首页 > 文献资料
-
黄芩苷对TNF-α诱导下人脐静脉血管内皮细胞影响的初步研究
目的 研究TNF-α和黄芩苷对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)活力的影响及黄芩苷对体外TNF-α诱导培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.以期从血管内皮细胞的角度探讨黄芩清热安胎的机理.方法 选取不同浓度的TNF-α作用于HUVEC,四甲基偶氮唑盐(3-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色实验分析TNF-α对HUVEC细胞活力的影响.选取不同浓度的黄芩苷作用于HUVEC,培养24 h后,MTT比色实验分析黄芩苷对HUVEC细胞活力的影响.选取TNF-α作用浓度10ng/ml造模及原液1000倍稀释液的黄芩苷溶液作用于HUVEC,MTT比色实验和流式细胞术分析黄芩苷对HUVEC凋亡的影响.结果 TNF-α作用后的HUVEC活性(A值)均低于于空白对照组,并且随着TNF-α浓度越大,A值越小.10、50ng/ml浓度TNF-α作用后HUVEC与空白对照组比较差异有显著性,P＜0.05.黄芩苷作用后的HUVEC活性(A值)高于于空白对照组.黄芩苷作用后的HUVEC活性(A值)高于凋亡模型组,差异具有显著性,P ＜0.05.流式细胞术示黄芩苷作用后的HUVEC凋亡率低于凋亡模型组.结论 TNF-α明显抑制细胞增殖分裂的过程,诱导细胞凋亡.黄芩苷对HUVEC的生长增殖具有一定的促进作用.而黄芩苷对TNF-α诱导培养的HUVEC凋亡有抑制作用.
关键词： 黄芩苷 流式细胞术 细胞凋亡 人脐静脉血管内皮细胞 -
乙醇刺激HepG2细胞分泌VASN蛋白的生物学功能研究
目的：探究乙醇对HepG2细胞VASN蛋白表达与分泌水平的影响，及其对HUVEC细胞迁移的影响。方法乙醇刺激HepG2细胞，定量PCR （ qPCR）检测HepG2细胞VASN mRNA水平的变化， Western印迹检测HepG2细胞与细胞上清中VASN蛋白水平的变化。划痕愈合实验检测细胞共培养条件下，乙醇刺激的HepG2细胞培养上清对HUVEC细胞迁移的影响。结果 qPCR结果显示，乙醇可上调HepG2细胞VASN mRNA水平。 Western印迹结果显示，细胞VASN蛋白表达与分泌水平升高。划痕愈合实验结果表明乙醇刺激HepG2细胞VASN蛋白的分泌增加，可以促进HUVEC细胞的迁移。结论乙醇刺激导致HepG2细胞VASN蛋白表达水平和分泌水平升高，并可促进与其共培养的HUVEC细胞迁移。
关键词： 乙醇 肝癌 VASN蛋白 人脐静脉血管内皮细胞 细胞迁移 -
小檗碱改善高糖诱导血管内皮细胞和微血管内皮细胞损伤
目的:探讨小檗碱对高糖引起的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人心脏微血管内皮细胞(HC-MEC)损伤的保护作用.方法:采用含5mM葡萄糖的完全培养基培养的HUVEC和HCMEC为对照组;含30、50、100、200mM葡萄糖的完全培养基培养的HUVEC和HCMEC为各高糖组;含100mM葡萄糖和0. 01、0. 1、1μM小檗碱的完全培养基培养的HUVEC和HCMEC为各小檗碱组,各组处理24h和48h后应用MTT法检测细胞活力.应用诱导型一氧化氮合酶(iNOS)试剂盒检测HUVEC细胞iNOS活性.结果:与对照组比较,30、50、100、200 mM葡萄糖浓度依赖性引起HUVEC和HCMEC的细胞活力依次下降(P<0. 05).同组细胞处理48h与24h比较,随着作用时间的延长细胞活力降低越明显.0. 01μM、0. 1μM和1μM小檗碱组较l00mM高糖组细胞活力在一定程度上有所改善(P<0. 05).与对照组比较,高糖组HUVEC的iNOS活性增加(P<0. 01),小檗碱组较高糖组iNOS活性明显降低(P<0. 01).结论:30-200 mM高糖可造成HUVEC和HCMEC损伤,小檗碱对损伤有一定的保护作用,其作用和下调iNOS活性有关.
