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微创手术精准导航
随着医学影像设备、介入治疗器械、影像技术和介入新技术的不断发展,使外科技术微创化,内科技术手术化成为了当今医学发展一大趋势,治疗方法也从以往单一的外科手术向血管腔内治疗,进而向融合了腔内和外科技术优势的方向转变,并通过医学影像设备将两者有机结合在一起.一站式杂交手术(one-stop hybrid procedure)是同时用两类或两类以上的技术处理同一病变的新技术[1-2],虽然杂交手术在20世纪60年代就已出现,但仅限于血管外科技术和血管腔内技术的结合,应用于血管切开取栓术中.
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中国经皮冠状动脉介入治疗指南2012(简本)
前言冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)是当今世界威胁人类健康重要的心血管疾病之一,其主要病理生理机制是冠状动脉粥样硬化狭窄或阻塞所致的心肌缺血坏死.心肌血运重建治疗是指以冠状动脉介入或外科手术方法解除冠状动脉狭窄、重建血管,恢复心肌灌注,目前主要的方法包括经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、冠状动脉旁路移植术(CABG)和二者结合的杂交手术治疗.
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人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型
目的建立聚合酶链反应(PCR)产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒(HPV)型别鉴定.方法利用HPV通用引物介导PCR(GP-PCR)扩增靶DNA,然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物(HRP-PEI-QI),与预先包被在微孔板上的HPV寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测.结果 HPV各型之间无交叉杂交;杂交灵敏度可达13~76个病毒DNA拷贝,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测高10倍;该法重复性好,阳性孔批内CV为6.34%,批间CV为10.53%,阴性孔批内CV为1%,批间CV为5.79%;而且杂交影响因素较少.结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便,无放射性和E.B.染料污染,杂交时间短、仪器读取结果,便于大量常规临床样本定性或定量检测.
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微孔杂交快速检测黄热病及乙型脑炎病毒方法的建立
聚合酶链反应(PCR)技术已广泛应用于疾病诊断[1],但由于临床标本复杂,常出现非特异性扩增条带或电泳拖尾现象,给结果的判定带来困难.为了探讨更加敏感、特异的流行性乙型脑炎病毒(JEV,乙脑)及黄热病病毒(YF)快速检测方法,我们分别设计了黄热及乙脑病毒的特异性包被探针及检测探针,建立了快速检测YF及乙脑病毒的微孔杂交(PCR-ELISA)方法.
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丙型肝炎病毒1b亚型诊断芯片的制备与实验室研究
目的建立一种简单有效的制备、筛选丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型cDNA基因芯片探针的技术.方法应用cDNA文库法制备芯片探针,限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b全长cDNA,所得的酶切片段在72℃补平加单个碱基A,然后与pMD18-T载体连接,AT克隆,用载体引物进行PCR初步鉴定,并测序.将筛选出的片段打印在氨基修饰的玻片上制备成cDNA芯片并进行杂交验证分析.样品标记采用限制性显示PCR(Restriction Display PCR RD-PCR)技术.结果应用cDNA文库法,共得到22大小相对一致(250~750bp)的基因片段,序列分析表明,均属于HCV-1b基因,可以作为诊断芯片探针;芯片杂交结果显示,样品和诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳.结论用cDNA文库法收集片段是一种快速、简便制备芯片探针的实用方法;制备的诊断芯片可以用于检测HCV-1b RNA,具有敏感、检测结果较为可靠的优点.
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用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对异烟肼的耐药性
本研究采取的方法是针对耐药性基因突变情况设计相应的探针,然后将合成好的寡核苷酸探针点阵,并固定于玻璃片表面制作DNA芯片,通过杂交的方法对结核分枝杆菌(TB)异烟肼耐药性进行检测.报告如下.一、材料与方法1.TB菌株均由上海市肺科医院提供,40株耐异烟肼菌株,5株异烟肼敏感株,1株标准株(敏感株H37RV),均已通过常规的耐药性检测.
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一致-简并杂交寡核苷酸引物设计用于未知病原微生物检测的进展
近年研究发现,暴发的"非典型性肺炎",禽流感及四川发生的猪链球菌感染等要么是已发现的病原微生物家族中的新成员,要么是原来不感染人的动物病原体.因此,快速、及时、准确定性检测这些病原体,对防治疾病具有重要意义.
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多重耐药微生物的实验室检测新技术
以核酸体外放大为基础,直接检测与微生物耐药有关基因及突变的实验室技术近年来快速崛起.快速、准确的分子生物学检测方法 将在全球的多重耐药微生物防控中起决定性作用.笔者对多重PCR技术结合溶解曲线分析、反向线性杂交技术、基因芯片技术、飞行时间质谱技术及现场即时分子检测技术及其在微生物耐药检测中的应用进行综述.
