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基因芯片技术与应用
随着人类基因组计划的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展,越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定,基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长.然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题.为此,建立新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测、分析就显得格外重要了.
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异核苷掺入寡核苷酸的合成及其与互补序列的结合研究
目的合成异核苷掺入寡核苷酸并考察它们与互补序列的结合能力.方法采用DNA固相合成仪合成寡核苷酸,通过热变性实验考察双链的稳定性.结果合成了四条单异核苷掺入的寡核苷酸,热变性实验结果发现异核苷的引入降低了双链的稳定性,当异核苷处于寡核苷酸链的中央时,这种影响更为明显.异核苷6′-OH处于游离和烯丙基保护状态时的结果没有显著差异.结论寡核苷酸中的异核苷使链发生扭曲,从而导致双链稳定性降低.
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PCBP1的新伴侣蛋白分子的研究
Objective: PCBP1 is a family member of heterogeneous nuclear ribonucleoproteins (hnRNPs) that belong to RNA-binding proteins and bear three KH domains. The protein plays a pivotal role in post-transcriptional regulation for RNA metabolism and RNA function in gene expression. We hy-pothesized and were going to identify that the regulatory function of PCBP1 is performed through different complexes of proteins that include PCBP1. Methods: To test our hypothesis, approaches of protein wal-king with a yeast two-hybrid system (Y2H), pulling down in yeasts, co-immunoprecipitation and immu-nofluorescent microscopy assay were employed in this study. The PCBP1 was used as the initial "walker" to search for its interaction partner(s). Results: Candidate proteins including MYL6, PECAM1, CSH1,RAB7, p57KIP2, ACTG1, RBMS1 and PSG4-1ike were identified with selection mediums and preceding methods. Conclusion: With these candidate protein molecules, some protein complexes associating with PCBP1 are proposed, which may help in a better understanding of physiological functions of PCBP1 and proved evidence that PCBP1 is involved in variant biological pathways.
关键词： Poly(C)结合蛋白质1 酵母菌 杂交 遗传 蛋白质结合 -
酵母双杂交筛选雄激素受体辅助调节因子267-α(ARA267-α)的相互作用蛋白
目的:通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子267-α(androgen receptor-associated coregulator 267-α,ARA267-α)有相互作用的蛋白质,为研究ARA267-α的生理功能寻找证据和方向.方法:以能表达ARA267-α中4个PHD(p1ant homeodomain)和1个SET[Su(var)3-9,Enhancer-of-zeste,Trithorax]结构域的pGBKT7-PHD-SET重组质粒为"诱饵",采用酵母融合(yeast mating)方法筛选预转化的人脑cDNA文库.挑选阳性酵母菌落进行质粒提取、限制性内切酶分析和DNA测序.将测序结果在GenBank中进行核苷酸序列同源性比对,确定它们所对应的基因.通过再次酵母双杂交排除假阳性相互作用.结果:筛选cDNA文库共获得约600个阳性酵母菌落,随机挑选其中的65个菌落提取混合质粒.经过在氨苄青霉素培养盘中筛选,共得到43个文库pACT2-cDNA质粒.选取35个酶切片段不同的文库pACT2-cDNA质粒进行测序,测序结果比对揭示,35个cDNA插入片段来源于16种不同的基因.酵母双杂交证实其中RanBPM是ARA267-d的假阳性作用蛋白.结论:通过筛选cDNA文库发现ARA267-α可以与多个不同的蛋白质相互作用,这提示ARA267-α可能是一个具有多种生理功能的蛋白分子,而RanBPM极可能是一个转录因子.
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应用酵母双杂交系统筛选新基因AngRem104相关蛋白
目的:应用酵母双杂交系统筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,为该基因的功能研究提供线索.方法:构建AngRem104的真核表达载体AngRem104-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达, 进行毒性和自激活检验,与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互作用的蛋白.结果: AngRem104蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象. 筛选出的蛋白包括真核翻译延伸因子1α1、糖皮质激素受体AF-1特异延伸因子、β2-微球蛋白、巴戴-比德尔综合征2蛋白及4个与细胞代谢有关的蛋白.结论:AngRem104可能影响细胞内某些转录因子活性和细胞代谢,并与某些免疫相关疾病和遗传病发病有关.酵母双杂交结果为AngRem104的功能研究提供了重要线索.
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Northern印迹杂交检测胃癌组织中uPA和uPAR mRNA表达及其意义
目的:检测胃癌和相应癌旁组织中uPA和uPAR mRNA表达水平,并探讨它们与胃癌的侵袭、转移之间的关系.方法:运用cDNA-mRNA Northern印迹杂交方法定性和定量地检测了 20 例胃癌和相应癌旁组织中uPA和uPAR mRNA的表达水平.结果:在检测的20例胃癌组织中分别有 13 例uPA和 15 例uPAR mRNA表达显著高于相应的癌旁组织 (P＜0.01),其中12例uPA和uPAR mRNA协同高于相应癌旁组织;11例伴有淋巴结转移的胃癌组织中uPA和uPAR mRNA表达水平显著高于 9 例无淋巴结转移者.结论:uPA、uPAR mRNA在胃癌组织中表达增强,并且与胃癌侵袭、转移密切相关.
