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持续被动运动对兔膝关节损伤后侧副韧带内弹性蛋白表达的影响
目的：观察持续被动运动（ continuous passive motion，CPM）对兔膝关节损伤后侧副韧带内弹性蛋白的影响。方法选取15只新西兰雄性大白兔造膝关节软骨全层缺损模型，术后按运动方式不同，随机分成3组即制动组、自由活动组， CPM组。6周后提取韧带采用蛋白免疫印迹法（ western blotting）进行弹性蛋白的检测。结果制动组的膝关节出现不同程度的僵硬，功能出现障碍；三组弹性蛋白的表达量分别是制动组（0．84±0．25）、自由活动组（2．91±0．34）、CPM组（2．04±0．69）。自由活动组侧副韧带内弹性蛋白的表达高于制动组和CPM组，CPM组侧副韧带内弹性蛋白的表达高于制动组，差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论 CPM和自由活动均可有效防止关节损伤后导致的韧带挛缩及关节僵硬，而自由活动效果更好。
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NLRP3基因真核表达载体的构建和定位
目的:构建人NLRP3真核表达载体,并证实融合蛋白在人心肌细胞中定位.方法:以人胎脑cDNA文库为模版,PCR扩增NLRP3全长编码基因,亚克隆至p3×FLAG-cmvTM-10表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到人心肌细胞中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测.利用激光共聚焦扫描显微镜观察FLAG-NLRP3在HCM细胞内定位.结果:NLRP3全长基因序列克隆到了真核表达载体p3×FLAG-cmvTM-10中,酶切鉴定片段大小3 111 bp.Western blotting检测到了融合蛋白FLAG-NLRP3表达,分子量约为114 kD.FLAG-NLRP3在人心肌细胞中表达,定位于细胞浆内.结论:成功构建了FLAG-NLRP3全长基因真核表达载体,FLAG-NLRP3蛋白主要定位于心肌细胞浆内.
关键词： 质粒构建 NLRP3 蛋白印迹 激光共聚焦扫描显微镜 -
WT1在子宫内膜腺癌中的表达及其临床意义
目的：探讨Wilms肿瘤基因（WT1）在子宫内膜腺癌组织、子宫内膜不典型增生组织以及正常内膜组织中的蛋白和基因表达水平及其临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析WT1mRNA的相对表达量，应用蛋白印迹（Westernblot）法检测子宫内膜组织中WT1蛋白的表达。结果：WT1在子宫内膜腺癌组织中的基因和蛋白表达均明显高于子宫内膜不典型组织和正常内膜组织（均P＜0.01）；WT1mRNA与子宫内膜腺癌患者年龄、绝经情况、临床分期、淋巴结浸润情况、雌激素受体（ER）和体质量指数（BMI）无显著相关性，与病理分级、肌层浸润情况和孕激素受体（PR）相关（P＜0.05）；WT1蛋白的表达与患者年龄、绝经情况、临床分期、肌层浸润、ER、PR和BMI无显著相关性，与病理分级、淋巴结转移情况相关（P＜0.05）。结论：子宫内膜腺癌中存在WT1mRNA和蛋白表达水平上调，可能与子宫内膜腺癌的发生和进展有关。
关键词： Wilms肿瘤基因 子宫内膜腺癌 实时荧光定量聚合酶链式反应 蛋白印迹 -
窖蛋白-1在肺腺癌A549细胞凋亡中的作用及其分子机制
目的 探讨窖蛋白1(caveolin-1,Cav-1)在肺腺癌A549细胞凋亡中的作用及其分子机制.方法 体外培养A549细胞,100 nM星形孢菌素(staurosporine,STS)处理6、12和24h后,流式细胞术检测STS处理后细胞周期的改变和凋亡率,Western blot方法检测STS诱导细胞凋亡过程中Cav-1、caspase-3、PI3K蛋白表达的变化.结果 FACS检测显示100 nM STS作用后,出现G2/M阻滞和细胞凋亡,促凋亡作用于用药后6h出现,持续至24h,G2/M阻滞的作用在12h达到峰值,凋亡率在24h达到峰值.Western blot结果显示经100 nM STS处理A549细胞6、12和24h后,Cav-1蛋白含量逐渐增加,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),caspase-3蛋白显示32kDa和17kDa条带,caspase-3含量逐渐增加,与对照组相比,STS处理12h和24h后,差异有统计学意义(P＜0.01);PI3K含量逐渐下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).采用caspase-3的抑制剂能阻止STS诱导的细胞凋亡.结论 Cav-1在STS诱导的A549细胞凋亡中起正调控作用.
