首页 > 文献资料
-
UPLC法同时测定大黄中8个成分的含量
目的:建立UPLC法同时测定大黄中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻苷A、番泻苷B、土大黄苷8个成分的含量.方法:采用ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),以乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0 ～1 min,10％ B→15％B;1～2 min,15％B→20％B;2～3 min,20％B→30％B;3～4 min,30％B→40％B;4～5 min,40％ B→60％B;5 ～6 min,60％ B→65％ B;6 ～7 min,65％B→70％B;7～8 min,70％ B→80％ B;8～9 min,80％B→85％B),流速0.3 mL· min-1,柱温35℃,254 nm处检测大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素,320 nm处检测番泻苷A、B和土大黄苷,对测定结果进行主成分分析.结果:大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻苷A、番泻苷B、土大黄苷浓度在一定范围内,与峰面积积分值线性关系良好(r≥ 0.9996),方法的精密度RSD为0.51％～0.97％,重复性RSD为0.64％ ～1.3％,稳定性RSD为0.72％ ～ 1.6％,平均加样回收率为96.5％～104.2％.主成分分析结果表明正品大黄与伪品可以明显分开,野生品与栽培品内在质量存在差异.结论:所建立的方法能同时测定大黄中8个成分的含量,可作为大黄药材与伪品的区分和质量控制的参考方法.
-
高效液相色谱法同时测定栀子金花丸中9个成分的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定栀子金花丸中9个成分的方法.方法:采用DIKMA Platisil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱(0～5 min,40％A;5～ 20 min,40％ A→60％A;20～26 min,60％A→60％A;26 ～ 35 min,60％A→90％A;35 ～ 52 min,90％A;52 ～54 min,90％A→40％A),流速为1 mL·min-1,变换波长检测(327 nm,绿原酸、盐酸小檗碱;254 nm,栀子苷、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚).结果:绿原酸、栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性范围分别为0.02 ～0.4μg(r=0.9998)、0.049 ～0.98μg(r=1.000)、0.05 ～1 μg(r =0.9999)、0.1 ～2 μg(r=1.000)、0.0025～0.05 μg(r=0.9996)、0.001 ～0.02μg(r =0.9997)、0.0014 ～0.028 μg(r =0.9998)、0.004～0.08μg(r =0.9998)、0.00033 ～0.0066 μg(r=0.9998),平均回收率在98.8％ ～ 100.4％之间.结论:该法经方法学验证,是可用于栀子金花丸质量控制的一个有效的方法.
-
HPLC测定不同来源决明子饮片中9个成分的含量
目的:建立高效液相色谱法测定决明子饮片中红镰霉素龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素葡萄糖苷3个苷类成分和橙黄决明素、黄决明素、决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚6个苷元的含量.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C1s色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为室温.流动相Ⅰ为乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(18:3:79),检测波长为278 nm;流动相Ⅱ为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为284 nm,分别测定苷和苷元类成分的含量.结果:红镰霉素龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素葡萄糖苷、橙黄决明素、黄决明素、决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的进样量分别在0.051 ～2.0、0.054～2.1、0.020～0.78、0.050～0.50、0.018～0.18、0.015 ～0.15、0.013 ～0.13、0.085 ～0.85、0.026～0.26 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;加样回收率(n=6)在97.6％ ～ 101.6％,RSD在1.4％ ～2.4％.不同来源的决明子饮片中9个成分的含量差异显著.结论:本方法为决明子饮片的全面质量控制提供了参考.
-
HPLC法同时测定麻仁润肠丸中9个成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定麻仁润肠丸中芍药苷、橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、木香烃内酯、去氢木香内酯、大黄酚、大黄素甲醚的含量.方法:色谱柱:Inertsil(R)ODS-SP(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.1％磷酸溶液-乙腈梯度洗脱;流速:1.0mL·min-1;检测波长:230 nm;柱温:35℃;进样量:10 μL.结果:在上述色谱条件下,麻仁润肠丸中9个成分之间有良好的分离度,芍药苷、橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、木香烃内酯、去氢木香内酯、大黄酚和大黄素甲醚的线性范围分别是2.045 ～ 81.79、4.063 ～ 162.5、0.2952 ～ 11.81、0.5184 ～ 20.74、0.4612 ～ 18.49、0.6120 ～24.48、0.9348 ～ 37.39、1.034 ～41.34、0.4912～19.65 μg· mL-1;r分别为0.9988、0.9943、0.9998、0.9999、0.9999、0.9995、0.9996、0.9939、0.9914;平均加样回收率(n=6)分别为98.3％、97.5％、98.5％、100.5％、101.7％、101.3％、97.1％、100.5％、100.0％,RSD分别为0.90％、0.89％、1.6％、1.0％、1.0％、1.6％、0.82％、1.2％、0.99％.结论:本法操作简单、可靠,重复性好,为更好地控制麻仁润肠丸的质量提供参考依据.
