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乳腺癌β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗耐药的相关研究
目的 探讨乳腺癌β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗耐药发生的关系.方法 对42例乳腺癌患者进行2～6个周期的含紫杉类药物方案化疗,并在化疗前及化疗的第2、4、6周期末检测β3-微管蛋白的表达,分析化疗疗效与β3-微管蛋白表达的相关关系以及化疗过程中β3-微管蛋白表达的改变.结果 化疗前β3-微管蛋白的平均表达率为0.456±0.320,化疗总体有效率为57.1％,tubb3表达与紫杉类药物化疗有效率呈负相关.在化疗过程中,β3-微管蛋白表达呈上升趋势,并在第4疗程达到了统计学的差异.结论 β3-微管蛋白是良好的紫杉类化疗敏感性预测因子,并且可能是紫杉类继发耐药的重要原因,在化疗前及化疗过程中检测其表达情况有助于化疗方案的选择.
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局部晚期宫颈癌中β-微管蛋白Ⅲ的表达及意义
目的 探讨β-微管蛋白Ⅲ在局部晚期宫颈癌(LACC)组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测47例LACC组织中β-微管蛋白Ⅲ的表达情况,分析β-微管蛋白Ⅲ的表达与紫杉醇新辅助化疗(NACT)的疗效及临床病理参数的关系.结果 47例LACC中,NACT有效率为72.3％ (34/47).β-微管蛋白Ⅲ阳性表达率为72.3％(34/47),其中表达(+)者占40.4％(19/47),(++)者占12.8％(6/47),(+++)者占19.1％(9/47).β-微管蛋白Ⅲ高表达患者NACT有效率为46.7％(7/15),低表达患者为84.4％(27/32),两者比较差异有统计学意义(P=0.007).β-微管蛋白Ⅲ在LACC组织的表达与病理分级呈显著性相关(P=0.021),与病理类型、临床分期及淋巴结转移无显著性相关(P=0.822、0.336、0.839).结论 紫杉醇联合铂类行NACT对LACC有效,LACC组织中β-微管蛋白Ⅲ异常表达与紫杉醇耐药有关,与宫颈癌的生物学行为有关,可能是宫颈癌预后判断的一项生物学指标.
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LATS2基因在肿瘤研究中的新进展
1 LATS2的概述1.1 LATS2基因编码的蛋白质及生物学作用 LATS2基因属于拉特抑癌家族,编码一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.该蛋白定位于中心体,作用于细胞各个时期.参与形成aurora-A和ajuba蛋白,负责积累γ-微管蛋白和纺锤体的形成,在中心体有丝分裂环节中起到重要作用[1].LATS2还作为一个负调控因子参与p53功能调控,并可能在与p53功能的一个正反馈循环中起到重要作用[2].此外,它还参与雄激素应答基因表达的抑制[3].
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微管蛋白破坏对软骨细胞代谢功能的影响
目的 探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响.方法 2月龄新西兰白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4%链酶菌蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞培养3 d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组继续用原代培养基(90%DMEM/F12±10%胎牛血清)培养,实验组在原代培养基中加入微管蛋白破坏剂秋水仙素(终浓度为0.1μmol/L).加药后第1、2天用Annexin-Ⅴ/PI流式细胞术检测软骨细胞早期凋亡率,加药后第6天细胞爬片HE染色观察细胞形态的改变,加药后第3、6、9天取细胞用实时定量荧光反转录聚合酶链式反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖以及MMP-13 mRNA的表达量,同时在加药后第3、6、9天取细胞上清液,用ELISA法和阿尔新蓝法检测各组上清液中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量.结果 实验组第2天软骨细胞早期凋亡率明显高于对照组(P＜0.05);与对照组比较,实验组第6天软骨细胞呈不规则多角形,胞核深染且分裂象增多,细胞基质减少,实验组第3、6、9天软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达量较对照组均明显降低(P＜0.05),第6、9天实验组软骨细胞MMP-13mRNA表达较对照组明显增高(P＜0.01),同时实验组第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 微管蛋白破坏可致软骨细胞早期凋亡,导致体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖等基质成分合成减少,炎性因子MMP-13的表达增多.
