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人葡萄膜黑色素瘤的细胞培养及生物学特性
葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UMM)是成人眼内常见的恶性肿瘤,5年生存率为17%~50%.主要死亡原因为肝脏转移,目前仍无有效的治疗方法[1].虽然UMM在我国患病率低于欧美,但仍占我国眼科患者死亡的0.4%~0.5%,我国上皮型UMM的比例高于欧美国家[2].为探讨葡萄膜黑色素瘤的生物学特性,有学者自1929年开始行体外培养葡萄膜黑色素瘤细胞,至1984年成功建立6个连续细胞系[3],但有关葡萄膜黑色素瘤的生物学特性及其细胞培养的报导较少.因此我们1999年12月至2000年12月对本中心眼科手术摘除的4只患眼的肿瘤进行取材、培养,对其形态学特征、生长状况、表面抗原及超微结构进行了检测,同时探讨其生长特点,建立UMM连续细胞系,为我国葡萄膜黑色素瘤的基础理论和临床治疗等研究提供良好的实验模型.
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隐匿性HBV感染相关S基因突变对HBsAg检测的影响及其机制
目的 探讨隐匿性HBV感染(OBI)相关S基因突变对多种抗-HBs及HBsAg临床检测试剂的反应性.方法 9种代表性S基因突变株(M1-M9,其中M1-M5为本课题组首次报道)分离自1例OBI患者和3例OBI献血人员血清.分别采用野生型及突变型S基因重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞,分析9种突变株HBsAg表达及其突变蛋白对抗体和检测试剂反应的影响.结果 采用HBsAg罗氏诊断试剂Elecsys定量检测9种突变株胞内HBsAg水平,均较野生株的水平明显下降;相同样品用抗-His抗体检测显示仅M1、M6和M7的HBsAg-His融合蛋白表达水平与野生株比较明显降低.6种抗-HBs与各突变HBsAg的反应性结果(S/CO值)显示,与野生株相比,多数突变株与6种抗-HBs的反应性明显降低,M1、M4、M7和M9产生的HBsAg与抗体4及M9产生的HBsAg与抗体6反应性差(S/CO<1).6种商品化HBsAg临床试剂检测结果显示,多数突变株与6种HBsAg试剂反应性较野生株明显降低(P<0.05),ELISA试剂D、E和F漏检率分别为11.1%、22.2%和55.6%.结论 本实验涉及的突变HBsAg与抗-HBs的结合力降低是引起OBI表现的主要原因之一.当前临床常用HBsAg检测试剂对突变HBsAg的检测能力存在明显不足,亟待提高.
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HBsAg/Anti-HBs共阳性乙型肝炎肝硬化患者HBV表面蛋白免疫逃逸的变异分析
目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者中HBsAg/Anti-HBs共同阳性现象的临床意义及其与乙型肝炎病毒表面蛋白(HBV S蛋白)主要亲水区(MHR)内免疫逃逸相关变异的关系.方法 收集81例HBsAg/Anti-HBs共同阳性和167例HBsAg单阳性的乙型肝炎肝硬化患者临床数据和血清样本,提取HBV DNA扩增HBV S基因并进行序列测定,分析两组患者HBV S蛋白MHR内免疫逃逸相关变异特点.结果 HBsAg/Anti-HBs共同阳性乙型肝炎肝硬化患者与HBsAg单阳性患者在年龄、性别构成、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)等生化指标,凝血酶原时间(PT)延长时间、HBV DNA水平和HBeAg阳性率等方面的差异均无统计学意义.在HBsAg/Anti-HBs共同阳性患者中,HBeAg阳性与阴性患者间HBV DNA水平差异无统计学意义,而HBsAg单阳性患者中,HBeAg阳性患者HBV DNA水平明显高于阴性患者(P<0.05).与HBsAg单阳性患者相比,HBsAg/Anti-HBs共同阳性患者中MHR内总体免疫逃逸相关变异检出率(46.9%vs.25.2%)、多位点联合变异检出率(21.0% vs.7.2%),以及免疫逃逸相关的MHR新增N-糖基化位点变异检出率(9.9% vs.1.2%)均明显增高(P<0.05).结论 在HBsAg/Anti-HBs共同阳性乙型肝炎肝硬化患者中,应谨慎评价HBeAg反应HBV复制活跃程度的能力.与HBsAg单阳性患者比较,HBV S蛋白MHR内免疫逃逸相关变异及新增N-糖基化位点变异检出率更高、变异形式更复杂,可能是导致HBsAg/Anti-HBs共同阳性现象的因素之一.