-
HPLC波长切换法同时测定大黄、牡丹皮药对提取物中11个成分的含量
目的:建立高效液相色谱波长切换法对大黄、牡丹皮药对提取物中11个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)进行分析.方法:采用Phenomsil ODS(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1％磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长为267 nm(0～20 min,没食子酸)、258 nm(20 ～ 30 min,氧化芍药苷)、230 nm(30 ～ 50 min,芍药苷)、274 nm(50～80 min,1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚)、230 nm(80～90 min,苯甲酰芍药苷)、254 nm(90 ～ 125 min,芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚),柱温30℃.结果:大黄、牡丹皮药对中11个成分没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进样量分别在0.365 ～3.65 μg(r=0.9991)、0.0349 ～0.349μg(r=0.9995)、0.106 ～ 1.06 μg(r =0.9993)、0.215 ～2.15μg(r =0.9996)、0.259 ～ 2.59μg(r=0.9994)、0.0758 ～0.758 μg(r =0.9993)、0.0846 ～0.846 μg(r =0.9993)、0.0581 ～0.581 μg(r =0.9993)、0.109 ～1.09μg(r=0.9992)、0.164～ 1.64 μg(r =0.9991)、0.0424 ～ 0.424 μg(r =0.9995)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为100.1％、98.4％、99.5％、99.3％、99.4％、98.8％、99.5％、99.0％、99.1％、98.8％、99.1％.结论:该方法可用于大黄、牡丹皮药对提取物的质量控制.
-
UPLC-UV-MS法应用于胃肠安丸中11个活性成分的定性与定量分析
目的:建立超高效液相色谱-紫外-串联质谱法应用于胃肠安丸中11个活性成分(川芎嗪、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、芦荟大黄索、大黄酸、大黄素、和厚朴酚、厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚)的定性、定量分析方法.方法:采用 ACQUITY UPLC BEH C1s(2.1 mm×50mm,1.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0-7.5 min,90％A→25％ A),流速0.3 mL· min-1,DAD波长切换检测模式[0～1.92 min,320 nm(川芎嗪、阿魏酸)；1.93 ～3.00 min,283 nm(柚皮苷、橙皮苷)；3.01 ～5.50 min,254 nm(芦荟大黄索、大黄酸)；5.51～6.26 min,294 nm(大黄素、和厚朴酚)；6.27 ～7.50 min,254 nm(厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚)],柱温40℃,进样量2μL;Waters Quattro Premier XE质谱仪,正／负离子检测模式.结果:各成分在7.5 min内分离良好,通过与对照品的保留时间(tR)和质谱信息的对比,确定了胃肠安丸中的11个活性成分；它们在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均＞0.9977；加样同收率(n=5)为96.6％ ～ 107.2％,RSD均小于3.0％.批内精密度RSD均小于1.0％,批间精密度RSD均小于3.5％.结论:本方法简便、快速、准确,精密度高,重复性好,适用于胃肠安丸中多种活性成分的快速定性、定量分析.
-
明目上清丸质量标准改进
目的:对明目上清丸(大黄、黄连、栀子、赤芍、当归和黄芩)的质量标准进行改进.方法:采用TLC法鉴别处方中的栀子、赤芍、当归、黄芩和黄连;采用HPLC法,以甲醇-0.2％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱的方法测定大黄中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚,以乙腈-0.04 mol· L-1磷酸二氢钾溶液为流动相,测定黄连中巴马汀和小檗碱.结果:薄层色谱中特征性斑点明显,分离度好,阴性对照无干扰;大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在6.5～162.8 ng(r=1.000 0)、12.4～311.0 ng(r=1.000 0)、13.8～345.4ng(r=1.000 0)、3.2～80.8 ng(r=0.999 8)范围内与峰面积均呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为97.0％、98.0％、100.2％和101.4％,RSD分别为1.2％、1.2％、1.4％和1.5％;盐酸巴马汀和盐酸小檗碱分别在13.1～326.4 ng(r=0.999 9)和42.8～1 070.0 ng(r=0.999 9)范围内与峰面积均呈良好的线性关系,平均回收率(n=9)分别为101.9％和97.6％.样品中大黄酸、大黄素及大黄酚的含量测定总和为0.23～0.84 mg·g-1,大黄酸、巴马汀和小檗碱(以盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计)的含量测定结果分别为0.027～0.259、0.591～0.896和2.57～3.90 mg· g-1.结论:鉴别方法专属性强、灵敏度高;定量方法简便快速,结果准确且重复性好.经方法学验证,本法可作为明目上清丸的质量控制方法.
