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发热伴血小板减少综合征病毒在Vero细胞中的培养特性观察
目的 了解发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)在绿猴肾细胞(Vero细胞)中培养的特征.方法 收集荧光定量逆转录聚合酶链式反应(荧光定量RT-PCR)阳性的发热伴血小板减少综合征(SFTS)阳性病人血清,应用Vero细胞对SFTSV进行分离培养.结果 24份核酸阳性病人标本有21份在Vero细胞中出现了细胞病变(CPE),其中第1代5份、第2代8份及第3代5份,另有3份在培养到第6代~7代时才出现CPE.病毒分离率达87.5% (21/24).并且毒株经Vero细胞连续传代后CPE出现的时间及进展均明显加快,一般均可稳定在5d内出现明显的CPE.结论 虽然SFTSV的初代培养周期较长(约14 d),但经传代后CPE出现时间明显缩短,并且TCID50也较高.因此,应用Vero细胞分离SFTSV既直观又敏感,同时又是疫苗研究中应用广泛的细胞基质.
关键词: 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 细胞培养 细胞病变 -
微量细胞病变中和实验在检测流行性出血热抗体中的应用研究
采用N-2羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES)诱导的微量细胞病变中和实验(HEPES-MCPENT)检测流行性出血热病毒(EHFV)中和抗体国内已有报道[1],为了探索测定动物EHF抗体比较便利的方法以及EHF患者与健康人IFA抗体与中和抗体的关系,笔者使用该法对EHF患者、健康人及多种动物血清进行了检测并与免疫荧光法进行了比较,结果如下:
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微量细胞病变中和实验在检测流行性出血热抗体中的应用研究
采用N-2羟乙哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES)诱导的微量细胞病变中和实验(HEPES-MCPENT)检测流行性出血热病毒(EHFV)中和抗体国内已有报道[1],为了探索测定动物EHF抗体比较便利的方法以及EHF患者与健康人IFA抗体与中和抗体的关系,笔者使用该法对EHF患者、健康人及多种动物血清进行了检测并与免疫荧光法进行了比较,结果如下:
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实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒
腺病毒是一种双链 DNA 病毒,依据病毒株红细胞凝集能力和 DNA 的同源性,分为六种类型,即 A、B、C、D、E、F[1-3]。其中 F 型的Ad40和Ad41是引起胃肠疾病的主要腺病毒[4,5]。目前检测腺病毒的主要方法包括病毒培养和血清学检测。病毒培养存在细胞病变效应和检测时程较长,并且有的腺病毒株不能在常用培养细胞里复制[1]等问题;血清学检测存在抗血清价格昂贵、分型技术繁琐、易出现假阴性结果等弊端。
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大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染
本试验利用指示菌MC1061,经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌O157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体.这些噬菌斑透明,直径为0.5-2 mm,对指示菌的感染效价均在109PFU/mL以上,抵抗氯仿和56℃C30min的作用.将噬菌体分离株SHφW1感染MC1061后,经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061/SHφW1).溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关.
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反义RNA抑制猪传染性胃肠炎病毒复制的研究
根据反义RNA作用原理,设计一条互补猪传染性胃肠炎病毒基因(26888-27184)区的反义RNA序列.将该序列与逆转录病毒表达载体构建成质粒PLXSN-N5',并与质脂体共转染PA317细胞,经G418(500μg/ml)筛选出稳定的产毒细胞克隆.取其上清液感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,测定细胞克隆产生的假病毒滴度,用高滴度假病毒感染IBRS2细胞.提取被感染的IBRS2细胞总DNA和RNA,通过PCR和RT-PCR证明PLXSN-N5'整合到IBRS2细胞基因组.病毒感染细胞病变表明,反义RNA有明显抑制TGEV复制的作用.
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足细胞病变与慢性肾脏病进展
慢性肾脏病(CKD)是2001年由美国肾脏病基金会(NKF)首次提出.CKD由多种不同病因引起,可发生在任何年龄段人群,具有较高的致残率及致死率,很大比例的CKD患者终进展至终末期肾衰竭而接受肾脏替代治疗.CKD进展的损伤机制十分复杂,其特征主要是由于各种初始原因触发了肾脏纤维化的过程,终导致尿毒症的发生.总体来说,CKD进展损伤的共同路径是肾小球硬化、肾血管硬化和肾小管间质纤维化.在CKD进展中,影响肾损害的因素很多,主要包括全身及肾小球高血压、各种细胞因子和生长因子的表达改变、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)改变、血脂异常、蛋白尿、糖尿病及年龄因素等,此外,还包括先天性及遗传因素等[1].
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小儿微小病变肾病综合征免疫发病机制研究进展
小儿微小病变肾病综合征(Minimal Chang Nephrotic Syndrome, MCN)是一组由足突细胞病变引起的肾小球通透性增加,导致血浆内大量蛋白质从尿中丢失的临床综合征, 是儿童单纯型肾病综合征(Simple Nephrotic Syndrome,SNS)中常见的类型,也是儿童原发性肾病综合征(Primary Nephrotic Syndrome,PNS)主要病理类型,主要表现为明显水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症和高胆固醇血症[1],其发病机制尚不明了.目前认为细胞免疫反应为MCN发病的中心环节,特别是足突细胞,故在此探讨MCN免疫发病机制.
