首页 > 文献资料
-
2型糖尿病患者血液3-硝基酪氨酸水平及其相关因素分析
目的 观察2型糖尿痛患者血清3-硝基酪氨酸水平及其相关因素分析.方法 按随机病例对照研究方法,抽取确诊的2型糖尿病患者109例(病例组),非糖尿病患者57例(对照组).对研究对象进行人体测量、血生化指标检测和血清3-硝基酪氨酸(3-NT)水平测定,并分析3-NT的相关因素.结果 两组入选受试者的年龄、体重等指标均无显著性差异;病例组血糖、糖化血清蛋白、总胆固醇、载脂蛋白C2(ApoC2)明显高于对照组(P<0.05).病例组3-NT水平明显高于对照组,且病例组男性高于对照组男性、病例组女性高于对照组女性(P<0.05);BMI≥28糖尿病患者3-NT明显高于BMI<24糖尿病患者;空腹血糖>6.1mmol/L糖尿病患者3-NT水平也高于空腹血糖≤6.1mmol/L糖尿病患者(P<0.05);病例组回归分析显示与3-NT线性相关性大的因素依次为糖化血红蛋白、糖化血清蛋白、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c).结论 糖尿病患者3-NT水平明显高于对照人群;3-NT水平与糖化血红蛋白、糖化血清蛋白、LDL-c等因素密切相关.
-
3-NT在2型糖尿病周围神经病变中的相关性研究
目的:探讨3-硝基酪氨酸(3-NT)与2型糖尿病周围神经病变的关系.方法:采用神经电生理检查筛查内分泌科糖尿病住院患者及正常体检者84例,正常人(NC)20例,糖尿病未合并周围神经病变者(NDPN)32例,糖尿病合并周围神经病变者(DPN)32例,采集其身高、体重、血压等临床一般资料,测定3-NT、血脂、血糖等指标.结果:DPN组血清3-NT水平明显高于NDPN、NC组,差异有统计学意义(P＜0.05);且NDPN组与NC组相比,NDPN组血清3-NT水平也高于NC组,差异亦有统计学意义(P＜0.05).2型糖尿病周围神经病变与3-硝基酪氨酸(3-NT)、糖尿病病程(Course)、空腹血糖(FBG)、年龄(Age)相关(P＜0.01).多元Logistic回归分析显示3-NT、病程、年龄是DNP的危险因素.结论:2型糖尿病周围神经病变的发生与发展除了与病程、年龄有关外,还可能与3-硝基酪氨酸(3-NT)有关.
-
过氧亚硝基阴离子分解催化剂对衰老大鼠血管舒张功能的保护作用
目的 利用过氧亚硝基阴离子(ONOO-)分解催化剂FeTMPyP探讨衰老大鼠血管舒张功能障碍的可能机制.方法 选取雄性SD大鼠,随机分为成年组(3～4月,n=8)、衰老组(18～20月,n=8)及给予FeTMPyP的衰老组(n=6);制备离体胸主动脉环,观察血管舒张功能;采用免疫组织化学法和Western blot法测定血管组织中可代表ONOO-生成的标记物3-硝基酪氨酸(3-NT)的表达.结果 与成年组大鼠比较,衰老组大鼠胸主动脉环对10-9～10-5 mol/L累积浓度的内皮依赖性舒张剂乙酰胆碱(Ach)的大舒张程度显著下降[(29.74％±8.28％)vs(69.52％士5.51％),P＜0.001];对10-9～10-5 mol/L累积浓度的非内皮依赖性舒张剂硝普钠(SNP)的大舒张程度也显著下降[(92.01％±3.19％) vs( 99.26％±1.33％),P＜0.001].与成年组大鼠比较,衰老组大鼠血管组织中3-NT蛋白表达增加(P＜0.05).给予FeTMPyP后,衰老大鼠血管组织中3-NT蛋白表达下降(P＜0.0l):抑制ONOO-的生成后,衰老大鼠胸主动脉环对累积浓度Ach的大舒张程度显著升高[(65.96％±11.36％) vs( 29.74％±8.28％),P＜0.001],对累积浓度SNP的大舒张程度也显著升高[( 98.15％±2.79％) vs( 92.01％±3.19％),P＜0.001].结论 FeTMPyP改善了衰老大鼠血管舒张功能,提示ONOO-可能在衰老大鼠血管功能障碍中起重要作用.