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普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白免疫原性的研究
目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性.方法: 将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,分析免疫小鼠的细胞免疫应答水平,并采用RT-PCR方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞被重组蛋白刺激后细胞因子的表达.结果: N端和C端重组蛋白均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,诱导高水平的小鼠脾淋巴细胞增殖;经两种重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2.结论: 普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,可作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白.
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静滴乳酸环丙沙星致黄疸1例
1 病例报告患者男,34岁.左侧胸痛伴发热5 d 入院.查体:体温39.4℃,呼吸22/min,心率106/10kPa.急性病容,咽部充血,左肺语颤增强,浊音,肺底可闻及大量湿性NFDE1音.实验室检查:白细胞22.5×109/L,中性0.92,淋巴0.08,肝功能、生化全项及尿便常规均正常.X 线胸片示:左下肺炎.诊断:肺炎.静滴乳酸环丙沙星(四川科伦大药厂,批号00216-11,200 mg/100 ml)200 mg,每日2次(用药前环丙沙星未作稀释,滴速为55~60/min).治疗第4天,皮肤、巩膜黄染,总胆红素92.6 mmol/L,直接胆红素77.8mmol/L,间接胆红素14.8 mmol/L,谷丙转氨酶(ALT)38 U/L,碱性磷酸酶86 U/L,清蛋白45 g/L,球蛋白27g/L,尿胆红素阳性,乙型肝炎病毒表面抗原阴性,甲、丙、戊型肝炎病毒抗体阴性.考虑为环丙沙星致药物性黄疸.停用环丙沙星,改用头孢夫辛钠,并加用保肝药,10d 后黄疸消失,复查肝功能正常.
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化学发光法与酶联免疫吸附测定法在乙肝两对半检测中的应用研究
目的 研究分析化学发光法与酶联免疫吸附测定法在乙肝两对半检测中的临床应用价值.方法 选择西平县人民医院2016年2月-2017年2月收治的乙肝患者500例,抽取血样,分别应用化学发光法和酶联免疫吸附法进行乙肝表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb),e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)检测,观察比较两种测定方法的敏感性、特异性和准确性.结果 化学发光免疫法对HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率均高于酶联免疫吸附试验检测法,具有统计学意义(P<0.05);在65例经化学发光免疫法检出的低水平(0.06 ~ 3.00 IU/ml)阳性标本中,酶联免疫吸附试验检测法检出率为46例(70.8%)(P<0.05),差异具有统计学意义;酶联免疫吸附试验检测法的低检出浓度为0.14 IU/ml,显著高于化学发光免疫法的0.03 IU/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附试验检测法的批次内、批次间变异系数(精密度)分别为3%~5%、5% ~ 10%,显著高于化学发光免疫法的<3%和<5%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 化学发光法具有敏感度强、特异性好、重复性高、操作简便、检出率高等特点,且其对HBsAg低水平的检出率较为理想,可有效避免误诊或者漏诊事件的发生.