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胃腺癌组织中c-IAPl蛋白和mRNA的表达及临床
目的 探讨c-IAPl蛋白和mRNA在胃腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法、Western blot和qRT-PCR技术检测50例胃腺癌组织和40例癌旁正常胃黏膜组织中c-IAPl蛋白和mRNA的表达,分析其在胃腺癌发生、发展中的作用及与临床病理特征的关系.结果 c-IAPl蛋白和mRNA在胃腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P均<0.05).胃腺癌组织中c-IAPl蛋白和mRNA的表达与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度均相关(P＜0.05),与患者性别、年龄无关(P＜0.05).结论 c-IAPl在胃腺癌组织中表达升高,抑制了胃腺癌细胞的凋亡,促进了胃腺癌的发生、发展,有可能为胃腺癌的临床靶向治疗提供新的理论依据.
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无偿献血者HIV-1抗体蛋白印迹确认与核酸检测结果分析
目的 对酶联免疫检测HIV抗体呈反应性标本进行蛋白印迹(WB法)确认和TMA-化学发光法对照检测,以探讨其应用特点.方法 将本中心检验科ELISA法检测结果呈HIV抗体反应性的117份标本,重新进行ELISA法检测,结果为S/CO＞0.8的标本做蛋白印迹(WB法)确认试验.同时,对117份标本采用TMA-化学发光法检测核酸作为对照试验.血清学检测参加国家CDC及澳大利亚(CITIC)室间质评；核酸检测参加卫生部临检中心和澳大利亚(CITIC)室间质评.结果 ELISA初筛试验:117份标本中,S/CO＞1的为37份;0.8＜S/CO＜1的为11份,S/CO＜0.8的为69份；抗体确认试验:HIV抗体确认阳性7份,不确定4份,HIV抗体确认阴性106份；核酸检测试验:117份标本中11份检出HIV RNA阳性,106份标本为HIV RNA阴性.结论 ELISA方法检测HIV抗体存在一定的假阳性;HIV蛋白印迹确认试验存在一些不确定结果,对于只有gp160/120、P17、P24的抗体不确定标本,可以采用核酸检测方法辅助确认.
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化学发光法检测人类免疫缺陷病毒抗体高值阴性样本的分析
目的 分析化学发光法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)检测人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体高值阴性样本是否有潜在危险性.方法 用CLIA试剂在临床标本中筛选出HIV抗体0.3
关键词： 化学发光 酶联免疫吸附法 人类免疫缺陷病毒抗体 蛋白印迹 -
5300例结核病患者HIV感染综合检测结果分析
目的 了解目前住院结核病人中合并HIV双重感染状况.方法 对2005年8月～2008年1月在我院住院的结核病人常规进行HIV抗体ELISA法检测初筛.初筛[+]者送陕西省CDC或西安市CDC作蛋白印迹(WB)实验确认.结果 5300例中10例HIV阳性.以农民、输血感染为多.结论 目前我市结核病人中有少量合并HIV感染,应引起我市医务人员的重视,加强对结核病人进行HIV监测.
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人C1 q/TNFα相关蛋白-6的表达、纯化及生物活性分析
目的：利用大肠杆菌表达可溶性hCTRP6蛋白并分析其活性。方法重组载体转化大肠杆菌表达菌株、IPTG诱导表达、纯化后测定活性。结果 Trx-hCTRP6蛋白在大肠杆菌中高效表达,经镍亲合纯化和分子筛纯化,Trx-hCTRP6在细胞和动物水平上都有生物活性。结论利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的Trx-hCTRP6蛋白。
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索拉非尼联合吉西他滨对k-ras基因突变肺癌细胞株的增殖抑制作用及其机制
目的 探讨索拉非尼(sorafenib)单药以及联合吉西他滨(gemcitabine)对k-ras基因突变的非小细胞肺癌H460、A549细胞株的抑制作用及相关机制.方法 索拉非尼、吉西他滨以及两药联合作用于H460、A549细胞株.MTT法检测增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测p-erk、erk以及bcl-2的变化.结果 索拉非尼抑制H460及A549细胞的增殖,联合吉西他滨有协同作用,索拉非尼将H460和A549细胞阻滞于G0/G1期,而吉西他滨将细胞阻滞在S期;吉西他滨单药上调p-erk、bcl-2,索拉非尼单药以及两药联合下调p-erk、bcl-2.结论 索拉非尼能抑制k-ras基因突变的H460和A549细胞株的生长,联合吉西他滨有协同作用.