-
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对2型糖尿病患者血清3-硝基酪氨酸水平及胰岛素抵抗的影响
目的：观察阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）对2型糖尿病（T2DM）患者血清3?硝基酪氨酸（3?NT）水平及胰岛素抵抗的影响。方法选取2012年2月至2014年1月在苏州大学附属第三医院内分泌科住院行多导睡眠监测的T2DM患者199例，其中OSAHS合并T2DM患者81例（OM组），单纯T2DM组118例（SDM组），选取同期41位健康体检者为对照组（NC组）。记录各组呼吸暂停低通气指数（AHI）、血氧饱和度低于90%时间占全部睡眠时间百分比（TST90）、低血氧饱和度（LPO2）、平均血氧饱和度（MPO2），检测3?NT等临床指标，计算体质指数（BMI）、稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA?C肽），比较各组参数差异。3组间计量资料的比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较采用SNK?q检验。结果 OM组BMI、HOMA?C肽、腰围、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）、尿酸（UA）及3?NT均明显高于SDM及NC组(F=5.591～73.427，均P<0.01)，OM组高密度脂蛋白胆固醇（HDL?C）明显低于SDM组及NC组（F=51.209,P<0.05）。Pearson相关性分析显示，3?NT与AHI、TST90呈正相关(r=0.425、0.409，均P<0.05)，与LPO2、MPO2呈负相关(r=-0.222、-0.280，均P<0.01)；HOMA?C肽与AHI、TST90呈正相关(r=0.324、0.421，均P<0.01)，与LPO2、MPO2呈负相关(r=-0.183、-0.200，均P<0.01)。Logistic回归分析经校正BMI、腰围、血压、空腹血糖（FPG）、TG等影响因素后，AHI、TST90、MPO2仍是影响血清3?NT的重要危险因素(OR=1.025、1.031、0.891，均P<0.05)；而AHI、TST90仍是影响HOMA?C肽的重要危险因素(OR=1.026、1.022，均P<0.05)。OM组冠心病和脑卒中、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病周围神经病变的发生率明显高于SDM组(χ2=9.866、7.508、5.341、4.484，均P<0.05)。OM有并发症亚组血清3?NT水平明显高于无并发症亚组，差异具有统计学意义(t=-2.536，P<0.05)。结论 OSAHS患者超重或肥胖更明显。T2DM合并OSAHS患者血压及UA水平升高，糖脂代谢紊乱更严重，血清3?NT水平明显升高，胰岛素抵抗更严重，糖尿病并发症发生率更高。
关键词： 糖尿病 2型 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 3-硝基酪氨酸 胰岛素抵抗 -
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并2型糖尿病患者胰高血糖素样肽1的变化及其类似物的研究
目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）合并2型糖尿病（T2DM）患者胰高血糖素样肽1（GLP?1）的变化及GLP?1类似物治疗对睡眠呼吸紊乱的影响。方法选取2012年10月至2014年9月河南省人民医院住院患者及健康对照人群共169例为研究对象，根据口服葡萄糖耐量试验（OGTT）及多导睡眠图（PSG）监测将研究对象分为OSAHS?T2DM组（45例）、OSAHS组（42例）、T2DM组（42例）、单纯肥胖组（40例），ELISA法测定空腹及餐后1 h GLP?1、3?硝基酪氨酸，通过单因素方差分析比较4组间GLP?1的差异。收集OSAHS?T2DM患者GLP?1类似物治疗与常规口服降糖药物治疗前后的数据，两组间采用独立样本t检验；多组间采用单因素方差分析，采用Logistic回归分析GLP?1类似物治疗是否是睡眠呼吸紊乱改善与否的独立相关因素。结果与单纯肥胖组、OSAHS组、T2DM组相比，OSAHS?T2DM组空腹GLP?1降低[分别为(2.9±1.4)、(6.4±2.7)、(5.5±3.1)、(3.6±1.4)μg/L，F=26.78，P<0.05]；采用二元Logistic回归分析发现体重变化与睡眠呼吸紊乱改善独立相关（OR=1.27，95%CI 1.13~1.72），GLP?1类似物治疗与睡眠呼吸紊乱改善独立相关（OR=3.52，95%CI 1.82~9.74）；GLP?1类似物治疗组患者血液流速水平高于常规组（t=5.86，P<0.05）；而3?硝基酪氨酸水平低于常规治疗组（t=-12.32，P<0.05）。结论 OSAHS?T2DM患者中GLP?1分泌减少，而GLP?1类似物治疗可改善夜间睡眠呼吸紊乱。
-
2型糖尿病患者中阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与糖尿病微血管病变相关性的初步分析