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桂皮醛通过 Caco-2细胞体外吸收模型对白血病K562细胞株的作用
目的:研究桂皮醛通过Caco-2细胞体外吸收模型作用于白血病K562细胞株并使K562细胞向髓系、红系分化的情况。方法桂皮醛经Transwell转运池Caco-2细胞模型,确定无细胞毒质量浓度为0,50,100,200,400,600,800,1000μg· mL-1,高效液相色谱法检测透过模型的成分。噻唑蓝( MTT)法检测桂皮醛作用K562细胞72 h 的无细胞毒的浓度范围。桂皮醛标准品(50,75μg· mL-1)直接培养白血病细胞K562共72 h,流式细胞仪检测K562细胞的表面抗原CD235a、CD36、CD41、CD61、CD13、CD33和CD14的比例。结果桂皮醛无细胞毒质量浓度为200μg · mL-1,透过模型的成分为桂皮醛。50,75μg· mL-1桂皮醛作用 K562细胞在以下不同时间的抑制率:24 h 为(25.29±0.97)%,(36.60±0.18)%;48 h 为(48.23±0.63)%,(57.15±0.58)%;72 h为(58.23±0.63)%,(57.15±0.58)%,和对照组相比,抑制效果明显(P<0.05)。50,75μg· mL-1桂皮醛作用K562细胞72 h后,髓系分化表型CD13、CD33、CD36在K562细胞上表达量分别为(0.33±0.21)%,(32.89±0.19)%,(7.73±0.57)%;(0.72±0.43)%,(38.80±0.03)%,(10.90±0.82)%,和对照组比较,表达均明显增高(P<0.05)。红系分化表型CD235a的表达量为(52.38±0.65)%,(57.48±0.70)%,和对照组比较,表达均明显增高( P <0.05)。巨核系分化表型 CD41、CD61的表达率无明显变化( P>0.05)。结论桂皮醛能透过Caco-2细胞体外吸收模型且能使K562细胞向髓系、红系分化。
关键词: 桂皮醛 K562细胞 Caco-2细胞模型 表面抗原 -
慢性乙型病毒性肝炎抗病毒治疗的进展
乙型肝炎病毒(HBV)感染呈全球性分布,全球慢性HBV感染者约为3.5亿人;每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞性肝癌(HCC)[1,2].我国自1992年起对全国新生儿接种乙肝疫苗纳入计划免疫后,1 ~59岁一般人群乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性率已由1992年的9.75%降至2006年的7.18%.其中慢性乙型肝炎患者约为2 000万人,是我国肝硬化和HCC的主要病因,对人民健康危害极大.1 抗病毒治疗的重要性和必要性慢性乙型病毒性肝炎(CHB)是进展性、难治性的传染病,可进展为肝硬化和HCC,发生的原因与持续高病毒水平密切相关,而感染性疾病重要的治疗就是病原学治疗.
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五种体外诊断试剂使用情况调查
根据文件的规定,5种体外诊断试剂即乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫诊断试剂盒(HBsAg EIA)、丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒(抗-HCV EIA)、人类免疫缺陷病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒(抗-HIV EIA)、梅毒诊断试剂盒及ABO血型定型试剂实行"国家批批检定"(以下简称"批批检定").在执行规定的7年中,对5种体外诊断试剂共抽验60个单位、4440批、211760万人份、合格率为98.2%.通过实行"批批检定",这5种试剂各生产单位不仅重视其工艺改进和产量增加,更重视质量,在乙肝、丙肝、艾滋、梅毒和血型定型诊断方面发挥重要作用.但是,在某些地区还存在非法生产的现象,少数使用单位仍未按规定使用"批批检试剂".为保证临床用血安全和血液制品的质量及临床诊断的准确性;巩固"批批检定"的成果和能使"批批检定"顺利进行.
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旋毛虫排泄分泌抗原的研究与应用
旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病,由旋毛形线虫引起.自1835年发现旋毛虫病以来,为诊治和预防旋毛虫病,人们对旋毛虫抗原展开了广泛的研究.旋毛虫生活史复杂、抗原成分多样,根据解剖部位分为虫体抗原、表面抗原、杆细胞颗粒相关抗原以及排泄分泌抗原(ES抗原)等[1].其中ES抗原是旋毛虫的代谢分泌产物,与宿主免疫系统直接接触.
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我校10届新生乙型肝炎表面抗原结果分析
我国乙型肝炎病毒携带者1亿以上,约占全国人口总数的9.75% [1].为了解我校新生乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的携带情况, 我们对1999~2008年新生进行了HBsAg检测,结果如下.
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表面抗原检测的相关体会
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测结果阳性就表明感染了乙型肝炎病毒(HBV),乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性就表明没有感染乙型肝炎病毒.这个观点,目前在临床上应该是得到一定认可的,然而事实是否有与此违背的现象呢?是否可凭一次检测结果而如此断言呢?事实表明在有些情况下是不可以这样的.
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溶血标本对酶联免疫法检测HBsAg的影响
目的:通过实验来观察不同程度溶血标本对酶联免疫实验检测乙型肝炎病毒表面抗原结果的影响.方法:收集健康人和乙肝患者标本,人为造成不同程度的溶血,用酶联的方法检测HBsAg,通过对结果的观察来分析其影响程度.结果:溶血对测定结果有干扰,乙肝患者血标本的吸光度受到影响,但是对结果判定无影响.结论:血红蛋白小于10 g/L,对乙型肝炎病毒表面抗原测定的结果无影响.