关键词： 尿激酶型纤溶酶原激活剂 受体 表达 胃癌 杂交 -
LAMP联合基因芯片技术在肺炎衣原体检测中的应用
目的 开发一种可以快速、准确检测肺炎衣原体的检测方法.方法 采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对肺炎衣原体的特异性DNA保守片段进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号.结果 只有肺炎衣原体DNA经LAMP反应后出现特异性的扩增条带,经LAMP扩增后的产物与基因芯片杂交,仅肺炎衣原体区域出现杂交信号.结论 LAMP技术联合基因芯片技术具有高度敏感性、高度特异性的特点,可快速准确地检测肺炎衣原体.
关键词： 环介导等温核酸扩增技术 基因芯片 肺炎衣原体 杂交 -
应用杂交技术治疗多节段下肢动脉硬化闭塞症34例
目的：探讨杂交手术治疗复杂的多节段下肢动脉硬化闭塞症的临床效果。方法2008年1月至2013年4月，采用杂交手术（髂动脉支架植入联合股深动脉成形或股动脉-腘动脉人工血管旁路移植术）治疗下肢多节段动脉硬化闭塞治疗34例。34条患肢行髂动脉球囊扩张和支架植入术，其中21条患肢联合行股深动脉成形术，13条患肢联合行股-腘动脉旁路术。结果手术均获成功，无严重并发症，平均随访12个月（3～24个月）术后踝肱指数0.73与术前0.26相比显著提高（P<0.05）。结论杂交技术治疗复杂的多节段下肢动脉硬化闭塞症是一种安全有效的治疗方法。
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种植体牵张成骨增高牙槽嵴的实验研究
1.目的:通过动物实验研究种植体牵张装置应用的可能性,为临床提供一定的实验数据和理论依据.2.材料方法:杂交家犬6只,随机分为三组,拔除下颌前磨牙3月后进行手术.首先沿牙槽嵴顶切开粘骨膜,两端向颊侧作副切口,翻开颊侧粘骨膜瓣,标出3cm×0.5cm的骨升段(Transport segment)及两枚种植体位置,种植体距垂直切口0.8cm,采用临床标准种植钻头预备种植体窝,钻头大直径3.54mm,种植体窝深度6mm,用金刚砂片及701号慢速裂钻作水平切口和垂直切口,游离骨升段,骨升段复位后植入后植入种植体,植入深度6mm,在骨基段(Basesegment)为1mm,骨升段为5mm,暴露4mm.
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电化学DNA生物传感器的指示方法及其临床研究进展
电化学DNA生物传感器是很有前景的核酸分析技术,由于它操作简便快速、信号灵敏,能与DNA生物芯片兼容等优点,受到了广泛的关注,成为当今生物学、医学领域的前沿性课题.它利用杂交原理及电化学标志物为杂交检测信号,既可以用标记法又可以用非标记法进行检测,不受颜色影响,可对痕量样品测定,仪器设备易于集成化和自动化且价格低廉,正朝向便携式商业化方向发展.实现电化学DNA生物传感器的准确检测,实验中所用到的指示方法发挥很大作用.该文着重阐述在DNA传感器工作中所运用的指示方法以及其在临床中的研究进展.
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实验动物泰泽病原位杂交法的建立
目的建立实验动物泰泽病原位杂交检测方法.方法用已感染Tyzzer菌小鼠的3T3细胞(MT-3T3细胞)感染4周龄的ICR小鼠,以4.0×105细胞量感染动物,动物于感染后4～7 d发病.根据Tyzzer菌16 srDNA序列设计出两对特异引物,以MT-3T3细胞的DNA提取物为模板,进行套式PCR.扩增出Tyzzer菌特有的196bp条带.以此产物为探针,用地高辛PCR一步法进行探针标记.选择感染动物的肝脏,采用不同探针浓度进行原位杂交.结果当探针的小浓度为40 ng/μl时,在肝细胞的胞质中有阳性结果.结论原位杂交方法能直接定位Tyzzer菌的感染位置,本研究建立的方法简单,易于操作,便于普及.
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腔内激光联合泡沫硬化剂杂交术与大隐静脉曲张剥脱术术后并发症对比观察
目的 探讨腔内激光合并硬化剂杂交治疗大隐静脉曲张的手术疗效.方法 对42例下肢静脉曲张患者应用腔内激光合并硬化剂治疗,33例患者采用传统剥脱术,对比观察术后并发症发生情况.结果 杂交手术组在术后的并发症发生方面较传统组明显减少.结论腔内激光联合泡沫硬化剂杂交治疗静脉曲张是一种更微创有效的治疗方法.
