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培养细胞缝隙连结细胞间通讯功能的测定
缝隙连结是机体多数细胞间连接的通道。细胞间通过缝隙连结形成电偶联和(或)代谢偶联,产生细胞间通讯,即缝隙连结细胞间通讯( gap junction intercellular communication, GJIC ) 。GJIC与细胞生长调控及癌变的关系日益受到重视。目前,已有多种技术途径用于功能性GJIC的研究。已经报道的技术有:电偶联、经过放射性代谢物移转的代谢协同、基因突变所致的代谢协同、刮除负载(scrape loading)染料传递、微注射荧光染料传递(microinjection and dye transfer assay, MDTA ),以及荧光光漂白再恢复(fluorescence redistribution after photobleaching,FRAP)技术[1]。我们就近年来本学科常用的MDTA法和新近开发的FRAP法对正常的和十四酰基咐拜醇酯(TPA)作用的体外培养中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞单层GJIC功能进行测定,并作量化比较。
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荧光显微镜划痕标记染料示踪技术的改进
划痕标记染料示踪(scrape-loading and dye transfer,SLDT)技术是一种简单快速研究培养细胞间缝隙连接通讯(gapjunction intercellular communication,GJIC)的方法.适用于各种培养细胞,具有方法简单、实验周期短、成本低廉的特点,自问世以来即在研究细胞通讯方面得到了广泛应用[1].
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用东北红豆杉培养细胞的原生质体高效生产紫杉醇
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两种间接免疫荧光实验自动化操作平台的实测比对与分析
间接免疫荧光实验(IFA)是自身抗体临床检测的经典与"金标准"实验,广泛用于自身抗体的快速筛查、确立临床诊断方向及发现新抗体[1].目前,用于检测自身抗体的间接免疫荧光检测试剂盒都是采用包被细胞(培养细胞或单细胞生物如绿蝇短膜虫等)或组织切片的玻璃或塑料载片,所有操作均在载片上进行.
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甲基硝基亚硝基胍诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究
将培养第5天的日本血吸虫成虫培养细胞在含甲基硝基亚硝基胍(MNNG)终浓度分别为0(对照)、1、2、3、4、6、9μg/ml的附加20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640培养基中分别处理24h、36h、48h;随后,换用含20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640培养基培养;3d后,改用含5%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640培养基继续培养,每天在OlympusIM倒置显微镜下观察.用浓度为6μg/ml、9μg/ml的MNNG处理的日本血吸虫成虫培养细胞在处理后3天左右大片脱落,残留的少量细胞在换用5%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640培养后逐渐死亡;用1、2、3、4μg/ml浓度MNNG处理后的日本血吸虫成虫培养细胞,生长良好,与对照组相比,培养细胞的体积变大,分裂细胞增多,尤以3μ/ml的MNNG处理48h的试验组为明显,并观察到转化灶,但传代培养没有成功.结果表明在一定程度上,MNNG能够诱导日本血吸虫成虫培养细胞出现转化灶,并发生分裂、繁殖.
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日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察
目的探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的组织化学变化.方法应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP.结果日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性强;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位;ACP的活性均较强,尤其是体积较大的培养细胞,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中.结论日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标.
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丁胺卡那去除甲肝病毒培养细胞中支原体的效果观察
探索丁胺卡那去除HAV培养细胞中污染支原体的效果,发现常规剂量(100U/ml)的丁胺卡那效果不显著,而采用突击处理(300U/ml)与常规处理协同应用,取得显著效果:细胞形态恢复正常,种植病毒后维持时间延长,且不影响细胞对病毒的敏感性.
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环境内分泌干扰物研究方法进展
环境内分泌干扰物(Environmental endocrine disruptors, EEDs)对人和野生生物的有害影响是近些年来国际上研究热点.美国、欧共体和日本等都已拨出巨款对此进行研究.2000年国家自然科学基金对EEDs研究给予有力的支持.联合国已于2001年以来在全世界范围内禁用或严格限用一些EEDs,以减少其对人类健康的危害,建立一套高效快速的EEDs筛检方法显得尤为重要.目前,EEDs的研究方法主要有:整体动物试验、酵母双杂交法[1,2]、受体结合实验、重组受体/报告基因表达培养细胞、卵黄蛋白原法、细胞增殖法以及流行病学调查研究.本文从环境毒理学及流行病学角度就其研究方法进展作一综述.
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松果体的细胞培养研究
本文就松果体细胞体外培养的研究进展、培养细胞的形态学特征、功能表达与调控等方面的研究作一综述.