目的 初步分析阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)与糖尿病微血管病变的相关性.方法 选取2012年至2013年河南省人民医院内分泌科共239例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,采用密歇根神经病变筛查表、体感诱发电位与神经传导速度诊断糖尿病周围神经病变(DPN),采用尿白蛋白/肌酐比值诊断糖尿病肾脏病变(DN),采用眼底检查诊断糖尿病视网膜病变(DR),并依次分为DPN组(97例)和非DPN组(142例)、DN组(74例)和非DN组(165例)、DR组(87例)和非DR组(152例),检测患者糖化血红蛋白(HbA1c)及相关生化指标,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定3-硝基酪氨酸.采用独立t检验、x2检验、logistic回归分析进行统计学处理.结果 Logistic回归分析发现糖尿病病程、HbA1c、OASHS均是DPN患病与否的独立相关因素(OR=1.12、2.93、3.54,P＜0.05),糖尿病程、HbA1c、收缩压、OASHS均是DN患病与否的独立相关因素(OR=1.11、3.23、1.67、9.58,P＜0.05),糖尿病病程、HbA1c、OSAHS是DR患病与否的独立相关因素(OR=1.17、2.89、2.54,P＜0.05).OSAHS组血浆3-硝基酪氨酸高于非OSAHS组[(121.6±9.3)比(87.5 ±9.1) nmol/L,t=4.36,P＜0.05].结论 T2DM患者中OSAHS与糖尿病微血管病变存在独立相关性.
-
不同类型二尖瓣病变者左房心肌组织氧化应激特点及其与心房颤动的关系
目的 探讨不同类型二尖瓣病变心房肌氧化应激特点及其与心房颤动(AF)的关系.方法 24例二尖瓣病变者,其中二尖瓣狭窄(MS)和二尖瓣关闭不全(MR)各12例(窦性心律各6例,AF各6例).术中切取部分左心耳组织,4例意外死亡者作为对照.免疫组织化学染色评价3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)表达.比色法检测心肌肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌型肌酸激酶同工酶(MM isoenzyme of creatine kinase,CK-MM)、肌球蛋白ATP酶活性.Western blotting评价心肌CK-MM含量及CK-MM中3-NT的表达.结果 所有病人心房肌3-NT表达均明显增高(P＜0.05),AF者表达高于窦性心律者(P＜0.05),MS者表达高于MR者(P＜0.05).病人心肌CK、CK-MM活力均降低(P＜0.05),CK活力与心房肌3-NT表达呈负相关(r=-0.382,P＜0.05),CK-MM活力与其3-NT表达亦成负相关(r=-0.446,P＜0.05).结论 二尖瓣病变者心房肌氧化应激反应明显升高,MS者心房肌氧化应激反应高于MR者.心房肌氧化应激与AF的持续存在有关.CK和CK-NN中酪氨酸硝基化可以降低其活力.
-
可卡因-苯丙胺调节转录肽对脑缺血-再灌注损伤小鼠脑保护机制的研究
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注小鼠脑梗死体积、脑组织8 -羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)水平的影响. 方法 选用10 ～ 12周龄的健康雄性昆明小鼠264只,随机分为缺血-再灌注组、CART组、等渗盐水组(各72只)及假手术组(48只).建立大脑中动脉闭塞(MCAO)2h,再灌注12、24、48及72 h模型(每时间点6只).CART组于再灌注前经尾静脉注射CART55-102(0.5μg/kg,浓度12nmol/L;每24h重复给药1次),等渗盐水组给予同体积等渗盐水作对照.采用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法测定脑组织中的8-OHdG和3-NT含量. 结果 ①CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均小于缺血-再灌注组和等渗盐水组,其中24、48和72 h差异均有统计学意义(P＜0.01).②与假手术组比较,缺血-再灌注组、CART组及等渗盐水组在再灌注后各时间点脑组织中8-OHdG和3-NT含量均升高.③与缺血-再灌注组、等渗盐水组比较,CART组再灌注后各时间点脑组织中的8-OHdG和3-NT含量均有所下调.其中8-OHdG仅在12h差异有统计学意义(P＜0.05),3-NT在24、48及72 h时间点差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 CART对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用可能与下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激有关.