-
LC-MS/MS同时测定一清胶囊9个成分的含量
目的:建立运用液相色谱-串联质谱法同时测定一清胶囊中9个成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄连碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)含量的分析方法.方法:采用Agilent SB-C18色谱柱(2.1 mm×50mm,1.8μm),以水-甲醇为流动相,梯度洗脱(0～4.5 min,20％B→70％B;4.5 ～8 min,70％B→95％B;8～8.5 min,95％B→20％B),流速0.3 mL·min-1,柱温为室温;采用电喷雾离子源(ESI),动态多反应监测扫描模式(DynamicMRM)进行定量分析,干燥气温度350℃,干燥气流量10 L·min-1,雾化器压力275.8 kPa,毛细管电压4 kV.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄连碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的质量浓度分别在2.712～27.12μg· mL-1(r=0.9989)、0.8800 ～8.800 μg·mL-1(r =0.9991)、0.5280～5.280 μg·mL-1(r=0.9982)、0.1272～1.272 μg·mL-1(r =0.9977)、0.3024～3.024 μg·mL-1(r=0.9979)、1.196～11.96 μg·mL-1(r =0.9995)、33.28～ 332.8 ng·mL-1(r=0.9988)、32.40～324.0 ng·mL-1(r=0.9974)、8.800 ～88.00 ng·mL-1(r=0.9977);平均加样回收率(n=6)均在97.5％ ～ 101.9％范围内,RSD均小于2.4％.结论:该分析方法特异、快速、灵敏,重复性好,可为一清胶囊的质量控制提供依据.
-
SD大鼠重复给予大黄素甲醚肝毒性与遗传毒性研究
目的:综合重复给药毒性试验和遗传毒性试验,对大黄素甲醚研究潜在肝毒性及遗传毒性进行评价.方法:雄性Spargue-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)及大黄素甲醚低(6.5 mg· kg-1)、中(65 mg· kg-1)和高剂量组(650 mg·kg-1),连续14 d经口灌胃给药;平行设甲磺酸乙酯(200 mg· kg-1)遗传毒性试验阳性对照组.观察动物临床症状,分析体质量、血清生化指标、肝脏质量及病理学指标变化,并开展微核试验及彗星试验.结果:连续14d给予SD大鼠大黄素甲醚,未见明确的与大黄素甲醚有关的肝毒性表现,且未检出其存在诱导SD大鼠肝细胞染色体损伤DNA断裂的作用.结论:当前试验条件下大黄素甲醚未见毒副反应剂量为650 mg· kg-1.本研究为对大黄素甲醚潜在肝毒性的初步探索,建议延长给药时间并增加动物数量,以进一步明确其体内毒性.
-
大黄素甲醚联合脐带间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠MMP-9和TIMP-1蛋白酶的影响
目的 观察大黄素甲醚联合人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)移植对颅脑损伤大鼠脑组织MMP-9和TIMP-1蛋白酶的影响.方法 将40只 2-3月龄,体重200~250g,清洁级Wistat大鼠随机分为正常对照组(10只)、TBI组(10只)、HUC-MSCs移植组(10只)、HUC-MSCs移植+大黄素甲醚组 (10只).ELISA法检测基质金属蛋白-9(mat rix metalloproteinase-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metall oproteinase-1,TIMP-1)的表达.结果 与模型组比较,HUC-MSCs移植组、HUC-MSCs移植+大黄素甲醚组大鼠脑组织中MMP-9表达减弱,TIMP-1表达增强.结论 大黄素甲醚可使脑损伤大鼠微血管基底通透性降低,减轻脑水肿程度,并与HUC-MSCs有协同作用,其作用机制可能与增加TIMP-1表达以调节MMP-9平衡有关.
-
大黄素甲醚调节miR-370诱导肝癌细胞凋亡的实验研究
目的:观察大黄素甲醚调节miR-370诱导肝细胞癌(HCC)细胞的凋亡情况,并探讨其作用机制.方法:将大黄素甲醚作用于SMMC7721和HepG2两组HCC细胞,使用TaqMan探针用实时定量PCR法检测miR-370的表达;用Western blot检测Sp1和DNMT1相应的蛋白表达水平.结果:大黄素甲醚抑制肝细胞癌细胞增长和诱导凋亡.肝细胞癌细胞中通过上调miR-370造成大黄素甲醚诱导型细胞凋亡.大黄素甲醚处理的细胞中通过miR-370抑制剂抑制miR-370水平能明显降低凋亡细胞的百分比(P<0.01).大黄素甲醚通过AMPK/Sp1/DNMT1信号调节miR-370的水平(P<0.01).AMPK/Sp1/DNMT1信号参与大黄素甲醚诱导的HCC细胞凋亡.结论:大黄素甲醚通过上调miR-370诱导HCC细胞凋亡,通过调节AMPK/Sp1/DNMT1信号通路对miR-370发挥调节作用.
