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荷载溶瘤病毒细胞载体的研究进展
溶瘤病毒的给药方式分瘤内注射和静脉注射.静脉注射溶瘤病毒可被免疫系统完全排除而不能发挥其抗肿瘤作用.应用具有淋巴细胞特性、干细胞特性、肿瘤细胞特性的细胞载体荷载并运输溶瘤病毒到达肿瘤部位发挥作用,可更好地发挥抗免疫/肿瘤效应.
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HOXB7 siRNA表达载体在裸鼠体内对人恶性黑色素瘤细胞株的影响
目的 探讨转染同源盒第7基因(HOXB7)siRNA质粒表达载体对人恶性黑色素瘤细胞株A375在裸鼠体内生长的影响.方法 裸鼠皮下接种人恶性黑色素瘤A375细胞,对2周后形成的瘤块进行分组干预.随机分为生理盐水对照组、阴性质粒组、HOXB7质粒组,观察转染后各组裸鼠移植瘤的生长情况;免疫组化法比较瘤体内微血管密度(MVD).结果 HOXB7质粒组的裸鼠移植瘤块生长慢、体积明显小于生理盐水对照组[(0.134±0.039)cm3比(1.006±0.235)cm3,P＜0.05],而阴性质粒组瘤块体积大小与生理盐水对照组无统计学差异[(0.929±0.157)cm3比(1.006±0.235)cm3,P＞0.05].HOXB7质粒组裸鼠体内肿瘤MVD低于生理盐水对照组[(2.8±1.9)比(19.9±5.6),P＜0.05],阴性质粒组与生理盐水对照组无统计学差异[(18.1±5.5)比(19.9±5.6),P＞0.05].结论 针对HOXB7 siRNA质粒表达载体可有效抑制A375细胞裸鼠体内肿瘤生长和瘤内血管生成.
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白血病人骨髓间充质干细胞是否是恶性细胞?
本研究探索白血病人的骨髓间充质干细胞是否也具有白血病恶变特征.分别分离培养急性早幼粒细胞白血病(APL)及慢性髓系白血病(CML)患者的骨髓间充质干细胞并与正常对照比较其形态、生长曲线、细胞表面标志及是否带有白血病细胞的恶性克隆性的基因异常标志.结果表明:白血病患者的骨髓间充质干细胞在细胞生物学特征方面与正常健康人无任何明显差异,未发现白血病患者的骨髓间充质干细胞带有白血病细胞的恶性克隆性基因改变.结论:来源于白血病患者的骨髓间充质干细胞并无相应白血病细胞的克隆性异常,提示可能作为自体移植的辅助治疗和细胞治疗或基因治疗的可供选择的细胞载体.
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神经干细胞治疗帕金森病的可行性探究
不少研究表明,动物成体和胚胎脑中也存在一类具有多种潜能的原始细胞,这类细胞在特定因素影响或诱导下,能被特异性地分化为某种特定的神经元或胶质细胞以替代丢失的神经元,称之为神经干细胞.它们有着类似于皮肤和造血系统内干细胞的功能.因此,神经干细胞具有极大的可塑性,不仅可以替代丢失的神经元,在神经发育及神经损伤中发挥作用,同时还可以作为细胞载体用于神经系统疾病的基因治疗.这无疑将为中枢神经系统功能重建和神经再生带来新的希望.
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骨组织工程研究进展概况
1 概述近年来,随着细胞生物学和生物材料科学的发展,组织工程学作为高新技术新领域的一门多学科交叉的新兴边缘学科随之应运而生,并得到了迅速的发展.组织工程学是应用生命科学和工程学原理与方法,去认识哺乳动物的正常和病态组织的结构-功能关系,以研究、开发用于修复和维护或增进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的一个新学科.其基本方法是将体外培养的高浓度组织细胞,扩增后吸附于一种生物相容性良好、并可被人体逐步降解吸收的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)上.该材料可为细胞提供生存的三维空间,使细胞按预制形态的三维支架生长.然后将这种细胞生物材料复合体植入机体病损部位,在生物支架逐步降解吸收过程中,种植的细胞继续增生繁殖,形成了新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官,达到修复创伤和重建功能的目的.骨组织工程学是在组织工程研究领域中专门从事研究组织工程化新生骨组织的一个研究分支,并被认为是具有前途和可行性的一个分支.因为它们和其他内脏组织不同,具有相对单一的细胞成分,相对单一的框架,客观上降低了体外复制的难度[1].在骨组织工程领域的研究主要在以下几个方面:①选择细胞来源,②在一定细胞因子的调控下增殖,体外培养表达成骨细胞的显型,③选择具有三维空间框架的细胞外基质,即细胞载体[2].
