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促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A对肿瘤细胞的靶向性作用
目的:探讨重组促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A(Luteinizing hormone releasing hormone-pseudomonmexotoxin A,LHRH-PE40)与肿瘤细胞和正常细胞膜表面受体特异性结合的差异.方法:常规培养Hep-2、A549及LO2细胞,通过细胞毒性试验观察LHRH-PE4.0对3种细胞的形态学影响及生长抑制作用；通过LHRH-Pe40与LHRH受体的结合试验及LHRH对LHRH-PE40竞争性抑制试验,测定LHRH-PE40在不同J细胞中膜表面受体结合的差异.结果:LHRH-PE40对Hep-2、A549细胞具有明显的杀伤作用,细胞收缩变圆,色暗,折光性差,裂解死亡,杀伤作用随LHRH-PE40浓度的增大而增强,IC50值分别为0.45和0.19 μmol/L,而对LO2细胞毒性作用较弱；LHRH-PE40可与Hep-2和A549细胞受体结合密切,A490值较高,与两种细胞的结合力随着时间的延长而增加,与LO2细胞结合较弱；LHRH可以竞争性拮抗抑制LHRH-PE40与Hep-2、A549细胞的结合,结合力随着LHRH浓度的增高而递减,对LHRH-PE40和LO2细胞结合影响较小.结论:LHRH-PE40可特异性结合癌细胞表面LHRH受体,从而发挥对肿瘤细胞的靶向杀伤作用.
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靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性
目的 原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应.方法 从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性.经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性.结果 重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18000,诱导5h表达量高,约占菌体总蛋白的15％,主要以包涵体形式表达；重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合；纯化的重组蛋白纯度约为90％,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应.结论 成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础.
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抗原与免疫刺激复合物结合方法研究
近年来,一些利用通用表达系统表达抗原,并将其耦联于佐剂系统的研究屡有报道.本文介绍了应用基因融合技术实现重组抗原与免疫刺激复合物的联合,并对一系列研究结果进行了阐述.
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治疗性抗体Fc融合蛋白药物研究进展
抗体融合蛋白已成为生物工程治疗药物中成功的一员.其中的Fc融合蛋白,是一类通过基因工程平台技术将抗体的Fc部分与药物的活性成分融合表达而产生的蛋白.虽然构建Fc融合蛋白的初衷是为了延长其半衰期,但大量研究表明,Fc部分也参与免疫调节过程,引起一些免疫效应.随着生物治疗药物研究的飞速发展,Fc融合蛋白药物研究也取得了很大进展.此文从Fc融合蛋白的设计目的、设计原理、作用机理以及质量控制方面,对治疗性Fc融合蛋白药物的研究进展做一介绍.
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融合蛋白技术在生物医药领域中的应用
在治疗性药物的研发中,效应分子与人免疫球蛋白IgG1 Fc片段或人血清白蛋白形成的融合蛋白疗效不变,但体内半衰期明显延长、药物耐受性增加、副作用减少.在疫苗研发中,抗原分子与毒素分子或Fc形成的融合蛋白是很好的新型疫苗,并能激发细胞免疫.
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一种减少包涵体变复性过程中产生的蛋白多聚体的方法
目的 优化蛋白制备工艺,减少原核表达包涵体变复性产生的多聚体.方法 根据原始工艺进行菌体培养、破壁以及包涵体收集和变复性.然后在包涵体复性液中直接添加硫酸铵固体(优化工艺).离心去沉淀,收集上清液制备蛋白粗制品.对原始工艺和优化工艺制备的蛋白粗制品进行凝胶蛋白结合量、蛋白回收率、纯化蛋白量以及细胞杀伤活性比较.结果 与原始工艺相比,增加30％ 饱和度硫酸铵沉淀步骤的优化工艺可使1 ml层析凝胶的蛋白结合量由1 mg提高至20 mg,单位体积发酵液蛋白回收率由10％ 增加至90％,400 ml发酵液所得的纯化蛋白量由3 mg提升至15 mg.蛋白粗制品的平均半数抑制浓度从0.07799μg/ml降至0.04569μg/ml.结论 在包涵体复性液中添加硫酸铵可有效减少多聚体.
