首页 > 文献资料
-
人参皂苷Rd及其C12手性异构体对缺氧/再复氧后蛋白酪氨酸磷酸化的抑制作用
目的探讨人参皂苷RdC12手性碳构型改变与其药理活性的关系.方法建立牛主动脉内皮细胞(BAEC)缺氧/再复氧(H/R)损伤模型;MTT法研究Rd及Rd C12手性异构体(12-epi-Rd)对H/R损伤BAEC的保护作用;Western印迹法检测蛋白酪氨酸磷酸化(TPP)水平,研究二者对H/R损伤BAEC的TPP水平的影响.结果0.5～64μmd·L-1的Rd及12-epi-Rd能浓度依赖性的保护H/R损伤的BAEC,二者所能达到的大存活率分别为(72.7±1.5)%和(70.0±1.5)%,EC50分别为(1.06±0.19)和(1.88±0.55)μmd·L-1(P＜0.05).Rd及12-epi-Rd均可抑制H/R引起的TPP水平的提高,浓度为1,4,16μmol·L-1时,Rd的抑制率分别可达(24.3±6.8)%,(52.6±8.7)%及(73.4±11.4)%;而12-epi-Rd的抑制率分别可达(12.8±4.4)%,(24.1±10.3)%及(42.5±13.0)%,二者在三个浓度点的抑制率均有显著性差异(P＜0.05).结论人参皂苷Rd C12手性碳构型的改变对其保护H/R损伤BAEC的作用及抑制H/R诱导的TPP水平增强的作用有一定的影响.Rd C12手性碳构型改变明显降低其抑制TPP增强的作用可能是其保护作用下降的重要原因之一.
-
维拉帕米对母鸡口服三邻甲苯基磷酸酯后脑干微粒体蛋白磷酸化的影响
目的为了探讨钙离子通道阻断剂维拉帕米是否会对母鸡口服三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)后脑干微粒体蛋白磷酸化有影响.方法维拉帕米的给药剂量为7 mg*kg-1(im),给药共4 d(d 1～d 4),d 2 ig TOCP 750 mg*kg-1.体外实验测定 [γ-32P]ATP磷酸基团对蛋白质的渗入量来表示蛋白质磷酸化的强弱,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离放射性标记的蛋白质并用放射自显影术来显示磷酸化的蛋白质,蛋白质磷酸化的变化以吸光度值的变化来定量.结果给予TOCP后,鸡脑干微粒体蛋白的整体磷酸化水平增强,特别是45、41和32 ku蛋白质的磷酸化水平分别增加至对照组的118.7%、173.7%、172.7%; 而维拉帕米则能消除TOCP处理组磷酸化水平的增加.结论维持脑干微粒体蛋白磷酸化水平的平衡可能是钙通道阻断剂缓解迟发性神经毒性的机理之一.
-
G蛋白偶联受体激酶活性调控及其在恶性肿瘤中的作用
G蛋白偶联受体(GPCR),是一类重要的细胞表面受体.G蛋白偶联受体激酶(GRK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,其亚型广泛存在与各种组织,能够特异性地使活化的GPCR发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCR介导的信号转导通路.新的研究还发现,GRK不仅作用于GPCR,也可以通过使非GPCR磷酸化或通过非磷酸化作用参与信号转导.GRK不仅能够调节GPCR和非GPCR,其自身活性也可受到多种因素的调节.本文结合GRK的多种功能作用和GRK活性调控,对GRK在脑、内分泌、生殖系统、消化系统及黑色素肿瘤中的作用做简要综述.
-
Src家族激酶的研究进展
Src酪氨酸激酶家族与细胞内多条信号传导途径有关,其相关基因参与许多重要的生理过程,如生长、分化、黏附、转录等,特异结构的改变属Src蛋白原癌基因的特性.本文中,我们综述了可获资料中有关于Src基因产物(Src激酶家族蛋白)的调节机制、非受体酪氨酸激酶的作用及一些相关蛋白.