-
酪氨酸硝基化在分泌性中耳炎所致耳蜗损伤作用实验观察
目的：通过观察3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine，3-NT）在分泌性中耳炎（Otitis Media with Effusion，OME）大鼠内耳的定位、分布及内耳组织形态学特征，确定OME大鼠耳蜗中的酪氨酸硝基化情况，探寻OME导致内耳损伤的酪氨酸硝基化机制。方法将40只健康成年雄性SD大鼠一侧耳通过阻塞咽鼓管的方法构建分泌性中耳炎模型。造模成功后分组行耳蜗石蜡切片HE染色和免疫组织化学，Tunel凋亡检测和神经节细胞的透射电镜观察。采用SPSS16.0软件包进行统计学分析，以p<0.05作为有显著性差异。结果造模后大鼠的耳蜗毛细胞没有明显的缺失， HE染色发现中耳及内耳慢性炎症改变，免疫组化检测3-NT在耳蜗毛细胞、血管纹、神经纤维细胞、神经节细胞均有阳性表达，而对照组在相应部位均阴性表达。Tunel凋亡检测见耳蜗的神经纤维细胞、神经节细胞出现凋亡。透射电镜观察示神经节细胞线粒体肿胀、出现空泡化，并有神经节细胞间质的淋巴细胞浸润。结论通过构建OME模型初步发现OME能够导致耳蜗损伤，OME可能通过酪氨酸硝基化作用导致耳蜗毛细胞的凋亡、螺旋神经节细胞及神经纤维的变性，即酪氨酸硝基化是OME导致耳蜗损伤的可能机制之一。
-
尿样中3-硝基酪氨酸在轨检测技术的建立与空间验证
目的 建立尿液中3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)在轨检测装置和技术,为评估航天员飞行中应激状态变化提供客观依据.方法 基于表面等离子体共振(SPR)原理,研制了在轨医监生化检测装置,并建立了配套的尿液预处理及3-NT检测技术,于“神舟”9号任务中进行了在轨飞行验证.结果 在轨检测装置空间工作正常,3-NT检测灵敏度好、准确度高、特异性好,圆满完成飞行中尿液测试.结论 建立了尿样中3-NT在轨检测技术,成功应用于空间环境.
-
eNOS解偶联对减压病大鼠肺动脉内皮功能损伤的影响
目的 探讨不安全减压对大鼠肺动脉内皮功能的影响及其相关机制.方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=30)和减压病(DCS)组(n=30).将DCS组大鼠置于加压舱内,暴露于600kPa压缩空气环境下60min,再以100kPa/min减至常压,制作DCS模型.DCS组存活大鼠及对照组大鼠麻醉后剥离肺动脉,检测离体肺动脉内皮依赖的血管舒张能力,采用Western blotting检测肺动脉组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达情况及其解离情况,以及肺动脉组织中各蛋白硝基化水平,行离体肺动脉超氧化物阴离子探针(DHE)染色检测活性氧(ROS)形成情况.结果 DCS组30只大鼠经历不安全减压后死亡10只,存活大鼠肺动脉内皮依赖的血管舒张能力明显下降(P＜0.05).DCS组及对照组eNOS表达量差异无统计学意义(P＞0.05),但DCS组eNOS单体/二聚体比例明显高于对照组(P＜0.05);DCS组肺动脉组织各蛋白酪氨酸硝基化水平明显高于对照组(P＜0.05).DHE染色结果显示,DCS组肺动脉中ROS生成量明显高于对照组(P＜0.05).结论 模拟潜艇逃生过程中不安全减压可导致肺动脉内皮中eNOS二聚体解偶联,解离的eNOS单体不能合成NO,从而影响血管内皮依赖舒张能力;eNOS单体可促进ONOO-合成,导致肺动脉组织中蛋白酪氨酸硝基化水平提高,引起细胞信息调控紊乱,eNOS单体还可引起活性氧离子ROS形成增加,从而介导过氧化损伤.