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精选目次:组织工程
Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell- based therapies. 2001 Apr;7(2):211- 28. 人类脂肪组织的多线性细胞:在细胞疗法中的意义 Evaluation of nanostructured composite collagen- chitosan matrices for tissue engineering. 2001 Apr;7(2):203- 10. 评估纳米结构复合物胶原-壳聚糖基质在组织工程中的应用 Two- photon laser scanning microscopy of epithelial cell- modulated collagen density in engineered human lung tissue. 2001 Apr;7(2):191- 202. 人类工程肺组织的上皮细胞调节的胶原密度的双光子激光扫描显微学 Aggregation enhances catecholamine secretion in cultured cells. 2001 Apr;7(2):179- 90. 多聚化增加培养细胞儿茶酚胺的的分泌
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神经细胞培养方法在缺血性脑损伤研究中的应用
神经组织的体外培养是1907年由Harrison首创[1],很多学者相继在培养技术、培养容器、培养液几方面作出改进:1956年Nakai创造了神经组织的分离细胞培养[2],1957年Dulbecco采用胰蛋白酶消化并用液体培养基方法获得了单层培养细胞;神经组织的分离细胞培养和单层培养法的出现,对神经细胞培养的发展起了很大的推动作用,已成为人们进行神经领域研究所普遍采用的技术.
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体外培养细胞扫描电镜制样技术的改进
体外细胞培养始于上世纪之初,现已成为重要的生命科学研究手段之一[1].其中,培养细胞的扫描电镜的观察是一种较为常见的形态学研究方法.由于扫描电镜的样品制备过程比较复杂,致使以盖玻片培养的细胞,到现在的多孔载体培养细胞来制备扫描电镜样品都有其不足之处.经各种固定液和缓冲液处理后于电镜下常可出现细胞脱落龟裂和重叠等人为假象.近年来,人们发现,以天然葡聚糖小颗粒(直径约50μm)为原料的多孔微载体上培养的细胞,其常规扫描电镜样品的观察效果较好,但存在着载体价格昂贵的问题[2,3 ].为此,我们尝试对体外培养细胞的扫描电镜样品制备技术加以改进,是以应用定量滤纸和醋酸异戊酯替代离心的方法取代以盖玻片培养的细胞及多孔载体培养细胞来制备扫描电镜的样品.
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丙型肝炎病毒研究的新进展
一、HCV基因复制单位(复制子)复制细胞的建立1999年,Lohmann建成能够自我复制HCV部分基因[亚基因组(subgenome)]RNA并维持此一功能的培养细胞,遂获高效再现复制HCV基因的实验系统.该亚基因组RNA本系HCV基因组中编码生成病毒颗粒结构蛋白的区段,只是将具有细胞毒性的新霉素置换以无毒化的氨基糖苷磷酸基转移酶(AGPT)编码序列(Neor).
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尿酸对肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响
目的:观察不同浓度尿酸是否调节肾小管上皮细胞(HK-2 细胞)人尿酸盐转运子(hUAT)mRNA的表达.方法:根据培养液中所含尿酸浓度的不同,将HK-2 细胞分为:①仅使用DMEM(对照组);2DMEM+100 μmol/L 尿酸(U1组);3DMEM+ 200 μmol/L尿酸(U2组);④DMEM+400 μmol/L尿酸(U3组).每组均培养6 瓶细胞.上述细胞在不同培养液中分别培养48 小时.采用实时荧光定量PCR 检测HK-2 细胞中hUAT mRNA 的相对表达量(2-ΔΔCt 法).结果:所有标本均能检测到hUAT mRNA 的表达,且各组hUAT mRNA 表达水平均明显低于对照组,U1 组hUAT mRNA 表达量为对照组的108%,U2 组为对照组的111%,U3 组为对照组的116%.除U1组外各组与对照组相比,差异均有显著性(P<0.05),但各组间差异均无统计学意义( P=0.49,0.54,0.15).结论:尿酸可上调hUAT mRNA 表达.
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植物细胞悬浮培养
植物细胞能合成许多具有重要价值的次级代谢产物,它们可作为农药、杀虫剂、调味剂及香精等.这些产物传统上是从天然植物中直接提取,但天然植物生长周期较长,而且生长还受地域和环境因素的限制,所以采用直接提取具有较大的局限性.化学合成法已用于多种产品的生产,但是有些物质不能通过化学法合成,或虽能合成,却比较困难.植物细胞培养可大规模生产代谢产物,现已成为生产某些高价值产品的重要途径.一般情况下,培养细胞中的次级代谢物含量明显高于原来植物细胞中的含量,而且这种方法还能避免地域和环境的影响.
