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阿尔茨海默病人皮肤基底细胞α-微管蛋白研究
目的探讨阿尔茨海默病患者皮肤基底细胞内微管蛋白的数量变化作为早期诊断生物学指标的意义。方法使用免疫组化LSAB法对阿尔茨海默病和正常健康老年人皮肤基底细胞α-微管蛋白进行检测，用图像分析仪进行定性与定量分析。结果阿尔茨海默病组的IOD=261.43、AOD=1.89，分别非常显著地高于正常老年组的IOD=139.70和AOD=1.00；P值均小于0.01。结论本研究提示阿尔茨海默病患者基底细胞微管蛋白的定性与定量分析，有可能为阿尔茨海默病早期诊断提供一种非神经系统的生物学诊断指标。
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多西他赛临床分析与评价
多西他赛(Docetaxel,泰索帝)是一种新型抗肿瘤药物,属于紫杉类化合物,为白色或近似白色粉状物,其作用机制是加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用,导致形成稳定的非功能性微管束,从而破坏肿瘤细胞的有丝分裂.
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肿瘤内科治疗的进展
肿瘤内科治疗的进展近几年来由于作用机制新颖的几种抗癌药物进入临床,重要的是抑制微管蛋白解聚的紫杉类和拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱衍生物.同时,由于多药耐药基因的发现、生物和基因治疗在临床上取得一定成功,使得肿瘤内科治疗更为丰富多彩,成为学术界活跃的一个研究领域.而更重要的是,人们对影响疗效的内在因素--肿瘤细胞免疫和抑癌基因等的认识也愈来愈深入;辅助治疗如造血因子的输注和解决化疗引起的严重呕吐的成功;对化疗剂量强度的掌握,化疗后病人骨髓功能和内在抗病能力的恢复等方面也都积累了一定经验,使得治疗更为合理.进入新世纪以来,根据肿瘤的基因、受体和激酶而发展的靶向治疗使得治疗水平大幅度提高而且更为个体化.
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阿尔茨海默病与血管性痴呆患者血浆β-微管蛋白和APP的变化
目的: 对阿尔茨海默病(Alzheimers disease, AD)与血管性痴呆(vascular dementia, VD)血浆β-微管蛋白与淀粉样蛋白前体(APP)进行定量分析,分析这些指标的变化是否可以为临床诊断阿尔茨海默病提供生物学方面的帮助.方法:用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定11例AD、11例VD和8个正常老年人血浆β-微管蛋白和APP的水平.结果:(1)血浆APP含量AD患者(84.36±41.34)的高于VD患者(56.34±18.68)和正常人(43.25±27.67), P<0.05;(2)血浆中β-微管蛋白含量AD患者(105.91±41.25)高于VD患者(64.36±28.27)和正常人(52.25±11.11), P<0.05;(3)VD患者和正常人之间APP和β-微管蛋白比较无明显差异(P>0.05).(4)Pearson相关分析显示:血浆中APP和β-微管蛋白含量可能存在一定的相关性,相关系数为0.451(P<0.05).结论:AD患者血浆APP和β-微管蛋白含量明显高于正常人和VD患者,对AD患者血浆APP和β-微管蛋白含量的测定对AD的诊断可能具有一定的意义.
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Alzheimer's型老年性痴呆与tau蛋白异常修饰
tau蛋白是一种低分子量含磷糖蛋白,分布在中枢神经系统内,与神经轴突内的微管结合,诱导与促进微管蛋白聚合成微管,防止微管解聚、维持微管功能的稳定.当tau蛋白发生高度磷酸化、异常糖基化、异常糖化以及泛素蛋白化时,tau蛋白失去对稳定微管的束缚,神经纤维退化,功能丧失,产生Alzheimers型老年性痴呆.
