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牛磺胆酸钠诱导的急性坏死性胰腺炎大鼠基因表达谱变化
基因芯片技术是高通量的差异基因表达研究手段.通过杂交后的生物信息学分析有助于全面了解复杂基因和信号转导通路在急性坏死性胰腺炎(ANP)中的作用.因此,利用全基因组表达谱方法分析ANP基因的变化较单个基因的研究具有理论上的优势.李磊等[1]曾报道,腹腔注射雨蛙肽诱导的急性水肿性胰腺炎(AEP)基因表达谱的变化,但尚未见类似临床重症急性胰腺炎(SAP)的ANP模型的胰腺组织基因表达谱的报道.故本实验观察ANP大鼠胰腺组织基因表达谱的变化.
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青少年或成人主动脉缩窄临床特征和治疗分析
目的 探讨青少年或成人主动脉缩窄的临床特征及治疗策略.方法 北京阜外医院血管外科中心从2010年5月至2013年9月共治疗青少年或成人主动脉缩窄37例,男30例,平均年龄26.97±10.76岁.手术方法主要有缩窄段切除+人工血管替换术、介入球囊扩张支架植入术、人工血管旁路移植术和杂交技术.结果 手术均成功完成,住院期间无死亡病例,发生1例双下肢轻瘫.无二次开胸止血、脑卒中、心衰等并发症发生.随访3-24个月,无死亡,无支架相关并发症发生.结论 青少年或成人主动脉缩窄病变复杂,合并症多,其治疗需要根据患者的实际情况制定个体化治疗方案;若需同期手术处理的其它心血管疾病,杂交技术不失为一个良好的选择.
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主动脉夹层术式选择在预防脑部并发症中的意义
目的:总结21例不同类型主动脉夹层术式选择,预防脑部并发症。11例破口夹层累及升主动脉行Bentall's手术。4例破口在升主动脉夹层累及弓部行四分叉人工血管置换(左颈总动脉吻合长7.6分钟)。3例Stanford B型夹层行颈总动脉搭桥+腔内隔绝治疗,3例Stanford A型夹层行体外循环下“杂交”全弓置换术。
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一期杂交手术与一期体外旁路手术治疗主动脉缩窄联合心脏病变临床结果对比分析
目的:本研究通过对比分析一期杂交手术与一期体外旁路手术在治疗主动脉缩窄联合心脏病变的早期临床结果,阐明杂交手术在此类疾病治疗中的优势。
方法:回顾性分析阜外医院2000年3月~2012年8月37例主动脉缩窄联合其他心脏病变患者的临床资料,其中一期体外旁路手术治疗组22例(8例患者行升主动脉-胸主动脉搭桥术,14例患者行升主动脉-腹主动脉搭桥术),杂交手术治疗组15例。两组联合心脏病变手术治疗方式包括:Bentall手术、主动脉瓣置换术(AVR)、二尖瓣置换术(MVR)、室间隔缺损修补术、冠状动脉旁路移植术(CABG)。 -
杂交手术治疗主动脉弓部瘤的中期疗效
目的:探讨杂交手术治疗主动脉弓部瘤的中期疗效。
方法:将本中心2009-09到2014-1018例主动脉弓部瘤行杂交手术的患者纳入研究对象。男14例,女4例,年龄41~77岁,平均年龄(63±11)岁。吸烟史6例,合并冠心病病史7例,高血压14例,糖尿病3例,高脂血症6例,陈旧性脑卒中史2例,房颤1例,1例曾因B型夹层行主动脉支架植入术,1例左侧椎动脉起自主动脉弓。所有患者均为全麻后正中开胸行手术治疗。需升主动脉置换者经腋动脉和(或)股动脉行动脉插管,右心房插管行静脉引流建立体外循环,四分支人工血管主干与升主动脉端端吻合,结扎头臂动脉近端,人工血管分支与头臂动脉远端端端吻合。无需升主动脉置换者,将人工血管主干与升主动脉端侧吻合,结扎头臂动脉近端,人工血管分支与头臂动脉远端端端吻合。经人工血管分支植入(6例)或股动脉植入(12例)覆膜支架。观察手术死亡率、并发症发生率和中期生存率。 -
以“杂交手术室为中心”的主动脉疾病个体化治疗(附247例病例分析)
目的:探讨杂交手术室在主动脉疾病个体化治疗中的作用。
方法:回顾性分析杂交手术室2013-01至2014-12进行主动脉疾病手术247例,其中主动脉夹层或穿透性溃疡合并壁内血肿216例(Stanford A型病变35例,复杂B型病变88例,简单B型病变93例),主动脉瘤28例,复合病变3例。 -