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急性呼吸窘迫综合征 115 例临床分析
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)可由多种疾病或致病因素引起,其病因复杂交错.本文收集了2002年4月至2007年12月我院收治的ARDS患者115例临床资料,并进行了回顾性分析,现报道如下:
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微创冠状动脉旁路移植术的新进展
近几年来,随着造影技术、血管吻合装置、稳定器、心肺转流等技术的进步,微创冠状动脉旁路移植术有了相当的发展.微创冠状动脉旁路移植术,包括微创直视冠状动脉旁路移植术(MIDCAB)、非体外循环心脏不停跳冠状动脉搭桥术(OPCAB)、完全内镜下机器人辅助下的冠状动脉旁路移植术(TECAB),以及"杂交"技术(Hvbrid,PTCA+MIDCAB)等.
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微创射频消融治疗心房颤动
心房颤动(简称房颤)是常见的快速型心律失常之一,可增加心血管疾病死亡率和发病率,我国流行病学研究显示房颤发病率为0.73％[1].房颤治疗原则包括:控制心室率、抗凝治疗、缓解症状、治疗基础心脏病和诱发因素、恢复并维持窦性心律.房颤的药物疗效差,不能预防血栓栓塞和心力衰竭,抗凝药物的应用虽然减少血栓栓塞风险但同时也增加了出血风险.导管及外科的射频消融治疗房颤效果明显好于单纯药物治疗12-4].内、外科微创射频消融治疗房颤各有优缺点,可结合其优点联合治疗房颤.
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基因检测法在血尿诊断中的应用研究#
泌尿系肿瘤的早期诊断是临床医师提高患者治愈率和降低死亡率的有效方法,目前使用内镜活检是诊断尿路上皮肿瘤的金标准,但因其较为痛苦且创伤大,病人依从性差,对具有尿路刺激症状的患者无法配合,对镜下血尿的患者诊断阳性率低,可能会导致延误诊断或漏诊。影像学检查对小于0.5cm的肿瘤病变难以发现。经过多年探索,研究者发现了9号、3号、7号及17号染色体畸变与尿路上皮肿瘤的常见遗传学改变密切相关[1,2]。本研究采用荧光标记探针与DNA分子杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)技术对53例无症状血尿患者尿脱落细胞核行检测,探讨基因检测技术在可疑尿路上皮肿瘤患者诊断中的应用价值。
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荧光探针定量PCR技术
PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测.荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用"实时定量PCR(real time quantitative PCR)"或"TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)".该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术.
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4696例人乳头瘤病毒感染基因分型检测及分析
目的 探讨清远地区4696例妇科门诊和体检中心就诊人群人乳头瘤病毒的感染状况和基因亚型的分布特征.方法 采用HPV-DNA核酸分子快速杂交基因分型方法对就诊妇女的阴道分泌物进行HPVDNA分型检测.结果 在4696名妇女中,检测出阳性的患者有831例,阳性率为17.70％,其中有342人感染两种及两种以上亚型,主要以高危型HPV感染为主.HPV 52和HPV 16是常见的感染亚型,在感染者中分别占25.5％和13.5％.妇科门诊就诊的高危人群组的HPV感染率为20.25％,较体检组感染率12.63％高.各年龄阶段HPV感染率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 清远地区女性HPV的感染率为17.7％,且以高危型感染为主,其中为常见的感染亚型为HPV 52.
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某区人乳头瘤状病毒基因型的分布研究
目的：了解楚雄地区女性人群人乳头状瘤病毒（HPV）基因型在宫颈疾病中的感染状况及其分布特点。方法采用PCR-反向点杂交法对2013年12月至2014年3月在楚雄州人民医院妇科就诊的1936例女性患者进行23种HPV（低危型6、11、42、43、81，高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、53、66、73、82、83）基因型的分型检测，分析常见感染亚型和分布特点。结果研究人群HPV感染总阳性率为18.8%，常见的5种高危型为52、58、16、53、51；常见的2种低危型为81、42。单重感染的比例为87.3%，多重感染的比例为12.7%。结论楚雄地区HPV感染亚型有独特的区域分布特点，HPV 52和58型有相当高的流行率，值得重视。
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肾癌差异表达基因克隆的研究
目的 克隆并鉴定肾癌与正常肾之间差异表达的基因。方法 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库，并从中克隆鉴定出肾癌差异表达的基因。结果 构建成功了高消减效率的人肾癌 cDNA 消减文库，对其中 5个克隆插入的cDNA片段进行测序后经 Genbank检索表明， 5个片段均为未知新序列，其中GYLZ-RCC18为 3个拷贝，提示以上 5个 cDNA片段可能来自 3个新基因。 Northern杂交分析显示， GYLZ-RCC18在肾癌组织中有明显表达，而在正常肾组织中无表达，这证明 GYLZ-RCC18是肾癌相关的新基因。结论 人肾癌cDNA消减文库的建立为进一步筛选、克隆肾癌特异性表达的新基因奠定了基础。
