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成人外周血来源的树突状细胞体外诱导方法
目的:探讨从成人外周血中提取单核细胞经体外诱导为树突状细胞(DC)的方法.方法:采用密度梯度离心法和细胞贴壁法从成人新鲜血液中分离出树突状细胞的前体单核细胞,利用重组人白介素4(rhIL-4)重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)经体外诱导5 d后,加入浓度为75 ng/mL的重组人肿瘤坏死因子-a(TNF-a)培养2 d.观察细胞形态,并用流式细胞仪检测技术检测DC表面分子标志物CD80-FITC、CD83-PE和HLA-DR-APC的表达.结果:沉降6 h后洗去淋巴细胞后的DC细胞呈圆形,大小均一,表面较光滑,贴壁生长.诱导第3天,DC细胞形态明显改变,体积变大,单个细胞开始呈簇状集落生长,部分细胞呈半悬浮状态.第5天细胞集落现象明显.加入rhTNF-a后,诱导第7天DC细胞悬浮,单个散开.成熟DC细胞CD80-FITC、CD83-PE、HLA-DRAPC表达率分别为81.59%、67.37%、85.38%.结论:密度梯度离心和细胞贴壁法可从外周血可获得DC的前体单核细胞,通过rhIL-4、rhGM-CSF和rhTNF-a联合诱导可得到成熟的DCs.
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泗洪县2004年高考体检HBsAg、肝功能检测结果调查
对我院2004年高考体检5 190例肝功能、HBsAg检测结果调查分析如下.
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维持性透析患者严重的感染症之一:病毒性肝炎
乙型肝炎及丙型肝炎的病原学一、乙型肝炎病毒(HBV)为DNA病毒,其直径为42~47 nm的球型颗粒(Dane颗粒 ).HBV由两层外壳及内核组成.外壳有许多小球状颗粒,含表面抗原(HbsAg).内核由环状双股DNA、DNA多聚酶、核心抗原(HbcAg)和e抗原(HbeAg).
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乙型肝炎肝硬化的抗病毒治疗
据世界卫生组织(WHO)报道,全球60亿人口中约1/2的人生活在乙型肝炎病毒(HBV)高流行区.全球约有20亿人感染了HBV,其中6.9亿人在中国;全球有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带者3.5亿人,其中1/3在中国;全世界每年有75万人死于HBV感染引起的疾病,其中28万人来自中国,其中25%~40%终将死于肝硬化和肝癌[1].在全球前十位疾病死因中,慢性乙型肝炎(简称乙肝)占第7位,每年因慢性乙肝死亡者约为75万例.乙肝肝硬化患者发生肝细胞肝癌的五年累计危险度在亚洲为17%,在欧洲和北美为10%,五年肝病相关性死亡率在亚洲为14%,欧洲为15%[2].
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慢性乙型肝炎患者HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA与肝功能的关系
乙型肝炎病毒(HBV)基因组表面抗原(HBsAg)编码区(S区)由S、前S1和前S2基因组成,分别编码S、前S1和前S2三种主要蛋白,从而共同构成HBV外壳蛋白[1].作为一项新的HBV血清学检测指标,乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV preS1-Ag)的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.我们对310份慢性乙型肝炎患者血清进行了HBV preS1-Ag、HBV-M、HBV-DNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)联合检测,进而分析探讨这些指标之间的关系.
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固相免疫层析法检测细菌样本处理液的比较研究
固相免疫层析方法检测细菌目标主要为细菌颗粒表面抗原成分,利用表面活性剂增溶活性,使待检测抗原从颗粒上解离成为 "可溶性"抗原,并保持其免疫反应性,进而提高固相膜免疫分析方法检测敏感性.故以鼠疫耶尔森菌为对象,通过建立金标记和上转换磷光(UPT)标记免疫层析方法进行不同表面活性剂处理筛选,以获取佳样本处理效果.