心血管杂交手术室的设计理念及实践
伴随外科治疗技术的微创化和医学影像技术的发展,心血管疾病的诊疗技术逐渐向融合外科与介入技术优势的“杂交手术”转变。这就需要建设一种多学科联合、兼顾常规手术室和介入手术室优势、能够同时进行常规外科手术和介入手术的一站式手术室--“杂交手术室”。阜外心血管病医院在2007年建成亚洲第一家心血管杂交手术室。建设过程中,依据功能需求和流程规范,从平面布局、建筑设计、装修标准等各个方面进行了综合考虑和全新设计。
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基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1在肺间质纤维化实验中的表达
细胞外基质(ECM)合成和降解失衡是引起ECM积聚导致肺间质纤维化的重要病理生理因素。基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)是调节ECM降解的重要体系。我们以博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠为模型,观察肺间质纤维化发生过程中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、 MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的变化,探讨MMP-2、9和TIMP-1在肺间质纤维化发病中的作用。 材料与方法 (1) 动物模型制备:雌性Wistar大鼠60只(沈阳军区医学专科学校动物实验中心提供),体重(215±20)g,随机分为:模型组、对照组,每组各30只。模型组吸入乙醚麻醉后,颈前暴露气管,一次性气管内注入0.4%博莱霉素A5(天津华北制药厂)生理盐水注射液(5 mg/kg),制成动物模型。然后分别于第1、3、7、14、28天处死6只大鼠,心脏取血。对照组同样方法注入等量生理盐水,同样天数各处死6只。(2)酶谱分析:根据刘煜等[1]介绍的方法,对标本进行MMPs酶谱分析。(3) Northern Blot:取5 μg大鼠肺组织总RNA,行RT-PCR,引物序列为:MMP-2:5′-AGTGGGACA AGAATCAGATCACAT-3′(上游), 5′-TCGGTGGTACAGCTGT TGTAAGAG(下游);MMP-9:5′-AAGCAGACATTGTCAT CCAGTTTG-3(上游),5′-GACAGAAACCCCACTTCTTGTCAG-3′(下游);TIMP-1:5′-CTCATCGCGGGCCGTTTAAG-3(上游),5′-GAAGGCTTCGGGTCATCGAG-3′(下游),geneclean纯化回收PCR产物制备探针,随机引物法行α-32P-dCTP标记。20 μg RNA 样品经甲醛变性电泳、转入尼龙膜、65 ℃预杂交1~3 h、65 ℃杂交18 h,常规洗膜及放射自显影。
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基因芯片技术及其在结核分支杆菌研究中的应用
一、基因芯片技术概述基因芯片(又称DNA芯片)始创于90年代初,首先由美国Affymetrix公司的Fodor博士提出并开始基因芯片技术的研究.它是目前分子生物学前沿的方法,是物理学、微电子学与生命科学交叉综合的高新技术,是近年来发展起来的进行大规模遗传多态性检测的新方法[1].基因芯片以其基片的不同分为无机基片和有机合成物基片,前者包括半导体硅片和玻璃片,其上的探针主要以原位聚合的方法合成;而后者的探针是预先合成后通过特殊的微量点样装置或仅器滴加到基片上去[2].基因芯片的基本原理是将多种探针固定在玻璃等基片上,然后与待测样本的DNA或RNA进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息.由于该法同时将大量探针固定于支持物上,所以一次可以对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了传统核酸印迹技术的操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足[3].