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成骨细胞的成骨作用及复合移植研究进展
大型骨缺损一直是骨外科损伤需要解决的难题之一,传统的自体骨移植和异体骨移植已经远远满足不了临床的需求,寻找理想的骨组织替代物始终是实验室研究的重点课题之一.近年来,骨组织工程技术为这一难题的解决带来了新的希望,其方法是:在体外培养并扩增成骨细胞,然后将其种植在体外细胞载体上,构建组织工程骨.本文对体外培养成骨细胞的成骨能力,细胞载体的分类、性质以及成骨细胞与载体复合物进行了综述,希望可以作为参考与大家共勉.
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人脂肪干细胞体外培养及细胞载体复合物诱导培养
目的：探讨人脂肪干细胞体外培养方法以及对细胞载体复合物诱导成软骨分化的潜能。方法从人脂肪组织分离人脂肪间充质干细胞（ hADSCs），噻唑盐（ MTT）法检测细胞生长情况，流式细胞术hADSCs细胞表面分子标志，hADSCs成脂、成骨和成软骨的诱导及鉴定检测。 hAD-SCs与不同浓度胶原纤维蛋白溶液混合制成细胞载体复合物凝胶，14 d后进行细胞鉴定。结果体外分离、培养出高活性hADSCs，增值曲线呈S形。细胞CD29、CD90、CD105呈阳性表达，CD34、CD45呈阴性表达。 hADSCs成脂诱导后细胞呈类圆形，在细胞浆内有透亮的脂滴出现，油红 O染色脂滴呈鲜红色。成骨诱导后细胞呈为不规则形，免疫荧光检测细胞表达骨唾液酸蛋白、骨桥蛋白、骨连接蛋白。 hADSCs成软骨诱导后细胞形态变为铺路石样，甲苯胺蓝染色细胞基质呈蓝色，免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白染色呈阳性。阿利新蓝染色细胞载体复合物成蓝色，免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白结果显示，混合胶原蛋白组较单一胶原蛋白组更强阳性表达。结论本研究成功分离培养出高度同源性 hADSCs，具有多分化潜能。复合胶原纤维蛋白载体诱导hADSCs成软骨细胞分化，可能作为修复关节软骨缺损的理想载体支架材料。
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兔膀胱无细胞基质作为组织工程学细胞载体的评价
目的 评价膀胱无细胞基质移植物(BAMG)作为组织工程学细胞载体的可行性.方法 10只兔行半膀胱切除术,切取的一半膀胱制备BAMG.另选择20只兔行半膀胱切除术后,用BAMG重建兔膀胱.测定术前和重建术后8周时的膀胱容量、压力和顺应性.HE染色和透射电镜观察BAMG以及重建术后8、16周时的兔膀胱.结果 BAMG中未见细胞成分.重建兔膀胱8周时,BAMG中除多层移行上皮外,其余组分还不成熟.16周时,重建膀胱和正常膀胱组织已无法区别.重建膀胱术后8周与术前比较,膀胱的容量、压力和顺应性无显著差异(P＞0.05).结论 BAMG是组织工程学技术中理想的细胞载体.
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肝脏组织工程种子细胞来源研究进展
组织工程学是应用工程学和生命科学的原理与方法,研究机体的组织结构与功能的关系,并开发生物代用品,以恢复、维持或改善组织的形态和功能的一门新兴学科.其基本的研究方法包括:分离某种细胞在体外进行培养扩增后,将高浓度、有活力的种子细胞接种于生物相容性良好、具有预制形态和空间结构、并可生物降解的合成聚合物或天然的细胞载体中,再植入体内或缺损部位,在生物材料逐步降解吸收的过程中,种子细胞继续增生繁殖、分泌细胞外基质,形成新的具有特殊功能和形态的相应组织或器官,达到修复缺损和功能重建的目的.
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骨髓间充质干细胞体内外对胃癌细胞的趋向性
目的:探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,hBMSC)对胃癌细胞的趋化性,为将MSC研发成为胃癌基因治疗载体提供实验依据.方法:骨髓培养法分离培养hBMSC并进行流式细胞术鉴定.Transwell实验检测hBMSC对胃癌MKN45细胞和人成纤维细胞(human fibroblast,hFB)的趋化能力.建立MKN45细胞裸鼠移植瘤模型,感染Lenti-EGFP(MOI为50)的hBMSC或hFB细胞经尾静脉注射入荷瘤小鼠,荧光显微镜下观察移植瘤组织及各脏器GFP的表达.结果:培养第3代的hBMSC细胞CD44、CD105阳性率为(96.7±1.84)％、(98.1±0.95)％,而CD34、CD45表达阴性.hBMSC细胞向MKN45细胞的趋化能力明显强于胃上皮细胞GES-1组及空白对照细胞[(239.5-54.3)vs(43.57±4.6)、(37.3±4.7)个,P＜0.01],且hBMSC向MKN45细胞的趋化能力明显强于hFB细胞向MKN45细胞的趋化能力[(239.5 ±54.3)vs(27.7 ±16.7),P＜0.01].与hFB相比,hBMSC对胃癌移植瘤组织具有明显趋向性；hBMSC组移植瘤组织内可见GFP表达,移植瘤小鼠部分肝脏(20％)及肺脏(20％)有GFP表达,但较移植瘤组织内GFP表达率和强度均低(P＜0.05).结论:hBMSC在体内外对胃癌细胞均有特异性趋化作用,有望研发为胃癌基因治疗的良好载体.
