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Toll样受体与自身免疫性肝病
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是近些年来发现的一类新的细胞表面信号传导跨膜受体,能够识别作为配体的病原相关的分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),是人体固有免疫和适应性免疫的桥梁[1].
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桃拉综合征病毒CP2蛋白的克隆表达及其结合肽的噬菌体肽库筛选
目的:克隆表达出桃拉综合征病毒(TSV)主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点.方法:根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV CP2基因高变区376~1 371 bp,扩增片段插入pET-32构建成原核表达载体pET-CP2.该重组载体在IPTG诱导下进行可溶性表达,SDS-PAGE电泳检测表达的CP2蛋白.以纯化的CP2蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示12肽库进行亲和淘选.结果:原核表达出56 kD大小的CP2蛋白,对噬菌体12肽库4轮"吸附-洗脱-扩增"淘洗后,所得的噬菌体回收率逐步提高,由6.4×10-5上升到2.8×10-2,显示淘选过程对随机肽库有很好的富集效果.随机挑选第4轮淘筛后的36个单克隆噬菌体,ELISA鉴定有24个单克隆(66.6%)为强阳性.将这24个阳性克隆扩增、测序,推导随机多肽的氨基酸序列.分析发现,有7个克隆(克隆号2、6、7、9、18、20、33)完全一致,序列为HTSFCSTHLCLI,其它的几个克隆如克隆3及28序列为HCSNLFCSLDLP;克隆5为HCSHTLCALHVM;克隆26为HCNSWLCPLITD也与该7个克隆有相似的序列,经比对核心序列为HCS及LCL.结论:首次用重组的TSV CP2蛋白从噬菌体随机12肽库中筛选到特异结合的肽序列,其共有结构特征为明确CP2与结合蛋白的相互作用位点提供支持.
关键词: 桃拉综合征病毒(TSV) CP2蛋白 克隆表达 噬菌体展示肽库 配体 -
细胞因子与肾移植术后急性排斥反应的分子损伤机制研究进展
肾移植后排斥反应病理组织学变化显示移植肾局部有免疫细胞渗出和血管及间质的病变.引起局部细胞增多的小分子物质,主要是细胞因子及其受体等,直接独立和/或与其相应的配体相互作用共同参与介导免疫排斥.
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TET2突变检测在血液肿瘤中的临床价值
1 TET2基因的起源与结构TET家族中包括TET1、TET2及TET3.TET1位于染色体10q22,在急性髓系白血病(AML)相关的染色体易位t(10;11)(q22;q23)中作为混合性白血病(MLL)的融合配体出现在少数AML中.TET1编码2-酮戊二酸和二价铁离子依赖性的双加氧酶,它们可以在胚胎干细胞中催化5-甲基胞嘧啶与5-羟甲基胞嘧啶的转化,而这种转化可能促进DNA的去甲基化[1].
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ST2及其配体IL-33与心血管系疾病
ST2是多种炎症反应及自身免疫疾病中的孤儿受体,白细胞介素-33(IL-33)自2005年发现后,成为IL-1细胞因子家族成员,并成为ST2的功能配体.ST2/IL-33信号途径参与T细胞介导的免疫应答,近年来发现其存在于血管内皮细胞,心脏成纤维和心肌细胞中,是很有前途的新型心血管生物标记物,而且有心肌内成纤维细胞-心肌细胞信息交流的新机制,可影响心肌细胞凋亡,心室重塑,血管内皮细胞平滑肌细胞分泌等.
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PD-1及其配体在慢性乙肝免疫中的作用
HBV特异性T淋巴细胞功能低下与HBV逃避免疫是造成HBV慢性持续感染的原因,T淋巴细胞功能状态决定了病毒是被清除,或是持续感染.T淋巴细胞异常表达某些免疫分子与慢性乙肝(CHB)的发生、发展过程有关.PD-1为近年发现的CD28家族新成员,因其独特的生物学功能而备受关注,已发现其在慢性乙肝免疫应答过程中发挥重要作用,但其具体免疫机制尚需进一步研究[1].
