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霍乱弧菌在2种不同增菌液中增菌效果的研究
[目的]了解霍乱弧菌在不同的增菌液中增菌效果.[方法]配制"模拟水产品棉拭子标本",在不同增菌液中增菌后进行胶体金试条检测及参照《霍乱防治手册》中的方法进行分离鉴定.[结果]在庆大琼脂上挑取典型菌落进行血清凝集,经增菌液2增菌的霍乱弧菌凝集菌株数均高于经增菌液1增菌的凝集菌株数;在胶体金试纸条试验中,霍乱弧菌在增菌液2中增菌6h开始出现阳性,增菌12h后均出现阳性;在增菌液1中增菌8h开始出现阳性,增菌12h部分未出现阳性.[结论]在增菌液2增菌后划线庆大琼脂较容易分离出霍乱弧菌;在胶体金试纸条试验中增菌液2增菌效果较好.这可能与增菌液2含有促进霍乱弧菌生长的物质及抑制杂菌生长的物质,以及胶体金试纸条不仅能检测活菌,还能检测死菌等有关.可以选择增菌12～14h进行胶体金试纸条试验.
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武汉市蔡甸区饮食店餐饮具消毒效果检测
1994 2000年,我们对蔡甸区287家饮食店的餐饮具消毒效果进行了检测.检测大肠杆菌时,向消毒后备用的碗、盘、杯、碟等内侧表面贴2张检测大肠菌群纸片(每张纸片面积25 cm2),贴30 s取下,放于无菌塑料袋内.置37℃培养16～18 h,纸片保持紫蓝色为大肠菌群阴性,纸片变黄并呈现红色斑点或片状红晕为阳性.检测致病菌时,用棉拭涂抹餐饮具内侧表面50 cm2采样,分别接种于SC、GN增菌液中.
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自腹泻患者标本中检出产硫化氢志贺1型菌
1998年6月，我们由肠道门诊腹泻患者粪便中分离到1株产硫化氢(H2S)的革兰阴性杆菌，生化反应符合志贺菌属。 1.材料与方法：营养肉汤、GN增菌液、克氏双糖铁琼脂(KI)、伊红美兰琼脂(EMB)、SS琼脂等由杭州微生物试剂厂生产；肠杆菌科细菌生化编码鉴定管GYZ-15e由杭州微生物试剂厂产品，批号980112，其余自制；志贺菌属诊断血清21种由卫生部成都生物制品研究所生产，批号980101，有效期2000年1月；庆大霉素等10种药敏纸片由杭州微生物试剂厂产品，在有效期内使用；鲎试剂由中国湛江海洋生物制品厂生产，灵敏度0.5 EU/ml，批号980424。 标本的分离、培养和鉴定按北京市卫生防疫站编《卫生防疫检验手册》程序进行。药敏试验采用Kirby-Bauer法。鲎试验按中华人民共和国药典中细菌内毒素检查法进行。豚鼠角膜试验执行《卫生防疫检验手册》程序。 2.结果： (1) 粪便标本接种GN增菌液，37 ℃4 h增菌培养的同时，直接划线SS和EMB琼脂做分离培养。次日在SS和EMB琼脂上呈现纯培养，无色、透明、较小的菌落。挑取可疑菌落。接种KI上，做初步生化反应， 37 ℃培养过夜，生长菌无动力，分解葡萄糖产酸不产气、不发酵乳糖，但产生H2S。涂片染色为革兰阴性杆菌, 生化编码鉴定排除沙门菌、变形杆菌、枸椽酸杆菌等。用志贺菌属群、型诊断血清作凝集反应，初步鉴定为产H2S志贺1型菌，也是引起腹泻病的唯一病原菌。 (2) 产H2S志贺1型菌的微生物学性状：为革兰阴性短小杆菌，长约2～3 μm，宽0.5～0.7 μm，无动力，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。37 ℃ 24 h培养后，在营养肉汤和GN增菌液中均匀混浊，无沉淀、无荚膜。在SS琼脂上，为无色、半透明、圆形、光滑、湿润、边缘整齐，稍有凸起的较小菌落，直径0.5～0.8 mm；在EMB琼脂上，菌落无色半透明，边缘整齐，圆形，光滑，湿润，直径1.2～1.6 mm。该菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖、甘露醇、卫矛醇、肌醇、侧金盏花醇、棉子糖、纤维二糖、木糖、鼠李糖和水杨素等。甲基红试验和硝酸盐还原试验阳性，靛基质、 VP 试验阴性，不分解尿素，不利用枸橼酸盐、赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶均阴性，在醋酸盐中不生长。除产H2S外，生化反应符合志贺菌属。与志贺菌属4种多价和志贺1型诊断血清呈现凝集，与生理盐水和其他群型血清无自凝和交叉凝集现象。经安徽省卫生防疫站鉴定，确认为产H2S志贺1型菌。
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实时荧光PCR快速检测沙门菌
60份食品样本同时用常规国标法、科玛嘉平板分离法和实时荧光PCR法进行沙门菌检测研究.按国标GB/T4789.4-2003对60份食品样本进行沙门菌检测,在分离培养的同时将增菌液划线于科玛嘉沙门菌显色平板,挑可疑菌落(紫色或紫红色)进一步试验,所有分离菌株用SENSITITRE微生物鉴定分析系统进行生化鉴定.用Invitrogen提取试剂盒提取细菌DNA,具体方法按说明书操作,鼠伤寒沙门菌作为参考菌株经纯培养后制成菌悬液,同时提取DNA.