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HSP70基因在马内菲青霉酵母相和菌丝相中的差异表达
目的 初步探讨马内菲青霉双相转化中HSP70基因转录、蛋白表达变化情况.方法 对马内菲青霉临床分离株SUMS 0152进行双相性诱导,收集菌丝相和酵母相菌体.使用RT-PCR技术半定量测定HSP70基因转录水平,Western blot技术半定量测定HSP70蛋白水平.分别在两相间进行比较.结果 马内菲青霉SUMS 0152酵母相HSP70基因转录较菌丝相升高;酵母相的HSP70蛋白表达较菌丝相升高.结论 马内菲青霉SUMS0152 HSP70基因在两相间存在明显表达差异,其基因转录和表达水平在酵母相均表现为一致的上调.
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膜联蛋白A1的表达差异同乳腺癌发生发展相关性的初步研究
目的检测膜联蛋白A1(Annexin A1)在正常乳腺组织、乳腺良性增生、癌前病变及乳腺癌中的表达,以探讨其表达差异同乳腺癌发生发展的相关性.方法应用免疫组织化学SABC方法和蛋白印迹检测乳腺正常组织、良性病变(纤维腺瘤)、癌前病变(乳腺囊性增生症)、非浸润性导管癌、浸润性导管癌中Annexin A1的表达情况.结果Annexin A1的染色评分在20例癌旁正常乳腺组织为1.5328±0.45603;在20例良性病变为1.3250±0.56928;在20例癌前病变为0.9125±0.40324;在20例非浸润性导管癌为0.1550±0.20125;在40例浸润性导管癌为0.1038±0.12004.正常乳腺组织、乳腺囊性增生症、乳腺癌3组间差异显著(P＜0.01).乳腺囊性增生症、良性增生、乳腺癌3组间差异显著(P＜0.01).良性增生与正常组织之间,非浸润导管癌与浸润性导管癌之间无显著差异(P＞0.05).乳腺癌中Annexin A1表达水平与乳腺肿瘤大小及临床分期有关(P＜0.05),与患者绝经与否、乳腺癌组织学分级、淋巴结转移与否等无显著差异(P＞0.05).蛋白印迹结果与上述结果一致.结论Annexin A1表达水平在乳腺癌及其癌前病变组织中有不同程度的下调,下调程度与乳腺癌发生的危险性及恶性度密切相关,提示Annexin A1可以作为乳腺癌发生趋势预测、早期诊断、评价预后具有重要应用价值的指标.
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肺癌细胞分泌蛋白特异性抗体检测
目的研究肺癌患者血清中是否存在肺癌细胞分泌蛋白的特异性抗体.方法收集34例非小细胞肺癌患者血清、12例小细胞肺癌肺癌患者血清及15例健康对照者血清.收集A549细胞及HBE细胞培养的培养液上清液,同时收集胎牛血清培养液做对照;进行蛋白SDS-PAGE分离及电转膜.用肺癌患者及健康对照者的血清作第一抗体进行蛋白印迹检测.只与A549培养液蛋白样品有反应条带,而与HBE及对照无反应即认为是蛋白印迹阳性.结果在分子量约为30 kD的蛋白条带处,有61.8%(21/34)的非小细胞肺癌患者血清中存在分泌蛋白的抗体,小细胞肺癌患者(0/12)及健康对照者血清中未发现阳性条带(0/15).结论非小细胞肺癌患者血清中存在分子量约为30 kD的A549分泌蛋白特异性抗体.
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食管鳞癌组织中STAT6的表达及其临床意义
目的 检测信号转导与转录激活因子6(signal transducers and activators of transcription 6,STAT6)在正常食管黏膜、癌旁非典型增生和食管鳞癌组织中的表达,探讨其与食管鳞癌临床病理参数的关系.方法 2013年8月-2014年5月应用RT-PCR和Western Blotting方法检测40例食管鳞癌、40例癌旁非典型增生及20例正常食管黏膜组织中STAT6的表达.多组间比较用单因素方差分析,多样本率的比较用行列表资料的x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 STAT6 mRNA在正常管黏膜组织、非典型增生组织和食管鳞癌组中都有表达,其相对表达强度依次升高,分别为(0.085±0.000)、(0.519±0.001)、(0.860±0.000),组间差异有统计学意义(F=2.030,P＜0.05);STAT6蛋白在正常食管黏膜组织、非典型增生组织中及食管鳞癌组织中的表达量依次升高,分别为(0.339±0.001)、(0.486±0.001)、(0.624±0.001),组间差异有统计学意义(F=894.735,P＜ 0.05);STAT6异常表达与食管癌的分级、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P＜0.05).结论 STAT6的表达增强可能与食管鳞癌的发生发展有关.