关键词： 高糖 小檗碱 人脐静脉血管内皮细胞 人心脏微血管内皮细胞 诱导型一氧化氮合酶 -
整合素β1反义寡核苷酸对次声诱导ECV-304细胞F-actin表达的影响
目的 研究整合素β1反义寡核苷酸(ASODN)对次声诱导人脐血管内皮细胞(ECV-304)骨架微丝F-aetin表达的影响,探讨次声信号向细胞内传导的途径.方法 应用脂质体转染试剂介导整合素β1正义寡核苷酸(SODN)和ASODN转染ECV-304,并将细胞分为次声假暴露组、次声假暴露+ASODN组(转染整合紊β1反义寡核苷酸片断)、次声假暴露+SODN组(转染整合素β1正义寡核苷酸片断)、次声暴露组、次声暴露+ASODN组和次声暴露+SODN组.次声作用频率为16 Hz,声压输出为130 dB,时间2 h.应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝聚合态肌动蛋白(F-actin)的改变,测定单个细胞F-actin的平均荧光强度.结果 次声假暴露组、次声假暴露+ASODN组和次声假暴露+SODN组的ECV-304细胞胞浆内有少量肌动蛋白纤维丝,方向性较差,大部分荧光物质呈弥漫状态,这3组F-actin表达差异无统计学意义.在接受次声暴露的3组细胞中,次声暴露组的F-actin表达明显增强.大多为较长的粗大应力丝,沿细胞纵轴排列较多.数量及荧光强度明显增加;与之相比,次声暴露+ASODN组的细胞内F-actin荧光强度明显较弱;而次声暴露+SODN组的细胞F-actin表达与次声暴露组差异无统计学意义.结论 次声作用可引起ECV-304细胞中细胞骨架F-actin表达增加,转染整合素β1 ASODN可部分抑制次声引起的F-actin表达;次声信号向细胞内传导可能与整合素-细胞骨架这一通路有关.
关键词： 整合素 寡核苷酸 次声 人脐静脉血管内皮细胞 聚合态肌动蛋白 -
肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察
目的:观察非肌肉肌球蛋白重链Ⅲ B(nonmuscle myosin heavy chain ⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TNFR 1)转位的影响.方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR 1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染人HUVECs,筛选获得稳定克隆株.设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFa诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR 1蛋白含量的变化.结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB siRNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2):(0.454 0±0.041 1),P＜0.01],也可以明显减少TNFa诱导前[(0.430 6±0.028 9):(0.324 8±0.016 7),P＜0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01]细胞质膜TNFR 1的含量.在转染NMHC-ⅡB siRNA的细胞,TNFa的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01].结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR 1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用.但是可能并不是惟一的或决定性的因素.
-
新型器官保存液抗脐静脉内皮细胞凋亡作用的研究
由于供者器官在获取、保存和移植过程中难以避免的会遭遇冷缺血、热缺血及缺血再灌注损伤,这将影响供者血管内皮细胞的生存状态[1].缺血时间过长及器官保存液都会启动血管内皮细胞凋亡基因,引起血管内皮的损伤,从而导致移植物功能恢复延迟,甚至原发性移植物无功能[2],并且可缩短移植物的存活时间[3],引起慢性移植物功能丧失[4].2006年2-10月,我们分别采用新型器官保存液(TRS液)、UW液及HTK液对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,观察不同器官保存液对人血管内皮细胞凋亡的影响.
-
不同浓度的乌司他丁对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、迁移及黏附作用的影响
目的 观察不同浓度的乌司他丁溶液对人脐静脉血管内皮细胞(HUVE C)增殖、凋亡、迁移、黏附作用的影响.方法 将原代HUVEC培养至第4代,分为对照组(U)和实验组A、B、C、D(浓度分别为625、2 500、5 000、10 000 U/ml),分别用CellTrace实验、原位缺口末端标记法(TUNEL)实验、划痕实验、细胞黏附实验检测细胞的增殖、凋亡、迁移、黏附功能.结果 划痕实验:U、A、B、C、D组细胞6h的迁移率分别为4.08％、2.61％、5.24％、3.99％、2.27％,24h迁移率分别为12.53％、13.04％、20.65％、21.37％、30.10％,48 h的迁移率分别为20.18％、25.00％、37.92％、49.22％、49.01％;增殖实验:5组细胞增殖至第4代的百分数分别为60.1％、70.3％、77.2％、82.1％、88.5％;凋亡实验:5组细胞凋亡率分别为3.1％、2.5％、2.1％、2.3％、35.3％;黏附实验:5组细胞的贴壁率分别为:牛血清白蛋白组细胞贴壁率分别为38.0％、39.0％、41.0％、43.0％、43.0％,基质胶组细胞贴壁率分别为50.0％、51.0％、54.0％、61.0％、66.0％,纤维粘连蛋白组细胞贴壁率分别为60.0％、61.0％、64.0％、73.0％、81.0％.结论 乌司他丁能促进HUVEC的增殖、迁移和黏附作用,而高浓度的乌司他丁可导致HUVEC的凋亡.