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细胞自噬与乙型肝炎病毒及中医药关系的研究进展
细胞自噬(autophagy)是一种通过降解细胞内长寿的蛋白质和受损的细胞器维持细胞平衡的过程,自噬不足或自噬过度都可以导致细胞病变,甚至死亡,这与中医的阴阳平衡理论似相一致.细胞自噬可能增强了乙型肝炎病毒(HBV)的复制,中医药能否通过调节细胞自噬来治疗HBV感染,目前尚无研究报告,很值得我们关注研究.
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A-H1N1肺部感染临床影像表现与病理机制
甲型流感病毒(A-H1N1)和乙型流感病毒由8段890~2341个核酸组成的单链RNA套膜病毒.现在只有H1N1和H3N2的亚型病毒在人类之间传播(图1).病毒复制传播的条件:进入人类身体内并进行复制、使人类生病、能容易地在人与人之间传播.A-H1N1复制仅限于呼吸系统上皮细胞.当有病毒进入细胞,它会导致复杂的细胞病变,使柱状上皮细胞停止细胞本身的蛋白质合成,细胞缺少了本身必须的细胞蛋白而导致细胞的死亡.
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金叶败毒制剂对人巨细胞病毒感染人胚肺细胞的影响
目的研究中药金叶败毒制剂对人巨细胞病毒(HCMV)蛋白激酶pul97的抑制作用及对HCMV感染人胚肺细胞病变的影响,探讨其治疗HCMV感染的分子机制. 方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测中药金叶败毒制剂和更昔洛韦(GCV)干预HCMV感染细胞后pul97mRNA表达水平,并观察两种药物干预后对HCMV感染细胞病变的影响. 结果两种药物均可明显抑制HCMV pul97mRNA的表达水平, HCMV感染12 h后, 即出现细胞病变, 而两种药物均可明显延缓感染细胞的细胞病变. 结论金叶败毒制剂通过抑制HCMV蛋白激酶pul97基因的表达而抑制HCMV的表达和复制,从而延缓感染细胞的细胞病变.
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007 用bcl-2及Ki-67鉴别前列腺良性基底细胞病变与基底细胞样癌
前列腺基底细胞增生性病变包括了从相对常见的良性病变基底细胞增生(BCH)到罕见的基底细胞样癌(BC)等一系列发展过程。BCH以前列腺多层基底细胞的增生为特点,通常伴有完整的基底膜;不典型基底细胞增生用来描述核仁明显或核有异型的增生,仍属于良性病变。BC以各种基底细胞样细胞呈建筑样排列为特点,可有坏死及异型性。由于BCH可以出现明显的核仁及浸润,使得BCH与BC的鉴别较为困难,主要是依靠形态学作出诊断。作者用bcl-2、P53及Ki-67进行了研究,从Johns Hopkins医院外科病理档案中筛选了22例病例,6例为前列腺全切标本;16例为经尿道切除标本;8例为典型BCH;8例为具有核仁的BCH;6例为BC。研究结果显示bcl-2表达(P<0.0001),及Ki-67指数(P=0.05)在BC中有增高,而典型BCH及具有核仁的BCH则没有显著差异。P53则在鉴别前列腺病变时作用不明显。作者认为bcl-2有可能参与前列腺基底细胞病变的病理过程,Bcl-2及Ki-67有助于诊断前列腺基底细胞增生性疾病。刘杉摘刘复生校]
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穿心莲水提取物的抗Ⅰ型单纯疱疹病毒作用
目的 观察穿心莲水提取物体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用.方法 以无环鸟苷(ACV)为阳性对照,将不同稀释浓度的穿心莲水提取物在兔肾细胞上进行治疗、预防及中和实验,通过观察细胞病变(CPE),观察穿心莲水提取物抗HSV-Ⅰ的作用效果.结果 穿心莲水提取物半数毒性浓度(TC50)为2.50g/L,有效抑制浓度为0.63 g/L,对Ⅰ型疱疹病毒的感染有抑制病毒生长和对病毒颗粒有直接杀伤作用.结论 穿心莲水提取物体外有明显的抗Ⅰ型疱疹病毒的作用.
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人巨细胞病毒负荷量对细胞病变的影响
目的探讨感染后人巨细胞病毒负荷量与细胞病变的关系.方法采用不同滴定度的人巨细胞病毒感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立人巨细胞病毒梯度感染细胞模型,荧光定量PCR法测定感染细胞内及其维持液病毒DNA量,光镜观察致细胞病变作用,电镜检查其超微结构的改变.结果人巨细胞病毒感染后,细胞内与其维持液病毒DNA量成正相关(r=0.83,P<0.01).当细胞内病毒DNA量>105GE/106HEL时,病毒开始自细胞内释放;当维持液病毒DNA量>103GE/ml时,细胞出现病变.结论人巨细胞病毒感染后,受染细胞排放病毒致细胞外,且细胞内外病毒负荷量成正相关.细胞病变的发生情况与细胞内及其周围环境的病毒负荷量均密切相关.
