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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对涎腺腺样囊性癌细胞系细胞MGMT和hMLH1基因表达的影响
目的 观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对体外培养人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞系细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT)和人类mutL同源物1(homo sapiens mutL homolog 1,hMLH1)基因表达的影响,探讨DNA甲基转移酶抑制剂应用于SACC治疗的可行性及机制.方法 用不同浓度5-Aza-CdR分别处理体外培养SACC-83和SACC-LM细胞作为药物处理组,以药物处理浓度0 μmol/L为对照组.甲基噻唑基四唑法确定5-Aza-CdR的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration of a substance,IC50)；实时聚合酶链反应和反转录聚合酶链反应检测用药后细胞中MGMT和hMLH1 mRNA表达水平.结果 药物处理细胞24 h后细胞形态发生变化,并且随时间延长变化愈加显著.5-Aza-CdR对SACC-83和SACC-LM细胞的IC50分别为(11.816±0.023)、(5.751± 0.049) μmol/L.经5-Aza-CdR处理后,SACC-83和SACC-LM细胞中MGMT和hMLH1 mRNA表达增高1～5倍,MGMT和hMLH1在药物处理组与对照组之间的表达差异有统计学意义(P＜0.01).结论 5-Aza-CdR可改变细胞形态,上调MGMT和hMLH1 mRNA的表达,其机制可能与5-Aza-CdR反转MGMT、hMLH1基因DNA启动子区高甲基化状态有关.
关键词： 癌 腺样囊性 脱氧胞苷 半数抑制浓度 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 -
铜蒸气激光照射下光敏剂血卟啉衍生物和血卟啉单甲醚杀伤特性研究
目的 测定血卟啉衍生物(HpD)和血卟啉单甲醚(HMME)在铜蒸气激光照射下的半数杀伤浓度(IC50)和半数杀伤光剂量(IED50),了解HpD与HMME杀伤特性的差异.方法 将小鼠肺血管内皮细胞接种于96孔培养板,然后加入用DMEM(低糖)培养基配置的光敏剂中,4h后应用铜蒸气激光(510.6nm和578.2nm)单色光分别照射,24h后用MTT法测定细胞存活率.结果 在510.6nm和578.2nm波长下,饱和光剂量条件下HMME的IC50分别是HpD的1.31和1.24倍,在饱和光敏剂剂量条件下,HpD的IED50分别是HMME的1.18和1.17倍.结论 HpD在510.6nm和578.2nm波长的杀伤效应均较HMME强并和光剂量、波长密切相关.
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丹参酮Ⅱ A亚微乳抗肿瘤作用及对逆转SMMC-7721/VCR肿瘤多药耐药的影响
目的 研究丹参酮Ⅱ A亚微乳的抗肿瘤作用及逆转人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/VCR肿瘤的多药耐药性的作用.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721及SMMC-7721/VCR细胞,每种细胞都分为3组:实验组(细胞悬液+3种化疗药)、阴性对照组(细胞悬液+培养液)和空白对照组(培养液).丹参酮Ⅱ A亚微乳和丹参酮Ⅱ A以5个浓度(0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 μg· mL-1)对SMMC-7721细胞作用,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅱ A亚微乳作用24,48 h对SMMC-7721细胞的抑制作用;同时,检测长春新碱、顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)这3种化疗药对SMMC-7721、SMMC-7721/VCR细胞株及丹参酮Ⅱ A亚微乳干预后的SMMC-7721/VCR细胞株的半数抑制浓度(IC5o),观察丹参酮Ⅱ A亚微乳干预前后耐药细胞株的药敏性变化及药物逆转效果.结果 前4个浓度丹参酮Ⅱ A亚微乳对SMMC-7721细胞作用48 h的抑制率分别为47.93％,55.92％,66.34％,95.61％,IC50为(0.67±0.32)μg· mL-1;丹参酮Ⅱ A对其的抑制率分别为38.83％,49.31％,58.24％,82.46％,IC50为(1.91 ±0.53)μg·mL-,两者相比差异均有统计学意义(均P＜0.01).丹参酮Ⅱ A亚微乳对SMMC-7721细胞的抑制率随着浓度的增加而逐渐升高,呈剂量依赖性和时间依赖性.0.5μ g·mL-1丹参酮Ⅱ A亚微乳浓度对SMMC-7721细胞及SMMC-7721/VCR细胞的生长抑制率分别为9.53％,7.74％(均＜10％),说明两者均无明显毒性作用.0.5μg·mL-1丹参酮Ⅱ A亚微乳干预SMMC-7721/VCR细胞,长春新碱对SMMC-7721/VCR的半数抑制浓度由(12.27 ±0.84) μg·mL-1降为(3.25±0.14) μ.g·mL-1,逆转倍数为3.78.顺铂对SMMC-7721/VCR的半数抑制浓度由(20.42-0.18) μg·mL-降为(6.98±0.99)μg·mL-1,逆转倍数是2.93;5-FU对SMMC-7721/VCR的半数抑制浓度由(35.21±0.68)μg· mL-1降为(18.27±2.18)μg·mL-1,逆转倍数分别为1.93.与对SMMC-7721细胞作用相比,长春新碱、顺铂、5-FU对SMMC-7721/VCR细胞作用差异均有统计学意义(P＜0.01).与丹参酮Ⅱ A亚微乳干预后的SMMC-7721/VCR细胞作用相比,长春新碱、顺铂、5-FU对SMMC-7721/VCR细胞作用差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 丹参酮Ⅱ A亚微乳可以抑制SMMC-7721细胞及SMMC-7721/VCR细胞的生长;丹参酮Ⅱ A亚微乳在体外能够部分逆转SMMC-7721/VCR的多药耐药性.