-
水通道蛋白9磷酸化对哺乳动物细胞中砷摄入的影响
目的 研究水通道蛋白9 (AQP9) mRNA表达水平、水通道蛋白9及p38蛋白表达及其磷酸化水平对肝癌细胞HepG2和肝正常细胞L-02砷摄入的影响,探讨水通道蛋白9磷酸化的调控机制.方法 采用电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量.采用实时定量PCR、免疫印迹法和免疫共沉淀技术分别检测不同处理后两细胞株中水通道蛋白9 mRNA、水通道蛋白9和p38蛋白表达水平及其磷酸化水平.采用SPSS统计软件分析实验数据.结果 HepG2细胞内砷含量及摄入速度高于L-02细胞.HepG2细胞的水通道蛋白9 mRNA表达水平在6h内随NaAsO2处理时间延长而显著增加(P＜0.05),而在L-02细胞无明显变化.在2h时,HepG2细胞水通道蛋白9基因表达水平在各NaAsO2处理浓度均显著增加(P＜0.05).免疫沉淀实验结果显示,HepG2细胞中水通道蛋白9蛋白磷酸化水平随NaAsO2处理时间和浓度的增加而增加,而L-02细胞在各时间和浓度处理点水通道蛋白9蛋白磷酸化水平与对照相比明显增加,但处理间无明显差异；p38的磷酸化水平在两种细胞中均随砷处理时间延长而增加；SB203580抑制p38活性后能完全取消L-02细胞水通道蛋白9蛋白的磷酸化,而对HepG2细胞水通道蛋白9蛋白磷酸化无明显影响.结论 水通道蛋白9的表达及磷酸化水平可能在调节细胞砷摄入中发挥重要作用,在不同细胞中水通道蛋白9蛋白磷酸化的调控机制有所差异.
-
哺乳动物细胞中调控AQP9磷酸化的蛋白因子及对砷摄入影响的研究
目的 探讨蛋白激酶p38,蛋白激酶C对几种哺乳动物细胞中水通道蛋白9磷酸化的调控作用,以及这些蛋白因子对细胞中砷摄入含量的影响.方法 采用免疫印迹法和免疫共沉淀技术分别检测细胞株中p38,蛋白激酶C和水通道蛋白9表达水平及其磷酸化水平.电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量.结果 在ECV-304,AsRE,HepG2和L-02细胞株中,p38蛋白及其磷酸化表达水平在砷的刺激下随时间增加而有显著上升,相同条件下蛋白激酶C末见明显变化.当抑制细胞中p38活性,除了L-02细胞中水通道蛋白9的磷酸化水平受到抑制外,其余细胞中水通道蛋白9的蛋白含量及磷酸化水平都未见明显变化.砷含量也只在L-02细胞中看到有较显著的下降.结论 水通道蛋白9磷酸化水平影响砷进入细胞的速度与含量,但不同的细胞中水通道蛋白9的磷酸化调控机制有所差异.p38蛋白激酶在正常肝细胞L-02中显示对水通道蛋白9磷酸化有一定的调控作用,蛋白激酶C则在本实验条件下未见入调控砷的入胞机制.
-
尿中骨桥蛋白的初步分离与鉴定
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种富含唾液酸的磷酸化糖蛋白, 近来的研究发现,在体外OPN具有抑制草酸钙晶体生长的活性.
-
人类神经丝蛋白基因hSTE的分子克隆
啤酒酵母是人类基因组计划的重要模式生物,它的全基因组测序已于两年前完成,其功能基因组研究亦已全面展开.到目前为止,在已知基因中约1/3功能已经清楚,余下2/3基因的功能有待进一步研究.在全基因组所有6 000多个基因中,约1/4的基因尚未被研究,其中一部分基因在功能上尚不能进行归类,称为"孤儿基因"(orphan genes).我们根据系统测序发现的新的开放阅读框基因STE编码的蛋白质序列,在Internet下进行Blast分析,搜寻到一个高分值的人EST,再根据获得的EST序列设计两条引物分别和人脑cDNA文库插入子两端的载体序列配对组成类似于5′-RACE和3′-RACE的扩增体系,获得5′端序列和3′端序列.完成测序后和人的EST库中相关EST进行比较分析,拼接出一个全长为3773bp的cDNA,其中长的开放阅读框在1～3078之间,编码的蛋白质含1026个氨基酸,并含有多个重复的KSP磷酸化位点.同源性检索发现它和人类神经丝蛋白H的同源性在90%以上.将克隆的该基因命名为hSTE并登录到Genbank,登记号为AF203032.利用模式生物对克隆的基因进行遗传互补测验的工作目前正在进行中.