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中心体α、γ-微管蛋白在乳腺癌前病变及乳腺癌中的表达及其意义初探
目的探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用.方法采用免疫组织化学S-P法检测乳腺导管上皮不典型增生、乳腺导管内癌和浸润性导管癌各40例中中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达水平,30例正常乳腺组织作为对照组,并用Western 印迹进行验证.所得数据经统计学分析并结合随访情况进行评价.结果不同样本组α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达水平不同(P=0.000),随正常上皮组织到出现不典型增生至进展为原位癌和浸润性癌的发展变化,α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达量呈增高趋势,以浸润性癌为高(40例中分别有14例、11例表达为+++),各组间差异均有统计学意义(P=0.001).比较同例和同组α、γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义(P>0.05).癌前病变、导管内癌、浸润性导管癌组α、γ-微管蛋白的表达水平与预后具有相关性.结论中心体异常为乳腺癌细胞恶性表型的明显特征之一,并可能为乳腺癌形成过程中的早期事件.α、γ-微管蛋白的表达情况可为乳腺癌发生机制探讨、高危病例筛选及估测预后提供一种新的途径.
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曲古抑菌素A和紫杉醇对子宫内膜癌细胞凋亡和微管稳定性的影响
目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)和紫杉醇(PTX)体外对人子宫内膜癌细胞凋亡和微管稳定性的影响及其机制.方法 将浆液性乳头状子宫内膜癌Ark2细胞、低分化子宫内膜样腺癌KLE和AN3细胞各分为TSA、PTX单独作用组(TSA组、PTX组)和联合作用组(TSA+PTX组),并设空白对照组,以锥虫蓝拒染法观察药物对细胞增殖的影响,膜联蛋白V、Hoechst染色法检测细胞凋亡率,流式细胞仪测定线粒体膜电位(MMP),蛋白质印迹法检测半胱天冬酶9(caspase-9)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和乙酰化微管蛋白的表达.结果 TSA、PTX对Ark2、KLE和AN3细胞均有抑制作用,二药联用后抑制作用更强.药物作用后4 d,TSA、PTX、TSA+PTX和对照组Ark2细胞凋亡率膜联蛋白V染色法检测分别为4.25%±0.25%、12.12%±0.62%、16.56%±0.74%和46.78%±2.68%,Hoechst染色法检测分别为3.39%±0.12%、6.00%±0.25%、10.05%±0.53%和22.30%±1.25%,TSA+PIX组明显高于其他各组(均P＜0.05).药物作用后24 h,Ark2和KLE细胞的TSA+PTX组caspase-9、PARP的裂解明显增加;Ark7.和AN3细胞的TSA+PTX组MMP消失率(16.80%±0.92%、11.28%±0.78%)明显高于TSA组(4.96%±0.47%、6.46%±0.62%)和PTX组(5.34%±0.45%、5.61%±0.56%)(均P＜0.05);Ark2和KLE细胞的TSA+FIX组乙酰化微管蛋白表达明显增加.结论 TSA和PTX可通过促进子宫内膜癌细胞中乙酰化微管蛋白表达和增强微管稳定性而产生协同抗肿瘤作用.