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糖原磷酸化酶抑制剂高通量筛选模型的建立
目的:建立糖原磷酸化酶(GPa)抑制剂的体外高通量筛选模型.方法:用梯度离心方法提取大鼠肝脏GPa,以葡萄糖-1-磷酸作为底物,通过测定反应中磷酸根的释放量,间接反映肝脏GPa的活性.通过对反应体系的优化,调整反应条件,建立96孔微孔板的高通量筛选模型,用咖啡因对此模型进行验证,并评价高通量技术参数[Z'-因子(Z'-factor),信号本底比(signal to background,S/B),信噪比(signal to noise,S/N)].用此模型对5000个样品(包括合成化合物、天然提取物)组成的随机库进行体外筛选,考察这些样品对GPa的抑制作用.结果:确定反应体系条件是:反应温度25℃,反应时间30 min,底物浓度0.5 mmol·L-1,大鼠肝脏GPa的用量为250 ng.用此条件测定咖啡因对GPa的抑制曲线,计算其半数抑制浓度(IC50)为(285.3±39.6)μmol·L-1,与文献报道(IC50=240μmol·L-1)基本一致;本模型技术参数Z'-因子=0.79,S/B=0.45,S/N=11.32,表明此模型可以用于高通量筛选.应用此模型筛选得到有活性的化合物9个,其IC50在3.56～45.75/μmol·L-1.结论:建立的体外GPa抑制剂高通量筛选模型具有快速、微量、准确的特点,可以作为研究降糖药的工具.
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黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用
目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus, TFA)在体外实验条件下对人肝癌细胞(BEL-7402)生长、繁殖的影响.方法:以BEL-7402细胞为实验对象,5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照,比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后,TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响.结果:数据表明TFA处理48h半数抑制浓度(IC50)为40μg/ml, 5-FU为0.3μg/ml;TFA浓度达80μg/ml时可使BEL-7402细胞生长明显受挫(P<0.05),有丝分裂指数下降;与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多,胞浆出现大量空泡,核固缩.结论:TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用.
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尿毒清颗粒对CYP450与P-gp体外影响的初步研究
[目的]初步考察尿毒清颗粒(NDQ)对重组人细胞色素P450(CYP450)和P糖蛋白(P-gp)的体外影响.[方法]1)使用Promega P450-GloTM Screening System,通过荧光发光原理来检测NDQ组、抑制剂组对重组CYP450的IC50(半数抑制浓度)值,比较NDQ组与抑制剂组IC,来评价NDQ对重组人CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C 19,CYP2C9的抑制作用.2)使用BD ATPase Assay Kit,通过发光法检测NDQ组、空白对照组P-gp三磷酸腺苷(ATP)酶活性,比较NDQ组、空白对照组ATP酶活性来评价NDQ是否为重组人P-gp的底物或抑制剂.[结果]1)NDQ组与抑制剂组IC50值(g/L)如下,CYP1A2:17.47、3.37×10-6; CYP3A4:33、4.181 3×10-5; CYP2C9:10.39、1.056×10-3; CYP2D6:13.98、2.245 9× 10-6; CYP2C 19:9.251、1.442×10-3.2)NDQ组的P-gp ATP酶的活性为16.39 nmol/(mg· min),空白对照组的ATP酶活性为4.72 nmol/(mg· min).[结论]1)NDQ组IC5o大于对应抑制剂组IC50,NDQ对重组人CYPlA2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C19、CYP2C9基本没有抑制作用.2)NDQ组ATP酶活性高于空白组并差异有统计学意义,NDQ可能为重组人P-gp的抑制剂或底物.