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基于中国仓鼠卵巢细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺的优化
目的 优化基于中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺.方法 对于上游细胞培养工艺,先在摇瓶中分别对培养基配比和流加培养方案进行优化,再将优化工艺放大到生物反应器规模并确认其可行性.对于下游蛋白纯化工艺,分别对A蛋白亲和层析的洗脱条件和阴离子交换层析的平衡条件进行优化.结果 对于上游细胞培养工艺,以种子培养基∶基础培养基(CD OptiCHO)∶基础培养基(CDM4Mab)为2∶1∶1的配比配制培养基,并以3、6和9d补料的流加培养方案进行细胞培养,可获得理想的细胞密度和活率,且成本较低.对于下游蛋白纯化工艺,以pH3.3的洗脱液进行A蛋白亲和层析纯化时,Fc融合蛋白的回收率为94.7％,纯度为98.64％;以pH5.0～pH5.5的平衡液进行阴离子交换层析纯化时,Fc融合蛋白的回收率达到98％以上、纯度达到99％.结论 基于CHO细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺的上游细胞培养和下游蛋白纯化工艺得到成功优化,这为此类抗体药物制备工艺的优化提供了思路.
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重组人肝细胞生长因子激活因子质粒的构建、表达和功能研究
背景:肝细胞生长因子激活因子(HGFA)是活化单链前体HGF(pro-HGF)成为有生物学功能的HGF的关键酶,在受损组织器官的修复和再生中发挥重要作用.目的:制备rhHGFA-Fc融合蛋白并证实其具有肝细胞保护功能.方法:采用基因重组技术构建表达人源化HGFA成熟肽段与人IgG Fc段融合蛋白的载体.以脂质体介导法转染人胚肾293细胞.纯化293细胞表达产物,以蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白(rhHGFA-Fc融合蛋白)及其对pro-HGF的酶切活性,以流式细胞术检测融合蛋白介导的肝细胞凋亡抑制作用.结果:SDS-PAGE显示转染重组质粒的293细胞总蛋白纯化产物在62 kDa处显示单一蛋白条带.蛋白质印迹法结果显示纯化的rhHGFA-Fc融合蛋白能与抗hHGFA单克隆抗体发生特异性反应,并将pro-HGF酶切为α链和β链,酶切活性呈剂量依赖性,半效酶切活性(IC50)为8.22 nmol/L;流式细胞术结果显示融合蛋白通过激活pro-HGF发挥其抑制肝细胞凋亡的作用.结论:293细胞表达的rhHGFA-Fc融合蛋白纯度高、酶切活性强,可高效激活pro-HGF,对于肝组织严重损伤,特别是肝硬化基础上肝损伤的治疗具有潜在价值.
关键词： 肝细胞生长因子 肝细胞生长因子激活因子 重组融合蛋白质类 细胞凋亡 -
三种人类8型疱疹病毒特异性抗原表达及复合抗原血清学检测方法的建立
目的 建立人类8型疱疹病毒(HHV-8)血清学检测方法.方法 利用E.coli系统合成HHV-8三个抗原性较强的融合蛋白:K8.1,ORF65和ORF73 C,作为检测抗原,阳性血清为本地12份卡波西肉瘤患者血清和32份AIDS相关型卡波西肉瘤患者血清;阴性血清为20份皮肤肿瘤患者血清和77份15岁以下儿童血清.以Western印迹及ELISA法确定各重组蛋白免疫原性和该混合抗原ELISA法的敏感度和特异度.结果 获得高纯度的3种8型疱疹病毒特异重组蛋白,均具备较强的抗原特性.应用上述复合抗原ELISA法与传统免疫荧光法共同筛查同批次阳性和阴性血清,发现前者敏感度远高于后者,分别为81.8%和34.4%,特异度则为97.9%.结论 K8.1、ORF65、ORF73 C是建立HHV-8血清学检测方法较佳的候选抗原,有更高的敏感度和特异度.