-
c-Jun氨基末端激酶活性测定
丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)是细胞内重要的信号转导酶类,它们被细胞外刺激因子激活后,可通过使不同的转录因子磷酸化,调节特定基因的表达,转导细胞增殖、肥大或细胞分化的信号.研究表明,MAPKs家族至少有3个亚类,分别为细胞外信息调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/ERK2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和p38激酶,其中JNK又称应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK),已知它可被炎症介质(TNF-α、IL-1)、应激刺激(热休克、高渗)、紫外线、缺血/再灌注等激活.
-
9601颗粒对急性多发脑梗塞大鼠海马皮层MARCKS磷酸化调节作用的研究
目的研究急性多发脑梗塞大鼠海马皮层MARCKS及p-MARCKS蛋白的表达,进一步观察9601颗粒对MARCKS信号转导通路的影响,从蛋白水平探讨中药对急性脑缺血保护作用机制.方法采用改良Kaneko法建立急性多发脑梗塞动物模型,观察造模后各组大鼠的神经系统症状体征积分改变及海马皮层组织的病理变化及细胞超微结构的改变;应用免疫组织化学和固定化蛋白印迹法检测急性缺血后海马皮层MARCKS及p-MARCKS蛋白表达的改变以及中药的调节作用.结果 MARCKS及p-MARCKS蛋白在急性缺血后海马皮层中表达比正常对照组明显升高(P＜0.05),应用9601和尼莫地平可以使海马皮层异常升高的MARCKS及p-MARCKS表达下降,但中西药之间无显著差异(P＞0.05).结论在急性脑缺血状态下大鼠海马皮层MARCKS和p-MARCKS蛋白表达异常升高,与缺血损害关系密切,9601颗粒对此具有明显的下调作用.
-
微管相关蛋白Tau蛋白及Tau病的研究进展
Tau蛋白是微管相关蛋白家族的主要成员,其磷酸化水平的增高与多种中枢神经系统疾病密切相关,如阿尔茨海默病(Alzeimer's disease,AD)、癫痫、额颞叶痴呆、皮质基底节变性(corticobasal degeneration,CBD)、进行性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy,PSP)、朊蛋白病等.Tau病是以异常磷酸化Tau蛋白聚集为病理特点的年龄相关性神经变性病.Tau病根据微管相关蛋白Tau(microtubule-associated proteins tau,MAPT)基因剪切不同分为6种同型异构体,外显子9、10、11、12各编码一个微管结合模序氨基酸重复序列,有外显子10编码氨基酸序列的Tau蛋白异构体为4R,其他的异构体为3R.皮克病(Pick's disease,PiD)中3R占优势,而皮质基底节变性和进行性核上性麻痹中4R占优势,根据MAPT中基因突变的位置,额颞叶痴呆FTLD-tau可以出现3R、4R或二者均有.本文综述了近年来在Tau蛋白及Tau病相关领域的研究进展.
-
锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓磷酸化ERK表达和热痛阈的影响
目的 研究锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓磷酸化(p)的细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulate kinase,ERK)表达和热痛阈的影响.方法 72只C57/BL6小鼠随机分为4组,采用足底注射辣椒素(0.5％,5μl)制备神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)动物模型:对照组(Con)锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后足底注射溶剂(吐温80、酒精和0.9％氯化钠注射液混合液);N-NPP组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后给予足底注射辣椒素,L-NPP组锌饲料0.85 mg/(kg·d)喂养2周后注射辣椒素,H-NPP组硫酸锌水溶液227 mg/(L·d)喂养2周后注射辣椒素.应用动物行为学检测、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测注射后7d锌对动物行为学以及脊髓pERK表达的影响.结果 高锌喂养能显著降低脊髓pERK的表达,降低痛敏,使热痛阈增高(P＜0.01);而低锌喂养能增加脊髓pERK的表达,增加痛敏,使热痛阈降低(P＜0.01).结论 锌能抑制辣椒素致痛模型小鼠脊髓pERK的表达和热痛觉过敏.