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嗜麦芽窄食单胞菌生物被膜形成的体外抗菌活性研究
目的:研究天津地区嗜麦芽窄食单胞菌(SMA)感染与耐药现状,观察临床常用抗生素对其形成生物被膜后的作用效果.方法:分析临床分离的非重复51株SMA对左氧氟沙星、环丙沙星、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮舒巴坦、庆大霉素、红霉素和磺胺甲噁唑8种抗生素的耐药情况,通过建立SMA生物被膜的体外模型,测定其对生物被膜的抑制浓度(BIC),与相应抗生素的低抑菌浓度(MIC)进行比较.通过扫描电镜观察抗生素作用后细菌生物被膜的形态学变化.结果:51株SMA对8种常用抗生素的耐药率分别是13.73%、82.35%、54.90%、50.98%、70.59%、82.35%、94.12%及45.10%;其中42株SMA利用微量接种针成功建立成熟生物被膜的体外模型;菌珠形成生物被膜后,每种抗生素的耐药菌株数和耐药程度均大幅度增加.结论:本地区分离的SMA具有耐药谱广、耐药率高特点;左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦对SMA有较强的抗菌活性.形成生物被膜后的SMA较浮游态细菌对抗生素的耐药程度增加.
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SOCS1基因沉默对人胰腺癌细胞增殖和干扰素-γ敏感性的影响
目的：在人胰腺癌细胞中观察细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）沉默对细胞增殖及干扰素-γ（IFN-γ）敏感性的影响，探讨SOCS1作为胰腺癌治疗靶点的可能。方法 Western blot及PCR验证SOCS1干扰序列沉默人胰腺癌细胞系PANC1中SOCS1的表达；给予IFN-γ刺激后，采用Western blotting方法观察转录激活因子（STAT）1及磷酸化STAT（pSTAT）1的变化；采用定量PCR的方法观察IFN-γ调节因子1（IRF-1）表达水平变化；MTT法检测胰腺癌细胞对IFN-γ敏感性的变化；细胞计数的方法观察细胞的增殖速度；采用流式细胞术的方法检测细胞周期的变化。结果将SOCS1干扰序列转染PANC1细胞后，SOCS1 mRNA及蛋白表达水平均明显下降。沉默SOCS1表达后，pshSOCS1-PANC1组细胞的IRF-1 mRNA水平及pSTAT1蛋白表达水平均显著升高（P<0.05），IFN-γ对PANC1细胞的半数抑制浓度（IC50）显著降低（P<0.01）；转染72 h后PANC1细胞数量较对照组显著减少（P<0.05）；SOCS1表达抑制后PANC1细胞G0/G1期细胞比例明显升高，而S期和G2/M期细胞比例明显减小，与对照组比较差异均有统计学意义。结论 SOCS1表达抑制后，人胰腺癌细胞株PANC1的增殖能力下降，并且对IFN-γ的敏感性增强。
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独角莲体外抗肿瘤实验研究
为探讨独角莲的体外抗肿瘤作用,将独角莲根茎水提物分别处理人宫颈癌系细胞( HeLa)、人白血病细胞( HL60)、人肺腺癌细胞(SPC)、人骨髓神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y) 24、48h后,应用体外细胞培养技术、倒置相差显微镜观察、Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖和毒性实验检测独角莲根茎水提物对各肿瘤细胞的生长抑制作用并筛选出对独角莲根茎水提物敏感的肿瘤细胞株,运用AV/PI双染流式细胞术对该细胞株生长抑制机理进行初步探讨.结果表明:独角莲根茎水提物对HeLa、HL60、SPC、SH -SY5Y细胞的生长具有抑制作用,与细胞作用48h时的IC50分别为2 575、16 054、2 077、0.862mg·mL-1,与细胞作用24h时的IC50分别为4 303、21 674、3.114、1.158mg·mL-1；倒置相差显微镜观察和流式细胞仪检测结果表明独角莲根茎水提物可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来抑制其生长的.