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改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的分离效果研究
目的 探讨改良硫代硫酸钠碳酸钙(TT)增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果.方法 收集2015年3月-2016年9月288例因急性腹泻住院患者的粪便作为研究样本,对照组和观察组各144例,采用常规接种法接种于麦康凯琼脂培养基(MAC)和沙门氏菌-志贺氏菌琼脂培养基(SS),另外加种改良TT增菌液进行增菌培养,同时使用改良TT增菌液、革兰阴性(GN)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液分别对外购的沙门菌属和志贺菌属进行培养,比较不同增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果.结果 对照组采用直接接种培养基的方法检测出沙门菌属15株,志贺菌属4株,检出率分别为10.42%和2.78%;观察组采用改良TT增菌液培养后接种方法检测出沙门菌属43株,志贺菌属12株,检出率分别为29.86%和8.33%;观察组沙门菌属与志贺菌属的检出率明显高于对照组(P<0.05);改良TT增菌液对沙门菌属的增菌效力与SC增菌液相当,其中对鼠伤寒沙门菌属增菌效果高达到10-8,优于SC增菌液10-7,改良TT增菌液对志贺菌属的增菌效力与GN增菌液相似,两种志贺菌属的大增菌效果均达到10-7.结论 改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的增菌效果与SC、GN增菌液相当,不仅可以有效促进沙门菌属和志贺菌属的增殖,提高病原菌分离效果,还能简化工作流程,提高实验室工作效率.
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pH值及盐度对副溶血弧菌与霍乱弧菌生长影响的研究
目的 研究增菌液pH值及盐度对副溶血弧菌和霍乱弧菌生长的影响,找出副溶血弧菌与霍乱弧菌的佳生长pH和盐度.方法 应用阳性菌株副溶血弧菌和霍乱弧菌,参照国际和国内增菌液的要求,控制增菌液pH值和盐度条件,采用弧菌显色培养基检测副溶血弧菌和霍乱弧菌生长数.结果 增菌液pH值7.2、盐度3.2％时适副溶血弧菌生长,增菌液pH值7.1、盐度1.2％时适霍乱弧菌生长.结论 增菌液pH值和盐度对副溶血弧菌和霍乱弧菌生长有一定影响.
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影响海洋细菌检测的因素探讨
目的了解海洋微生物的适生长条件,为海洋微生物监测提供有力保障.方法用无菌海水采样器采集海水,每份225 ml分别加入含有25ml的10×碱性蛋白胨水、5×碱性蛋白胨水、原液碱性蛋白胨水、嗜盐菌增菌液、RVS增菌肉汤、营养肉汤6种增菌液,经18℃、25℃、35℃增菌培养,每6 h为一个时间段,观察细菌生长情况,并挑取表面培养物接种于相应平板,TCBS平板、血平板、SS平板(SS平板配制采用海水和蒸馏水2种溶剂做对比),并置相应温度下培养6、12、18、24、36 h,在相应时间内长出细菌的分别挑取纯菌落进行鉴定.结果适合海洋菌生长的温度为35℃,增菌时间为6～12 h,培养时间为12～24 h;在各种稀释度碱性蛋白胨水中以10×碱性蛋白胨水增菌效果较为理想,且用海水配制的培养基较蒸馏水生长条件好.结论海水中微生物具有嗜盐性,在35℃下适宜的含盐培养基有利于海洋菌的生长.
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3种方法分离培养粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的比较
小肠结肠炎耶尔森菌[简称耶(氏)菌]是近年来受到国内外重视的一种人兽共患的肠道感染病原菌,常见于不同年龄的婴幼儿腹泻和肠炎患者的粪便标本中,但不易从常规的肠道选择性培养基中直接分离.为此我们作了一些尝试.