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蛋白质乙酰化与精子DNA稳定性和精子活力
表观遗传学参与调节精子发生和精子形成，其中组蛋白及非组蛋白乙酰化对生精细胞染色质结构重建以及精子活力起关键作用。环磷酸腺苷（cAMP）反应元件连接蛋白（CREB）的结合蛋白（CREB-binding protein，CBP）和p300是两个乙酰化酶，能使核心组蛋白发生乙酰化，其乙酰化作用能被乙酰化酶抑制剂（INHAT）所抑制。睾丸特异的布罗莫结构域（BRDT）蛋白为保守的核蛋白，能够识别乙酰化和非乙酰化的组蛋白。在精子发生早期，BRDT调节基因转录；在精子形成阶段，BRDT识别高度乙酰化组蛋白，接着组蛋白被鱼精蛋白替代，从而使精子形成致密的染色质。非组蛋白α微管蛋白（α-Tubulin）去乙酰化则降低精子活力，在少弱精患者精子中乙酰化α微管蛋白（acetylatedα-tubulin，Ac-α-Tu）明显下降。
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膳食锌对小鼠中枢神经系统微管蛋白表达的影响
目的通过观察中枢神经系统(CNS)中a-微管蛋白(a-Tub)及β-微管蛋白(β-Tub)的表达,探讨膳食锌调节CNS微管聚合作用的可能机制.方法80只刚怀孕ICR母鼠随机分为严重缺锌组、轻度缺锌组、适锌组、高锌组和高锌对喂组五组,在孕期和哺乳期分别饲喂含1、5、30、100和100mg/kg锌水平的实验饲料;断奶期(仔鼠20日龄)后各组均改喂普通饲料.取各实验组动物第10天胚胎(E10)头和身体、及第15天胚胎(E15)、出生第1天(P1)、第5天(P5)、第10天(P10)、第20天(P20)和第70天(P70,成年)大脑、小脑和肝组织,采用Westernblot技术检测其a-Tub和乒β-Tub表达情况.结果实验仔鼠从胚胎早期(E10)至发育成熟(P70)CNS中均有微管蛋白(Tub)表达,而肝组织中未见有Tub印迹出现;a-Tub和β-Tub在大脑和小脑的表达模式相似,即发育早期有上调趋势,达到表达高峰(P5～P10)后表达量逐步下调,a-Tub在P5达到表达高峰,而β-Tub在P10达到表达高峰;比较实验组各期Tub表达水平,依次为lmg/kg组<5mg/kg组<30mg/kg组<100mg/kg组,大脑和小脑a-Tub、β-Tub水平与膳食锌水平具有明显的依赖关系.结论发育期锌缺乏可抑制CNS中a-Tub和β-Tub表达,而补充锌可促进Tub表达;Tub表达量降低可能是锌缺乏引发微管聚合作用下降的一个重要机制.
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Ac-SDKP调节乙酰化微管蛋白α抑制矽肺肌成纤维细胞转化的研究
目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过对乙酰化微管蛋白α(Ac-Tub α)的调控,抑制矽肺肌成纤维细胞转化的作用及机制.方法 构建矽肺大鼠模型,分为对照组(4、8周)、矽肺模型组(4、8周)、Ac-SDKP抗纤维化治疗组和预防治疗组;原代肺成纤维细胞分为对照组、血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导组、Ac-SDKP预处理组、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)阻滞剂(缬沙坦)预处理组、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)6选择性抑制剂(TCS HDAC6 20b)预处理组.免疫组化及免疫荧光染色法观察Ac-Tub α、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肺组织或细胞中的表达与定位.免疫印迹法检测肺组织或细胞中Ⅰ型胶原、α-SMA、Ac-Tubα、HDAC6蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示,矽肺模型组矽结节和间质纤维化区域Ac-Tubα表达缺如,α-SMA阳性表达.Ac-SDKP能够抑制Ⅰ型胶原、α-SMA、HDAC6蛋白的表达,其中抗纤维化治疗组与矽肺模型8周组比较下降至48.39％、52.63％和70.18％,预防治疗组与矽肺模型8周组比较下降至32.26％、64.91％和54.39％;在Ac-SDKP抗纤维化治疗组和预防治疗组Ac-Tub α蛋白表达为矽肺模型8周组的3.00和2.90倍,以上结果经方差分析差异均有统计学意义(P＜0.05).Ang Ⅱ诱导组Ac-Tubα表达减弱为对照组的44.44％.而AngⅡ诱导组的α-SMA、HDAC6和Ⅰ型胶原表达增多,分别是对照组的1.66、3.56和4.00倍(P＜0.05).予以Ac-SDKP、缬沙坦或TCSHDAC6 20b预处理,能明显抑制该变化.结论 Ac-SDKP抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞转化和胶原沉积,发挥抗矽肺纤维化的作用,可能与下调HDAC6和促进Ac-Tub α的表达有关.
