首页 > 文献资料
-
靶向B7/CD28共刺激信号系统防治移植物抗宿主病的新策略
移植物抗宿主病(GVHD)已成为临床异体造血干细胞移植(HSCT)面临的大障碍之一,如何改善或克服现有免疫抑制剂或方法存在的弊端,抑或创造出新一代理想、高效、特异、低毒、能防治或减弱GVHD的新策略或措施,已成为迫切需要解决的问题,这也是当今异体造血干细胞移植与移植免疫学研究领域的中心课题.现已证实,无论是对于免疫耐受的诱导,还是在GVHD的防治方面,B7:CD28/T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)共刺激信号系统均极为重要,正成为当今异体造血干细胞移植、器官移植、移植免疫和相关新型免疫抑制剂创新性开发研究领域关注的焦点.
-
阻断CD40/CD40L共刺激通路延长大鼠移植肝脏存活时间
T细胞介导的免疫应答在移植排斥反应中起重要作用,共刺激信号在T细胞活化中是不可或缺的,CD40/CD40L可提供共刺激信号.我们利用腺病毒介导CD40Ig融合基因阻断CD40/CD40L通路,探讨其延长移植肝脏存活的机制.一、材料和方法1.材料:CD40、白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(美国R&D公司),羊抗兔CD40多克隆抗体(Abcam公司).
-
CTLA4Ig与CD40Ig局部共转染诱导异种大鼠移植肾免疫耐受的影响
CD28-B7和CD40-CD40L共刺激分子系统是T细胞依赖的免疫反应启动和维持所必不可少的基本信号系统.缺乏或阻断共刺激信号,将会引起T细胞的无反应性或细胞凋亡.我们用CTLA4Ig和CD40Ig双基因局部转染大鼠肾脏后进行异种移植,观察双基因局部共转染能否诱导移植肾免疫耐受.
-
阻断CD28/B7和CD134/CD134L共刺激通路对心脏移植排斥反应的影响
CD134-CD134L(也叫OX40-OX40L)通路是活化T细胞进一步增殖、分化为效应细胞和记忆细胞所必需的共刺激信号,是T细胞介导的免疫应答的关键共刺激信号[1].CD134的表达不依赖CD28-B7信号,但是CD28-B7信号可以促进CD134的表达.同时CD28-B7信号和CD134-CD134L信号在时空表达上具有序贯性,分别作用于T细胞活化、增殖、分化的早期和晚期阶段[2,3].我们本文利用排斥反应强烈的不同种系间的心脏移植模型,观察单独和同时阻断CD28-B7和CD134-CD134L信号通路对抗排斥反应的效果.
-
小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中可诱导共刺激分子的表达及阻断其对排斥反应的影响
移植胰岛长期存活率不高,主要原因是移植术后排斥反应[1,2],共刺激信号在排斥反应的发生中起重要作用.本实验旨在观察共同刺激分子-可诱导其刺激分子(ICOS)是否参与了小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的发生,并用ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)阻断ICOS,研究其对排斥反应的抑制作用.
-
IFN-γ对小鼠心脏移植免疫耐受的影响
目的 探讨γ干扰素(IFN-γ)对阻断共刺激信号CD40-CD40配体所诱导的小鼠心脏移植免疫耐受的作用.方法 移植心脏和脾脏取自行心脏移植后的同种同系受体和同种异系受体(包括接受和未接受抗CD40配体抗体治疗),使用实时定量RT - PCR方法测定IFN -γ的表达.比较野生型小鼠和IFN-γ基因去除小鼠受体移植物的存活时间.同时比较接受MR-1治疗的野生型小鼠受体和IFN-γ基因去除小鼠受体的CD4+T细胞混合淋巴细胞反应和CD8+T细胞的细胞毒性.结果 发生排斥反应的移植物较免疫耐受移植物表达更高的IFN-y.IFN-γ基因去除小鼠受体如未接受免疫抑制治疗,移植物存活时间无明显延长,较之野生型小鼠受体反而有所缩短.使用MR-1在野生型小鼠受体中诱导出移植物的长期存活,但在IFN-γ基因去除小鼠受体中却无类似效果.1FN-γ缺失使T细胞的增殖活性及细胞毒性增强.结论 在阻断共刺激信号CD40-CD40配体所诱导的移植免疫耐受中,IFN-γ能够促进免疫耐受状态的形成.
-
树突状细胞的抗肿瘤实验研究
树突状细胞(dendritic cells, DC)DC是一类具有独特形态的新型细胞群体,是目前发现的功能强的一类专职性抗原提呈细胞,也是体内唯一能激活初始型T细胞的抗原提呈细胞.DC可以通过MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子途径提呈抗原,并提供充分的共刺激信号,因而在肿瘤免疫中起着举足轻重的作用.
