首页 > 文献资料
-
TNF-a对大鼠肾小球前小动脉平滑肌细胞Ca2+内流的影响
目的:为探讨肿瘤坏死因子-a(TNF-a)对肾小球前小动脉平滑肌细胞Ca2+内流的影响,以阐明TNF-a在肝肾综合征(HRS)发病中的作用.方法:通过对大鼠肾小球前小动脉平滑肌细胞(RASMC)的分离、培养,应用同位素方法检测在TNF-a作用下培养细胞的Ca2+内流情况,研究在TNF-a作用下,蛋白激酶C(PKC)抑制剂对TNF-a诱导的RASMC Ca2+内流作用的影响.结果:TNF-a增强RASMC的Ca2+内流,作用时间长达60min,以后逐渐下降;Ca2+通道阻断剂硝苯地平明显抑制了TNF-a促进Ca2+内流的作用,硝苯地平添加组细胞内流的Ca2+水平为2211.3±406.8cpm,未添加组为3326.2±315.2cpm,P<0.01; PKC抑制剂也明显抑制了TNF-a促进Ca2+内流的作用.GFX添加组细胞内流的Ca2+水平为2095.8±395.2cpm,未添加组为3326.4±315.2cpm,P<0.01.结论:TNF-a在HRS的发生中起到一定作用,其作用机制可能是通过促进肾小球前小动脉平滑肌细胞内Ca2+水平增高而实现的.TNF-a可能是通过活化PKC后使在肾小球前小动脉平滑肌细胞膜上的Ca2+通道开放,引起肾小球前小动脉平滑肌细胞内Ca2+迅速上升,导致肾小球前小动脉平滑肌收缩,从而使肾血流量减少,肾小球滤过率下降,促使HRS发生.
-
丙型肝炎病毒超微结构研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)基因组克隆成功后,人们对其基因组的研究已十分深入,但由于HCV病毒颗粒在感染者血中、肝脏中含量很低,血中HCV又往往与免疫复合物和脂蛋白包裹存在,以及缺乏有效的HCV体外培养体系和小动物模型,形态结构研究难度极大而相对滞后,有关HCV超微结构和病毒装配过程还知之甚少,多数研究认为HCV病毒颗粒由外膜及核心组成,外膜表面有钉状突起.HCV感染后的细胞多数可见扩大的胞质囊腔,病毒颗粒多存在胞质囊腔内,这些胞质囊腔认为来自扩大的细胞内质网.细胞核内、胞质、血清、体外培养细胞中HCV颗粒的大小、形式有差异,目前尚无统一认识,其在感染细胞内的形态结构和定位尚不清楚.本文就近年来有关HCV超微结构研究的相关文献进行回顾.
-
反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:利用反义核酸技术,研究体外胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)反义寡核苷酸转染对肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性.方法:合成针对IGF-Ⅰ的寡核苷酸片段,利用脂质体包裹反义IGF-Ⅰ寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法检测细胞增生;放免法检测培养细胞上清中AFP,CEA的分泌量;免疫组化法检测转染细胞AFP,PCNA表达的变化;采用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡的变化.结果:MTF法检测转染反义IGF-Ⅰ寡核苷酸的人肝癌细胞系BEL-7402A值由0.44±0.09下降为0.30±0.07(P<0.01),上清液AFP和CEA水平分别由12.5±2.2 μg/L和6.8±2.3μg/L下降为2.5±0.3μg/L和2.2±1.5μg/L(P<0.01,P<0.05),凋亡阳性细胞数由16.4±2.3%增加至23.1±3.7%(P<0.05).结论:反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞可以降低细胞增生,减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡.
-
肝脏胶原蛋白检测进展与评析
胶原含量多少可以直接反映肝脏纤维化程度之轻重,胶原蛋白含量测定在肝纤维化机制与药理研究中极其重要,往往是结果分析的"终点指标".综述肝脏胶原蛋白的生化与病理检测方法,结合个人实践体会,分析其各种不同方法的特点及适应范围.认为肝组织胶原蛋白以羟脯氨酸含量检测可靠,培养细胞总胶原分泌宜采用同位素掺入与胶原酶消化的方法,各型胶原分泌量可采用ELISA法,各型胶原沉积量可采用Western blot法.肝组织与培养细胞胶原病理染色,主要用于胶原蛋白定性分析与表达位置检测,正确应用图像分析可半定量.