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Combretastatin A4 Phosphate对人晶状体上皮细胞增殖及迁移的影响
[目的]研究Combretastatin A4 Phosphate (CA4P)对晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖及迁移影响,初步探讨其抑制细胞增殖的机制.[方法]以晶状体上皮细胞系SRA01/04为实验对象,设空白对照组及CA4P组,分别以PBS或1 μmol/L CA4P处理15 min,于0、24、48、72 h后进行检测.通过WST-1法检测细胞增殖能力；划痕试验检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞死亡方式；PI染色法检测细胞周期；免疫荧光法检测细胞骨架蛋白(α-微管蛋白、F-肌动蛋白)及细胞形态.[结果]CA4P对细胞增殖的抑制作用呈时间依赖性,24、48、72 h细胞相对增殖活性分别为73％、40％、34％(P＜0.05).空白对照组细胞划痕面见大量细胞覆盖；CA4P组划痕面无细胞覆盖,细胞呈细小圆形,可见部分细胞脱落漂浮.CA4P组24、48、72 h细胞凋亡率为19.7％、43.6％、72.2％,明显高于对照组(1.7％、2.2％、3.6％；P＜0.05).CA4P组各时间点G2/M期分布分别为30.3％、55.4％、70.8％,明显高于对照组(4.4％,9.0％,7.9％；P＜0.05).CA4P组细胞内微管纤维丝状结构消失,可见多核、巨核等有丝分裂障碍表现,但F-肌动蛋白未见明显变化.[结论]1 μmol/L CA4P短时间作用于SRA01/04晶状体上皮细胞可明显抑制其增殖和迁移,且作用呈时间依赖性.CA4P抑制细胞增殖可能机制是通过解聚微管蛋白,诱导有丝分裂停止而诱发SRA01/04细胞凋亡.
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小鼠体外发育与体内发育成熟卵子胞浆成熟度和细胞骨架比较
[目的]体外培养小鼠窦前卵泡得到成熟卵子,比较其与体内发育成熟卵子直径、谷胱甘肽含量、皮质颗粒分布以及纺锤体结构的差异,评估胞浆成熟度对卵子发育潜能的影响.[方法]选择出生10 d小鼠,分离窦前卵泡,培养后得到326个M Ⅱ期卵子作为体外发育组.8～10周雌鼠经孕马血清和绒毛膜促性腺激素注射得到244个M Ⅱ卵子作为体内发育组.酶法检测卵子谷胱甘肽含量,免疫荧光染色,共聚焦显微镜成像显示纺锤体形态和皮质颗粒分布.[结果]体外发育成熟卵子直径(69.6±5.7)μm,明显小于体内发育成熟卵子直径(84.2±3.0)μm;体外发育成熟卵子谷胱甘肽含量(4.3±0.7)pmol明显低于体内发育成熟卵子(6.1±1.0)pmol;50个体外发育成熟卵子中18个(36%)皮质颗粒周边分布,40个体内发育成熟卵子中36个(90%)皮质颗粒周边分布(P＜0.05);14个(28%)体外发育卵子出现无皮质颗粒区,34个(85%)体内发育成熟卵子出现无皮质颗粒区(P＜0.05);120个体外发育成熟卵子中46个(38.3%)显示正常桶状纺锤体,84个体内发育成熟卵子中80个(95.2%)显示正常桶状纺锤体(P＜0.05).[结论]体外发育成熟卵子胞浆成熟度没有达到体内发育成熟卵子水平.
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盖诺与顺铂联合治疗晚期非小细胞肺癌32例
异长春花硷是一个半合成的长春花生物硷,是长春硷的第三代衍生物,在国外应用于临床已有10年历史.进口商品名为"诺维本”,1998年由中国药科大学和连云港豪森制药有限公司联合研制开发了"国产诺维本”重酒石酸长春瑞宾注射液,商品名"盖诺”.它通过阻断微管蛋白形成微管和诱导微管的解聚,使分裂停止于中期而发挥抑制肿瘤细胞分裂作用.自1999年3月～2000年6月我们作为一种治疗方案[3]采用盖诺与顺铂治疗非小细胞肺癌32例,现将结果报告如下.
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诺维本的应用及护理
诺维本属长春花生物碱类抗肿瘤药物,直接作用于管蛋白/微管蛋白的动态平衡,可阻断G2与M期细胞的有丝分裂,从而导致进入间期或下一周期细胞的死亡,在应用过程应严密观察和护理.
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紫杉醇联合铂系配合物抗肿瘤作用的研究进展
铂系药物作为一类传统抗肿瘤药物,其有较强的广谱抗肿瘤作用,尤其是顺铂,作为人类医学史上第1个应用于临床的抗肿瘤药物至今仍然被广泛应用于化疗,它主要是通过破坏肿瘤细胞的DNA结构来阻断肿瘤细胞的复制.但其毒副作用也是巨大的,主要表现为肾功能损害,由于药物容易在肾脏富集,易导致肾小管上皮细胞急性坏死、变性,并引发肾间质水肿和肾小管扩张等,出现血尿、血清肌酐升高及清除率降低.同时还伴有严重的胃肠道反应,如食欲减退、恶心、呕吐、腹泻等,长期大剂量用药还会出现明显的耐药性.近年来研究发现,紫杉醇与铂系药物联合用于治疗可以提高疗效并减轻其毒副作用[1].