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β-羟基异戊酰基紫草素对高表达酪氨酸激酶肿瘤细胞系的生长抑制作用
目的验证β-羟基异戊酰基紫草素对体外培养的肿瘤细胞的生长抑制作用.方法 XTT比色法.结果低浓度的β-羟基异戊酰基紫草素抑制人类白血病细胞K562和U937的生长,半数抑制浓度分别是0.12 μmol/L和0.14 μmol/L.在较高剂量下,β-羟基异戊酰基紫草素抑制酪氨酸激酶高表达细胞系大鼠SR-3Y1和KDR/Flk-1-NIH3T3细胞以及人类表皮细胞癌细胞A431的生长.其半数抑制浓度分别是1.2 μmol/L、2.5 μmol/L、11.0 μmol/L.结论β-羟基异戊酰基紫草素对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用.
关键词： β-羟基异戊酰基紫草素 酪氨酸激酶 细胞毒作用 半数抑制浓度 -
独角莲乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究
目的:通过独角莲20%乙醇提取物对人胃腺癌MGC-803、肝癌Hep-2、肺癌A549、乳腺癌MCF-7细胞杀伤率、半数抑制浓度的测定,确定对独角莲20%乙醇提取物的佳敏感瘤株并通过透射电镜观察药物作用后该肿瘤细胞形态的变化.方法:1.采用体外细胞培养技术用MTT法,检测药物对各肿瘤细胞的生长抑制作用.2.透射电镜观察药物作用96h的肿瘤细胞形态.结果:独角莲20%乙醇提取物对胃癌MGC-803、肝癌Hep-2、肺癌A549、乳腺癌MCF-7细胞的生长有抑制作用,与细胞作用72h时的IC50分别为(74.14±5.29)mg/mL、(81.61±6.14)mg/mL、(128.26±11.43)mg/mL、(120.26±9.46)mg/mL,与细胞作用48h时的IC50分别为(94.55±6.85)mg/mL、(108.94±8.69)mg/mL、(187.78±9.87)mg/mL、(280.54±14.51)mg/mL;透射电镜观察结果表明独角莲20%乙醇提取物能使MGC-803细胞发生凋亡.结论:独角莲20%乙醇提取物对胃癌MGC-803瘤株敏感且可使该瘤细胞发生凋亡.
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表没食子儿茶素没食子酸酯联合叶酸杀伤胃癌细胞的实验研究
背景:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有抗肿瘤作用,对不同胃肠道肿瘤细胞系具有不同程度的、呈剂量依赖的杀伤作用.叶酸是一种水溶性维生素,叶酸缺乏可增加肿瘤的发生率,影响肿瘤细胞凋亡.目的:研究EGCG联合叶酸对胃癌细胞杀伤作用的影响.方法:以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测EGCG联合叶酸对胃癌细胞系MKN45、SGC7901、MKN28的杀伤作用.流式细胞仪测定两者对MKN45细胞周期的影响.结果:EGCG联合叶酸较EGCG单独作用对MKN45、SGC7901、MKN28细胞的杀伤作用增强,EGCG半数抑制浓度(IC50)分别降低28.4%、51.9%和40.0%.3种浓度的EGCG联合叶酸作用48 h后,MKN45细胞的细胞周期分布与对照组和EGCG组相比无明显变化(P＞0.05).结论:EGCG联合叶酸较EGCG单独作用对胃癌细胞的杀伤作用增强,但对MKN45的细胞周期分布无明显影响.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 叶酸 细胞系 肿瘤 半数抑制浓度 -
三苯氧胺联合化疗对人大肠癌细胞系SW480、HT29的作用
目的研究三苯氧胺联合化疗药物对人结肠癌细胞系SW480、HT29体外培养的影响及机制探讨.方法应用MTT法,比较单纯用三苯氧胺和三苯氧胺与化疗药物联合对SW480、HT29细胞系生长抑制作用,通过化疗药物的量-效关系曲线,观察三苯氧胺有否化疗增敏作用,同时对mdr1编码产物PgP的检测,探讨三苯氧胺可能的作用机制.结果在TAM浓度为5μmol/L时,能使SW480细胞系对5-FU、MTX的敏感性分别提高1.5976、1.6456倍;在10μmol/L时,使SW480、HT29细胞系对5-FU、MMC、MTX、ADM的敏感性分别提高4.1524、2.0244、4.7833、2.2323倍和4.7713、4.7865、4.2557、4.4713倍,差别有显著性(P＜0.05).化疗药物使体外培养的SW480、HT29细胞系产生耐药性(P1,P2＜0.05),TAM能显著逆转其耐药性(P3,P4＜0.05).结论在体外实验中,一定浓度的TAM能增加人结肠癌细胞系SW480、HT29对化疗药物5-FU、MMC、MTX、ADM的敏感性,其机制可能为TAM抑制mdr1编码产物P-gp的产生.