-
锌对神经病理性疼痛模型小鼠脊髓磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响
目的：研究锌对神经病理性疼痛(neuropathic pain，NPP)模型小鼠脊髓磷酸化(phosphoryltion，p)的cAMP反应元件结合蛋白(camp response-element binding protein，CREB)表达的影响。方法72只C57/BL6小鼠随机分为4组，正常喂养的NPP组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周，低锌喂养的NPP组锌饲料0.85 mg/(kg·d)喂养2周，高锌喂养的NPP组用硫酸锌水溶液227 mg/(L·d)喂养2周。采用足底注射辣椒素(0.5%5μl)制备NPP模型：对照组锌饲料30 mg/(kg·d)喂养2周后足底注射溶剂。应用原子吸收光谱、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测术后7 d锌对脊髓pCREB表达的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量，脊髓pCREB表达下调(P＜0.01)；而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状况，脊髓pCREB表达上调(P＜0.01)。结论锌能抑制NPP模型小鼠脊髓pCREB的表达。
关键词： 锌 神经病理性疼痛 脊髓 磷酸化 cAMP反应元件结合蛋白 -
缺氧影响PTEN磷酸化和核定位
目的 观察缺氧(hypoxia)对第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)磷酸化及核定位的影响.方法 以1% O2条件下培养的COS-7细胞为缺氧模型,在缺氧处理不同时间点0、1、8、24、32 h收集细胞,应用Western blotting方法 检测PTEN磷酸化水平及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)的表达变化;分别应用细胞核、质分离技术,共聚焦显微镜观察缺氧24 h前后PTEN亚细胞定位的变化.结果 COS-7细胞缺氧处理24 h与未缺氧对照细胞相比,PTEN磷酸化水平显著降低,p-Akt亦明显减少;细胞核中PTEN表达量则显著升高.结论 PTEN磷酸化水平和核质分布受到细胞缺氧的调节.在细胞缺氧反应中,PTEN去磷酸化而活化,通过抑制其下游分子Akt磷酸化,从而抑制缺氧诱导的细胞增殖信号通路活化;并且部分入核发挥核内PTEN功能.
关键词： 第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶 缺氧 磷酸化 亚细胞定位 -
6种不同人类肿瘤细胞株pp60c-Src的活性及PP2抑制效应的差异
pp60c-Src是一个相对分子质量为60 000的、416位点磷酸化后激活的Src蛋白,是非受体型酪氨酸激酶家族中研究多的成员.目前大量研究显示,Src或其家族活性异常与癌症的发生发展密切相关,它们参与了肿瘤的黏附、迁移、浸润及血管形成等过程.
-
角蛋白18在HepG2细胞凋亡中的磷酸化(Ser33,Ser52)及其意义
目的 研究角蛋白18 (keratin18,K18) 在人肝癌细胞HepG2凋亡中的磷酸化情况并分析其意义.方法 以不同浓度的顺铂(cisplatin,CDDP)作用于HepG2细胞,用双标记流式细胞术(Annexin V/PI)染色检测HepG2细胞的凋亡情况,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测不同凋亡状态下K18的磷酸化水平.结果 顺铂可以使HepG2细胞发生明显的凋亡,而且凋亡比例随着药物浓度的增加而增加;52位丝氨酸(Ser52)磷酸化水平随着药物浓度增加而增加;33位丝氨酸(Ser33)磷酸化在低浓度药物作用下增加,但在高浓度药物作用下明显减少.结论 Ser33和Ser52磷酸化的K18与HepG2细胞凋亡有密切关系.