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流感的生物预防——疫苗接种
揭开流感的面纱流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病.流感病毒为RNA病毒.病毒颗粒由三层结构组成,外层为两种突起的表面抗原,一种是血凝素(HA),另一种是神经氨酸酶(NA),蹭层是类脂体和核蛋白(NP)和三个多聚酶蛋白缠绕在一起.
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干扰素-α对卵巢癌细胞CA125的诱导作用探讨
卵巢癌(Ovarian Cancer)发病率较高,占妇科肿瘤发病之首,恶性程度较高,大多数发现于晚期,5年生存率仅为30%左右.而CA125是与上皮细胞型卵巢癌相伴随的表面抗原,检测血清中CA125对卵巢癌病人的手术治疗范围、术后复发及用药等问题均有指导意义.本文利用干扰素-α(interferon IFN)对体外人工培养的两株卵巢细胞系SKOV3及3AO表达CA125进行诱导调节,检测其浓度变化.旨在探讨IFN-α对卵巢癌可能的治疗作用.
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乙肝病毒携带者乳汁中乙肝病毒状况研究
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染所致的乙型病毒性肝炎是我国主要的传染性疾病之一,严重危害人们健康.母婴传播是造成我国HBV流行的重要途径:因表面抗原(HBsAg)阳性母亲所致的HBsAg携带儿童占总携带人群的32.3%[1].但母婴传播机制尚不清,推测可能与经胎盘、分娩时以及产后密切接触有关[1,2].
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100例血清HBsAg阴性乙型肝炎恢复期病人血清中HBV-DNA检测分析
目的探讨血清HBsAg呈阴性的乙肝恢复期病人血中HBV-DNA存在情况.方法选取血清HBsAg阴性的处于乙肝恢复期病例100例,分析这部分人血液HBV-DNA的检测结果,其中两对半检测用单克隆抗体免疫放射分析法.HBV-DNA用ELISA-PCR法.结果HBsAg为阴性的100例乙肝恢复期血样中,HBV-DNA全部呈阴性.结论单克隆抗体免疫放射分析法检测血清HBsAg能真实反映受检者是否携带乙肝病毒.
关键词: 乙肝病毒 表面抗原 乙肝病毒脱氧核糖核酸 -
淋巴瘤的免疫诊断
恶性淋巴瘤(malignant lymphoma,ML)是原发于淋巴结或淋巴结外组织或器官的一种恶性肿瘤,来源于淋巴细胞或组织细胞的恶变.根据临床和病理特点不同,ML分为两大类,即霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's Lymphoma,HL)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin's Lymphoma,NHL)1994年"修订的欧美淋巴瘤分类"(Revised European-American Lymphoma Classification,简称REAL分类)对各型的描述,除形态学特征外,还包括较多的免疫表型及细胞遗传学特点或基因突变位点.新的WHO分类综合了临床表现,形态学,免疫学和分子生物学的特征,较好地反映了淋巴瘤研究的新进展.因此恶性淋巴瘤的免疫诊断显得越来越重要,它不仅能确立淋巴瘤的干系分化(如T细胞或B细胞),而且可以根据有些淋巴瘤表面抗原的不同,达到相互鉴别的目的[1,2].
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分泌性靶向促凋亡分子基因构建、表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用
为建立更敏感而特异的用于肿瘤基因治疗新策略,本研究将一段信号肽、抗肿瘤表面抗原HER2的抗体、具有膜转位作用的肽段和几种促凋亡分子融合,构建了几种靶向促凋亡蛋白.体内外实验研究证实,这种重组分子表达分泌后,能够特异性识别和内化进入HER2阳性肿瘤细胞,继而带有部分PEA Ⅱ转膜结构域的促凋亡蛋白转位进入胞质,诱导细胞凋亡,实现特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞和抑制HER2阳性肿瘤生长的作用.
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乙型肝炎病毒表面抗原检测敏感度和标准化问题
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个全球性公共卫生问题.HBV表面抗原(HBsAg)是目前诊断急性和慢性HBV感染的重要血清学标志物.但是HBsAg阴性并非意味着没有HBV感染,检测误差主要由病毒、宿主或者检测试剂盒造成.提高检测方法的敏感度有助于降低满检率,建立标准化检测可以发挥HBsAg定量检测在临床中的价值.同时结合HBV DNA和HBV核心抗体(HBcAb)可以提高HBV感染的检测率,保障临床输血和器官移植安全.