-
紫外线照射对血管内皮细胞的损伤效应
目的 探究不同剂量紫外线照射对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的细胞形态、细胞凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影响.方法 实验分正常组和3个不同剂量辐照组,辐照组分别采用l0J·m-2、20J·m-2、40J·m-2紫外线照射血管内皮细胞,通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞凋亡率,荧光试剂盒检测ROS的水平和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定VEGF和bFGF的含量.结果 与正常组相比,细胞经不同剂量紫外照射24 h后,细胞凋亡率随着照射剂量的增加而升高;ROS、VEGF、bFGF的含量随着照射剂量的增加而升高.结论 紫外照射对血管内皮细胞有一定程度的损伤效应,可能与诱导细胞凋亡,释放ROS和激活VEGF和bFGF有关.
-
蕨麻多酚对糖氧剥夺损伤血管内皮细胞一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素及缺氧诱导因子的影响
目的:研究蕨麻多酚对糖氧剥夺损伤的血管内皮细胞中一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、内皮型一氧化氮(eNOS)、诱导型一氧化氮(iNOS)及缺氧诱导因子(HIF-1α)的影响.方法:利用混合气体培养箱建立糖氧剥夺损伤的血管内皮细胞模型,用高(2.4 mg·ml-1)、中(1.2 mg·ml-1)、低(0.6 mg·ml-1)浓度的蕨麻多酚处理细胞,以复方丹参滴丸为阳性药物(2.4 mg·ml-1),UV法检测各组细胞培养介质中NO含量和NOS活性;放射免疫法检测ET-1含量;RT-PCR法检测各组细胞HIF-1αmRNA、eNOS mRNA、iNOS mRNA及ET-1 mRNA的表达;Western Blot法检测各组细胞HIF-1α和eNOS蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞中ET-1含量和NOS活性显著升高,NO含量显著降低,HIF-1αmRNA、ET-1mRNA、iN-OSmRNA和HIF-1α蛋白表达上调,eNOS mRNA和eNOS蛋白表达下调(P<0.01).与模型对照组比较,除低浓度蕨麻多酚组ET-1含量、ET-1mRNA和eNOSmRNA无统计学差异外,蕨麻多酚各浓度组细胞NO分泌量均显著升高,ET-1含量和NOS活性显著下降,HIF-1αmRNA、ET-1mRNA、iNOSmRNA和HIF-1α蛋白表达下调,eNOSmRNA和eNOS蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01).与阳性药物组比较,蕨麻多酚各浓度组能够显著降低iNOSmRNA的表达,高、中浓度组能够显著增加eNOSmRNA的表达,降低NOS活性,高剂量组能够进一步增加NO分泌量,降低ET-1含量(P<0.05或P<0.01).结论:蕨麻多酚可能在血管内皮细胞缺氧时通过下调HIF-1α,进而抑制ET-1合成和分泌;上调eNOS,下调iNOS,调控NO合成和分泌;调节NO和ET-1的动态平衡,发挥抗缺氧保护作用.
-
松萝酸抑制小鼠H22肿瘤生长及作用机制研究
目的:探讨松萝酸对小鼠H22肿瘤生长的影响及其作用机制.方法:昆明种小鼠前腋下皮下接种H22细胞,第2天腹腔注射松萝酸,每3d测量1次肿瘤体积.用免疫组化法检测微血管密度(MVD);ELISA法检测小鼠血清和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)细胞培养基上清中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平;MTT法检测松萝酸对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响.结果:松萝酸组小鼠H22肿瘤体积、重量增长明显较模型组缓慢(P＜0.05),同时松萝酸组的肿瘤微血管密度显著减少(P＜0.05),松萝酸对HUVEC体外增殖有显著抑制作用.松萝酸可显著降低HUVEC细胞和小鼠血清VEGF和bFGF水平(P＜0.01).结论:松萝酸可显著抑制小鼠H22肿瘤生长及血管生成,且能抑制VEGF和bFGF表达和HUVEC体外增殖.松萝酸对VEGF和bFGF分泌的抑制作用可能是其抗H22肿瘤及抗血管生成的一个重要机制.