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机器人微创旁路移植与雷帕霉素洗脱支架分站式杂交手术治疗老年急性冠脉综合征1例报道
1 临床资料患者女性,69岁,活动后胸闷胸痛3年,加重3d,于2005年饱餐后快步行走或上2层楼出现胸闷胸痛,持续10min左右,休息或含服硝酸甘油缓解.3d前上述症状加重,轻微活动就能诱发,伴有恶心和出汗,硝酸甘油不能缓解,经急诊处理后入院.无高血压病、糖尿病史,无吸烟饮酒史.
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抑制性消减杂交筛选细胞衰老相关基因
目的研究人胚肺二倍体成纤维细胞2BS在衰老过程中的基因表达变化. 方法对年轻2BS细胞[低于30 PD(population doubling)]和衰老2BS细胞(高于55 PD)样品进行双向抑制性消减杂交,并筛选分析. 结果构建了2个抑制性消减文库,分别代表年轻细胞和衰老细胞高表达基因,点杂交筛选获得30个差异表达片断(差异比例大于2)包含多种细胞功能的变化.部分差异基因表达在新生儿脐带血和老年人外周血样中差异也有显著性. 结论首次报道了RBM4、FBXO7、TOM1等基因在2BS细胞衰老时的表达变化,并表明体外培养细胞与个体的衰老变化过程有一定相似性.
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分子病理学技术应用原理和适用范围
1 Southern杂交:Southern杂交是1975年由Southem提出,并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点,已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的常用手段之一[1]。Southern杂交的基本方法是,从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化,通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段,然后使这些DNA片段在原位发生变性,并以凝胶转移到另一种固相支持物如硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,同时保持各个DNA片段的相对位置不变。再用已标记的(通常为放射性同位素标记,也可用非放射性标记)DNA或RNA探针与固着于固相支持物上的DNA杂交。经放射自显影或化学显色的方法确定与探针互补的电泳条带的位置,从而达到检测和分析的目的。
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一站式杂交技术在治疗复杂型主动脉缩窄中的应用
目的探讨一站式杂交技术( one-stage hybrid technique )治疗合并其他心血管疾病的复杂型主动脉缩窄的临床应用价值。方法回顾性分析2011年1月至2013年9月阜外医院血管外科中心收治的复杂型主动脉缩窄15例,均为男性,平均(26.93±9.84)岁(13~46岁)。全部患者均在杂交手术室一期完成手术,先经股动脉置入球囊扩张支架,然后正中开胸,常规体外循环下行Bentall等手术。结果15例手术均成功完成,术后上下肢压差(8.67±4.81) mm Hg。同期外科手术包括Bentall 手术7例,主动脉瓣置换术4例,单纯二尖瓣置换术1例,二尖瓣成形术2例,室间隔缺损修补1例。体外循环时间(67.38±19.67) min,支架长度(37.29±3.34)mm,ICU时间(42.35±24.89)h。随访3~24个月,院内及随访无死亡病例,无支架移位等并发症。结论一站式杂交技术治疗复杂型主动脉缩窄安全、有效,住院效果满意,早中期随访结果良好。由于样本量较少,随访时间较短,尚需进一步随访评估远期疗效。
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抗骨质疏松药XW630对成骨细胞碱性磷酸酶mRNA表达的影响
目的研究新设计的抗骨质疏松药物XW630对成骨细胞碱性磷酸酶基因表达的影响,为其治疗骨代谢性疾病提供理论和实验依据.方法以成骨细胞MC3T3-E1为体外实验模型,用含有10-6mol/L浓度的XW630,雌酚酮,四环素及四环素加雌酚酮的细胞培养液DMEM培养细胞,24 h和72 h提取细胞总RNA并与碱性磷酸酶cDNA进行Northern杂交.结果 XW630对成骨细胞MC3T3-E1合成和分泌碱性磷酸酶具有明显的促进作用.结论 XW630具有明显的促进成骨作用.