-
兔气管纤毛蛋白磷酸化的初步研究
目的 建立分离提取呼吸道纤毛的方法,为进一步研究纤毛蛋白磷酸化在纤毛运动调控机制中的作用提供方法学基础.方法 用Triton X-100分离缓冲液孵育兔气管黏膜上皮,使纤毛上皮细胞的纤毛与细胞体分离,通过离心提取分离的纤毛,将提取的标本行透射电镜观察、Western blotting小鼠检测β微管蛋白(β-tubulin)和纤毛蛋白磷酸化情况.结果 ① 透射电镜观察可见提取的标本为浓集的纤毛,纤毛的横断面可见典型的"9+2"结构;② Western blotting检测可见高信号强度的β-tubulin条带;③ Western blotting检测可见5条酪氨酸磷酸化的蛋白条带.结论 经含有Triton X-100的缓冲液孵育的兔气管黏膜上皮离心后可提取到分离的纤毛标本,适于进行进一步的纤毛蛋白磷酸化研究.
-
糖尿病患者血浆减少α-突触核蛋白的磷酸化和寡聚化
目的 研究2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)患者血浆对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)磷酸化和寡聚化聚集的影响.方法 收集首都医科大学宣武医院内分泌科T2D住院患者70例,另收集年龄和性别与之匹配的健康志愿者70例作为对照组.采集抗凝血,并分离血浆.将基因重组人α-Syn在患者和对照志愿者血浆中振荡孵育,ELISA法检测各组人群血浆中寡聚化和磷酸化α-Syn形成量.结果 T2D患者血浆中寡聚化和磷酸化α-Syn形成量较对照组均有显著降低(P＜0.05),且其与年龄有相关性.结论 T2D患者血浆以年龄依赖的方式减少寡聚化和磷酸化α-Syn的形成.
-
磷酸化P38及相关蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义
子宫内膜癌占女性生殖系统恶性肿瘤的20％ ～30％,发病率仅次于子宫颈癌[1].选择2007年1月至2010年12月我院经病理学诊断的60例子宫内膜癌患者,检测其癌组织中磷酸化P38(P-P38)和磷酸化GSK3β (P-GSK3β)蛋白表达情况,报告如下.
-
角蛋白18磷酸化与奥沙利铂作用下结肠癌HCT116细胞凋亡的关系
目的 探讨在化疗药物作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞凋亡的关系.方法 以不同浓度的奥沙利铂作用于HCT116细胞,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和钙黄绿素-AM/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)法检测细胞凋亡情况,免疫印迹(western blotting)方法检测K18磷酸化表达水平;HCT116细胞分别转染绿色荧光蛋白(GFP)、野生型K18和33、52丝氨酸(Ser33A、Ser52A)磷酸化位点突变的K18质粒后,用奥沙利铂处理,Annexin V-FITC/PI和Calcein-AM/PI法分析K18及其突变对细胞凋亡的影响.结果 奥沙利铂可以使HCT116细胞发生明显的凋亡,而且凋亡比例随着药物浓度的增加而升高,经20、60、100 μmol/L奥沙利铂处理后,细胞较对照组均出现凋亡增加,依次为(15.6±3.1)％、(30.1±4.9)％和(62.6±6.8)％,两两比较差异均有统计学意义(P均＜ 0.05);K18的Ser33、Ser52磷酸化水平也随着药物浓度的增加而增加;单纯质粒转染的各细胞组之间的凋亡率差异均无统计学意义(P＞0.05),但经过奥沙利铂处理后,Ser33A和Ser52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率[(27.3±6.7)％和(31.2±8.1)％]明显低于GFP和K18质粒转染的细胞凋亡率[(40.5±4.8)％和(50.9±6.3)％,P＜0.05],转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率高于GFP转染对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Ser33A和Ser52A质粒转染组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 K18 Ser33和Ser52磷酸化水平随着细胞凋亡水平的增加而增加;K18过表达提高了HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性,而抑制K18 Ser33和Ser52的磷酸化可以减少化疗药物作用下结肠癌细胞的凋亡.