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3种常用抗癌药物对人肝癌细胞HepG2抑制作用的研究
目的:研究3种常用抗癌药物对于HepG2细胞的抑制情况.方法:细胞铺96孔板,3种抗癌药物以不同浓度给药,每浓度设3复孔,不加药组做空白对照,MTT法测定,以抑制率对药物浓度作图.结果:在1～420μg/mL浓度范围内,5-氟尿嘧啶抑制效果差;20～300 μg/mL丝裂霉素C抑制效果好于长春新碱;1～20μg/mL和300～420μg/mL浓度范围内,长春新碱抑制效果好于丝裂霉素C.结论:该方法评价对比了3种常用的抗癌药物对于人肝癌细胞的抑制效果,为药物筛选中阳性药物的选择提供一定借鉴.
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石杉碱甲与石杉碱乙组合对乙酰胆碱酯酶抑制活性的增效减毒作用
目的 观察石杉碱甲(Hup A)与石杉碱乙(Hup B)不同比例组合物抗乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及安全性的影响.方法 采用比色法检测Hup A与Hup B不同比例组合物对大鼠全血AchE活性及对小鼠急性毒性的影响.结果 Hup A与Hup B以2／1、1／1、1／2、1／4比例组合物对大鼠全血AchE活性均具有明显的抑制作用,其IC50分别为8.04×10-6g·L-1、8.40×10-6g·L,、9.74×10-6 g·L-1和13.12×10-6 g·L-1,其中Hup A用量分别为5.36 × 10-6 g·L-1、4.20 × 10-6 g·L-1、3.25×10-6 g·L 1和2.62 × 10-6g·L-1,而对照品Hup A和Hup B的IC50分别为4.82×10-6 g·L-1和854.65×10-6 g·L-1;以2∶1、1∶1、1∶2、1∶4比例组合物灌胃给小鼠,其LD5o的95％可信限分别为(9.23±1.95) mg· kg-1、(13.76±2.98) mg·kg-1、(20.33±4.29) mg· kg-1和＞40.00 mg· kg-1,其中Hup A用量分别为6.09 mg· kg-1、6.74 mg· kg-1、6.57 mg· kg-1和8.00 mg· kg-1,而对照品Hup A和Hup B的LD50的95％可信限分别为(6.03±1.46) mg·kg-1和＞40.00 mg·kg-1.结论 在Hup A与Hup B组合物中,当成分Hup A/Hup B≤1时,随着Hup B比例提高,Hup A活性增强,毒性下降,显示有一定的减毒增效作用.
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美洲商陆致中国仓鼠肺细胞染色体畸变实验研究
目的 探讨美洲商陆对中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体的畸变作用.方法 四唑盐(MTT)比色法(吸光度490 nm)测定美洲商陆抑制50％ CHL细胞生长的浓度(IC50).确定IC50为染色体畸变试验CHL细胞暴露于受试物的高剂量组,下设100.0、40.0、8.0、1.6μg/mL共4个剂量组,按常规方法进行CHL细胞染色体畸变试验.在加入与不加入代谢活化系统的条件下,观察CHL细胞暴露于受试物6、24 h CHL细胞染色体数目及结构的变化,进行染色体畸变分析.结果 在加入与不加入代谢活化系统的条件下,CHL细胞暴露于受试物6、24 h,美洲商陆的终浓度在200.0～ 1.6 μg/mL,CHL细胞染色体畸变率与溶剂对照组(灭菌水和二甲基亚砜)相比无显著差异(P＞0.05);与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在本试验条件下,美洲商陆不诱发中国仓鼠肺细胞染色体结构畸变.
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新型抗菌单体DMAE-TB的抗菌活性及生物安全性研究
菌.细胞毒性实验表明DMAE-TB对细胞增殖的半数抑制浓度为8.21 μg/ml.结论 DMAE-TB对口腔常见致病菌具有强效、快速的抗菌活性,生物安全性较理想,具有应用于牙科抗菌修复材料的前景.