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甘草体外抑制呼吸道合胞病毒作用研究
目的:开发安全有效的抗呼吸道合胞病毒的新药.方法:采用细胞病变抑制实验观察甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:甘草半数中毒浓度(TC50)为3.43g/L;抑制呼吸道合胞病毒的半数有效浓度(EC50)为0.2535g/L,治疗指数(TI)为13.53;甘草对呼吸道合胞病毒的抑制作用存在量效反应关系;在感染后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h,甘草均有抑制呼吸道合胞病毒的作用.结论:甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的.
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千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)初探
目的:体外测定千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据.方法:用不同稀释度的千金藤素抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用,48 h后观察细胞病变(CPE)效应.结果:千金藤素能明显抑制HSV-1对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率升高.结论:千金藤素有较显著的抗HSV-1的作用,且抗病毒作用是多方面的,是一种具有潜在开发前景的药物.
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感康源的体外抗病毒实验研究
目的:感康源冲剂为验方中药制剂,主要由柴胡、双花、连翘、桔梗、元参、板兰根、荆芥等组成,治疗上呼吸道感染疗效显著.本实验观察了该药对Ⅰ型人类疱疹病毒(HSV-1)、腺病毒(AD3)和流感病毒FM1株致Hela-2细胞病变的药效研究.
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黄芪总皂甙对CVB3感染心肌细胞cTnI、SERCA活性及mRNA表达的影响
目的:探讨黄芪提取物-黄芪总皂甙对柯萨奇B3(CVB3)感染的培养SD乳鼠心肌细胞损伤模型的保护作用,对病毒引起的肌浆网钙泵(Sarco/Endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase,SERCA)活力及其mRNA表达变化的影响.方法:将培养SD乳鼠心肌细胞分为正常组、模型组及黄芪组,模型组及黄芪组以柯萨奇B3亲心肌病毒株(CVB3m,TCID50为10-5.83)感染心肌细胞.72~96 h后,观察各组细胞病变作用(cytopathic effect, CPE),检测其培养上清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量及NO浓度,测定心肌细胞中SERCA活力以及SERCA2型基因的mRNA表达水平.结果:(1)和正常组相比,模型组CPE分级数明显增高(P<0.001),而黄芪组CPE分级数比模型组降低,与正常组无显著差异(P>0.1).(2)模型组、黄芪组心肌肌钙蛋白I均高于正常组,但黄芪组与模型组相比,心肌肌钙蛋白I降低,与正常组无显著差异(P>0.05).黄芪组NO浓度增高.(3)模型组心肌SERCA活力以及SERCA2型基因的mRNA水平均显著低于正常组及黄芪组(P<0.05,P<0.001).结论:表明黄芪总皂甙可以减轻病毒引起的心肌细胞损伤,对病毒感染引起心肌细胞SERCA2型基因mRNA水平降低以及SERCA功能下调有逆转作用.
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POEMS综合症的临床及影像学特点
POEMS 综合征又称 Crow-Fukase 综合征、Takatsuki综合征,是一种较为罕见的临床症候群,涉及多个系统的一系列病变。POEMS综合征的名称由其主要临床特点的首字母构成,即(1)多发周围神经病变(Polyneuropathy);(2)脏器肿大(Organomegaly);(3)内分泌异常(Endocrinopathy);(4)M蛋白(Monoclonal protein);(5)皮肤改变(Skin change)。
概述
POEMS综合征是由潜在的浆细胞病变引起的副肿瘤综合征[1]。POEMS综合征可继发于骨髓瘤、髓外浆细胞瘤或Castleman病,也可仅表现为M蛋白血症,而未见克隆浆细胞。Bardick等学者1980年首次报道了2例具有相似临床特点的病例,并以主要临床表现的首字母缩写对这一综合征命名。随后日本[2]、美国[3]、法国[4]、中国[5]及印度[6]等国家也陆续出现相似报道。随着报道的增多,POEMS这一缩写名称的局限性也凸显出来,目前对于这一命名我们需要注意:(1)诊断此综合征并不需要出现缩写名中所有临床表现;(2)有很多重要征象并未在此缩写名中体现,例如视神经乳头水肿、血管外容量超负荷、硬化性骨病变、血小板增多症、血管内皮生长因子(VEGF)水平升高、血栓特异质及肺功能异常等[1]。 -
α-辅肌动蛋白4在糖尿病肾病大鼠蛋白尿产生中的作用
糖尿病肾病蛋白尿的形成有多种因素,足细胞病变在其中起着重要的作用.α-辅肌动蛋白(actinin)-4是足细胞上一种辅肌动蛋白,对于维持足细胞的正常结构及功能起关键作用.本研究利用糖尿病肾病大鼠模型在蛋白尿的发生、发展过程中动态观察α-actinin-4表达的变化,并初步探讨导致其变化的可能机制.