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梅毒螺旋体特异性表面抗原的克隆表达与血清鉴定
梅毒病原体为苍白密螺旋体(Tp),俗称梅毒螺旋体.对Tp的诊断目前主要依据病史与临床检查,辅助以一些血清学方法,如血球凝集试验(TPHA)和荧光抗体吸收试验(FTA-ABS)[1].蛋白分子量17 000与47 000是Tp特异性表面抗原[2,3],患者感染Tp后能够产生相应的特异性抗体.我们利用基因工程的方法,通过大肠埃希菌表达Tp的17 000与47 000特异性抗原,以建立一种Tp血清学诊断方法.
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2000年全国血站血液检验室间质量评价
2000年,卫生部临床检验中心(部临检中心)对全国血站共进行了3次血液检验的室间质量评价工作,质评时间分别为:5、8、11月的1~30日。全国29个省、自治区、直辖市的235家血站参加了质评,其中,血液中心21家、中心血站157家、血站31家、中心血库26家。评价的项目有:乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)抗体、人免疫缺陷病毒(HIV)抗体、梅毒抗体、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血红蛋白(Hb) 6项,批次为005、006、007。现汇报总结如下。
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对《只有提高自己的素质才能更好地与临床对话》一文的异议
编辑同志:贵刊2006年第29卷第12期刊登了我国著名实验诊断学和临床免疫学专家孔宪涛教授的《只有提高自己的素质才能更好地与临床对话》[1]一文,其中对一个乙型肝炎患者检查表面抗原结果有时阳性有时阴性的解释中有"其二,有Hook现象,亦即患者体内可能有抗异性动物的抗体,造成假阳性"的说法,笔者对此有不同看法,愿与孔教授一同商榷.
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血清HBcAg和HBsAg/IgM在慢性乙型肝炎患者中的意义
我们应用放射免疫分析法(RIA),测定638例慢性乙型肝炎患者,108例"健康"成人的血清中乙型肝炎核心抗原(HBcAg)与乙型肝炎患者表面抗原/免疫球蛋白复合物(HBsAg/IgM).现将两项检测指标的临床意义报告如下.
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隐匿性乙型肝炎研究现状
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的全球性问题,我国是HBV的高感染地区,约1.2亿人携带HBV,其中约1/4的人终将发展为慢性肝病,包括肝硬化和肝癌.慢性HBV感染是我国肝硬化和肝癌的主要病因,严重威胁人民健康,也给国家带来巨大的经济损失.多数HBV感染无明显临床症状,血清HBV表面抗原(HBsAg)阳性和病毒血症是HBV感染的主要证据.血清HBsAg阴转及抗HBs的出现一直被认为是HBV清除和临床痊愈的标志.
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门脉高压性胃病的病理观察及其影响因素分析
[摘要]目的 探讨门脉高压性胃病(PHG)的病理特点,分析PHG的影响因素.材料方法 对36例肝炎后肝硬化PHG患者的胃黏膜活检组织光、电镜下观察并进行幽门螺杆菌特殊染色,乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)免疫组化染色.
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慢性乙型肝炎病毒清除自杀基因平衡制约载体系统的构建
目的:建立清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统,靶向清除HBV感染的肝细胞,抑制慢性乙型肝炎和肝硬化患者免疫再活动.方法:逆转录PCR(RT-PCR)扩增丙型肝炎病毒(HCV)基因组中核糖体插入位点(IRES),以pcDNA3载体为基础,构建双顺反子表达载体.同时在IRES位点的上游克隆HBV表面基因的部分反义序列和HCV全长核心基因,在IRES位点下游克隆胸腺苷激酶基因,PCR、酶切和测序鉴定.构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统分别转染培养基含有更昔洛韦的HepG2细胞和2.2.15细胞.结果:构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统可以选择性促使2.215细胞凋亡(实验组细胞凋亡率为15%,而对照组仅为6%);抑制2.2.15细胞在培养基中分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),统计学分析表明,HBsAg在培养基中检测滴度,在两组之间有显著性差异(P<0.05).结论:构建以HBV表面基因为靶基因,自杀基因为效应基因的自杀基因制约平衡系统,可能为下一步慢性乙型肝炎的基因治疗提供理想的基因治疗载体.