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计算分值法在沙门氏菌和志贺氏菌增菌液培养基的应用
肠道致病菌的分离,通常采取GN和SC等增菌液,但各种增菌液均有各自的特点和分离肠道致病菌的局限性.本次实验研究目的是制备既可使沙门氏菌和志贺氏菌同步增菌,又可在增菌过程中抑制非致病菌的生长.并采用计算分值的方法来优选配方.现报告如下.
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改良显色增菌液在食品微生物检测中的应用
在食品微生物检测中,常采用增菌的手段来放大病原菌,提高检出率.常规的增菌后,增菌管内的菌量靠浊度来判断,但因浊度会受到多种因素干扰,影响增菌效果的判断.当病原菌的数量很少时,往往在增菌后增菌液仍呈透明清澈或某些样品加到增菌液中变得混浊就很难判断增菌的效果如何.我们通过改良增菌液,在增菌液中加入适量的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)和琼脂粉,制成改良显色增菌液,可以直观增菌液中细菌含量,推测样品中的原始细菌数量,这在国内各文献中没有报道过.
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长春市家畜(禽)粪便携带O157:H7大肠杆菌调查
O157:H7大肠杆菌(Escherichia coli O157:h7)是肠出血性大肠杆菌的主要血清型,1982年首次在美国分离得到.O157:H7大肠杆菌引起的感染近年来在美国、日本、加拿大等西方国家呈逐年上升的趋势,而且危害大、死亡率高,现已成为全球性公共卫生问题.我国近年来也陆续有10多个省、市在食品、家畜、腹泻患者粪便等均检出该致病菌.为了解O157:H7大肠杆菌在我市家畜粪便的带菌状况,2002年7-9月我们对长春市6个监测点的家畜(猪、牛、鸡)粪便进行采样调查,所采集标本经增菌液增菌、分离培养、接种双糖后进行血清学、形态学和生化鉴定,终检出1株O157:H7大肠杆菌阳性.
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金黄色葡萄球菌显色培养基在乳品检验中的应用
金黄色葡萄球菌是常见的食物中毒病原菌之一.目前通用的检验方法(国标法)是将样品稀释液先接种于增菌液培养24 h,然后转种于血平板和Baird-Par-ker氏平板,再培养24 h,挑取金黄色葡萄球菌菌落进行染色镜检、血浆凝固酶试验进行确认,耗时较长.而金黄色葡萄球菌显色培养基是一种仅通过观察菌株的颜色,便能在24 h分离和用肉眼鉴别金黄色葡萄球菌的新型培养基.应用于乳及乳制品中金黄色葡萄球菌检验,大大提高了微生物检测效率.
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62株伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌的鉴定及药敏试验
近年来,由伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌引起的疾病乃时有发生并造成局部流行的现象,严重地影响了人们的身心健康.为有效地早发现、早治疗、早预防,将1997年～2000年检出的62株伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌株进行了系统的生化鉴定和药物敏感试验.1 材料与方法1.1 标本来源 62株菌株,均为本站微生物实验室检出,其中8株分离于带菌者的粪便标本,54株分离于病人血液标本.1.2 培养基及试剂 SS琼脂、SF增菌液、常用药敏试纸、肠道菌科细菌生化编码微量管均由浙江省军区后勤卫生部防疫检验所提供.沙门氏菌属诊断用血清56种57瓶系卫生部成都生物制品研究所生产.肠杆菌科诊断用噬菌体为珠海东大制药有限公司生产.
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肺炎链球菌致脓胸1例
患者女,45岁,因无明显诱因发热1周于2002年3月5日入院.查体:体温38℃以上,伴咳嗽,咳白色粘液痰,有时痰呈铁锈色,无咯血.检查血WBC27.3×109/L,白细胞分类计数N0.98,Hb87g/L.无菌抽取患者胸腔积液,呈黄色,浑浊,有凝块;李凡他实验(+++),WBC300～500/HP,多核0.75,单核0.25,并可见成堆细胞.直接接种于增菌液(法国梅里埃公司生产)及血琼脂平板,36小时后增菌液浑浊,血琼脂平板上呈灰白色半透明较小扁平菌落.长时间培养后成脐窝状,涂片染色为革兰氏阳性球菌,矛头状双排列,为肺炎链球菌.临床诊断为大叶性肺炎并脓胸.患者对青霉素过敏,临床根据药敏结果给予先锋V治疗,半月后患者痊愈出院.