关键词： 信号转导与转录激活因子6 非典型增生 逆转录聚合酶链反应 蛋白印迹 -
22例抗-HIV国产ELISA试剂检测假阳性报告
笔者在用国产ELISA双抗原夹心法试剂对无偿献血者的血液进行抗-HIV检测时,曾检出22份"阳性"样品,再用进口ELISA双抗原夹心法试剂复检为阴性,后经送滨州市卫生防疫站用蛋白印迹技试剂检测,证实为假阳性,现将结果报告如下.
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用蛋白印迹技术初步评价重组梅毒螺旋体抗原的反应性
目的:初步分析重组梅毒螺旋体抗原对梅毒螺旋体抗体的反应性.方法:用蛋白印迹技术检测与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合的2种重组梅毒螺旋体蛋白(rTP47和rTP17)与二期梅毒患者血清的反应性.结果:30份二期梅毒患者血清均与MBP-rTP47和MBP-rTP17反应,反应强度与RPR试验测定的血清滴度无绝对一致性,但MBP-rTP17与二期梅毒患者血清的反应强于MBP-rTP47.30份正常人血清均不与NBP-rTP47和MBP-rTP17反应.结论:MBP-rTP47和MBP-rTP17对二期梅毒患者血清的反应性较强.
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COX-2蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义
目的 探讨COX-2(cyclooxygenase-2)蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义.方法 分别应用免疫组化方法(IHC)和蛋白印迹方法(Western Blot)检测47例鼻咽癌组织(其中用IHC33例,Western Blot14例)及24例鼻咽部炎症组织中COX-2蛋白的表达.结果 COX-2蛋白在鼻咽癌组织的阳性表达率为81.8%(27/33),在鼻咽炎组织的阳性表达率为25%(3/12),两者表达差异有统计学意义(P=0.001).Western Blot结果显示,在两种组织中COX-2蛋白表达的相对值分别为1.258±0.034和0.487±0.076,在鼻咽癌组表达显著增高(P=0.000).结论 COX-2蛋白的高度表达在鼻咽癌的发生、发展中起重要作用,选择性COX-2抑制剂有望成为鼻咽癌化疗的重要药物.
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M2-PK蛋白在宫颈及癌变组织中的差异表达
目的:筛选、验证肿瘤标志物M2-PK在宫颈及癌变组织中的差异表达. 方法:选择永生化的人宫颈粘膜上皮细胞株H8和人宫颈癌细胞株Caski,采用双向凝胶电泳技术通过比较二者的双向电泳图谱筛选明显差异表达的蛋白质,并行MALDI-TOF-MS质谱鉴定;Western blot法检测差异蛋白质M2-PK在宫颈及癌变组织中的表达.结果:获得H8和Caski细胞的双向电泳图谱;蛋白M2-PK在Caski细胞中的表达量明显高于H8细胞;M2-PK在宫颈的正常组织、癌前病变组织和癌组织中的表达逐渐增加.结论:筛选出H8细胞和Caski细胞间的差异蛋白M2-PK,M2-PK在宫颈及癌变组织中的表达量不同.
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Aβ1～42致老年性痴呆大鼠海马神经元细胞外信号调节激酶1,2的表达
目的:建立老年性痴呆大鼠模型,观察老年性痴呆大鼠海马神经元细胞外信号调节激酶1,2表达的变化,探讨其在老年性痴呆发病机制中的作用.方法:采用立体定向下双侧海马注射Aβ1～42,建立老年性痴呆动物模型,经Y型电迷宫试验测试其行为学,采用免疫组织化学、蛋白印迹等方法观察细胞外信号调节激酶1,2表达变化.结果:模型组大鼠学习记忆能力较对照组显著下降,免疫组化显示海马CA1区细胞外信号调节激酶1,2的免疫反应阳性神经元数目及细胞平均光密度值均显著减少,蛋白印迹显示模型组较对照组条带变细,灰度值变小,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:海马神经元细胞外信号调节激酶1,2表达的减少可能参与了老年性痴呆的发病机制.
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抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
目的 制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定.方法 应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联.以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Western blot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性.结果 得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达1:6 000.ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体町特异性识别STEAP4多肽.Westem blot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52 000.以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致.结论 成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Western blot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础.