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携带溶瘤病毒细胞载体的研究进展
溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤性病毒,可通过多种机制发挥抗肿瘤作用.然而,机体的免疫监视作用使溶瘤病毒不能高效到达肿瘤部位而不足以治疗肿瘤.细胞载体作为溶瘤病毒的"特洛伊木马"可使溶瘤病毒逃避免疫监视,且两者联合具有更好的抗肿瘤疗效.根据细胞载体对肿瘤靶向程度的差异,细胞载体可分三大类:靶向肿瘤细胞的细胞载体,包括抗原特异性T细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞;靶向肿瘤基质的细胞载体,包括间充质干细胞、内皮系细胞和肿瘤相关巨噬细胞;靶向组织或器官的细胞载体,包括外周血淋巴细胞、树突状细胞和肿瘤细胞等.本文主要介绍该三类细胞载体的研究及应用进展,讨论其存在的问题与应对对策,并展望未来发展方向.
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三种不同载体材料体外生物相容性的比较
目的探讨纳米晶羟基磷灰石胶原复合材料(NHAC)、非纳米晶羟基磷灰石胶原复合材料(HAC)和珊瑚羟基磷灰石(CHA)的体外生物相容性,为组织工程提供理想的细胞基质载体材料.方法将人骨髓基质干细胞分别与上述三种载体材料体外复合培养,应用倒置显微镜、扫描电镜、四唑盐比色试验(MTT法)及碱性磷酸酶(ALP)活性测定,对材料上复合培养的细胞进行形态学和功能测定.结果骨髓基质干细胞能在NHAC和CHA两种材料上良好地黏附、增殖和生长.细胞的活性和碱性磷酸酶活性未受到材料的影响;而HAC不利于人骨髓基质干细胞的黏附、增殖,并使碱性磷酸酶活性降低.结论 NHAC和CHA两种材料具有良好的生物相容性,可作为骨组织工程理想的骨替代材料;HAC不适合做细胞外基质.
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高建青教授课题组在构建基于干细胞的新型生物类靶向传递系统的应用研究上取得新突破
2015年5月8日，浙江大学药学院药物制剂研究所高建青教授课题组在国际控释学会会刊《控释杂志》（ Journal of Controlled Release）在线发表了题为“Synergistic effects of co－administration of suicide gene expressing mesenchymal stem cells and prodrug－encapsulated liposome on aggressive lung melanoma metastases in mice”的研究论文（ http：／／www．sciencedirect ． com／science／article／pii／S0168365915003053）。该研究利用骨髓间充质干细胞的肿瘤归巢性质构建了具有生物活性的细胞载体传递系统，并联合脂质纳米载体进行共给药，实现了药物－基因的共靶向传递，并在小鼠恶性肺黑色素转移瘤模型上取得了良好的抑瘤效果。
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CIK细胞在荷瘤鼠体内的肿瘤靶向性与安全性
目的：探讨CIK细胞对肿瘤组织的靶向性及其在荷瘤鼠体内的运行轨迹和对主要脏器的影响。方法分离制备人CIK细胞,采用体外Transwell迁移试验观察CIK细胞对人乳腺癌细胞MDA-MB-435的靶向迁移效应；以该细胞系接种BALB/c裸鼠建立乳腺癌移植瘤模型,尾静脉注射DiI标记的CIK细胞,应用活体成像和病理学检查观察CIK细胞运行轨迹及对主要脏器的影响。结果 CIK细胞在体外培养14~20天时,细胞增殖达到高峰,CD3+CD56+ T细胞的比例也达到高值。体外Tr-answell迁移实验显示,随着肿瘤细胞上清液浓度的增加,CIK细胞的迁移数量也随之增多。荷瘤裸鼠尾静脉注射DiI标记的CIK细胞后,活体成像显示肿瘤组织24 h开始出现荧光信号,48 h达到强；HE和免疫组化染色结果显示,注射后6 h肿瘤周围开始聚集CIK细胞,48 h多,第14天时肿瘤部位仍有CIK细胞存在,各脏器均未发现由CIK细胞导致的病理组织学损伤。结论 CIK细胞在体内外对肿瘤组织均具有靶向性,对正常组织有安全性,可作为一种有潜力的细胞载体应用于肿瘤的靶向治疗。
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间质干细胞与肿瘤的关系研究进展
间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的非造血干细胞,具有很好的组织迁移能力和肿瘤靶向性.MSCs用于抗肿瘤治疗已经开展了广泛的研究,MSCs可以作为细胞载体发挥抗肿瘤作用,同时通过促肿瘤血管生成、免疫抑制、分化为肿瘤相关成纤维细胞等方式促进肿瘤的恶性行为.该文对近年来该领域的研究进展进行简要综述.