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胸腹主动脉瘤治疗方式选择
胸腹主动脉瘤是指累及到腹腔干、肠系膜上动脉及肾动脉的腹主动脉瘤。胸腹主动脉瘤的分型采用Safi修订的Crawford分型[1]:Ⅰ型胸腹主动脉瘤指动脉瘤从左锁骨下动脉开口远端扩展至肾动脉以上;Ⅱ型指从左锁骨下动脉远端扩展至肾动脉以下;Ⅲ型指从第6肋间隙至肾动脉平面以下;Ⅳ型指从第12肋间隙至肾动脉以下;V型指从第6肋间隙至肾动脉以上。目前,治疗胸腹主动脉瘤的方式主要有三种:传统开放手术、杂交手术、开窗和分支型覆膜支架腔内修复术。
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累及内脏动脉的腹主动脉瘤杂交手术肯定比开放手术获益大吗?
累及内脏动脉的腹主动脉瘤解剖形态与Crawford法分型的Ⅳ型胸腹主动脉瘤相似,是指病变累及全部腹主动脉,从膈肌处主动脉至腹主动脉分叉处,传统手术方法与Ⅳ型胸腹主动脉瘤相同。1991年,Parodi等[1]应用覆膜支架成功地修复了肾下腹主动脉瘤,从此主动脉疾病的治疗方式发生了巨大的变化,血管腔内微创方式在肾下腹主动脉瘤治疗上逐渐替代了传统手术。然而,累及内脏动脉的腹主动脉瘤由于需要重建内脏动脉,其手术时间长、创伤大及开放手术死亡率高,是血管外科治疗困难的疾病之一,因此血管外科医师们也在探索应用腔内技术治疗此病。
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胸腹主动脉瘤的治疗
胸腹主动脉瘤(thoracoabdominal aortic aneu-rysm,TAAA)是一种累及降主动脉及腹主动脉的动脉瘤样变,因其死亡率高及手术难度大而成为血管外科治疗难点之一,其与降主动脉瘤和腹主动脉瘤主要区别为TAAA累及内脏动脉,手术治疗需要胸腹联合切口,介入手术也不能简单使用直型覆膜支架治疗,因而,治疗的手术方式及技巧与降主动脉瘤和腹主动脉瘤截然不同。TAAA自然病程死亡率高,传统的治疗方式为开放手术。而杂交手术,开窗支架、分支型支架及多层裸支架等介入治疗方法的应用使更微创的方式治疗TAAA成为可能。
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应用血管腔内技术治疗Stanford A型主动脉夹层现状分析
主动脉夹层病变累及升主动脉者称为Stanford A型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection, TAAD)。TAAD治疗方法主要有传统的开放手术,包括单纯人工血管置换术、Wheat 术及Bentall 术等,这些手术必须在深低温麻醉和体外循环等辅助下进行,而且操作复杂,创伤较大,同时术后并发症发生率和死亡率均较高[1]。为此,临床上逐渐发展一种新的治疗技术,即血管腔内治疗技术,主要包括杂交手术及完全血管腔内修复术[2]。
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血管外科专家-刘长建教授
刘长建教授从事临床诊疗、教学和科研工作30余年,1989年于江苏省内首先创建独立血管外科专科。在血管外科疾病临床诊治,特别是主动脉夹层、主动脉瘤、颈动脉硬化狭窄、下肢动脉硬化闭塞症、内脏动脉瘤综合治疗等领域进行了开创性研究,在国内首先完成颈动脉外翻剥脱术治疗颈动脉硬化狭窄,在省内率先行“腹主动脉瘤腔内修复术”、“主动脉夹层腔内修复术”、“胸腹主动脉疾病杂交手术”等高难度手术,强调杂交手术对于血管外科疾病诊治的重要性,治愈了大量复杂疑难病例,在血管疾病的综合治疗方面取得显著成绩。刘长建教授适时组建了江苏省血管外科学组并担任组长,在其带领下江苏省及周边省市血管外科蓬勃发展。
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肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义
目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库. 方法分别从肾癌组织和正常肾组织提取poly A+ RNA,合成双链cDNA,经Rsa I酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析. 结果文库共包含414个阳性克隆,随机挑取265个阳性克隆提取质粒并酶切分析,其中246个克隆有插入片段.将其中40个克隆进行测序,表明1个克隆为新基因片段,其余39个源于35个已知基因. 结论该消减杂交文库质量可靠,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据.