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肿瘤抗原和肿瘤疫苗的研究
提取肿瘤细胞的表面抗原及各种抗原间结构的比较将成为今后研究的热点.理想的肿瘤疫苗很可能包括多个肿瘤特异性抗原和/或多个肿瘤非特异性抗原.对肿瘤抗原的研究不仅对免疫应答的机制和肿瘤免疫逃避机制具有重要的理论意义,而且对肿瘤的发病学、诊断、治疗及疫苗的制备也具有重要的应用意义.寻找肿瘤抗原的方法可分为3类:(1)基因工程制备抗原.经典的技术有基因工程与抗体技术和基因工程与T细胞克隆技术两种.(2)天然抗原的提取与纯化.根据MHC-Ⅰ类分子-肽复合物表达于肿瘤细胞表面这一现象,膜结合蛋白的纯化就显得尤为重要.(3)合成肽抗原的制备.另外,各种肿瘤疫苗均有一定效果,但其抗原性仍不理想.理想的肿瘤疫苗应有多向作用靶点.
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乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结构及调节研究
0引言乙型肝炎病毒(HBV)持续感染导致全球性健康问题.世界人口约6%是病毒携带者,HBV也是导致肝硬化和肝癌的危险因素.HBV要持续感染人体,必须要有持续的病毒复制,HBV基因表达精确调节对病毒复制起关键作用.HBV基因组分为结构基因序列和调节基因序列两大部分.调节基因序列和结构基因序列相互重叠,即使结构基因序列本身也有部分重叠,因此,HBV具有结构紧密的特点.HBV序列是在C、S1、S2、和X启动子控制下转录的.除了表面抗原基因启动子Ⅰ (SP Ⅰ),所有其他启动子缺乏TATA盒.两个增强子和负调控元件进一步控制HBV RNA合成,所有转录调控元件插入蛋白编码的基因区.SP Ⅰ作为指导2.4kb mRNA转录的启动子序列,在HBV复制中具有十分重要的作用.
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乙型肝炎病毒增强子的结构和调控研究
0引言HBV属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.他的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有四个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心抗原(pre-C/C)、核酸聚合酶(P)、表面抗原(preS/S)和X蛋白(X).这些基因的表达受到顺式元件-启动子和增强子的调控.目前在HBV基因组已发现并鉴定的顺式元件有四个启动子(C、X、SP Ⅰ、SPⅡ)、两个增强子(Enh Ⅰ和EnhⅡ)和糖皮质激素应答元件[1-4].其中增强子的作用主要是调控HBV的转录和复制.
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乙型肝炎病毒HBsAg重组疫苗与表面抗原DNA疫苗诱导H-2b小鼠免疫应答的实验研究
目的:观察重组乙肝疫苗及乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原DNA疫苗接种后,C57BL/6(H2b)小鼠的免疫应答.方法:构建质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S.转染COS7细胞系进行表达.将C57BL/6小鼠分为5组,分别接种质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S,pVR1012 100μg及重组乙肝疫苗1μg.ELISA法检测小鼠血清抗-HBs.结果:DNA疫苗在转染细胞中可表达HBsAg.血清抗-HBs在第一次接种重组乙肝疫苗后即可检出,而在DNA疫苗组则未检出.此后重组疫苗组诱导的抗-HBs的滴度与DNA疫苗组相似.结论:HBV表面抗原DNA疫苗在H-2b小鼠试验中有体液免疫原性.
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乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结合蛋白1的基因克隆化研究
目的:发现了与乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ(HBVSP Ⅰ)结合的未知功能蛋白,并克隆了他的全长基因.方法:以SP Ⅰ核心序列为"诱饵",应用酵母单杂交技术对人肝细胞cDNA文库进行筛选,得到了一个未知基因,命名为乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结合蛋白1(SBP1).结合生物信息学技术,应用分子生物学技术,克隆了SBP 1的基因编码序列.结果:经酶切和测序鉴定,结果正确,成功克隆了SBP 1的基因编码序列.结论:SBP 1具有完整的开放读码框,可能通过与SP Ⅰ的结合发挥生物学作用.
