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肺生物基质及鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞影响的研究
目的研究细胞外基质(ECM)对日本血吸虫培养细胞生存、生长的影响,佐证ECM有利于培养细胞的生存、生长.方法将虫龄21 d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肺生物基质、鼠尾胶的培养瓶和小盖玻片上常规培养,分别在光镜及扫描电镜下观察、拍照,并运用酶细胞化学方法进行培养细胞的乳酸脱氢酶(LDH)染色.对照组未涂生物基质.结果与对照组相比,实验组细胞饱满,弹性好,立体感强,存活时间长,LDH活性强,对高温具一定的耐受性;尤其是肺基质中培养的细胞,酶活性强,培养60 d的细胞仍观察到具有分裂能力.结论 ECM能改善日本血吸虫培养细胞生存、生长的微环境.实验组间比较,肺基质组更优.
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流式细胞术应用于医学检验的研究进展
流式细胞仪( flow cytometer , FCM )是集现代物理电子技术、计算机技术及激光技术于一体的先进的科学技术设备。流式细胞术即是利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的单列细胞或者生物颗粒进行逐个、多参数、快速地筛选或定性、定量分析的一种技术[1]。流式细胞术可用于分析血液、骨髓、体液中的细胞及体外培养细胞等。 FCM在进行医学检验方面应用广泛,包括肿瘤、血液学、免疫学及微生物学等许多相关疾病的检验,具有检测样品快速、准确以及敏感性高等特点,可从一个细胞中测得多个参数,为医学检验提供了一种强有力的手段和全新的医学视角,是医学检验中重要的研究工具。
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瑞香狼毒水提物小鼠药物血清对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的影响
目的:从整体水平探讨瑞香狼毒水提物(SCLA)的抗癌机理.方法:以不同剂量的SCLA灌胃给药后,在不同时间采集小鼠血清,处理体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞,用MTT比色法和集落形成试验观察细胞增殖能力.结果:不同剂量、不同时间SCLA小鼠的药物血清处理肿瘤细胞后,其MTT转化率和克隆形成率均显著降低;给药2h后的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用.结论:直接抑制癌细胞增殖是瑞香狼毒的主要抗癌机理.
关键词: 瑞香狼毒 血清药理学 胃腺癌SGC-7901 培养细胞 -
显微捕获分离技术在分子生物学和蛋白质研究中的应用
在科研工作中,选择各种细胞进行核酸水平和蛋白质水平的实验是为常见的工作.一般说来,细胞来源多为体外培养细胞或直接从组织中获取的细胞.培养细胞一般为单一种类的细胞,与对照组有很好的对比性,用于分子生物学实验或蛋白质研究是很好的研究材料.但长期的研究发现,细胞表型受到周围微环境,特别是周围细胞的细胞相互作用的影响,培养细胞可能因微环境改变或失去周围细胞的相互作用而使基因表型发生改变.
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细胞旋转培养器的研制与使用
在匀速旋转细胞培养中,需要一种匀速旋转的细胞旋转培养器.厂家生产的匀速细胞旋转培养箱体积大,结构复杂,价格高,不易购置.经过长时间的研究,我们制作了一个细胞匀速旋转培养器,经我院组织学与胚胎学教研室人员使用,达到了匀速旋转培养细胞的要求,现将制作及使用介绍如下.
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阿糖胞苷对原代培养的大鼠大脑皮层神经元的影响
阿糖胞苷(1-β-Darabinofuranosylcytosine,Ara-C)是治疗急性白血病常用的药物之一.Ara-C可诱导细胞凋亡[1].体外神经元的原代培养中,常在适当时间加入一定剂量的Ara-C作为细胞分裂抑制剂以抑制非神经元的增殖,从而提高神经元的产率.但Ara-C对正常培养的细胞的活性有一定的毒性,且随时间和剂量呈正相关.本实验进行体外大鼠大脑皮层神经元的原代培养,于培养细胞的不同时间加入Ara-C,并分不同的用药持续时间来测定其培养细胞的活性、存活率和神经元的产率,旨在优选在神经元的原代培养中加入Ara-C的佳时间和适用药持续时间.
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培养细胞电镜样品制备方法
随着细胞生物学的发展,大量培养细胞实验取代了动物实验.由于培养细胞体积小而且数量少,给电镜样品制备带来一定的难度.细胞培养的方法一般分悬液式和贴壁式两种.根据观察目的及细胞培养方式的不同,培养细胞的电镜样品制备也可分成不同的几种方法.