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丙型肝炎病毒高变区1融合蛋白的表达、纯化及其初步应用
目的克隆并表达中国不同地区不同基因型的丙型肝炎病毒高变区1(HCV HVR1)蛋白,并用表达纯化产物检测慢性丙型肝炎患者血清中的相应抗体,分析其临床意义.方法根据31株HCV HVR1序列分析及免疫原性预测结果,选择4株克隆(1b型3株,2a型1株),从pGEMT-E2克隆中扩增得到4个HVR1片段,将其分别克隆到原核表达载体pQE40中,表达产物经纯化后用以检测慢性丙型肝炎患者血清中的HVR1抗体.结果构建的HVR1原核表达载体在大肠埃希菌中成功表达了4种相对分子质量约为28 000的二氢叶酸还原酶(DHFR)-HVR1融合蛋白,纯化蛋白的获得率约为320～800 μg/100ml培养液.这4种融合蛋白(SH1b、BJ1b、SD1b、SD2a)与慢性丙型肝炎患者的血清结合率分别为72.8%(51/70)、60%(42/70)、48.6%(34/70)和58.6%(41/70).在20例用干扰素治疗的丙型肝炎患者中,57%(4/7)的干扰素治疗无应答者治疗前血清能与之反应,而应答者血清中只有15.3%(2/13)能与之反应.干扰素治疗应答者血清与4种融合蛋白反应的A值高于治疗无应答者(P＜0.05).结论选择的4株HCV HVR1片段在大肠埃希菌中获得成功表达,所得4种HVR1融合蛋白能与HCV感染者血清发生较广泛的反应.
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慢性乙型肝炎患者外周血中HBV特异性CD3+ T细胞的研究
目的研究慢性乙型肝炎患者外周血中可作用于病毒感染靶细胞的特异性CD3+ T细胞比率.方法筛选HLA-A2患者:将MHC:Ig双体融合蛋白试剂,加入HBV核心蛋白(C)、聚合酶蛋白(P)及表面抗原蛋白(S)中HLA-A2限制性合成肽,与患者CD3+ 细胞作用,采用双重荧光抗体染色,用FACS检测各患者的特异性T细胞比率,同时设立各种对照管.结果 23/54例(42.6 %)患者为HLA-A2.其中15例经用HBV C、P、S肽染色后,5例患者的特异性CD3+阳性细胞比率高于对照管,4例患者有结合S肽的特异性CD3+ 细胞,其中1例同时可结合P肽,1例仅与P肽结合.结论慢性乙型肝炎患者外周血中与特异性肽结合的CD3+ T细胞比率较少.MHC:Ig双体融合蛋白技术使用方便,但非特异性染色率偏高.本技术可用于随访治疗中的慢性乙型肝炎患者免疫状态的变化.
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甲型H5N1禽流行性感冒病毒血凝素抗原和霍乱毒素B亚单位融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建甲型H5N1禽流行性感冒流感病毒血凝素(HA)抗原和霍乱毒素B亚单位(CTB)融合蛋白真核表达载体,并研究其在COS7细胞中的表达特性,及其在动物体内不同时间点诱导机体产生特异性抗体的情况.方法 采用PCR技术分别克隆CTB基因和HA基因,并用BamH Ⅰ酶切2个基因片段,在T4连接酶的作用下构建CT-HA融合基因(CH基因).双酶切后,将CH基因插入真核表达质粒pCI-neo中,构建甲型H5N1禽流感病毒融合蛋白真核表达载体(pCI-CH).将pCI-CH质粒转染COS7细胞,利用Western印迹、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HA抗原的表达；间接ELISA法检测免疫接种新西兰大白兔后其血清中HA抗原的特异性抗体效价,以及与H1N1、H9N1、H3N2和乙型流感病毒的交叉反应情况.结果 pCI-CH真核表达载体(即核酸疫苗)构建成功,可在COS7细胞中高效表达,并能在大白兔体内诱导产生特异性抗pCI-CH抗体.核酸疫苗pCI-CH特异性抗血清不仅可以与甲型H5N1流感病毒特异性结合(P/N＞2.1),而且可以与H1N1、H9N1和H3N2毒株发生特异性反应；但该抗血清与乙型流感病毒无特异性反应.结论 构建的甲型H5N1禽流感病毒核酸疫苗具有良好的免疫原性.