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乙型肝炎病毒慢性感染者血清中不同类型病毒转录体的检测及其意义
目的:建立针对乙型肝炎病毒(HBV)全长型(fRNA)和顿挫型转录体(trRNA)的血清学检测方法,并探讨其临床应用价值.方法:自患者血清中提取病毒核酸,经PCR及PRT-PCR进行扩增,琼脂糖电泳显示产物,Southem印迹验证反应的特异性.取代表性产物克隆,测序.结果:在HBV慢性携带者的血清中检测到了在上述不同poly(A)位点成熟的病毒RNA.血清中fRNA的检出与e抗原阳性和较强的病毒DNA信号相对应,与转氨酶活性呈正相关,这一血清学指标反映了病毒复制;而trRNA的检出与e抗原阳性和转氨酶活性无关,不象fRNA那样依赖于血清中病毒DNA的量.二者检出率随年龄有不同变化,前者随年龄增加而进行性减低乃至转阴;而后者在10-20岁期间检出率升至80%,以后维持在较高水平.即使在某些表面抗原阴性血清中,也能检测到trRNA和不在上述两个位点成熟的病毒RNA.这些转录体在某些隐源性肝硬变和丙型肝炎患者血清中也存在.结论:病毒转录体的血清学检测有助于确定目前尚不认识的HBV感染期,可用来更准确地区分复制期和非复制期以及检出隐匿性HBV感染.
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拉咪呋啶预防乙肝相关性肝硬化肝移植术后乙肝再感染的临床对照研究
目的:了解乙肝相关性失代偿肝硬化肝移植术后使用拉咪呋啶预防移植物乙肝再感染的疗效及乙肝标志物在血清及肝组织中的动态变化.方法:用酶联放免法,血清HBVDNA荧光定量法、肝穿组织免疫组化LSAB法及HBV DNA原位杂交法定期检测25例受体血清及肝穿组织,观察肝移植术后HBV标志物在血清及肝组织中的动态变化.本研究设计为前瞻的开放的非随机的临床对照研究.25例被分为乙肝病毒活跃复制(15例)及非活跃复制组(10例)两组,皆以拉咪呋啶100 mfd术前后服用预防,非活跃复制组中有3例未能及时服用拉咪呋啶作为对照组.结果:在HBV活跃复制组,术前口服拉咪呋啶平均2 wk能使80%以上的患者血清HBVDNA阴转;继续口服,术后表面抗原消失,部分血清乙肝病毒抗体(表面抗体HBsAb 9/15,核心抗体HBcAb 13/15及HBeAb 11/15)可在术后1-2 wk出现,至6 mo可逐渐消失;血清中HBVDNA荧光定量可一直维持阴转的状态;肝穿组织中HbsAg,HBcAg及HBVDNA原位杂交可长期维持阴性.10例乙肝病毒活跃复制受体其HBV血清标志物在12--44 wk之间完全消失;本组中2例(2/15,13.3%)在2 a时发生拉咪呋啶预防失败而致移植物再感染或乙肝复发;在HBV非活跃复制组,乙肝病毒抗原抗体表达同活跃复制组:表面抗原术后即消失,乙肝病毒抗体即在1-2 wk出现(BsAb4/7,HBcAb 6/7,HBeAb 2/7),6 mo左右消失.3例(43%,3/7)在近2 a时血清及肝组织中HBV标志即完全消失.本组无移植物再感染,乙型肝炎复发及乙肝病毒相关死亡.若血清中重新出现表面抗原或HBVDNA荧光定量阳性或肝穿组织免疫组化或HBVDNA原位杂交阳性则可诊断为HBV再感染.未能及时服用拉咪呋啶的3例非活跃复制的乙肝受体分别在术后8、10、12 mo移植物感染及复发新肝乙型肝炎,移植物再感染率及乙肝复发率为100%,其中1例死于纤维淤胆性肝炎,后二者经加用拉咪呋啶治疗为主的综合治疗而缓解.本研究除对照组外,拉咪呋啶预防下移植物总的乙肝再感染率为9.1%(2/22),受体HB复发率为4.5%(1/22),1-2 a生存率达87%.结论:拉咪呋啶能有效地预防失代偿期乙肝相关性肝脏疾病受体、尤其是乙肝病毒活跃复制受体肝移植术后移植物乙肝病毒的再感染及乙型肝炎复发,甚至使血清中及移植物的乙肝病毒达到临床清除.远期疗效正在进一步的评价中.