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探针浓度对肽核酸石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响
目的探索不同肽核酸(PNA)探针浓度对PNA石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响.方法石英谐振式基因传感器阵列表面分别固定上0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0μM的bis-PNA探针后,观察其固定以及与相应的HBV靶序列杂交时频率的下降值及反应所需的时间.结果探针固定引起的频率变化值先升而后趋于平缓,而与HBV靶序列杂交所引起的频率变化值却是先升后降,以1.5μM探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势.结论 1.5μM bis-PNA探针固定浓度为适宜.
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离子浓度对肽核酸压电基因传感器杂交效应的影响
目的探索不同离子浓度的PBS缓冲液对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响.方法压电基因传感器阵列表面固定上1.5μM的bis-PNA探针后,分别观察在10、20、50、100mM的PBS缓冲液环境中与相应的靶序列杂交,记录频率的下降值及反应所需的时间.结果钠离子浓度从10mM增加至20mM时,杂交导致的频率下降值及平衡时间均增加(P＜0.05);从20mM增加至50、100mM时,杂交导致的频率下降值各组间无显著差异,但杂交平衡时间却呈倍数增长.结论离子浓度极大地影响了杂交反应的时间,低盐离子浓度更有利于提高bis-PNA和dsDNA的杂交速率,高盐离子浓度则会大大降低bis-PNA的结合速率.
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白细胞介素24的研究进展
白细胞介索(interleukin,IL)是一组由白细胞产生的在细胞间发挥作用的细胞因子,具有重要的免疫学功能.白细胞介素24(intedeukin24,IL-24)双称黑色素瘤分化相关因7(melanoma differentiation associated gene7,mda7)是初于1995年由美国哥伦比亚大学的Jiang等[1]通过差示杂交的方法从人干扰察(IFN)-β和瑞香素(mezerein,MEZ)诱导的人类黑色素瘤细胞中获得.
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基因芯片及应用前景
1 基本概念基因芯片(gene chip)也叫DNA芯片、DNA微阵列(DNAmicroarray),是指采用原位合成(in situ synthesis)或显微打印手段,将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上,产生二维DNA探针阵列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断,由于常用硅芯片作为固相支持物,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术,所以称之为基因芯片技术.
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卡介苗增强人肺腺上皮细胞β-防御素-1基因的转录
目的:检测卡介苗(BCG)胞壁蛋白对人β-防御素-1(hBD-1)基因表达的影响,并初步分析该基因5′-端旁侧区中的BCG作用元件. 方法:经Sephadex G-150层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交分析法检测hBD-1 mRNA在肺腺上皮细胞的表达.
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可乐定抑制大鼠心肌GSa mRNA 在烫伤后的表达变化
可乐定对烧伤休克、溶血具有保护作用,可减轻烧后水肿形成,改善烧伤后心功能,增加心肌细胞Gsα含量,为进一步探讨其在烧伤后心肌舒缩功能调节中的作用与机理,采用30%体表面积皮肤Ⅲ度烫伤大鼠模型,用dot blotting杂交技术测定心肌Gsα mRNA表
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同胞姐妹患不同型先天愚型
例1 女，26岁，未婚。智力低下，抽象思维能力极差，只能使用简单词语，生活自理能力弱。查体：身高135 cm，发育差。肌张力低，心音弱。月经18岁初潮、不规则，乳头小、乳房发育差。眼间距宽、外眼角上斜，鼻根低平，口半开，舌常外伸。皮纹学检查：双手拇指指纹为W、余为Lu，TFRC为107，右小指单褶，左掌褶线过渡Ⅰ型，左右手atd角分别为55°和60°，双足(口)/(止) 母趾球区胫弓。细胞遗传学检查：外周血培养，G显带，核型为47，XX，+21，应用FISH技术将生物素标记的人类染色体探针(英国剑桥大学病理系杨凤堂博士提供)杂交也证实是完全型21三体。 例2 女，24岁，未婚，例1之同胞妹妹，智力及外貌特征与例1相似，生活自理能力稍强些。身高138 cm，发育差。月经22岁初潮，不规律。皮纹学检查：双手指纹对称，拇指和无名指为W，余为Lu，TFRC为127，掌褶线普通型，左右手atd角分别为82°和75°，(口)/(止) 母趾球区均胫弓。细胞遗传学检查：外周血培养，G显带，核型为46,XX,-14,+t(14q;21q)。用FISH技术将生物素标记探针与其杂交后证实核型为46，XX，-14，+t(14q；21q)，即易位型21三体。
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胸腹主动脉瘤杂交技术应用
胸腹主动脉瘤是一类同时侵犯降主动脉及腹主动脉的动脉瘤,以病变累及范围广及多根内脏血管受累为特点,该病一直以来是血管外科医生所面临的具挑战的疾病之一.动脉瘤可能自发破裂,同时患者多合并全身心脑血管疾病,如果不加以外科干预,胸腹主动脉瘤5年生存率不足20%.近年来,虽然麻醉、手术技术及外科监护取得了大幅进展,但传统手术治疗的死亡率及致残率仍然很高.