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JC病毒t抗原的融合蛋白表达及抗体制备
目的 构建JC病毒t抗原的原核融合蛋白表达载体,表达并纯化该融合蛋白.方法 采用PCR方法 从患者脑脊液中扩增JC病毒t抗原,测序正确后再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-t表达重组体,并诱导表达t抗原融合蛋白.大量制备该融合蛋白并以镍柱亲和层析纯化.然后以纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果pET32a(+)-t表达出相对分子质量为41 000左右的重组蛋白.十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,异丙基-βD-硫代半乳糖苷诱导后3.5～20.0 h融合蛋白均高水平表达.Western印迹证实具有良好的抗原性,免疫BALB/c小鼠后,成功制备了鼠多克隆抗体.结论 成功构建原核表达载体pET32a(+)-t,表达纯化t抗原融合蛋白,成功制备了JC病毒小包膜蛋白t的抗体,为进一步流行病学调查及该基因的功能研究奠定了基础.
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呼吸道合胞病毒M2:81-95与热休克蛋白70L1融合蛋白的制备及其免疫原性
目的 构建呼吸道合胞病毒(RSV)CTL表位M2:81-95与热休克蛋白(HSP)70L1融合蛋白的重组质粒,原核表达后初步研究其免疫原性.方法 从SMMC7721细胞中克隆HSP70L1基因.PCR扩增M2:81-95基因片段,鉴定后构建质粒pET-HSP70L1-M2:81-95(pET-HSP70L1-M2).经PCR和酶切鉴定,转化E.coli BL21(DE3).用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HSP70L1-M2:81-95(HSP70L1-M2),Ni-螫合亲合层析纯化,梯度透析复性.用该蛋白免疫10只BAlB/c小鼠,ELISA榆测IgG抗体及其亚型.噻唑蓝(MTT)法榆测CTL杀伤活性.结果 成功构建重组质粒pET-HSP70L1-M2,并在E.coli中表达重组蛋白HSP70L1-M2,该蛋白诱导RSV及表位特异性的CTL活性,还诱导蛋白抗原特异性的IgG,为4.87±0.35、IgGl为5.53±0.28、IgG2a为4.40±0.21.且IgG1/IgG2a(1.26)的比例平衡,与PBS对照组的IgG,为0.33±0.17、IgG1为0.51±0.21、IgG2a为0比较,差异有统计学意义(t=3.512,3.681,5.856;P<0.05).结论 成功构建原核表达质粒pET-HSP70L1-M2,斤表达纯化获得重组蛋白,免疫小鼠后诱导RSV及表位特异性的CTL活性和辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2混合型应答.
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人类免疫缺陷病毒Tat融合蛋白后的修饰与生物学活性分析
目的 分析HIVTat融合后对融合蛋白生物学活性的影响,探讨HIV Tat的生物细胞膜穿透功能和意义.方法 以胸腺激酶(TK)基因为报告基因,将不同长度的甘氨酸(Gly)密码子融合在HIV Tat与TK基因之间以及两种基因倒置融合,分别克隆至PBK原核表达载体,大肠埃希菌表达,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,超声波破碎后,经耦联Tat蛋白单克隆抗体的层析柱层析收集.融合蛋白与HepG2细胞共培养,24 h后间接免疫荧光检测.加用更昔洛韦,3 d后锥虫蓝染色计算细胞死亡率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 克隆出含有不同甘氨酸密码子的HIV Tat-Gly(n)TK(n=0,2,4,6)融合基因,成功表达Tat-TK系列融合蛋白和TK-Tat融合蛋白.间接免疫荧光检测发现Tat-TK系列融合蛋白与Tat蛋白、TK-Tat融合蛋白透过膜效率相似;但流式细胞仪检测表明,在培养基含有更昔洛韦的条件下,Tat-Gly(4)-TK、Tat-Gly(6)-TK、Tat-Gly(2)-TK、Tat-TK融合蛋白、HIV Tat组和TK-Tat致HepG2细胞凋亡率分别为14.77%、4.30%、12.69%、3.00%、1.03%和4.40%.锥虫蓝染色发现细胞死亡率也有类似结果,分别为80.2%、56.7%、65.4%、58.4%、9.1%和57.1%,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),但TK-Tat和Tat-TK融合蛋白组之间差异无统计学意义(P=0.24).结论 Tat与TK基因之间融合甘氨酸密码子的数目对融合蛋白中Tat的细胞融合穿透功能不产生影响,而对TK的体外细胞致死作用有较大影响,其中间隔4个甘氨酸密码子对融合蛋白TK体外细胞致死作用的影响小,同时TK基因与HIV Tat的倒置融合不影响两者生物学功能.