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鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系增殖的抑制作用研究
目的:研究鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系(KB)增殖的抑制作用.方法:以KB细胞为研究对象,采用MTT法检测细胞毒作用；荧光染色法观察细胞形态学变化；RT-PCR法检测半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA的表达；激光共聚焦显微镜观察药物对细胞微管结构的影响.结果:4 μmol·L-1YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞；荧光显微镜观察到4 μmol·L-1YB-1EPN干预24 h后KB细胞出现凋亡小体；RT-PCR法检测到在1、2、4 μmol·L-1 YB-1EPN干预下KB细胞促凋亡基因Caspase-3表达上调；激光共聚焦显微镜观察到在2、4μmol·L-1YB-1EPN干预24 h后KB细胞微管结构被破坏.结论:YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞株,作用机制可能与促凋亡基因的表达上调和抑制微管蛋白聚合有关.
关键词： 鬼臼毒素衍生物 微管蛋白 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 增殖 抑制 -
宫颈永生化细胞和癌细胞的α、β、γ-微管蛋白比较分析
目的:探讨中心体α、β、γ-微管蛋白在人鳞状上皮宫颈永生化细胞(H8细胞株)和癌细胞(Caski细胞株)的表达差异及其在宫颈癌发生发展过程中的作用.方法:采用免疫细胞化学SP法检测中心体α、β-微管蛋白在人宫颈永生化细胞和癌细胞中的表达差异,提取两株细胞的骨架蛋白并用Western blotting对α、β、γ-微管蛋白的表达水平进行半定量分析.结果:Caski细胞中α、β-微管蛋白表达水平高于H8细胞,差异均有统计学意义(P<0.05).半定量分析α、β、γ-微管蛋白,Caski细胞中的表达量高于H8细胞.结论:中心体异常可能是宫颈癌细胞恶性表型的特征之一,以中心体微管蛋白为治疗靶点的研究有着可期待的前景.
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ApoE亚型蛋白对神经元轴突生长的影响
目的 观察不同亚型ApoE蛋白(apolipoprotein E,ApoE)对神经元轴突生长的影响,探讨其可能机制.方法 取新生C57野生鼠和APOE基因敲除鼠大脑皮质,进行神经元原代培养;在培养第1天,在APOE基因敲除鼠神经元培养基中加入重组人类ApoE2、3、4蛋白,将所培养细胞分为ApoE(-)组、ApoE2组、ApoE3组、ApoE4组和野生组5组.倒置相差显微镜观察神经元生长情况,测量其轴突长度和突起数量.免疫荧光对神经元轴突进行染色,并对神经元轴突荧光强度进行测定;Western blot检测不同亚型ApoE对细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,cdc42)表达的影响.结果 培养第1、3、5天,野生组、ApoE2组、ApoE3组神经元平均轴突长度较ApoE(-)组及ApoE4组长(P＜0.05);培养第5天,ApoE(-)组、ApoF4组神经元突起数量分别为(1.80±0.45)个和(1.90±0.84)个,较野生组(3.80±0.84)个、ApoE2组(3.60±0.55)个、ApoE3组(3.40±1.14)个少(P＜0.05);野生组、ApoE2组、ApoE3组神经元轴突荧光强度分别为(54.10±7.32)、(52.40±6.33)、(50.50±8.21),较ApoE(-)组(37.20±9.30)和ApoF4组(39.00±8.32)强(P＜0.05);野生组、ApoE2组、ApoE3组cdc42蛋白表达高于ApoE(-)组、ApoE4组(P＜0.05).而在所有实验结果中野生组、ApoE2组与ApoE3组组间以及ApoE(-)组与ApoF4组组间比较差异均无统计学意义(JP＞0.05).结论 不同亚型ApoE蛋白对神经元轴突生长的影响不同,对tubulinⅢ及cdc42表达的影响也各不相同,后者可能是其影响神经元轴突生长的机制之一.
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Taxol治疗明基恶性肿瘤32例临床分析
Taxol是一种新型抗肿瘤药,其作用于微管蛋白,抑制微管解聚,使形成稳定的微管,从而妨碍正常的有丝分裂,引起细胞凋亡,晚期恶性肿瘤的治疗是临床上一大难点,寻找有效低毒抗癌药物是治疗的关键,我们以1999年11月～2002年11月采用Taxol单药或联合用药治疗晚期恶性肿瘤32例,现报道如下.
