴别神经元及星形胶质细胞。 二、结果 移植后4周，在移植部位可见移植细胞存活、生长，细胞呈簇状或片状分布,细胞排列没有明显的层次结构,有别于正常的脑组织排列结构，Nissl染色可见胞浆内有较多的尼氏小体，免疫组化NSE染色显示神经细胞簇状或散在沿移植组织和宿主脑组织交界处分布，细胞形态较成熟，核圆、有核仁、胞体大，呈梭形或多边形，胞体有长短不一的突起形成，相互间及与周围组织间可见互相连接。移植细胞形成小灶性组织，与宿主脑组织相融合，其间有一定的界限，但无明显的瘢痕形成。移植组织中可见有丰富的新生毛细血管形成，术前与术后受体颅脑CT检查比较未发现密度异常的影像改变；ECT扫描可见移植部位局部密度增加，提示该部位组织血供增加。免疫组化GFAP染色显示星形胶质细胞呈弥漫性分布，胞体较大，饱满，形成较为粗大的纤维突起，向周围组织伸展，并互相连接构成网状结构。新生毛细血管壁上可见星形胶质细胞终末纤维包绕、附着，部分胶质纤维酸性蛋白阳性的纤维构成毛细血管壁的结构成分。8周时，移植部位仅见少量神经细胞存活，毛细血管数量减少。星形胶质细胞生长较为活跃，具丰富的纤维突起形成，并在移植组织和宿主脑组织交界处形成纤维胶质带。12周，移植部位未见神经细胞继续生长，毛细血管和胶质细胞数量显著减少， 移植部位多为胶质纤维修复取代。
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内质网应激介导的细胞自噬与凋亡研究进展
内质网(ER)是哺乳动物中一种重要的细胞器,是细胞内蛋白质合成、修饰、折叠的场所,是储存并调节Ca2+的场所[1].由于缺氧、营养缺乏、氧化应激等原因引起的错误折叠与未折叠蛋白在ER腔内聚集以及Ca2+平衡紊乱的状态,称为内质网应激(ERS).为缓解ERS而引起的一系列后续反应称为未折叠蛋白反应(UPR).轻度ERS时,一方面,ER通过激活UPR[2]以保护细胞免受损伤,促使细胞存活;另一方面,激活的UPR可启动自噬,清除那些超出蛋白酶体清除能力的错误折叠蛋白,以恢复ER稳态,促使细胞存活[3].
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组织工程修复下颌骨缺损的研究进展
组织工程学是一门应用工程学和生命科学的原理,以生物材料为载体结合被分离的细胞,并能在宿主体内降解及释放细胞,形成新的有功能组织的科学.其基本方法是将活体内取得的组织用机械或酶消化法分散成单细胞悬液,然后在模拟体内环境的体外条件进行孵育培养,使细胞存活、生长和扩散.然后将在体外培养的具有一定浓度的细胞种植到具有一定空间结构的三维支架材料上,进一步培养,通过细胞间的相互粘附、生长、繁殖、分泌细胞外基质,形成具有一定结构和功能的组织和器官[1,2].1994年Vacanti CA等将骨膜来源的成骨细胞培养后种植于PGA上,孵育7～10d后,上清液中有骨钙存在[3].其后有很多学者应用骨膜来源的成骨细胞或骨髓来源的骨髓基质细胞(MSCs)作为种子细胞在各种类型的支架上进行组织工程学的研究.无论是在种子细胞,还是在细胞外基质(ECM)既支架材料上,都取得巨大进步[4～6].
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Homer1a在机械性损伤神经元存活和凋亡中的作用及机制
目的 探究Homer1a对机械性损伤神经元的保护作用及具体作用机制.方法 分离并培养大鼠脑皮层神经细胞,随机分为:对照组、模型组、空载体组1(NC-V1)、Exp-Homer1a组、空载体组2(NC-V2)、sh-Hormer1a-2组、模型+SCH组和sh-Hormer1a-2+SCH组.构建机械性损伤细胞模型,分别感染Homer1a过表达或干扰慢病毒载体(Exp-Homer1a或sh-Hormer1a),并用细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)抑制剂SCH772984(SCH)处理细胞.采用MTT法检测各组神经元的存活情况,使用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)测试盒测定细胞上清LDH含量,Western blot检测Hormer1a、cleaved-Caspase-3、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 与对照组比较,机械性损伤神经元存活率显著降低,LDH释放水平和凋亡率增加,且Homer1a mRNA和蛋白表达水平显著升高,cleaved-Caspase-3和p-ERK1/2表达增加(均P<0.05);与模型组比较,上调Ho-mer1a可促进机械性损伤神经元存活,降低LDH释放量和细胞凋亡率,抑制cleaved-Caspase-3和p-ERK1/2表达(均P<0.05);与sh-Homer1a-2组比较,sh-Homer1a-2+SCH组细胞存活率明显升高,凋亡率显著下降(均P<0.05).结论Homer1a可能通过抑制ERK1/2信号通路的活化促进机械性损伤神经元的存活,抑制细胞凋亡.