-
分子病理学技术应用原理和适用范围
1 Southern杂交:Southern杂交是1975年由Southem提出,并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点,已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的常用手段之一[1]。Southern杂交的基本方法是,从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化,通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段,然后使这些DNA片段在原位发生变性,并以凝胶转移到另一种固相支持物如硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,同时保持各个DNA片段的相对位置不变。再用已标记的(通常为放射性同位素标记,也可用非放射性标记)DNA或RNA探针与固着于固相支持物上的DNA杂交。经放射自显影或化学显色的方法确定与探针互补的电泳条带的位置,从而达到检测和分析的目的。
-
抗骨质疏松药XW630对成骨细胞碱性磷酸酶mRNA表达的影响
目的研究新设计的抗骨质疏松药物XW630对成骨细胞碱性磷酸酶基因表达的影响,为其治疗骨代谢性疾病提供理论和实验依据.方法以成骨细胞MC3T3-E1为体外实验模型,用含有10-6mol/L浓度的XW630,雌酚酮,四环素及四环素加雌酚酮的细胞培养液DMEM培养细胞,24 h和72 h提取细胞总RNA并与碱性磷酸酶cDNA进行Northern杂交.结果 XW630对成骨细胞MC3T3-E1合成和分泌碱性磷酸酶具有明显的促进作用.结论 XW630具有明显的促进成骨作用.
-
bFGF基因转染对成骨细胞生物学行为的影响
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是调控成骨细胞增殖和分化的首选生长因子之一,而且还是一种强大的毛细血管增殖刺激剂。但外源性生长因子半衰期短,需反复给药,且价格昂贵[1,2]。我们将bFGF基因由体外转入兔骨膜源成骨细胞,观察了其对成骨细胞生物学的影响,报告如下。1.材料与方法:含有bFGF cDNA的克隆载体puc13-rbFGF由日本Inawashiro博士惠赠,用EcoR I酶切puc13-rbFGF及真核表达载体pcDNA3,用T4DNA连接酶连接后构建pcDNA3-bFGF重组表达质粒并鉴定。无菌条件下取2个月龄新西兰兔之双侧股骨和胫骨骨膜,37℃下用0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶各消化30min及2 h,将分离细胞接种于50ml培养瓶,加入含15%胎牛血清、10-7 M地塞米松、50mg/L维生素C、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基,在37℃5%CO2培养箱培养,用钙钴法行碱性磷酸酶(ALP)染色对培养细胞进行鉴定。
-
应用旋转细胞培养系统建造组织工程化人工软骨的实验研究
组织工程学的兴起,为临床上修复因各种原因导致的软骨缺损带来了希望[1,2].旋转细胞培养系统(RCCS)具有模拟微重力、高密度培养细胞、组织的特性[3].目前,国外已经将其广泛用于组织工程研究领域.本研究旨在应用RCCS进行组织工程化人工软骨的再造研究,探讨RCCS提供的外部环境对形成组织工程化人工软骨的影响.
-
睫状神经营养因子对反应性星形胶质细胞中波形蛋白的作用
一、材料和方法取P0~P3(postnatal,P)天大鼠,分离大脑皮层,获得较纯的Ast供实验用.参考Aoshiba(Am J Respir Crit Care Med.2000,162:695)制成体外Ast损伤模型.培养细胞的Vim的表达用免疫荧光染色SABC法.
-
218内淋巴囊培养细胞的形态和功能特点
-
一种快速制作以羊膜为载体培养角膜上皮细胞切片的方法
以羊膜为载体培养细胞已经被证明有利于细胞的分化和生长,临床上可能有较好的应用前景[1-3].但是,在研究载体上培养细胞形态时,获得良好的侧切面,观察细胞侧面形态、细胞基底面与羊膜基质的关系,一直是较为困难的工作.在实践中,我们使用一种简易、快速制作以羊膜为载体培养角膜上皮细胞切片的方法,供同仁参考.
-
人口腔粘膜上皮角朊细胞的体外培养
人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难,其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型,并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1.材料:培养物来源于5个月~10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干,每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2.方法:①酶消化法:用D-Hanks液冲洗粘膜块,剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液(1∶1)5 ml,将粘膜块放入其中,密闭放入4℃冰箱内12~20 h。将表皮从基底撕脱,放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min,终止消化。低速离心5 min,去上清,加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中,制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L,接种于25 ml培养瓶中。②组织块法:将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小,用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转,放入37℃温箱2~4 h,加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液,轻轻翻转培养瓶,使培养液浸没组织块,静置培养,每周换液2次。
-
骨组织工程的研究
“组织工程学”这个名称是1987年被正式提出的,早的定义是:“应用工程学和生命科学的原理和方法,认识哺乳动物正常和病理组织中结构-功能关系,并开发生物代用品,以恢复、维持或改善组织的形态和功能”。随着组织工程学研究的深入和发展,其内涵不断扩大。近年来,有人将生物材料诱导细胞分化、组织再生亦归于组织工程学范围,其定义也将会有所更改。组织工程的基本做法是,取少量自体组织,在体外分离、培养细胞,将一定量的培养细胞接种到具有一定空间结构的三维支架材料上,再将此细胞-支架复合物在体外继续培养,并植入体内培养,通过细胞生长繁殖、相互贴附、分泌细胞外基质,形成具有一定结构和功能的组织或器官。 1.骨的组织工程:骨组织工程是继软骨组织之后研究得较早、较多的对象。Vacanti(1993年)等将小牛骨膜细胞种植于多层编织的聚羟基乙酸(polyglycolic acid, PGA)支架中,然后移植于裸鼠体内,结果证实骨细胞可以增殖成为骨骼;Crane等[1]全面提出了骨组织工程研究的概念、方法、现状和前景,引起了广大学者的关注。近年来骨组织工程研究进展主要有两个方面:一是骨组织诱导;二是细胞传输[2]。和其他组织的组织工程研究原理和方法一样,组织工程骨的研究主要也是集中在种子细胞、支架材料和骨的构建3个方面。
-
乙醇诱导胃上皮癌细胞株(BGC-823)细胞凋亡
在整体动物和离体培养细胞,乙醇都可引起胃粘膜组织细胞损伤.但乙醇是否引起胃粘膜细胞发生凋亡,其在胃粘膜损伤中的作用如何,目前尚不清楚.本研究用257~686 mmol/L的乙醇(主要为343 mmol/L)作用于离体培养的胃上皮癌细胞株(BGC-823), 在不同时间作Giemsa染色, DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析.