-
2型糖尿病患者血清3-硝基酪氨酸水平及其与食物类别和摄入量的关系
目的 观察2型糖尿病患者血清3-硝基酪氨酸(3-NT)水平及其与食物选择和摄入量的相关因素.方法 按病例对照研究方法 ,招募确诊的2型糖尿病患者99例,非糖尿病对照病例57例.对入选人群进行人体测量、血生化检测、膳食调查和血清3-NT水平的测定,并分析3-NT的相关因素.结果 糖尿病组3-NT水平明显高于非糖尿病对照组(P<0.05);糖尿病组每日脂肪摄入量明显高于对照组(P<0.05),在三大营养素中脂肪供能比明显偏高,碳水化合物供能比明显偏低;糖尿病组B族维生素摄入量显著低于对照组(P<0.05);其日均主食量显著低于对照组,奶类和豆类以及盐的日均摄入量显著高于对照组(P<0.05);糖尿病组的营养素摄入量回归分析显示与3-NT线性相关性大的因素依次为钠、钾、铁.结论 糖尿病患者血清3-NT水平明显高于非糖尿病对照人群;糖尿病患者膳食结构不合理;3-NT水平与脂肪、钠、钾、铁等的摄入量相关,而与所摄入的任何食物类别没有相关性.
-
三七总皂苷抑制脑组织3-硝基酪氨酸形成的体外研究
目的 研究三七总皂苷(PNS)对体外过氧化亚硝基离子(ONOO-)依赖途径和亚铁血红素-亚硝酸盐-过氧化氢(heme/NO2-/H2O2)依赖途径诱导的脑组织3-硝基酪氨酸(3-NT)形成的抑制作用.方法 依据体内3-NT形成的主要途径,分别建立heme/NaNO2/H2O2和ONOO-诱导的3-NT形成体外模型;分别以牛血清白蛋白(BSA)/大鼠血浆蛋白、大鼠脑组织匀浆蛋白为底物,分为对照组、模型组及低、中、高浓度干预组(PNS终浓度分别为50、100及200 mg/L),Western blot法检测各组3-NT水平.结果 与对照组相比,模型组BSA、血浆蛋白、脑组织匀浆蛋白中均有3-NT形成(均P<0.05).与模型组相比,两种途径下,加入不同浓度PNS后,BSA、大鼠血浆蛋白中3-NT表达水平均降低(均P<0.05),而低浓度干预组脑组织匀浆蛋白中3-NT降低不明显(P>0.05),中、高浓度干预组脑组织匀浆蛋白3-NT水平降低明显,且高浓度干预组作用大(均P<0.05).结论 中、高浓度的PNS对脑组织3-NT形成具有抑制作用,PNS可能对3-NT参与损伤机制的多种脑组织疾病(如颅脑外伤、脑卒中、神经系统变性疾病等)具有保护作用.
-
胰岛素泵对初诊2型糖尿病患者内皮依赖性舒张功能及3-硝基酪氨酸的影响
目的 探讨胰岛素泵强化治疗对初诊2型糖尿病(T2DM)患者血管内皮依赖性舒张功能(FMD)及血清3-硝基酪氨酸(3-NT)的影响.方法 选取初诊T2DM患者40例(DM组)及与其年龄、性别等指标相匹配的健康体检者30例(NC组).检测两组受检者的血清学指标(包括血糖、血脂、糖化血红蛋白等),采用高分辨率超声仪检测FMD,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清3-NT水平.另外,DM组加测空腹胰岛素(FINS),采用稳态模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).DM组经胰岛素泵强化治疗2周后复测上述指标.结果 (1)与NC组比较,DM组患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及FMD显著下降,而糖化血红蛋白、血糖、血脂(除外HDL-C)及血清3-NT水平均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).(2)DM组经胰岛素泵强化治疗2周后,FMD由治疗前的(4.54±1.42)%增高至治疗后的(7.20±2.59)%,血清3-NT水平由治疗前的(118±13)nmol/L降低至治疗后的(112±11)nmol/L,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)相关分析显示,血清3-NT水平与糖化血红蛋白、空腹血糖呈正相关(P<0.01),与FMD呈负相关(P<0.01).结论 胰岛素泵强化治疗能明显提高初诊T2DM患者的FMD,降低血清3-NT水平.