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分期和"一站式"Hybrid 手术治疗法洛四联症合并体肺动脉侧支血管形成的疗效比较
目的 重症法洛四联症(TOF)常由于合并体肺动脉侧支血管形成(APCAs)而增加手术矫治及术后恢复的难度,为了提高此类患者的手术效果,评价分期和"一站式" Hybrid手术治疗TOF-APCAs患者的临床疗效.方法 2003年1月至2007年12月, 30例TOF-APCAs患者在阜外心血管病医院接受介入和Hybrid手术治疗.其中15例患者于TOF根治术前后行APCAs栓塞术治疗(分期Hybrid组),15例采用"一站式"栓塞与根治手术治疗("一站式"Hybrid组);两组患者均在低温体外循环下行常规TOF根治术. 结果 分期Hybrid组患者主动脉造影发现APCAs 19支,对其中15支(78%)侧支血管成功进行栓塞,术中结扎2支, 4例术前行体肺侧支栓塞, 11例为术后行体肺侧支栓塞;5例出现并发症,其中1例因大量肺渗出致呼吸循环衰竭而死亡,其余患者均痊愈出院."一站式"Hybrid组患者主动脉造影发现APCAs 22支,对其中的18支(82%)侧支血管进行了成功栓塞,术中结扎3支,术后1例出现肺渗出,均痊愈出院.分期Hybrid组的住院时间(中位数37 d vs. 22 d,P=0.011)、住院费用(中位数64 101元vs.48 021元,P=0.033)、ICU滞留时间(中位数7.0 d vs.4.7 d,P=0.029)、气管内插管时间(中位数131 h vs.19 h,P=0.009)明显高于"一站式"Hybrid组;两组患者的体外循环时间(P=0.126)、主动脉阻断时间(P=0.174)差异无统计学意义. 结论 相对于传统的分期Hybrid手术,"一站式"Hybrid手术可简化TOF-APCAs患者的手术过程,提高手术成功率和降低医疗费用.
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妊娠滋养细胞疾病间隙连接蛋白CX43的表达
目的:研究间隙连接蛋白(CX43)在妊娠滋养细胞疾病中的组织定位和表达,探讨CX43与妊娠滋养细胞疾病的关系.方法:采用单克隆抗体SP免疫组化技术和核酸原位杂交技术测定110例妊娠滋养细胞疾病中CX43的表达情况.结果:正常早孕绒毛中CX43阳性颗粒定位于细胞滋养层细胞的胞浆和胞膜中,胞核也有表达;合体滋养细胞和间质细胞几乎不表达.GTD中CX43表达明显减弱,有表达也仅局限于细胞膜上,胞核和胞浆中几乎不表达.正常早孕绒毛与妊娠滋养细胞疾病中CX43的表达有显著性意义(P＜0.01),而滋养细胞疾病间则无显著性意义(P＞0.05).结论:CX43表达降低及CJIC功能减弱,可能是导致滋养细胞恶变的因素之一.