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Toll样受体4在心血管疾病中的研究进展
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)家族是近年来新发现的一组细胞跨膜受体.TLRs的发现源于对果蝇Toll蛋白的研究.近年在多种植物和哺乳动物中发现与Toll蛋白有相似结构和功能的蛋白质,被称为TLRs.
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Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定
目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白.方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达.用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性.结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致.构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol·L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带.结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白.
关键词: 配体 原核表达 巢式聚合酶链反应 遗传载体/分离与提纯 -
选择素及其配体与白细胞的起始粘附
选择素是一类重要的粘附分子,主要介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附.选择素家族包括3个成员(Lselectin、P-selectin和E-selectin),分别表达于白细胞、血小板和血管内皮细胞的表面.选择素所识别和作用的配体是一些糖类化合物.唾液酸化、岩藻糖基化和硫酸化等化学修饰对于配体的功能十分重要.选择素与其配体的相互作用在使白细胞被捕捉的同时,可以转导胞外信号,使白细胞进一步活化并稳定粘附.白细胞粘附与人体的多种生理和病理过程密切相关.
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自然杀伤细胞活化性受体的研究进展
自然杀伤细胞(NK)是机体固有免疫系统的重要效应细胞,其不仅能杀死病毒感染细胞和肿瘤细胞,还参与调节固有免疫应答和适应性免疫应答.NK细胞对靶细胞的杀伤效应取决于NK细胞抑制性受体和活化性受体与其配体相互作用的整合,而NK细胞不杀伤正常组织是因为抑制性受体对HLA-Ⅰ类分子的优势识别.NK细胞抑制性受体研究比较成熟,近几年NK细胞活化性受体研究进展很快.
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青光眼睫状体炎综合征与杀伤细胞免疫球蛋白样受体-人类白细胞抗原受配体复合物遗传多态性的相关性研究
目的 研究和分析南方汉族人群青光眼睫状体炎综合征(PSS)与杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其人类白细胞抗原(HLA)配体基因多态性的相关性.方法 随机选择100例无关健康个体作为对照组,收集97例临床诊断为PSS的患者血样,采用KIR PCR-SSP方法检测KIR框架基因的有无,PCR-SBT法进行HLA-A、B、C基因的测序分型;统计分析健康对照组与患者的KIR框架基因频率、KIR基因单倍体组合型的频率、HLA配体的频率、单个KIR-HLA配体复合物的频率之间的差异.结果 与正常人群相比,PSS患者KIR框架基因频率及单倍体组合型频率差异无统计学意义(P均>0.05);HLA配体中的HLA-Bw4-80T在PSS患者及正常人群中的比例分别为22.1%和41.0%,差异有统计学意义(P<0.01);KIR-HLA配体组合中的3DL1+ HLA-Bw4-80T在PSS患者及正常人群中的比例分别为22.1%和40.0%,差异有统计学意义(P<0.05),患者组与正常人群组相比都显著降低.结论 PSS与KIR框架基因及单倍型频率无关,但可能与HLA配体或KIR-HLA配体组合相关,这对研究PSS的发病机制及治疗方法具有重要意义.
关键词: 青光眼睫状体炎综合征 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 人类白细胞抗原 配体 基因多态性 -
选择素及其配体的研究进展
选择素是新发现的一类重要的黏附分子,主要介导炎症发生时白细胞与血管内皮细胞的起始黏附,以及介导白细胞之间、白细胞与血小板之间的黏附.选择素家族包括3个成员(L-选择素、P-选择素和E-选择素),它们的一个共同特点是N末端具有一个凝集素样的结构域.与选择素识别并相互作用的配体都是一些糖类化合物,包括糖蛋白、糖脂和蛋白聚糖.唾液酸化、岩藻糖化和硫酸化是这些配体的共同特征,对于配体的功能极为重要.