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新靶点抗肿瘤药物研究进展
近年来,随着肿瘤分子生物学及相关学科的飞速发展,人们逐渐认识到细胞癌变的本质可能是细胞信号转导通路的失调导致的细胞无限增殖,抗肿瘤药物研发理念发生了重大转变,从传统细胞毒类药物(主要作用于DNA,RNA和微管蛋白)转移到针对细胞内信号转导通路的新型抗肿瘤药物[1].与传统细胞毒药物选择性差、毒副作用强、易产生耐药性等特点不同,靶向细胞内信号转导通路抗肿瘤药物针对于正常细胞和肿瘤细胞之间的差异,能够达到高选择性、低毒性的治疗效果[2].
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土槿皮乙酸体外对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及机制
目的:研究土槿皮乙酸(PAB)对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)PC-3细胞系增殖的抑制作用及其可能机制.方法:体外培养AIPC PC-3细胞,以不同浓度PAB进行处理一段时间后.再用MTT法测定PAB对PC-3细胞的生长抑制情况;用台盼蓝染色计数活细胞,用吉姆萨染色法检测凋亡细胞,进一步用Hoechst33342染色进行凋亡确认;用PI染色法检测PAB对PC-3细胞周期的影响;用考马斯亮兰G-250染色法检测PAB对细胞质蛋白的影响;用荧光双染法检测细胞微管蛋白表达.结果:PAB明显抑制体外培养的PC-3细胞生长.其抑制率在一定浓度和时间范围内呈依赖关系,作用36h的IC50值为6.20μM.PAB可以通过诱导PC-3细胞凋亡而抑制期增殖,凋亡细胞的数量随PAB浓度的增加而增加.PAB能明显增加PC-3细胞时G2期细胞的比例,G1期和S期细胞数减少,细胞周期的变化与PAB浓度相关.PAB可以减少PC-3细胞胞质内蛋白含量,抑制微管蛋白形成.结论:PAB可以抑制AIPC PC-3细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期(M晚期),呈浓度依赖性;机制可能与PAB降低胞质蛋白量,抑制微管蛋白形成有关.
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川陈皮素对非小细胞肺癌NCI-H460细胞中tubulin、Raf-1及Bcl-2表达的影响
目的:研究川陈皮素对非小细胞肺癌NCI-H460细胞tubulin、Raf-1、Bcl-2表达的影响.方法:MTT法检测川陈皮素对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用PI-Hoechst荧光双染法观察细胞凋亡形态;Western blot检测川陈皮素对NCI-H460细胞tubulin、Raf-1及Bcl-2蛋白表达的影响;体外微管蛋白聚合-解聚平衡体系研究川陈皮素对微管蛋白聚合的影响.结果:川陈皮素体外作用NCI-H460细胞24、48、72h后的IC50分别为23.5、11.3、3.81μmol/L;荧光双染色法显示经20μmol/L川陈皮素作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;40μmol/L川陈皮素作用细胞3、6、12、24h后,未聚合的tubulin及Raf-1表达逐渐增加,Bcl-2表达呈下降趋势;10μmol/L川陈皮素在体外能破坏微管蛋白的动态平衡体系,抑制微管蛋白的聚合.结论:川陈皮素能抑制细胞中微管蛋白的聚合从而影响Raf-1及Bcl-2这一信号途径.这可能是其在体外抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞的生长且诱导凋亡机制.
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诺维本的临床应用
诺维本(Navelbine,5-去甲-脱水长春碱)是一种新型长春花生物碱类抗肿瘤药,主要作用于分裂期微管蛋白,阻断G2期与M期细胞的有丝分裂.其代谢符合三室模型,终末期平均半衰期40h.临床主要用于非小细胞肺癌.转移性乳腺癌的化疗,既可单用,也可联合使用其他化疗药.因此药对局部组织有严重刺激
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肺癌紫杉醇耐药与微管蛋白
紫杉醇(taxol,paclitaxel)是红豆杉树皮的提取物,自1987年作为一种新型的化疗药物进入临床,已显示出良好的发展前景.大量研究证明,其对肺癌及其他肿瘤具有切实有效的治疗作用.
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国产长春瑞宾联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌47例临床观察
去甲长春花碱是一种新的半合成长春碱类化合物,是细胞周期特异性药物,通过阻断微管蛋白形成微管和诱导微管的解聚,使细胞分裂停止于有丝分裂的中期而发挥抗肿瘤作用,目前为治疗非小细胞肺癌的有效药物之一[1].我院自1997年6月至2001年6月应用连云港豪森制药有限公司生产的长春瑞宾(vinorelbine,VNR)联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌47例,现报告如下.