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三甲基氯化锡诱导的非洲绿猴肾细胞蛋白质表达谱改变
目的 分析三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT-Cl)诱导的非洲绿猴肾细胞(vero细胞)和正常vero细胞之间差异表达蛋白质,以寻找相关的标志物,探讨TMT-Cl所致肾损伤的分子机制.方法 通过双向凝胶电泳和液相色谱-电喷雾线性离子阱质谱技术比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞之间蛋白质表达谱的差异,蛋白免疫印迹技术分析其中的2个差异蛋白Annexin A1和α6-Tubulin的表达以验证双向电泳的结果,反转录荧光定量聚合酶链式反应技术进一步分析Annexin AI和α6-Tubulin在mRNA水平的表达.结果 比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞蛋白质表达谱,共获得15个差异蛋白点,9个通过质谱分析得到鉴定,3个上调,6个下调.与对照组比较,各TMT-Cl染毒组α6-Tubulin蛋白质和mRNA表达水平均下调,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,各染毒剂量组Annexin A1蛋白表达水平均上调,25和50 μmol/L组mRNA表达水平下调,100 μmol/L组的mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 双向凝胶电泳结合质谱分析筛选到的9个差异表达蛋白与TMT-Cl所致肾细胞毒性密切相关,可作为早期诊断、治疗及疗效评价的候选生物标志物.
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甲胺磷对鸡坐骨神经中微管和微丝蛋白水平的影响
目的研究甲胺磷诱发迟发性神经病动物的坐骨神经中微管蛋白和微丝中β-肌动蛋白水平随时间变化的趋势.方法母鸡以30 mg/kg甲胺磷连续15 d经皮下注射染毒,出现迟发性神经病症状后的第2、10和23天,分别取其坐骨神经匀浆,用Western blotting法检测鸡坐骨神经中α-微管蛋白、β-微管蛋白和β-肌动蛋白的水平.结果鸡坐骨神经上清液中α-微管蛋白水平随时间延长逐渐下降,出现迟发性神经病症状后的第2、10和23天分别降低了6%、15%和25%,沉淀中变化不明显;β-微管蛋白水平在各时间点均降低:在第2、10和23天,沉淀中的水平分别下降了27%、6%和19%,上清液则分别降低了1%、21%和22%;沉淀中β-肌动蛋白水平升高:第2、10和23天分别升高了24%、48%和17%;上清液中β-肌动蛋白水平的变化不明显.结论甲胺磷可导致母鸡坐骨神经α-微管蛋白、β-微管蛋白和β-肌动蛋白改变,可能是甲胺磷诱发动物迟发性神经病的机制之一.
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龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响
目的 研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响.方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化.结果 龙葵碱对MCF-7细胞的IC50为22.08 μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期；能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量.结论 龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长.
关键词： 龙葵碱 乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 微管蛋白 细胞增殖 -
作用于微管的天然产物
微管在有丝分裂中扮演着重要的角色,微管靶点药物是抗肿瘤药物的重要组成部分.很多天然产物能作用于微管的不同部位,其中包括紫杉醇类和长春花碱类.根据这些天然产物对微管蛋白聚合所起的促进作用或抑制作用,将其划分成两类.着重讨论它们的来源、作用机制和生物活性.
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去甲长春花碱联合顺铂治疗非小细胞肺癌近期疗效观察
去甲长春花碱(NAVELBINE,诺维本,NVB)是1974年由法国学者Potier等合成的长春碱类抗肿瘤新药.通过阻断微管蛋白形成和诱导微管的解聚,使有丝分裂停留在中期而发挥抑制肿瘤细胞分裂的作用.我们自1997年11月至1999年11月采用诺维本联合顺铂治疗小细胞肺癌( NSCLC)24例,现将结果报告如下.
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亚低温对体外液压冲击伤后神经细胞内游离钙及微管相关蛋白-2的影响
目的研究体外液压冲击伤后大鼠神经细胞内游离钙([Ca2+]i)及微管相关蛋白-2(micotubule-associated protein-2,MAP-2)水平的变化,并探讨亚低温对颅脑创伤后神经细胞内[Ca2+]i与MAP-2的影响及机制.方法经体外原代培养的神经细胞制备液压冲击伤模型,随机分为正常对照组、创伤组(7个亚组)和亚低温治疗组(4个亚组).亚低温治疗组于伤后30min、1 h、10 h和22h进行亚低温(32±0.5)℃治疗2 h,随后利用激光共聚焦显微镜测定体外液压冲击伤后神经细胞内[Ca2+]i及MAP-2水平的变化.结果于伤后30min内应用亚低温治疗可降低神经细胞内[Ca2+]i水平(P＜0.01),而于伤后1 h以上应用则无效;于伤后1 h内进行用亚低温治疗可明显减少MAP-2的丢失(P＜0.01),而伤后10h以上应用则无效.结论亚低温可降低颅脑创伤后神经细胞内[Ca2+]i水平及减少MAP-2丢失,但应用的有效时间窗不同,提示颅脑创伤后神经细胞内[Ca2+]i升高并不是MAP-2丢失的唯一原因.