-
一种培养细胞片免疫细胞化学染色方法
应用培养的细胞进行免疫细胞化学、原位杂交等是细胞生物学研究基本的方法.国内外多数研究者均采用将培养的贴壁细胞经过消化、离心、涂片、固定后免疫细胞化学的方法,但是,操作过程中细胞的形态和功能可能发生变化,操作烦琐.下面介绍一种简便、快速、可靠的在盖玻片上进行免疫细胞化学染色的方法.
-
Caco-2细胞模型在药物吸收研究中的应用
Caco-2细胞(the human colon carcinomaline)模型是近十几年来国外广泛采用的一种研究药物肠吸收的体外模型,它具有如下优点:与动物试验相比,培养细胞要比培养动物更省时更经济;可测定药物的细胞摄取及胯膜转运;Caco-2细胞内有药物代谢酶,可在有代谢状况下测定药物的胯膜转运;Caco-2细胞易于培养且生命力强;Caco-2细胞来源是人结肠癌细胞,同源性好;可用于区分肠腔内不同吸收途径的差别.
-
简易且能避免污染的细胞培养方法
培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱,且为保持箱内二氧化碳气5%~10%的浓度,需持续输入二氧化碳气体.为此,箱内的培养瓶盖不能拧紧,以便二氧化碳气体自由进出.这种方法缺点:①成本较高:一个二氧化碳温箱的价值就近万元,另外需大量的二氧化碳气,费用也高;②较易污染:二氧化碳气需自由进出培养瓶,无形中增加了外界的细菌或真菌感染细胞的机会.兹将我们培养细胞的方法做一简介.该方法的特点:①只需购置数百元的普通隔水式恒温箱,不需要昂贵的二氧化碳温箱;②配液方法特殊,可节省大量的二氧化碳气体;③培养瓶口要塞严或将瓶盖拧紧,减少了细胞受到感染的机会.
-
一种实验兔膝关节滑膜组织提取新方法
类风湿性关节炎( RA)典型病理表现之一为滑膜组织增生。成纤维样滑膜细胞( FLSs)在RA的发生、发展中发挥着重要作用。在原代FLSs体外培养过程中,滑膜组织提取成功与否是实验顺利进行的关键。以往兔膝关节滑膜组织提取大都是提起髌骨上下进行分离,在实验中我们发现将髌骨提起分离两侧及胫骨时需要将髌骨翻转,此时难以辨认关节囊内外层组织的解剖关系,致使分离困难,可能将纤维层混杂导致培养细胞纯度不高。本研究在此基础上进行改良,建立一种简单易行的提取方法并附图做详尽说明。
-
口腔扁平苔藓Th细胞亚群功能状态的初探
口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种常见的口腔粘膜的慢性炎症性疾病,为T淋巴细胞介导的免疫反应[1],CD4+辅助性T细胞(T helper cell, Th)在OLP的发病机制中起着重要的作用[2].本研究通过观察OLP患者外周血Th细胞亚群CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+表达的变化,检测OLP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在植物血凝素刺激下培养上清液中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量及培养细胞中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达水平,探讨OLP患者Th细胞亚群的功能状态.
-
极低频磁场对细胞缝隙连接通讯功能影响的超微结构观察
50 Hz连续或脉冲磁场对培养细胞的细胞缝隙连接通讯(gapjunctional intercellular communication,GJIC)功能影响的研究表明,0.4 mT以上强度的磁场具有抑制GJIC功能的作用,该作用与磁场强度及辐照时间相关,具有剂量-效应关系,脉冲磁场抑制效应较正弦磁场强[1-3].我们在已往实验的基础上,应用透射电子显微镜(TEM)及计算机图像分析系统进一步观察在0.8 mT、50Hz脉冲磁场辐射24h的条件下,极低频磁场对GJIC功能影响的超微结构变化.