-
CTLA-4 Ig对重型再生障碍性贫血患者骨髓白介素-10水平的影响——附40例分析
目的:研究细胞毒性T细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4)和人IgG1的重组融合蛋白CTLA-4 Ig对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓白介素-10水平的影响.方法:将40例重型再障患者平均分为2组,抽取骨髓并分离骨髓单个核细胞,其中A组加入CTLA-4 Ig,B组为对照组,另收集骨髓细胞学检查正常的20例外科手术患者的骨髓作为C组,3组均用ELISA方法检测骨髓单个核细胞培养上清液中的白介素-10水平.结果:A组患者骨髓白介素-10水平为(208±71)ng/L,B组与C组相应为(135±64)ng/L、(443±157)ng/L.患者骨髓白介素-10水平低于正常对照组,A组骨髓白介素-10水平高于B组(均为P<0.01).结论:重型再障患者白介素-10的水平下降,应用CTLA-4 Ig可提高白介素-10的水平.
-
Toll样受体研究进展与自身免疫性疾病
人类Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是近年来发现的一类新的细胞表面信号传导跨膜受体,它不仅在天然免疫系统中识别病原微生物、激活先天性免疫应答,是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体;而且还使抗原提呈细胞(APC)识别病原体、产生共刺激信号而启动获得性免疫反应,是人体先天免疫和后天获得性免疫的桥梁.
-
CD154胞外区基因局部修饰对大鼠移植肾存活的影响
目的观察CD154胞外区基因局部修饰大鼠供肾对延长移植肾存活的效能.方法以CD154基因重组腺病毒为载体,将CD154胞外区基因转入BN大鼠供肾,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.结果转染组移植肾存活(28±7.3) d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低.结论 CD154基因局部转染可明显延长移植肾存活时间.
-
腺病毒介导CTLA4Ig基因转染骨髓基质细胞及其对CD34+细胞粘附力的影响
目的通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)中的表达,探讨CTLA4Ig基因修饰的BMSCs对CD34+细胞的粘附力的变化.方法以CTLA4Ig-重组腺病毒按感染复数(Mutiplicity of infection,MOI)50转染BMSCs,免疫组织细胞化学确定CTLA4Ig的表达,免疫磁珠(MACS)阳性选择分选骨髓CD34+细胞,流式细胞仪检测其纯度,通过测定粘附于BMSCs的3H-TdR标记CD34+细胞的 cpm值观察CTLA4Ig基因修饰的骨髓基质细胞的粘附力变化.结果免疫细胞化学染色示CTLA4Ig表达阳性率达85%(MOI=50),弥漫性定位于细胞质;免疫磁珠阳性选择获取的骨髓CD34+细胞纯度可高达97.8%;转染组与对照组BMSCs对CD34+细胞的粘附力无显著差异(P>0.05).结论 CTLA4Ig-重组腺病毒能有效介导CTLA4Ig基因在BMSCs中表达,并对其粘附力无显著影响.
-
PDL1修饰树突状细胞对大鼠同种异体肾移植存活的影响
目的 观察激活负性共刺激信号PD1-PDL1对延长移植肾存活的效能.方法 以PDL1Ig基因重组腺病毒为载体,将PDL1Ig基因转入BN大鼠树突状细胞(DC)细胞同时输注受体,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染DC输注为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.结果 转染组移植肾存活(41±7.6)d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低.结论 PDL1基因修饰的DC可以明显延长移植肾存活时间.
-
BTLA介导的负调共刺激信号对混合淋巴细胞反应抑制的研究
目的 HVEM基因突变体腺病毒载体对大鼠混合淋巴细胞反应(MLR)的影响.方法 RT-PCR获得人HVEM的cDNA,使其与LIGHT分子结合的表位点突变,保留与BTLA结合的关健位点.构建经修饰的HVEM基因的复制缺陷型腺病毒载体Adv-mHVEM-IRES2-EGFP并对其进行鉴定和转染效率测定.将该载体用于混合淋巴细胞反应中,观察对淋巴细胞增殖的影响.结果 成功构建HVEM突变体和EGFP复制缺陷型腺病毒载体,经过测序与预期一致,体外培养细胞转染效率达到95%以上.该载体能够对大鼠MLR有明细的抑制作用.结论 构建的腺病毒载体能够共表达目的基因的产物HVEM突变体和EGFP蛋白,对体外细胞具有高效转染能力.该载体能够对大鼠混合淋巴细胞反应有明显的抑制作用.
-
树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫
T细胞介导的免疫应答在抗肿瘤免疫和抗病毒免疫中起主导作用,T细胞的致敏激活和扩增依赖于抗原提呈细胞(APC)提呈相应的抗原多肽和提供共刺激信号,分泌Th1型应答主导因子,诱导机体生成抗原特异性CTL,并通过细胞溶解机制和非细胞溶解机制对肿瘤或病毒产生杀伤或抑制,因而APC是启动机体产生抗肿瘤免疫和抗病毒免疫的中心环节,能否进行有效的抗原提呈直接关系到免疫激活或免疫耐受的诱导.APC包括树突状细胞(Dendritie cells,DC)、巨噬细胞、B细胞等,其中DC是机体有效、功能强的抗原提呈细胞,其在激发免疫反应中起核心作用,因此,DC在肿瘤和抗病毒免疫中的作用研究越来越受到广大学者的重视.