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半抗原2,4-二硝基氟苯体内外抑制肝细胞癌的初步研究
[目的]初步研究半抗原2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)在体内外对肝细胞癌的抑制作用.[方法]用不同浓度的DNFB、氟尿嘧啶(5-Fu)(对照组)分别处理SMMC-7721肝癌细胞株72h,用MTT法测定72h细胞存活率,并计算50％和90％抑制浓度(IC50和IC90).经H22肝癌细胞株皮下种植成功的18只昆明鼠随机分成3组:DNFB组、无水乙醇(Ethanol)组、磷酸盐缓冲液(PBS)组(对照组),并分别瘤内注射100μl的DNFB、Ethanol和PBS,每周2次,共4次.瘤内注射结束2周后剥离肿瘤称重,计算抑瘤率.[结果] DNFB和5-Fu对SMMC-7721肝癌细胞株的IC50分别为32.22μmol/L和3.62μmol/L; IC90分别为49.53 μmol/L和＞200μmol/L.DNFB组、无水乙醇组和PBS对照组终的瘤重分别为0.97±0.53g、1.55±0.76g和3.79±0.75g.与PBS对照组比较,DNFB组和无水乙醇组的抑瘤率分别为74.43％(P=0.00004)和59.20％(P=0.00045),DNFB组和无水乙醇组之间的差异无统计学意义(P=0.16).[结论]DNFB可在体内外抑制肝癌细胞的生长.
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丹酚酸A抗肿瘤作用及对逆转A549/MTX肿瘤多药耐药的影响
目的:探究丹酚酸A的抗肿瘤作用及逆转人肺癌耐药细胞株A549/MTX肿瘤的多药耐药性的作用.方法:将体外培养人肺癌细胞A549及A549/MTX细胞分别分为3组:空白对照组(只加培养基)、阴性对照组(细胞+培养基)及实验组(细胞悬液+3种化疗药).丹酚酸A以5个浓度(4、8、16、32、64 μg/mL)对A549细胞作用,MTT法检测丹酚酸A在24、48、72 h对A549细胞的抑制作用;同时,检测甲氨喋呤(MTX)、顺铂(CDDP)、吉非替尼(GEF)这3种化疗药对A549、A549/MTX细胞株及丹酚酸A干预后的A549/MTX细胞株的半数抑制浓度(IC50),观察丹酚酸A对耐药细胞株的药敏性及药物逆转的作用.结果:丹酚酸对A549细胞24h抑制率从(9.16±3.64)％(4μg/mL)上升至(52.93±5.21)％ (64 μg/mL),当浓度增加至64 μg/mL,并分别作用24 h、48 h、72 h后,抑制率为(54.93±5.21)％、(63.83±2.74)％、(72.91±4.06)％,丹酚酸A对A549细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性.4 μg/mL丹酚酸A对A549细胞及A549/MTX细胞的生长抑制率均低于10％ (9.16％,7.38％),说明对两者没有明显的毒性.经4 μg/mL丹酚酸A干预A549/MTX细胞后,甲氨喋呤对A549/MTX细胞株的IC50由(105.72±4.62)μ-g/mL降低至(26.13±1.36) μg/mL,逆转倍数为4.05倍;顺铂对A549/MTX细胞株的IC50由(174.92±6.86)μg/mL下降至(49.89±1.73)μg/mL,逆转倍数为3.51倍;吉非替尼对A549/MTX细胞株的IC50由(251.38±8.64) μg/mL降为(116.93±5.22)μg/mL,逆转倍数为2.15倍.与对A549细胞的作用相比较,MTX、CDDP、GEF对A549/MTX细胞作用差异均有统计学意义(P＜0.01).经丹酚酸A干预后,三种化疗药物对A549/MTX细胞作用差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论:丹酚酸A能够抑制A549细胞及A549/MTX细胞的生长,此外,丹酚酸A在体外能够部分逆转A549/MTX的多药耐药性.
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小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC50的计算方法
半数抑制浓度、半数致死量等半数量是分析和比较药效及毒效的重要数值,可用以测定药物安全性、比较效价等,其具体应用范围广泛,但计算相同.本文阐述了半数抑制浓度(IC50)的概念、含义、计算原理以及几种具有实际应用价值、精密度较好的计算方法.重点讨论在MTT法测药物对细胞增殖抑制的影响中计算IC50的特点和注意事项等,对正确、简便求解IC50值进行了初步探讨.