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从人肝细胞文库中克隆Fas cDNA
为获取人Fas cDNA,以探索Fas的功能作用,本文采用高滴度D ig- Fas cDNA探针噬菌斑影印杂交筛选技术,从人肝细胞cDNA文库(HL-cDNA)中获得多个F as cDNA克隆.
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鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定
为探讨脊髓背角内影响SG神经元存活和生长的因素,取 500只Hamburger 40期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用SDS-PAGE电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质.以简易细胞钓蛋白带(PBFC)技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率(Rf).将有神经细胞贴附的各Rf范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用NGF、BDNF、NT-3、GDNF兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Western杂交.PBF C结果显示: 在电泳胶Rf 0.10～0.19、0.30～0.35、0.50～0.55、0.60～0.67、0.90～0.94 处发现有多少不等的神经元附着.而Western杂交结果表明,在上述各Rf范围均有强弱不等的多条阳性杂交带.分别为NGF、BDNF、GDNF者;NGF、BDNF、NT-3者;NGF、BDNF、NT-3者 ;NGF、NT-3者、BDNF、NT-3者.提示:40期鸡胚脊髓背角提取液各Rf蛋白带的促神经元存活作用,至少涉及NGF、BDNF、NT-3、GDNF中的两种或三种.
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扩增结核分枝杆菌DNA的微孔杂交比色检测
目的建立简单的杂交方法特异地检测聚合酶链反应(PCR)扩增的结核杆菌DNA.方法用玻璃粉提纯结核分枝杆菌DNA,dUTP-脲DNA糖基化酶(UDG)防污染,用5'端标记生物素的引物进行PCR扩增,5'端带标记的扩增产物与固定在微孔板上特异探针杂交,然后用酶标链霉亲和素进行酶联免疫法检测.结果对100份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的痰标本检测,扩增杂交法检出40份阳性,比抗酸染色法(15/100),培养法(28/100)和PCR电泳法(35/100)检出率高,而50份来自无结核感染者的痰标本,几种方法检查均为阴性.结论该方法可灵敏、特异、客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌,比传统PCR-电泳法优越.
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类固醇受体辅活化子-3基因敲除小鼠的繁殖与鉴定
目的:繁殖并鉴定类固醇受体辅活化子(steroid receptor coactivator,SRC) - 3基因敲除(SRC - 3-/-)小鼠.方法:通过SRC - 3-/-雄性小鼠与杂合子(SRC - 3+/-)雌鼠杂交,繁殖出SRC - 3+/-及SRC - 3-/-两种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR 法进行鉴定,并进一步提取肝、脾组织总蛋白,采用Western blot进行蛋白表型鉴定.结果:成功繁殖并准确鉴定出更多数目的SRC - 3-/-小鼠.SRC - 3+/+小鼠脾组织SRC - 3蛋白表达水平显著高于肝组织,而SRC - 3-/-小鼠的肝、脾组织均未见SRC - 3蛋白表达. 结论:雄性基因敲除小鼠与雌性杂合子杂交是获取大量SRC - 3-/-小鼠的有效途径,PCR法是其子代简单准确的鉴定方法.
关键词： 类固醇受体辅活化子-3 基因敲除 杂交 -
Bentall联合全弓置换及远端血管内支架象鼻手术的护理配合
Bentall联合全弓置换及远端血管内支架象鼻手术又称杂交手术,是治疗急、慢性DeBakey[1]Ⅰ型、Ⅱ型主动脉夹层安全有效的方法,主要适应证为内膜原发破口位于主动脉弓,降部或主动脉弓降部有明显扩张改变的急慢性主动脉夹层病例[2],可以解决大多数患者的疾病痛苦,同时避免了传统象鼻手术的出血、需分期等弊端[3],是一种安全有效的手术方法.我院于2008年11月至2010年1月共行该手术6例,全部成功.现将术中配合体会介绍如下.