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低氧细胞模型的研究进展
细胞是有机体结构和功能的基本单位,对细胞的认识与理解是生命科学的研究基础[1].体外培养是将有机体的活细胞放在类似于体内环境的体外环境中生长和发育的方法,由于体外培养的细胞成分单一,环境因素易于控制、重复性好,故成为疾病研究的重要手段.缺氧是目前造成细胞和组织损伤常见而重要的原因.缺氧可以诱发机体各系统的功能改变,是造成临床多种疾病的主要病理过程之一,也是导致机体死亡的重要因素,因此缺氧的研究越来越受到关注.缺氧是指当组织和细胞得不到充足的氧,或用氧障碍,不能充分利用氧时,组织和细胞的代谢、功能,甚至形态结构都可能发生异常变化的病理过程[2].细胞缺氧是缺血缺氧性疾病发病机制中的关键环节,所以细胞缺氧模型是从细胞、分子水平研究此类疾病的重要方法.现就体外培养细胞缺氧模型的制备及其特点进行综述.
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HepG2.2.15细胞分泌前S1、病毒抗原和乙型肝炎病毒DNA的动态变化
HepG 2.2.15细胞是将含有HBV基因组(2个HBV二聚体以尾对尾方向串联)的重组载体质粒转染HepG2细胞,经G418筛选,得到的克隆能稳定分泌HBsAg、HBeAg、HBcAg及Dane颗粒,并可检测到细胞内DNA和RNA等各种中间复制体[1,2],还能分泌前S1和前S2[3-5].此外,在HepG 2.2.15细胞株中,培养细胞的上清液和细胞内均发现HBV ccc DNA[6],但至今鲜见有关HepG 2.2.15细胞分泌前S1动态变化的相关报道.为更好地了解和掌握HepG 2.2.15细胞分泌特点和动态变化,为筛选抗HBV药物建立一个稳定的体外培养系统,我们采用ELISA法检测HepG 2.2.15细胞株培养上清液中前S1、HBsAg和HBeAg,采用PCR检测HepG 2.2.15细胞株培养上清液中HBV DNA的动态变化,现报道如下.
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自身稳定性反义寡核苷酸抗核酸酶降解作用的研究
反义寡核苷酸(asoN)抗肿瘤,抗病毒基因调控、复制与表达的研究国内外已有报道[1-3].研究表明asON 能有效地抑制培养细胞中乙型肝炎病毒基因表达[4-5],是值得研究的新型抗病毒药,但其应用于体内的主要障碍之一是易被血清中各种核酸酶降解.
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基因芯片在胰腺癌研究中的前景
胰腺癌是一种恶性程度高、易转移、预后差的恶性肿瘤.由于胰腺癌位置较深,无特异性临床症状,诊断时大部分已属中、晚期,故5年生存率仅5%.近年来,胰腺癌发病率逐年上升,在美国居恶性肿瘤死亡率的第4~5位.上海地区近30年发病率增加7.5倍.由于胰腺癌治疗效果尚不理想,因此,对其分子病理学及肿瘤相关基因的研究逐渐受到重视.目前,国内外对胰腺癌相关基因的研究,主要针对一些基因异常表达、基因突变、癌基因异常扩增及抑癌基因失活等进行研究.涉及的主要基因有Ki-ras、p53、p16、p21、DPC4及胰蛋白酶原基因等.但各个研究中涉及基因较少,对基因研究也主要是将一个癌基因或可能的抑癌基因转到培养细胞或转基因动物中,或把某一基因进行敲除(knock out)以观察生理或病理变化,但无论是生理或病理过程中,每一个基因都不是独立发挥作用.