关键词： 糖尿病 2型 3-硝基酪氨酸 血管内皮依赖性舒张功能 胰岛素泵强化治疗 -
人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧在高糖状态下的表达
背景:高血糖导致的自由基损伤是糖尿病视网膜病变发病机制的中心环节.目的:观察高糖对体外培养的人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤作用以及高糖对人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧表达的影响.方法:将培养人视网膜色素上皮细胞,分为对照组、高糖组和甘露醇组,分别用含5.5 mmol/L葡萄糖,33 mmol/L葡萄糖及5.5 mmol/L葡萄糖和27.5 mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养.采用相差倒置显微镜观察细胞生长形态,采用免疫荧光染色研究诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达的变化,用氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯荧光染色检测视网膜色素上皮细胞中活性氧的产生量.结果与结论:与对照组相比,应用含33 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基处理视网膜色素上皮细胞48 h可见细胞胞体变薄,形态表现多样,不规则细胞增多;高糖培养的视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达增加,活性氧产生明显增多.说明高浓度葡萄糖培养可造成人视网膜色素上皮细胞氧化损伤,使细胞形态发生变化,并导致细胞中3-硝基酪氨酸产生增多.
-
单宁酸对糖尿病大鼠肾组织和肾小球系膜细胞培养上清中8-OHdG及3-NT含量的影响
目的：观察单宁酸（ TA）对糖尿病（ DM）模型大鼠肾脏形态和功能的影响，并从氧化应激、亚硝基化应激角度探讨单宁酸改善作用的机制。方法：6周龄健康雄性Wistar大鼠68只，随机选取8只作为正常对照组，其余60只给予高糖高脂饲料喂养4周后以链脲佐菌素（ STZ）按52 mg/kg体重单次腹腔注射制造糖尿病大鼠模型，造模成功的大鼠进一步随机分为模型组、氨基胍（ Aminoguanidine ，AG）组、单宁酸低剂量组、单宁酸高剂量组。氨基胍组及单宁酸低高剂量组分别腹腔注射AG[40 mg/（kg· d）]及单宁酸[20及30 mg/（kg· d）]，正常对照组和模型组给予生理盐水[30 mg/（kg· d）]，10周后处死大鼠取材。 HE染色观察DM大鼠肾脏形态学变化，进行肾脏功能相关生化指标检测，ELISA法检测各组大鼠肾组织匀浆8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）及3-硝基酪氨酸（3-NT）含量；同时体外培养肾小球系膜细胞，分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及AGEs （250 mg/L）处理，同时用不同浓度单宁酸（10、20、40及80μmol/L）进行干预，设立相应对照组，培养48 h后留取培养上清， ELISA法检测细胞各条件培养基中8-OHdG及3-NT的含量。结果：单宁酸可有效改善DM大鼠肾脏病理改变及改善肾功能。DM模型大鼠肾组织匀浆中以及高糖及AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量均显著增多。单宁酸可减少DM大鼠肾组织及高糖、AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量。结论：单宁酸可能通过降低肾脏氧化应激、亚硝基化应激机制从而改善糖尿病大鼠肾脏结构和功能的损害。
-
PC12细胞系硝化修饰亚蛋白质组表达谱的建立
目的 构建基础条件下PC12细胞系的硝化修饰亚蛋白质组表达谱.方法 提取PC12细胞总蛋白,进行双向电泳及Western blot硝化蛋白分析,应用Image Master 2 DEvolution分析软件获得硝化蛋白质点的信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定硝化蛋白质.结果 PC12细胞有50多个蛋白点发生硝化修饰,共鉴定出11个硝基酪氨酸免疫阳性的蛋白质.结论 成功地构建了PC12细胞系硝化亚蛋白质组表达谱,为病理学和药理学条件下蛋白质硝化修饰的研究奠定了基础.