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肝硬变大鼠肝部分切除术后残肝TGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s mRNA的变化
目的:探讨肝硬变状态下肝部分切除术后肝细胞和KCTGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s的mRNA表达,进一步阐明KC在肝细胞再生中的作用.方法:复制我们建立的大鼠肝硬变肝切除模型,分离肝细胞和KC,提取RNA,采用Northern杂交.结果:KC其HGF mRNA表达较肝细胞为早,在术后6 h点达到高峰.但肝细胞TGF-αmRNA表达含量明显高于KC的表达.肝细胞IGFBP-1s mRNA的表达含量低,术后6 h点相对较高.KCIGFBP-1s mRNA未见表达.肝细胞PCNA mRNA的表达在术后6 h其含量达到低点,明显受抑制.结论:HGF和TGF-αmRNA表达与肝硬变大鼠的肝细胞再生密切相关,而TGF-α是肝细胞再生中重要的物质.IGFBP-1s mRNA表达降低反应了肝硬变大鼠术后肝细胞代谢明显受损,而PCNA mRNA表达可提示肝细胞增生能力.
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双歧杆菌定量分析技术研究进展
传统细菌培养计数法是依据细菌表型特征来对双歧杆菌进行鉴别计数的,MTPY和BSM培养基是经常使用的双歧杆菌培养基.近年来包括点杂交、荧光原位杂交、荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术在内的以核糖体及其编码基因核酸序列为鉴别基础的分子生物学技术被广泛用于双歧杆菌的定量定性分析,其中荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术是目前较为理想的方法.
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乙型肝炎病毒前-X在大肠杆菌中的表达和纯化
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因,将前-X克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.结果:成功扩增获得HBV的前-X编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-PAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr27000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-X蛋白,对于研究HBV的前-X蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.
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结石性胆囊炎及胆囊腺瘤性息肉黏膜组织MUC1粘蛋白的检测
目的:检测胆囊息肉、胆固醇结石、胆红素结石时胆囊黏膜MUC1粘蛋白的(半)定量表达及规律.方法:采用Western-blot法:称取液氮保存胆囊黏膜组织100--200mg加入组织裂解液lml匀浆、离心、去上清、分装、测蛋白含量、电泳、电转移、杂交、化学发光试剂检测.结果:ODu结果分别为34.29±6.06(对照组),142.11±38.49(胆红素结石组),39.72±11.46(胆固醇结石组),174.59±41.6(胆囊息肉组).结论:对照组胆囊、结石性胆囊及腺瘤性息肉胆囊有MUC1粘蛋白的表达,且表达量逐渐增高.正常胆囊-结石性胆囊炎-胆囊息肉MUC1粘蛋白的表达是上调表达;用Western-Blot可以较好地检测各种胆囊组织黏膜MUCl粘蛋白的对比含量和带形分布,不同疾病粘蛋白含量不同,带形分布不一样,相同疾病标本粘蛋白含量也不尽相同.
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苯丙素甙对MKN45细胞端粒酶活性的抑制机制
目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用.方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析.结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg@L-1)抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性.用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1 kb)、G1亚u倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08).结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标.
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乙型肝炎病毒前-前-S蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-前-S基因,将前-前-S克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.结果:成功扩增获得HBV的前-前-S编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-pAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr28 000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-前-S蛋白,对于研究HBV的前-前-S蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.
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乳杆菌细胞壁表面黏附相关蛋白的提取和鉴定
目的:提取和鉴定参与乳杆菌黏附肠上皮样细胞以及粘蛋白受体的细胞壁表面蛋白.方法:采用HRP标记的粘蛋白受体以及NHS-Biotin标记的HT-29细胞与提取的乳杆菌JCM1081的细胞壁表面蛋白进行蛋白印迹,对参与黏附的细胞壁表面蛋白进行初步鉴定.结果:Western blot结果显示Mr29000和Mr14000的两种细胞壁表面蛋白在与粘蛋白受体和HT-29细胞的杂交中都出现了强阳性.结论:存在于乳杆菌JCM1081细胞壁表面的Mr29 000和Mr14 000的两种蛋白能够特异性识别粘蛋白受体和细胞膜受体,并与之结合,为乳杆菌JCM1081的黏附相关蛋白.
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肝癌组织中螺杆菌16S rRNA基因的检测
目的:探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关.方法:选取经病理诊断的肝癌组织38例,肝硬化15例,慢性肝炎12例,肝良性肿瘤15例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16Sr RNA检测螺杆菌,扩增产物经Southern杂交证实,并对部分标本的PCR产物进行测序及同源比较.阳性者再扩增幽门螺杆菌(Hpylori)的特异基因(26Ku蛋白)和相关功能基因(cagA,vacA,glmM,rps4)来验证是否为该菌.结果:52.6%(20/38)的肝癌组织中发现螺杆菌存在,而非肝癌组无一例阳性(P<0.01).所有PCR产物用Southern杂交得到证实.10例测序及同源比较显示,肝癌组织中的螺杆菌16SrRNA序列与Hpylori的16S rRNA序列有99-100%的同源性.阳性标本中26ku基因大部分亦阳性(14/20),但仅3例扩增出cagA基因,4例扩增出glmM基因,一直未扩增出vacA基因和rps4基因.结论:肝癌组织中存在螺杆菌感染,他与肝癌的发生可能存在某种联系.