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宫颈癌组织和宫颈管粘液中高危型HPV-DNA含量的对比分析
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染已被公认为是引起宫颈癌及癌前病变的主要原因[1],几乎所有的宫颈癌及癌前病变均可检测到高危型HPV感染的存在.高危型HPV检测已成为检测筛查宫颈病变的重要方法之一,第2代杂交捕获技术(HybridCapture-Ⅱ,HC-Ⅱ)是目前唯一经美国FDA认可用于临床的HPV检测技术并已在世界范围内普遍应用.
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雌激素对骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-4mRNA表达影响的实验研究(摘要)
在新骨形成过程中,骨形态发生蛋白(BMP)诱导间充质细胞分化成为成骨类细胞,并能刺激成骨类细胞的功能.BMP是间充质细胞合成分泌的多肽,在体内具有多种功能,在骨折愈合过程中能促进骨和软骨的形成.目前关于BMP基因的表达规律还不十分清楚.笔者采用原位杂交技术,在大鼠胫骨骨折愈合过程中探讨了雌激素对BMP-4基因表达的影响,以了解骨质疏松性骨折的愈合机理.
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HCV基因分型检测Oligo芯片的制备
目的 研制丙型肝炎病毒(HCV)基因分型寡核苷酸(Oligo)芯片并进行杂交验证.方法 分别对BLAST检索所得的HCV 4个亚型型特异序列逐一进行分析,设计长度均一的60mer Oligo探针,用芯片点样仪将设计好的探针打印到玻片上制备成基因芯片.结果 杂交结果显示,Oligo芯片检测HCV各基因亚型的效果较佳.结论 制备的长链Oligo分型芯片检测敏感性、特异性均为满意,为下一步集合更多种肝炎病毒的联合检测与分型打下基础.
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芯片检测HBV DNA聚合酶区基因突变及其临床应用
目的基因芯片方法检测HBV DNA聚合酶区基因突变,并初步探讨其临床应用价值.方法PCR扩增HBV DNA P区nt455～796片断.与预制的基因芯片杂交,运用激光共聚焦荧光检测系统扫描芯片分析基因突变类型.结果芯片检测HBV DNA P区变异具有较好的特异性和准确性,初步应用显示:慢性乙肝组aa528/552突变率分别为8.6%和9.6%,而无症状肝炎组扣重症肝炎组突变率均为0;拉米夫定治疗组与非拉米夫定治疗组比较,aa528突变率分别为10.5%和8.1%,aa552突变率分别为15.8%和8.1%.结论研究显示HBV DNA聚合酶区基因多态性分布与病情轻重无关,而与病程慢性迁延有关;拉米夫定在耐药突变中发挥了重要作用;基因芯片检测乙肝患者耐药基因有着十分重要的应用价值.
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胸腹主动脉瘤腔内介入治疗的护理
胸腹主动脉瘤是一类凶险的血管疾病,处理难度较大,是心胸外科和血管外科医生面临的一个挑战.传统的开放手术方式采用胸腹联合切口,以多分叉人造血管进行主动脉置换并重建内脏动脉,具有较高的术后并发症和死亡率.随着血管腔内技术的发展,出现了以杂交手术和开窗支架为代表的处理胸腹主动脉瘤的新技术.杂交手术是在主动脉瘤覆膜支架隔绝前采用开腹手术以人造血管重建内脏动脉,将内脏动脉开口移位于腹主动脉远端或一侧髂动脉,获得足够的覆膜支架的远端锚定区,然后用覆膜支架隔绝全部动脉瘤,避免了传统手术需要开胸、体外循环,且较长血管阻断时间和巨大创伤的缺点,降低了术后并发症.开窗支架技术根据患者的情况定制个体化的覆膜支架,隔绝主动脉瘤的同时采用血管腔内技术重建内脏动脉,属于完全血管腔内介入技术,但是因为需要定制支架,所以此项技术只能在较少的中心开展.