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海马神经元突触囊泡释放特征及可释放囊泡含量定量分析
中枢神经系统突触前的神经末梢只有少量的突触囊泡存在,突触囊泡数目的多少和融合模式将影响突触传递的效率.对突触囊泡数目的多少和释放模式的研究依赖于有效的研究方法.在本研究中,与膜亲和力不同的荧光染料用于标记体外培养的海马神经元的功能性突触囊泡.通过场电位和高钾刺激,动态观察荧光强度的变化,结果显示在第一轮刺激中,与膜亲和力低的染料FM2-10脱色的比例(93.0%±5.9%)显著大于与膜亲和力高的染料FM1-43(57.9%±3.5%).但是,第二和第三轮刺激中FM1-43脱色的比例分别为(24.0±2.3)%,(8.6±1.5)%,显著大于FM2-10的脱色比例(1.4±3.8)%,(2.3+1.6)%).这个结果提示快速内吞模式不仅存在于囊泡的第一次释放,同时还存在于囊泡回收后的再次释放.另一方面,高频刺激和高渗蔗糖溶液这两种方法同时用于检测体外混合培养13~14天的抑制性神经元的可释放囊泡池(readily releasable pool,RRP)的大小.结果显示,用高渗蔗糖溶液估计的RRP的大小[(200±23.0)pC]显著大于用高频刺激估计的RRP的大小[(51.1±10.5)pC].分析其可能的原因是用双patch的方法分析的是两个神经元之间的联系,而在混合培养的系统中,一个神经元有可能受多个神经元的支配,用高渗溶液刺激则使所有的突触前RRP都释放,所以用这种方法计算的RRP值要大的多.因此为了排除混合培养的神经元中突触联系的多少对RRP值的影响,用高频刺激的方法来估计RRP值的大小更合理.
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MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响
目的 观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导后日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)含量的动态变化,探讨MNNG诱导后培养细胞的增殖能力.方法 将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,置于含20%小牛血清附加常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中培养;培养第4天,细胞随机分为实验组和对照组两组,实验组细胞以含3 g/ml MNNG的常规培养基处珲48 h,对照组细胞则用不含MNNG的常规培养基作相同处理.细胞经彻底清洗后继续以常规培养基培养3周,然后换用含5%小牛血清的低血清培养基培养.MNNG处理后第1~9周,每周实验组和对照组细胞采用略作修改的胶银法进行Ag-NORs染色,光镜下观察与拍照,HPIAS-2000图像分析仪测定代表培养细胞内Ag-NORs含量的吸光度(A)值,并进行统计学分析.结果 培养过程中,对照组细胞着色逐渐变浅,MNNG组细胞除在第2 周时着色变浅外,其余均逐渐加深,尤其在第6周(MNNG诱导后第5周),细胞核呈深棕色,可见粗大的银染颗粒,核仁呈黑色,并观察到分裂细胞.第7~9周,两组细胞着色均逐渐,变浅.定量分析发现,对照组细胞在培养初期Ag-NORs含量高,随后逐渐降低;MNNG组的Ag-NORs含量在培养第2周时稍有降低,随后逐渐升高;在培养第6周即MNNG诱导后第5周时达到高峰,然后又逐渐下降.结论 MNNG诱导可显著增强培养细胞的rDNA转录活性,提高细胞的分裂增殖能力,在MNNG诱导后第5周细胞增殖能力强.
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肝基质对日本血吸虫培养细胞生长的影响
目的研究肝基质对日本血吸虫培养细胞形态、增殖的影响.方法联合法将虫龄为21 d的日本血吸虫童虫细胞接种于预先铺敷有肝基质(实验组)和未铺敷肝基质(对照组)的小盖玻片上,培养于常规培养基中,用高碘酸雪夫(PAS)法染色培养细胞,Olympus-BH2显微镜下观察并拍照;并将接种第3天的实验组和对照组培养细胞用胶银法进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)染色,HPIAS 2000图像分析仪测定AgNORs平均光密度值进行图像分析.结果实验组中的培养细胞其细胞质突起和分裂细胞增多,AgNORs的平均光密度值显著高于对照组细胞(P<0.01).实验组的细胞分裂方式除常见的一分为二方式外,还观察到一分为三的多极分裂方式;而对照组未观察到分裂细胞.结论肝基质可明显影响日本血吸虫培养细胞的形态,显著促进培养细胞的增殖.