关键词： 松萝酸 H22荷瘤小鼠 血管生成 人脐静脉血管内皮细胞 -
基质细胞衍生因子-1对人脐静脉血管内皮细胞迁移的影响
目的:利用Boyden chamber 体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)在人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)迁移中的作用及其信号转导机制.方法:以HUVEC为实验材料,首先利用免疫荧光技术及蛋白印迹方法检测HUVEC表达SDF-1α受体CXCR4,其次利用Boyden chamber体外迁移体系,先观察不同浓度的SDF-1α对HUVEC迁移的影响,后以磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)阻断剂wortmannin(50M)或LY294002(10μM)、丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD98059(50 μM)、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)阻断剂U73122(10μM)、CXCR4特异性阻断剂AMD3100(0.1 mg/ml)等不同预处理HUVEC 30 min,观察分析SDF-1α对HUVEC迁移影响的信号转导通路.结果:培养的HUVEC表达SDF-1α受体CXCR4,HUVEC体外迁移能力随着SDF-1α浓度的递增而逐渐增强,并且SDF-1α浓度在100 ng/ml时,HUVEC迁移到滤膜上的细胞数多;wort-mannin、LY294002、PD98059、U73122、AMD3100对HUVEC迁移均有影响,其中U73122、AMD3100对HUVEC迁移阻断的效应显著.结论:SDF-1α/CXCR4所介导的HUVEC迁移与MAPK)、PI-PLC和蛋白激酶C(PKC)等信号途径有关,且PKC途径可能处于中心环节.
关键词： 人脐静脉血管内皮细胞 迁移 蛋白激酶C 信号转导 -
PCA 通过NF-κB和AP-1信号通路影响HUVECs表达TF
目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C 激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用.方法:MTT 法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白在细胞中的分布,Western blot 法检测细胞内NF-κB p65、TF、c-Fos和c-Jun蛋白的表达,qPCR法测定TF mRNA在HUVECs的表达,ELISA法检测细胞培养上清中TF的含量.结果:与对照组比较,LPS组的细胞活力明显下降(P<0.01),胞质内出现明显的黄染颗粒,胞质染色加深,TRAF6平均吸光度值升高(P<0.01),NF-κB p65、c-Jun和c-Fos的蛋白表达均明显增加(P<0.01),TF mRNA和蛋白表达亦明显增加(P<0.01);PCA+LPS组的细胞活力较LPS组升高(P<0.05),细胞形态正常,胞质黄染颗粒不明显,TRAF6平均吸光度明显小于LPS组(P<0.01),NF-κB p65、c-Fos和c-Jun 3种蛋白表达则明显降低(P<0.01),TF mRNA及蛋白亦表达减少(P<0.01).结论:PCA可明显减轻LPS引起的HUVECs损伤,其机制可能是通过降低TRAF6、NF-κB及AP-1核因子的活化进而减少组织因子的释放来实现的.
关键词： 尖吻腹蛇毒蛋白C激活剂 人脐静脉血管内皮细胞 组织因子 核因子κB 活化蛋白1 -
脑源性神经营养因子保护 H2 O2诱导的氧化损伤血管内皮细胞
目的：研究脑源性神经营养因子（brain－derivedneurotrophicfactor，BDNF）对过氧化氢（H2O2）诱导的氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法：离体培养人脐静脉血管内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells， HUVECs），建立H2O2致HUVECs氧化损伤模型后，利用不同浓度（1、10和100μg／L）BDNF处理HUVECs，同时设置未损伤对照组、H2 O2损伤后PBS处理组和TrkB inhibitor组（同时加入100μg／L BDNF和1∶1000的TrkB inhibitor）。利用MTT方法检测各组细胞存活率；同时测定各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD ）和还原型谷胱甘肽（ GSH ）水平变化；ELISA 方法检测各组细胞分泌一氧化氮（NO）、内皮素1（ET－1）及细胞间黏附分子1（ICAM－1）的浓度变化；流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇（ROS）含量及细胞凋亡的变化；Western blot 检测各组细胞中 TrkB、p－TrkB、cleaved caspase－3、Bcl－2及 Bax 的蛋白水平。