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外环境中甲型副伤寒沙门菌分离培养方法的比较研究
[目的]选择佳增菌液、增菌时间、分离平板,提高外环境甲型副伤寒沙门菌检出率.[方法]11种不同种类不同产地沙门菌增菌液用不同来源不同菌量的甲型副伤寒沙门菌作增菌效果比较;制备贝壳类海产品、大便、水模拟标本作不同增菌液不同菌量甲型副伤寒沙门菌增菌效果比较;不同菌量模拟标本三种平板分离甲型副伤寒沙门菌效果比较;模拟标本不同增菌时间甲型副伤寒沙门菌检出率比较.[结果]11种增菌液,其中一种甲型副伤寒沙门菌菌不生长,二种较差,八种较好;在模拟标本甲型副伤寒沙门菌增菌效果比较中,亚硒酸盐增菌液对海产品、大便标本增菌效果较好,氯化镁孔雀绿增菌液对水样中甲型副伤寒沙门菌增菌效果较好;甲型副伤寒沙门菌在沙门菌显色平板上菌落特征明显,分离效果优于SS平板;贝壳类海产品甲型副伤寒沙门菌模拟标本37℃增菌6h甲型副伤寒沙门菌菌量多.[结论]贝壳类海产品用亚硒酸盐增菌液37℃增菌6h,水样用氯化镁孔雀绿增菌液42℃增菌12～18h,用沙门菌显色平板分离甲型副伤寒沙门菌效果好.
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改进SC提高沙门菌属带菌者检出
抗生索和化学疗剂一样,由于广泛应用和一些不合理的使用,细菌的耐药菌株也日益增多,也大大地增加了沙门菌属带菌者检出的难度.为了有利于沙门菌属在增菌时生长繁殖以提高检出率,对亚硒酸盐胱氨酸增菌液(以下简称SC)进行改进,应用结果,提高了该菌属带菌者的检出率.
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婴儿强化营养粉中粪链球菌的分离鉴定
2000年4月,作者从湖南省卫生防疫站质控科发的婴儿强化营养粉中分离鉴定出粪链球菌.结果报告如下:按国家标准<食品卫生检验方法微生物学部分>及有关资料进行.1 增菌培养在7.5%氯化钠肉汤、葡萄糖肉汤中均匀混浊,革兰氏染色镜检可见G+球菌和G-杆菌.在SC、MM、GN、肠道增菌液、营养肉汤、胰蛋白胨水中混浊,G染色镜可见G-短小杆菌,无G+球菌.
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改良李斯特菌增菌液的研究
目的:研制改良李斯特菌增菌液.方法:用不同浓度的吖啶黄、萘啶酮酸、亚碲酸钾、氯霉素对单增李斯特菌、大肠杆菌及蜡样芽胞杆菌进行抑制效果试验.结果:浓度在15～10 mg/L时,吖啶黄对蜡样芽胞杆菌有较强的抑制性,对单增李斯特菌、大肠杆菌几乎不起作用;20～10 mg/L浓度的萘啶酮酸、25～15 mg/L浓度的亚碲酸钾对大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌均有较强的抑制性,但对单增李斯特菌无抑制性;15～3 mg/L 4种浓度的氯霉素对3种菌均有较强的抑制性;用吖啶黄15 mg/L、萘啶酮酸20 mg/L、亚碲酸钾15 mg/L的李斯特菌改良增菌液增菌,单增李斯特菌检出率明显高于国标法(P＜0.05).212件样品的单增李斯特菌检出率由0.94%提高到7.08%.结论:该增菌液选择性强,检出率高,值得推广和应用.
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化妆品不同剂量增菌液比较效果
目的:比较不同剂量SCDLP增菌液对检验结果的差异.方法:选金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌5个不同菌浓度比较.结果:2 ml菌液加入18 ml SCDLP增菌液和10 ml 菌液加入90 ml SCDLP增菌液结果相同.结论:SCDLP增菌液用量可减少.
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一起由奇异变形杆菌引起的食物中毒
2000年8月,我市发生了一起食物中毒的案例,根据流行病学调查和中毒者的临床症状及实验室的病原学鉴定、患抗体测定均证明是一起由奇异变形杆菌所引起的食物中毒,现将结果报告如下:1 实验室检验及结果1.1 病源学分离、鉴定:将检样接种于GN增菌液,同时接种于SS平板,结果分离出4株奇异变形杆菌.1.2 形态学检查:暗视野悬滴观察运动较活泼.从SS平板上跳取单一典型菌落进行革兰氏染色、其形态特征为革兰氏性杆菌,两端钝圆,有明显的多形性.