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弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化
目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础.方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达.超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化.通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性.结果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达.对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达.在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别.结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别.
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人源抗-HBs轻链与干扰素-α融合蛋白的克隆及表达
目的构建人源单克隆抗-HBs Fab片段-IFN-α表达载体,对原核表达该融合蛋白的可行性及其效果进行实验研究.方法用聚合酶链反应(PCR)体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3'末端,利用酶切、PCR鉴定,测序筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠埃希菌Top10,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测融合蛋白的抗原性,用Dot-blot和WISH细胞检测其生物学活性.结果利用插入了人源抗-HBs Fab段基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的轻链与IFN-α的融合蛋白,其与HBsAg的亲合力与抗-HBs-Fab相近,而且具有干扰素的活性.融合蛋白对HepG2.2.15细胞初步实验结果亦显示出其具有良好的靶向性及致凋亡作用.结论轻链与干扰素IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达特异抗体和其介导的某些生物活性因子,不失为一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了实验依据.
关键词： 干扰素α 肝炎表面抗原 乙型 重组融合蛋白质类 HepG2.2.15细胞 -
HIV-1 p24和gp41融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化
目的用基因重组技术将HIV-1 p24基因以及gp41基因具有抗原线性中和表位的部分重组连接,构建重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白.方法设计带有酶切位点的引物,分别PCR扩增p24和gp41两个基因,将它们分别连接到pMD18-T载体中,测序验证后,挑选出含有目的基因的正确克隆.将p24片段酶切后连接到gp41基因所在的pMD18-T载体中,再将连接后的两个基因酶切,重新连接到pET21a表达载体中.将表达载体转染大肠埃希菌诱导表达,经Western-blot验证表达正确.结果融合蛋白p24-gp41在大肠埃希菌中高效表达.结论融合蛋白p24-gp41可以在pET21a表达载体中高效表达.
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人新的生长激素异形体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的构建含新的生长激素异形体(GHv)基因全长编码区的pGEM-T Easy质粒和GHv-谷胱甘肽转硫酶(GST)融合蛋白的表达质粒并在大肠杆菌表达出其融合蛋白.方法采用克隆和亚克隆技术构建GHv-GST融合基因的表达质粒,转化大肠杆菌BL21并用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达GHv-GST融合蛋白,谷胱甘肽-Sepharose 4B纯化试剂盒纯化融合蛋白.结果含GHv-GST融合基因表达质粒的大肠杆菌表达出相对分子质量约43000的GHv-GST融合蛋白,SDS-PAGE结果显示纯化的融合蛋白为单一条带.结论成功构建成GHv-GST融合基因的表达质粒并且GHv-GST融合蛋白在大肠杆菌BL21中有高表达.上述工作为制备多抗,深入研究GHv基因的功能奠定了基础.
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Trx-DMLS-AIF融合蛋白的原核表达及其对白血病K562细胞脱细胞系统的影响
目的:原核表达硫氧化还原蛋白-缺线粒体定位信号的凋亡诱导因子融合蛋白(thioredoxin-apoptosis-inducing factor-defected mitochondria localization sign,Trx-DMLS-AIF),并观察其对白血病K562细胞脱细胞系统的影响.方法:构建表达融合蛋白Trx-DMLS-AIF的重组载体并将其转化至大肠埃希菌BL21中,应用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达,并进行Ni-NAT柱亲和层析法纯化.建立白血病K562细胞的脱细胞系统,应用吖啶橙染色法观察Trx-DMLS-AIF对白血病K562细胞脱细胞系统的影响;免疫荧光染色法观察K562细胞质蛋白对Trx-DMLS-AIF进入细胞核的影响.结果:IPTG成功诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达,并获得纯化的Trx-DMLS-AIF蛋白.吖啶橙染色后发现,Trx-DMLS-AIF能够诱导脱细胞系统K562细胞核凋亡;免疫荧光染色后发现,K562细胞质蛋白可阻止Trx-DMLS-AIF蛋白进入细胞核.结论:成功诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达.Trx-DMLS-AIF可引起K562细胞核凋亡,K562细胞质蛋白可阻止Trx-DMLS-MF进入细胞核.