结果：与未损伤组相比，经H2 O2氧化损伤后，PBS处理组的HUVECs存活率显著下降，LDH和MDA含量显著上升而SOD和GSH的活性显著下降，细胞中NO分泌功能显著降低而ET－1和ICAM－1的分泌浓度则显著增加，ROS的含量和细胞凋亡率均显著上升，cleaved caspase－3和Bax的蛋白水平显著上升，Bcl－2蛋白表达则显著下降；与PBS处理组相比，不同浓度BDNF处理组中HUVECs的存活率逐渐上升，LDH和MDA含量逐渐下降，而SOD和GSH活性逐渐上升，细胞中的NO分泌量显著上升而ET－1和ICAM－1分泌量逐渐下降；ROS含量和细胞凋亡率则逐渐下降，TrkB和p－TrkB水平均显著上升，cleaved caspase－3和Bax的蛋白水平逐渐下降而Bcl－2蛋白表达逐渐上升，但BDNF的作用均受到TrkB inhibitor的抑制。结论：BDNF能够通过提高HUVECs细胞存活率，增强细胞抗氧化损伤能力，降低ROS产生和细胞凋亡率而保护氧化损伤的血管内皮细胞，并通过其与TrkB结合后激活BDNF－TrkB信号通路发挥作用。
-
尖吻蝮蛇毒PCA对血管内皮细胞的影响
目的：观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂（PCA）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）活性及表达组织因子（TF）、血管性血友病因子（ vWF）的影响，探讨PCA对血栓性疾病的防治机制。方法：常规培养HUVEC，MTT法检测细胞活性，ELISA检测细胞上清液中TF和vWF的含量，Western blot法检测细胞内TF蛋白表达，RT－PCR法检测细胞内TF和vWF mRNA的表达。结果：低浓度的PCA（＜2．5 mg／L）对HUVEC活性和形态没有明显影响，但可明显减轻LPS引起的HUVEC生长抑制和形态改变；高浓度的PCA（＞2．5 mg／L）可显著抑制HUVEC存活率并引起其形态改变。 PCA实验组与对照组比较，其上清中TF和vWF的含量、细胞内TF及vWF mRNA的表达无明显变化，而LPS损伤组各个细胞因子及相关蛋白的表达量明显增加（ P＜0．05）；对于PCA＋LPS组，各指标无明显变化。结论：低浓度PCA在一定程度上可减轻LPS引起的HUVEC损伤；PCA可拮抗内毒素引起HUVEC的TF和vWF的表达；PCA可能通过这种拮抗作用来防治血栓性疾病。
-
双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究
目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用.方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.
-
切应力诱导内皮细胞表达IL-8基因的信号转导
目的:现已确定动脉粥样硬化是一种炎症疾病,单核/巨噬细胞在动脉内膜下集聚是导致动脉粥样硬化损伤发展的基础;血流低切应力促进其损伤的发展.趋化细胞因子MCP-1对单核/巨噬细胞起强力趋化和激活作用,并有报告切应力可诱导其基因的表达.新近报道在层流作用下IL-8亦是单核/巨噬细胞与内皮细胞相互作用的重要调节因子.本研究旨在观察切应力诱导人脐静脉血管内皮细胞IL-8 mRNA的表达,探讨Toll/NF-κB信号转导通路对其基因激活的介导作用.方法:4.2 dyn/cm2层流切应力处理人脐静脉血管内皮细胞,提取总RNA,应用RT-PCR和Northern杂交技术检测切应力作用不同时间后IL-8、TLR-2和TLR-4 mRNA的表达.免疫印迹技术检测IκB磷酸化和降解.免疫荧光细胞化学染色检测NF-κB胞核易位.结果:切应力作用0.5 h后IL-8 mRNA表达逐渐增高,2 h时达到很高水平.胞浆蛋白IκB和磷酸化IκB的免疫印迹显示4.2 dyn/cm2层流切应力作用10 min后磷酸化IκB水平即显著增加,30 min后又逐渐下降,与之相应IκB含量随切应力作用时间而逐渐下降,到1 h时几乎测不出,表明在切应力作用下内皮细胞胞浆NF-κB抑制因子IκB发生了磷酸化和降解.NF-κBp65亚基免疫细胞化学染色显示在4.2 dyn/cm2切应力作用0.5 h后内皮细胞核逐渐着色,1.5 h时细胞核几乎全着色,表明胞浆NF-κB在切应力作用下发生了易位,从胞浆进入胞核.RT-PCR检测和Northern杂交分析显示内皮细胞固有表达TLR-2和TLR-4 mRNA,在4.2 dyn/cm2切应力作用1 h后TLR-4 mRNA的表达显著增强,而TLR-2 mRNA的表达变化不明显.结论:流体切应力可诱导血管内皮细胞表达IL-8,活化转录因子NF-κB.在切应力作用下内皮细胞TLR-4 mRNA表达增强,提示Toll/NF-κB信号转导通路可能参与动脉粥样硬化性炎症反应.