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基因芯片法筛选萎缩性胃炎相关的差异表达基因
目的:建立大鼠萎缩性胃炎模型,用高密度基因芯片筛选萎缩性胃炎相关的差异表达基因.方法:采用热盐水、盐水、热水灌胃的方法建立大鼠萎缩性胃炎模型,并设立正常对照组、正常喂养组作为对照.提取标本的总RNA,定量后并反转录成cDNA,萎缩性胃炎标本标记上Cy5,正常对照标本标记上Cy3,与含有8248个大鼠基因的cDNA芯片进行杂交,常规洗片,扫描,分析杂交结果.结果:热盐水组灌胃12 wk的大鼠经病理诊断已存在萎缩性胃炎的特征,盐水、热水组灌胃的大鼠在24 wk时经病理诊断也存在萎缩性胃炎的特征;热盐水组与正常对照组之间的差异基因共有436个,145个基因在萎缩性病变组织中呈高表达,291个基因在正常组织中呈高表达;热水组与正常对照组之间的差异表达基因共有398个,98个基因在萎缩性病变组织中呈高表达,300个基因在正常组织中呈高表达;热盐水组与盐水组之间差异表达基因共有36个,其中23个在热盐水组中呈高表达,13个基因在盐水对照组中呈高表达.结论:成功地建立了大鼠萎缩性胃炎的模型;筛选出了与热盐水、盐水、热水诱发的萎缩性胃炎发生有关的差异表达基因.
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胃癌细胞nm23H1基因表达与体内外侵袭力的关系
目的:探讨nm23H1基因与胃癌细胞体内外侵袭力的关系.方法:采用Boyden小室法测定四种胃癌细胞系MKN1、MKN45、GT3TKB、BGC823的体外侵袭力,Northern印记杂交,RT-PCR及免疫组化技术检测胃癌组织、四种胃癌细胞系的nm23H1 mRNA及蛋白表达水平.结果:胃癌细胞体外侵袭力高低的顺序依次为MKN45高(33.1±5.2,与其他三种细胞系相比P<0.01);BGC823(15.8±2.7),MKN1(14.1±4.5)次之(二者无显著差异,P>0.05),GT3TKB低(6.3±2.5,与其他三种细胞系相比P<0.01).nm23H1基因表达与胃癌细胞体内侵袭能力呈反比关系,nm23m基因表达与MKN45,BGC823,GT3TKB细胞体外侵袭力也呈反比关系,但与MKN1细胞体外侵袭力无明显关系.结论:nm23H1表达在评价胃癌细胞体内外侵袭力方面具有重要价值.
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螺杆菌感染与肝癌关系的研究
目的:已有研究发现几种螺杆菌与某些动物肝脏疾病相关,本研究目的旨在探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关.方法:选取经病理诊断的肝癌患者15例作为研究对象,非肝癌患者13例作对照.用聚合酶链反应(PCR)扩增肝组织螺杆菌16S rRNA来检测螺杆菌,扩增产物用Southem杂交证实,并进行测序及同源比较.结果:60%(9/15)肝癌患者肝组织中发现螺杆菌存在,而非肝癌组无1例阳性(P<0.01);所有PCR阳性产物用Southern杂交得到证实;4例测序及同源比较显示,肝癌组织中的螺杆菌与幽门螺杆菌有99%的同源性.结论:肝癌患者肝组织存在螺杆菌感染,他与肝癌的发生可能存在某种联系.其是肝癌的致病因素抑或伴发感染,需进一步的研究确定.由于是扩增16SrRNA的部分序列,故目前仍不能明确是哪一种螺杆菌.
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糖友吃草莓要明白七件事
草莓鲜嫩多汁、营养丰富、甘酸宜人、含糖量低,适宜糖尿病患者选择.近正是草莓上市的季节,但是消费者在草莓的选择和食用方面有不少误区,下面让我们来了解一下.到底是小的好还是大的好?现在个头大、长得好看的草莓经常遭受冷落,不少人买草莓都喜欢买小的,很多人认为大草莓被使用了膨大剂,食用不安全,而且味道也没有小草莓浓郁.其实这种认识比较片面,草莓有很多品种,个头大小和草莓本身的品种关系密切,有些草莓天生就大个,通过杂交也能培育出大个草莓,这在欧美的草莓市场很常见.此外,草莓的植株如果适当进行疏花疏果,也可以结出相对大的草莓,这样的较大个草莓也与使用膨大剂无关.