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肌腱组织工程研究新进展
组织工程化肌腱原理是将分离的高浓度有活力的肌腱种子细胞种植于生物相容性好,可生物降解的细胞载体中,体外培养后植到缺损部位,形成新的、自身的,具有功能的肌腱组织,终达到生物学意义上的完全修复.现就肌腱组织工程中肌腱细胞的特征、种子细胞来源、支架材料的制备、临床应用和面临的问题和展望等做一综述.
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生物蛋白胶作为骨髓间充质干细胞移植载体的体外相容性研究
[目的]构建骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)-生物蛋白胶复合体评价其生物相容性,探讨其作为种子细胞载体的可行性.[方法]本实验分为两组,实验组5×107骨髓间充质干细胞(BMSCs)与生物蛋白胶相混制备MSC -生物蛋白胶复合体,空白组骨髓间充质干细胞(BMSCs).通过Dead/live染色观察两组的细胞形态及21 d内细胞的存活情况,同时分别在1、3、7、14 d各取上清进行Elisa检测并计算其分泌释放NGF和BDNF的浓度.[结果]实验组培养3d后光镜下观察呈多个突起,细胞形态良好,空白组呈菱形和多角形；Dead/live染色结果提示体外培养1d,两组细胞的存活率都在90％,比较无差异,无统计学意义(P＞0.05),7、14、21 d两组细胞的存活率有差异,具统计学意义(P＜0.05),存活率在60％以上；Elisa检测结果显示两组中NGF在1d时有差异,具统计学意义(P＜0.05),3、7、14 d时NGF和BDNF的含量比较无统计学意义(P＞0.05),结果显示生物蛋白胶对MSC分泌的细胞因子NGF和BDNF的释放没有明显影响.[结论]生物蛋白胶是一种理想的可用于临床的细胞载体,具有良好的生物相容性,BMSCs -生物蛋白胶复合体能持续稳定的释放神经生长因子BDNF和NGF.
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兔骨髓间充质干细胞复合两种材料体外生物相容性的比较
[目的]探讨丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原/骨体外生物相容性,为组织工程寻找理想的载体材料.[方法]体外培养兔骨髓间充质干细胞分别于丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原/骨体外复合培养,应用扫描电镜、激光共聚焦显微镜,四唑盐比色试验(MTT法),观察材料上复合培养的细胞的生物学特性.[结果]兔骨髓间充质干细胞可以在丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原/骨良好的黏附、增殖和生长.两种材料相比较其相容性没有明显的差异.[结论]丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原/骨均具有良好的生物相容性,可以作为组织工程理想的载体材料.
关键词： 组织工程 细胞载体 丝素蛋白 纳米晶羟基磷灰石胶原 生物相容性 -
多糖生物膜细胞载体特性的实验研究
目的探讨多糖生物膜(PSBM)作为角膜内皮细胞培养及移植载体的可行性.方法通过PSBM的不同制剂给予大白鼠口服,悬浮培养仓鼠肾(BHK21)细胞及兔角膜层间植入,观察其毒性、生物相容性及可吸收性.结果食用含多糖微颗粒的饲料60 d后,大白鼠无肝肾功能及组织学改变;PSBM微载体悬浮培养72 h后,细胞密度可增值3倍以上;角膜层间植入PSBM后2～3个月时,植入物基本吸收.结论PSBM属安全无毒物质,具有很好的细胞亲和性、生物相容性及可吸收性,是CE细胞培养及移植的良好载体.
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表达胶质细胞源性神经生长因子的骨髓基质干细胞的神经分化潜能
有研究表明,骨髓基质干细胞(BM-SC)可以向神经细胞分化,且易于获取[1],因此被认为是治疗中枢神经系统疾病理想的细胞载体.我们以胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)为目的基因,采用阳离子脂质体转染方法,对BMSC的基因工程化和神经分化潜能进行了初步研究.