关键词： PC12细胞 双向电泳 蛋白质组学 3-硝基酪氨酸 Western blot -
可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠缺血/再灌注的保护作用及脑组织8-OHdG和3-NT含量变化的研究
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocain and am-phetamine regulated transcript peptides,CART)对脑缺血小鼠脑组织8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)和3-硝基酪氨酸(3-nitrtyrosine,3-NT)水平的影响.方法 健康雄性昆明白小鼠随机分为4组:脑缺血组(每时间点n=15),CART组(每时间点n=15),生理盐水(NS)对照组(每时间点n=15),假手术组(每时间点n=12).建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,CART组、生理盐水对照组于缺血2h即刻分别经尾静脉注射给予CART55-102(0.5μg)或同体积NS.在脑缺血不同时间点分别进行脑梗死体积和脑组织8-OHdG及3-NT水平检测.结果 脑缺血后不同时间点脑组织8-OHdG及3-NT含量均被上调,CART可下调缺血后脑内8-OHdG及3-NT水平的升高,缩小梗死体积.结论 CART能通过下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激,有效保护小鼠缺血性脑损伤.
-
eNOS解偶联对大脑中动脉栓塞后大鼠神经血管单元的作用及机制
目的 探讨大鼠大脑中动脉栓塞模型中,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)解偶联对神经血管单元的作用及机制.方法 将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=40)和大脑中动脉栓塞(MCAO)组(n=40).参照Longa法制作MCAO模型.栓塞后6 h,通过蛋白印记法检测缺血区eNOS不同偶联状态的表达情况及3-硝基酪氨酸(3-NT)的水平;通过尼氏染色比较缺血区神经元的形态及存活情况;通过免疫组织化学染色比较缺血区星形胶质细胞、微血管内皮细胞以及血脑屏障紧密连接对应的标记物GFAP、VWF、Occludin的表达水平;通过MRI的T2加权序列和动脉自旋标记(ASL)反应栓塞后脑组织病灶范围及血流情况.结果 MCAO后栓塞部位在T2序列上呈高信号,在ASL序列上血流信号减低.eNOS二聚体/单体的比例明显低于假手术组(P<0.05);3-NT的含量明显高于假手术组(P<0.05).尼氏染色显示MCAO后神经元大量空泡形成,核固缩变性,数量显著减少;免疫组化结果显示,VWF、Occludin的表达较假手术组明显减少,而GFAP则明显增多(P<0.05).结论 MCAO会导致eNOS解偶联.eNOS解偶联后NO合成受限,而具有毒性作用的3-NT产生增多,炎症反应加重,从而对神经血管单元结构及功能产生破坏作用.
-
阿尔茨海默病患者血浆NO、ox-LDL3-NT的临床研究
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者血浆一氧化氮(NO)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和3-硝基络氨酸(3-NT)动态变化及临床意义.方法 收集AD患者(AD组)48例,正常对照组(NC组)37例.全部研究对象均进行简明精神状态量表(MMSE)、日常生活能力量表(ADL)和Haehinski缺血指数(HIS),AD患者用全面衰退量表(GDS)分级.用酶联免疫吸附试验(ELSIA)测定两组血浆NO、3-NT、ox-LDL的浓度.结果 (1)AD组血浆NO、3-NT、ox-LDL浓度分别为(41.01±16.40)μmol/L、(119.46±21.82) nmol/L、(112.25±17.81) μg/L,较对照组血浆NO、3-NT、ox-LDL浓度(15.97±6.63) μmol/L、55.09±9.63) nmol/L、(47.46±10.04) μg/L均明显升高(P＜0.05、P＜0.05和P＜0.05).Spearman相关分析显示,血浆NO、3-NT、ox-LDL浓度与AD患者的MMSE评分呈负相关.(2)AD组内3个指标血浆浓度的Pearson相关分析显示,AD组中血浆NO浓度与血浆3-NT浓度正相关,而血浆NO、3-NT浓度与血浆ox-LDL浓度无明显相关性.结论 AD患者血浆NO、3-NT、ox-LDL浓度显著升高,可能与AD患者的病情严重程度密切相关.