-
前列腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移的影响
目的：探究前列腺素E2（PGE2）对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用以及对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受体抑制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848处理的NR8383细胞作为各实验组，选择未经PGE2以及其特异性受体抑制剂处理的NR8383细胞作为对照组，采用Western blot和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水平；收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs，运用TRANSWELL小室、Matrigel胶细胞成管实验等实验方法，观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383细胞培养液中加入PGE2浓度增高，其VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）；0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积，形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加（P<0.05）；HUVECs的迁移运动也随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强，HUVECs趋化的数量显著升高（P<0.05）；研究发现PGE2特异性的EP2/EP4受体拮抗剂AH6809/AH23848，可以显著抑制PGE2增强NR8383细胞内VEGF mRNAs表达的作用并且也显著抑制PGE2增强NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应（P<0.05）。结论 PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体调控VEGF的合成，促进HUVEC趋化和成管效应。
-
血小板活化因子受体在伴放线放线杆菌致病过程中的作用
目的 研究血小板活化因子受体(PAFR)在磷脂酰胆碱(PC)阳性伴放线放线杆菌(Aa)黏附侵袭人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)过程中的作用.方法 利用PAFR拮抗剂(CV3988)和抗PAFR抗体作用于HUVEC 30 min后,观察PC阳性Aa对HUVEC黏附和侵袭的影响;并采用MTT法分析PC阳性和阴性Aa诱导细胞损伤的情况.结果 采用100、200、500 nmol/L的PAFR拮抗剂预处理HUVEC,显著减少了PC阳性Aa对HUVEC的黏附和侵袭(P＜0.001),黏附率分别为对照组的(36.29±3.52)％,(19.04±3.35)％和(7.69±3.19)％;侵袭率分别为对照组的(12.12±1.58)％,(7.08±0.29)％和(2.60±2.26)％.用抗PAFR抗体预处理HUVEC后Aa对HUVEC的黏附率和侵袭率分别为(50.05±5.28)％和(39.09±6.50)％,显著降低了Aa对宿主细胞的黏附和侵入(P＜0.001).采用200 nmol/L和500 nmol/L的PAFR拮抗剂和25 μg/mL抗PAFR抗体预处理HUVEC后,PC阳性的Aa与细胞作用以后,细胞的存活率显著升高(P＜0.001),从(25.39±9.33)％分别升高到(91.12±3.14)％,(94.12±2.15)％和(65.5±1.87)％.而PC阴性的Aa菌株中,预处理组与未预处理的组相比,细胞活力并没有显著增加(P＞0.05).结论 我们发现PAFR在PC阳性的Aa对宿主细胞的粘附、侵袭及诱导胞死亡的过程中发挥了重要作用.
关键词： 伴放线放线杆菌 血小板活化因子受体 人脐静脉血管内皮细胞 黏附率 侵袭率 -
益母草对人脐静脉内皮细胞组织因子转录及表达的影响
目的 探讨益母草(Leonurus Heterophyllus Sweet,LHS)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达和转录的影响.方法 HUVECs的培养按Jaffe法,选用第2代细胞进行试验.测定不同浓度LHS处理前后组织因子表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TF mRNA水平.结果 LHS对HUVECs TF活性及TFmRNA转录的影响与正常对照组相比差异有明显统计学意义(P＜0.01).结论 LHS能下凋HUVECs TF的表达,干预HUVECsTFmRNA的转录.
关键词： 益母草 组织因子 人脐静脉血管内皮细胞 反转录聚合酶链反应 -
外源基因转染血管内皮细胞条件优化
目的 探讨阳离子脂质体及电穿孔法介导外源基因转染血管内皮细胞的转染效率并进行条件优化.方法 采用绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用LipofectamineTM 2000阳离子脂质体为载体以及电穿孔方法,转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC).培养48 h后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在HUVEC内的表达及转染效率.结果 LipofectamineTM 2000阳离子脂质体介导组有少量细胞可见弱荧光信号,而电穿孔法转染组可见较强荧光信号,其中以电击条件为电场强度1 100V、脉冲时间20 ms、电击2次的转染效率好.结论 电穿孔法介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,可作为血管内皮细胞的外源基因转染的方法.
关键词： 人脐静脉血管内皮细胞 基因转染 阳离子脂质体 电穿孔