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血清药理实验中不同动物种属血清对脾脏淋巴细胞的影响
在含药血清进行体外实验时,经常会遇到选择何种实验动物的问题.原则上首先要使体外培养细胞在该种动物血清中生长良好、形态正常,对照组血清质量稳定,并且血清添加量能够比较高.为此,我们选择了常用的实验动物大鼠和小鼠的脾脏淋巴细胞作为试验对象,分别添加不同种属的血清,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察其对淋巴细胞生长的影响.
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纳洛酮对缺氧心室肌细胞早期凋亡的影响
目的观察纳洛酮对培养家兔心室肌细胞缺氧/复氧后早期细胞凋亡的方法.方法取乳兔心室肌细胞培养传一代后分成3组:正常对照组、单纯缺氧/复氧组(缺氧组)、缺氧/复氧加纳洛酮干预组(用药组),然后以流式细胞仪检测缺氧/复氧后的细胞凋亡.结果缺氧2 h/复氧4 h,缺氧组的凋亡比率较正常对照组明显增多(P<0.01),较用药组也明显增高(P<0.01).缺氧组内凋亡细胞所占比率明显多于坏死比率(9.88±0.98 vs 5.10±0.29,P<0.05).结论缺氧/复氧可诱导家兔心室肌细胞早期凋亡,而且凋亡是缺氧/复氧后细胞早期死亡的主要表现形式,纳洛酮可明显降低早期凋亡的发生.
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EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞生长的影响
目的研究表皮生长因子(E GF)对用或未用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的促生长、增殖作用.方法将联合法接种培养至第3天的日本血吸虫成虫培养细胞,一部分在含EGF终浓度分别为0、0.5、1、2、4、8、12、16、20、 24、28 ng/ml的附加20%小牛血清及常量抗菌素的RPMI-1640培养基中培养 ;另一部分,先用含MNNG终浓度为3 μg/ml附加20%小牛血清和常量抗生素的RP MI-1640培养基处理48h,再换用含终浓度分别为0、1、8、12、16、20 ng /ml的EGF培养基继续培养.每日用Olympus IM倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况.结果两实验组中,用不同浓度EGF处理后的日本血吸虫成虫培养细胞均在2周以后出现不同程度的脱落、退化;并且,随着EGF浓度的升高, 培养细胞脱落、退化的现象更加严重;两实验组相比,未用MNNG诱导的培养细胞出现脱落和退化现象的时间比用MNNG诱导的相对更早.结论外加EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的生长增殖均无促进作用,相反,加速了培养细胞的老化,尤其是对未用MN NG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞,这种作用更加明显.
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β-巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响
目的研究β-巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响.方法将18 d虫龄的日本血吸虫童虫细胞联合法接种于小盖玻片上.实验被随机分为4个组,分别为对照组、β-巯基乙醇组、肝基质组、β-巯基乙醇+肝基质联合处理组.培养第7天,对各组细胞进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)与乳酸脱氢酶(LDH)细胞化学染色,并结合图像分析比较4个组培养细胞的AgNORs水平及LDH活性.结果与对照组比较,肝基质组、β-巯基乙醇组、β-巯基乙醇+肝基质联合处理组培养细胞的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度以及LDH的平均光密度等4个参数均有不同程度升高(P<0.01).其中,以β-巯基乙醇组培养细胞的4个参数升高显著,β-巯基乙醇+肝基质联合处理组次之,肝基质组升高幅度小.统计学分析显示,除β-巯基乙醇+肝基质联合处理组与β-巯基乙醇组之间的AgNORs及LDH平均光密度两两比较差异无显著意义(P>0.05),其余组间3个参数两两比较差异均有显著意义(P<0.01或P<0.05).结论β-巯基乙醇与肝基质均能促进日本血吸虫培养细胞的增殖、代谢,但β-巯基乙醇的作用比肝基质显著;二者联合使用对培养细胞的增殖无协同作用.
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日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统形态及基质对其结构的影响
目的研究日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统的三维结构及细胞外基质(ECM)对其的作用.方法用高锰酸钾作固定剂,制备日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统标本,扫描电镜下观察.结果日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统由膜性小管、小泡相互连接构成小型扁囊样网络结构.基质中细胞的内质网膜系统较对照组发达、丰富;基质的种类不同,培养细胞内质网膜系统的形态各异.鼠尾胶中细胞多由膜性小管和小泡构成,其网眼数目较少,可见伪足样结构;伪足较短,也由膜性小管或小泡构成管囊状网络.肺基质中细胞几乎均为小管,小泡极少;网眼和伪足数目增多,伪足呈针状.肝基质中细胞的内质网膜系统与肺基质中的相似,但网眼和伪足数目更多,伪足细长,呈纤维状.结论 ECM可明显影响日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统形态;ECM的种类不同,培养于其中细胞的内质网膜系统形态不同.