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肝基质鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞AKP和ACP影响的研究
目的研究肝基质、鼠尾胶对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,筛选适合日本血吸虫细胞培养的基质.方法将虫龄28 d的日本血吸虫成虫细胞,接种于预先铺敷有肝基质和鼠尾胶的小盖玻片上常规培养,未铺敷基质者作对照.运用酶细胞化学方法,分别于培养5、14、21、35 d对日本血吸虫成虫培养细胞进行AKP和ACP染色,显微镜下观察并拍照,图像分析仪测定其含量,并作统计分析.结果铺敷的基质不同,培养细胞的AKP和ACP活性不同.AKP、ACP着色深浅均按对照组、鼠尾胶组、肝基质组依次加深.定量分析显示,培养1 4 d内,肝基质组与鼠尾胶组细胞AKP活性明显高于对照组(肝基质组P<0.01;鼠尾胶组P<0.05);两基质组培养细胞之间差异也有显著性(P<0.05).培养21 d后,肝基质组细胞AKP活性分别高于鼠尾胶组和对照组(P<0.01);后两者培养细胞之间的AKP活性无明显差异(P>0.05).培养5 d细胞的ACP活性,肝基质组与鼠尾胶组明显高于对照组(P<0.05),两基质组相互比较差异无显著性(P>0.05);培养14 d后,各组之间两两比较均有差异(P<0.05),肝基质组培养细胞ACP活性强,鼠尾胶组次之,对照组弱.结论肝基质较为适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长.
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甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究
目的研究甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响.方法将虫龄26 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,在RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第7天时,随机分为实验组和对照组,实验组用含浓度为3 μg/ml MNNG的常规培养基处理48 h,对照组用不含MNNG的常规培养基处理同样时间,随后换用常规培养基培养3周,当再换用含5%小牛血清的培养基培养1周时,分别用Gomori钙钴法和Gomori硫化铅法对两组培养细胞进行AKP和ACP细胞化学染色,用OlympusBH-12显微镜观察并拍照,用HPIAS-2000图像分析仪测量其含量,并作统计分析.结果实验组培养细胞的AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性(P<0.01).结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞AKP、ACP的活力,对培养细胞有促生长或/和诱导其转化的作用.
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大黄素和大黄酸对角质形成细胞体外培养细胞周期的影响
研究大黄蒽醌衍生物对细胞增殖动力学的影响已有文献报告[1],但关于大黄蒽醌衍生物对细胞周期的影响,尚未见报告.本文通过体外培养细胞的方法,采用流式细胞分析仪检测细胞周期变化,观察大黄蒽醌衍生物(大黄素和大黄酸)对角质形成细胞株colo-16的细胞周期影响,进一步探讨大黄蒽醌衍生物的药理作用.
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银屑病患者Fas及Bcl-2的表达及中药的作用
为探讨银屑病的细胞凋亡机制及中药对其影响,我们对寻常型进行期银屑病患者皮损Fas和Bcl-2的表达进行了光镜及电镜原位杂交研究,探讨了电镜原位杂交的实验方法,观察了8种中药对银屑病患者皮损培养细胞中Fas和凋亡表达的抑制作用.并检测了经银屑病患者白细胞刺激的体外培养角质形成细胞(KC)Fas和凋亡表达的抑制作用,力图筛选出有效的中药.
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琼脂石蜡双重包埋法用于培养细胞的鉴定
目的 探讨培养细胞的佳染色方法.方法 通过比较细胞直接染色、细胞涂片染色、琼脂石蜡双重包埋法、电镜包埋染色四种染色方法为本实验室建立一套佳的细胞染色方法.结果 细胞直接染色和细胞涂片染色法显示出的细胞比较直观,结构清晰,但常出现细胞不集中、细胞重叠等缺陷.而用琼脂石蜡舣重包埋法,结果显示细胞分布均匀、集中,便于染色与观察.结论 琼脂石蜡双重包埋法是一种简便易行、重复性好的细胞切片染色方法.
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用ELISA测定卵巢癌患者血清、腹腔液VEGF水平及其临床意义
目的测定卵巢癌患者血清、腹腔液血管内皮生长因子(VEGF)水平,并探讨其临床意义.方法采用酶链免疫吸附试验(ELISA)检测28例卵巢癌患者血清、腹腔液及卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和原代培养卵巢癌细胞上清液中VEGF水平.结果卵巢癌患者血清VEGF中位值为463 2ng/L,腹腔液中位值为2630.5ng/L,腹腔液显著高于血清(U=58,P<0.001),但两者无相关性(r=0.185,P>0.05);卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和原代培养卵巢癌细胞上清液有较高水平的VEGF蛋白分泌(171.5~16232.9pg/ml/106个细胞).结论卵巢癌患者腹腔局部VEGF水平较高,可能主要来源于癌细胞的分泌;阻断VEGF的作用可能是卵巢癌有效的治疗策略.