-
腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰对骨髓基质细胞功能的影响
目的通过腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),探讨基因修饰对BMSCs主要功能的影响.方法以CTLA4Ig-重组腺病毒转染BMSCs,通过测定粘附于BMSCs层的3H-TdR标记CD34+细胞的 cpm值,观察基因修饰对其粘附力影响;通过观察骨髓基质细胞支持CD34+扩增的细胞总数及集落形成细胞数(colony forming cell,CFC)的变化,评价基因修饰对BMSCs支持CD34+细胞扩增能力的影响.结果转染组与对照组BMSCs对CD34+细胞的粘附力及支持CD34+细胞扩增的能力均无显著差异(P>0.05).结论适当条件下,腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰BMSCs不影响其对CD34+细胞的粘附力及支持CD34+细胞扩增的能力.
-
CTLA4Ig在基因治疗中的应用
CTLA4Ig由CTLA4的胞外链与IgG1 Fc段融合而成,具有与CTLA4胞外段可溶性蛋白完全相同的生物学功能.新近的研究发现,CTLA4Ig除直接作为治疗基因进行基因治疗外,还能显著提高基因治疗中转基因表达等,本文就此做一文献综述.
-
重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞活化的抑制作用
目的探讨基因重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响.方法于不同时相点在Con A刺激的小鼠脾淋巴细胞及BALB/c与昆明种小鼠混合淋巴细胞培养中加入不同剂量hCTLA4Ig,应用3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖情况.结果重组hCTLA4Ig能显著抑制Con A刺激的脾淋巴细胞及混合淋巴细胞反应中的细胞增殖.结论重组hCTLA4Ig能抑制鼠淋巴细胞的活化.
-
CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34+细胞扩增的实验研究
目的通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞(BMSCs)中的表达,探讨CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34+细胞扩增的功能变化,为该基因修饰的BMSCs联合造血干细胞移植(HSCT),达到预防移植物抗宿主病(GVHD )和纠正预处理损伤的造血微环境(HIM)积累实验依据.方法以CTLA4Ig-重组腺病毒按感染复数(Multiplicity of infection ,MOI)50转染BMSCs,以RT-PCR检测目的基因转录;免疫磁珠(MACS)阳性选择分选骨髓CD34 +细胞,流式细胞仪检测其纯度;通过骨髓基质细胞支持CD34+扩增的细胞总数及集落形成细胞数(CFC)的变化,比较转染和未转染BMSCs在支持CD34+细胞扩增方面的差异.结果 RT-PCR在转染组及转染后传两代BMSCs中检测到CTLA4Ig 基因的转录;通过观察扩增后细胞总数及CFC数的变化,发现CTLA4Ig基因转染组与未转染组 BMSCs支持CD34+细胞扩增的能力也无显著差异(P>0.05).结论 CTL A4 Ig-重组腺病毒有效介导目的基因对BMSCs的转染,在MOI为50时对其支持造血的功能无显著影响.
-
抗CD86单克隆抗体对哮喘小鼠TH1/TH2细胞因子的影响
目的观察抗CD86单克隆抗体对卵蛋白干粉(OVA)致敏并刺激小鼠TH1和TH2细胞因子比例的变化,为防治哮喘提供实验依据.方法经OVA致敏的雌性Balb/c于激发前腹腔注射抗CD86单克隆抗体及同型对照IgG2α 50 μg,末次激发48 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和干扰素-γ(INF-γ)水平.结果以OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平升高[分别为(64.23±3.91)pg/mL、(379.84±73.02)pg/mL],与PBS对照组[分别为(22±2)pg/mL、(245.75±50.01)pg/mL]比较,差异有显著性(P<0.05);OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中INF-γ水平降低[(98.73±16.41)pg/mL],与PBS对照组[(218.35±48.63)pg/mL]比较,差异有显著性(P<0.05).抗CD86单克隆抗体组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平降低[分别为(35.78±4.88)pg/mL、(222.98±58.68)pg/mL],而INF-γ水平升高[(206.92±47.8)pg/mL],与哮喘对照组及同型对照IgG2α组(98.73±16.41)pg/mL、(102.32±15.49)pg/mL比较差异有显著性(P<0.05).结论抗CD86单克隆抗体通过阻断共刺激信号,纠正TH1/TH2失衡,从而达到抗气道炎症的作用.
-
B7-H4——免疫调控以及肿瘤治疗的新靶点
B7-H4又称B7sl或B7x,是B7家族中的新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生,进展和转归中发挥重要作用.对B7-H4信号通路的进一步的研究必将为自身免疫性疾病、病毒感染性疾病和器官移植后排斥反应中T细胞介导的免疫应答调控提供了新的途径,同时也为肿瘤的诊断、治疗提供崭新的策略.