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FPR2介导内外源性配体HP(2-20)/ANXA1促进胃癌细胞侵袭和转移
目的:分析FPR2在内外源性配体对胃癌细胞侵袭和转移影响中的作用.方法:采用构建成功的XN0422/SGC790 1-mock细胞和XN0422/SGC7901-shFPR2低表达细胞,通过划痕实验、transwell实验观察和比较FPR2的内外源性配体—HP(2-20)/ANXA1对XN0422/SGC7901迁移和增殖的影响.结果:HP (2-20)/ANXA1处理的XN0422/SGC7901-mock和XN0422/SGC7901-shFPR2细胞侵袭和转移能力均相较于DMSO处理的XN0422/SGC7901-mock和XN0422/SGC7901-shFPR2细胞明显增强(P<0.05),且XN0422/SGC7901-mock组细胞的侵袭转移能力明显优于XN0422/SGC7901-shFPR2组细胞(P<0.05).结论:HP2-20和Ac2-26可以促进胃癌细胞的侵袭和迁移,而这一作用与FPR2有关.
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NKG2D及其配体研究进展
NKG2D在NK细胞以及T细胞参与的免疫过程中占有重要的地位.本文介绍了NKG2D受体复合体的组成、结构、功能及表达调控;同时介绍了NKG2D配体的分类,病原体感染对其表达的诱导作用以及异常NKG2D配体的表型及功能,后简要分析了NKG2D免疫途径在肿瘤免疫和治疗方面的应用前景.
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GMP-140及其配体与肿瘤转移研究进展
GMP-140是选择素家族中的一员,是一种存在于血小板α颗粒内和血管内皮细胞棒状小体内的糖蛋白,主要介导肿瘤细胞与血小板和血管内皮细胞的粘附形成瘤栓,从而促进肿瘤转移的发展.
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E-选择素在结肠癌中的研究现状
肿瘤的发生、发展和转移需要多种粘附分子的参与,E-选择素是粘附分子选择素家族的一名重要成员,E-选择素是重要的粘附分子之一,能介导血小板、内皮细胞与中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞及肿瘤细胞之间的粘附,与肿瘤侵袭转移密切相关.E-选择素及其配体在结肠癌中的表达强度增加和(或)患者血浆中的浓度升高,提示结肠癌易发生侵袭转移,预后差,研究表明检测E-选择素及其配体水平,可作为结肠癌的一项预后指标.
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骨关节炎中Notch信号通路的研究进展
骨关节炎(osteoarthritis OA)是一种目前较为常见的骨骼系统致畸性疾病.目前其确切的发病机制尚不明确.近年来有研究显示,Notch信号通路在OA发病机制中起至关重要作用.对Notch信号通路与OA的研究进展予以综述.
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人类腺病毒受体的研究进展
腺病毒受体的研究近十几年来得到迅速发展,人们对腺病毒受体的研究兴趣主要源于使用腺病毒载体所进行的基因治疗.随着多个腺病毒受体相继被发现和鉴定(表1),对腺病毒感染细胞的过程有了进一步的认识和理解.例如,腺病毒5型(Ad5)已被用作基因治疗的载体,但不能有效地感染受体低表达的细胞[1].人们通过修饰腺病毒载体中与受体结合的相应部位,提高基因传递的效率,使腺病毒载体在基因治疗中的作用不断完善.本文就已经鉴定的腺病毒受体和相应配体在腺病毒进入细胞时所发挥的作用加以综述.
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NK细胞受体及作用机制
自然杀伤细胞(NK细胞)是固有免疫中具有重要功能的细胞,在抗肿瘤和抗病毒反应以及免疫监视中发挥重要作用.NK细胞可表达多种抑制受体和激活受体,这两类受体的平衡调控NK细胞的杀伤功能.识别靶细胞上MHC Ⅰ类分子是NK细胞活化调节的关键,活化受体配体表达的增加及活化信号的转导,使得NK细胞激活并发挥效应.深入了解NK细胞受体与配体相互作用的机制及信号途径,将有助于开拓对感染性疾病和肿瘤进行基础研究和临床治疗的思路.
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Notch配体在细胞发育过程中的作用
Notch是一个在进化上高度保守的跨膜蛋白家族,它通过Notch配体与受体结合而转导信号,从而精确地调控细胞各谱系的发育.近年来多项研究表明,Notch配体在T细胞、B细胞、NK细胞等细胞谱系发育中起着重要的作用,正受到了越来越多的关注,本文就此作一综述.