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与微管作用的抗肿瘤天然产物的研究进展
自从紫杉醇广泛应用于临床治疗以来,与微管作用的抗肿瘤天然产物的发现、化学修饰和机制研究已经成为学术和临床研究的热点.介绍了与微管作用的抗肿瘤天然产物的研究情况,包括紫杉醇、埃博霉素、disco-dermolid、考布他汀、软海绵素、海兔毒素、那可丁等,简要探讨了目前存在的问题和未来的发展方向.
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2例艾克宁给药重度不当致局部皮肤坏死的教训
艾克宁,又名注射用重酒石酸长春瑞滨,是主要通过阻滞细胞有丝分裂过程中的微管蛋白的形成,使细胞分裂停止于有丝分裂中期,为细胞周期特异性药物.临床主要用于非小细胞性肺癌、转移性乳腺癌、晚期卵巢癌等,但其给药重度不当会引发局部皮肤坏死现象,报道如下.
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超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响
目的 探讨超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响.方法 6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞,每孔加入20μg质粒EGFP及10%微泡后行超声辐照,辐照方式为连续波,探头频率2 MHz,分别以不同照射时间分组:A组30 s,B组60 s,C组90 8,D组120 s,E组180 s(机械指数均为1.0);对B组再以不同机械指数分组:B1组0.75,B2组1.0,133组1.3,134组1.5,135组1.8(照射时间均为60 s).以激光共聚焦显微镜观察细胞膜荧光恢复评价细胞膜流动性,以免疫荧光法观察细胞微管蛋白、微丝蛋白荧光强度变化.结果 胞膜流动性荧光恢复指数分别为:A组0.173±0.013,B组0.250±0.037,C组0.364±0.022,D组0.381±0.019,E组0.395±0.009(B～E组与A组比较,均P＜0.01);B1组0.171±0.017,B2组0.255±0.026.B3组0.378±0.007,B4组0.382±0.009、B5组0.397±0.008(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01).微管蛋白荧光强度分别为:A组159.15±4.79,B组188.23±6.20,C组205.80±4.48,D组208.99±8.34,E组213.70±5.09(B～E组与A组比较,均P＜0.01),B1组176.84±3.10,B2组187.57±14.52,B3组206.41±11.66,B4组220.12±13.39,B5组221.16±12.78(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01);C、D、E组间两两比较及B3、B4、B5组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).不同辐照时间及MI时,微丝蛋白荧光强度差异无统计学意义.结论 超声介导微泡空化在一定能量模式下可引起细胞膜流动性及微管蛋白荧光改变,此效应可能是超声及微泡促基因转染机制之一.
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Stathmin蛋白——肿瘤治疗的新靶点
Stathmin是一种普遍存在的胞质磷蛋白,在细胞增殖、细胞分化的信号途径和激活中具有多种调节功能,对肿瘤细胞恶性表型的维持、转移、侵犯及分化等起重要作用,能够影响某些作用于微管的化疗药物的疗效.目前足肿瘤研究的热点,Stathmin有可能成为肿瘤新的治疗靶点.
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香烟烟雾致COPD模型大鼠气道纤毛结构变化的评价
目的 应用气道纤毛超微结构的综合评价方法,观察香烟烟雾暴露对COPD大鼠气道纤毛结构的影响.方法 Wister大鼠,随机分为对照组(5只)、香烟暴露组(5只),香烟暴露组通过45 d被动吸烟建立COPD大鼠模型,利用光镜观察肺组织病理学变化,电镜观察纤毛超微结构改变,免疫荧光标记技术观察纤毛超微结构中微管蛋白变化.结果 香烟暴露组大鼠的纤毛荧光强度为(53.46±13.28),低于对照组(120.00±26.86)(P＜0.05).香烟暴露组纤毛膜水疱数为(7.36±2.38)个高于对照组(O.66±1.21)个(P＜0.05).结论 被动吸烟导致COPD大鼠气道纤毛结构异常,表现为纤毛膜水疱数增加、纤毛荧光强度减低.
