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5剂系列的白喉类毒素-破伤风类毒素-无细胞百日咳疫苗的使用--免疫实践咨询委员会(ACIP)的补充推荐
当前美国批准了含有白喉、破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗(DTaP)在内的4种供婴儿和小儿使用的疫苗.2000年10月批准了ACEL-LMUNE(lederle实验室的制品)和Tripedia(白喉破伤风类毒素-无细胞百日咳菌苗)(Aventis pesteur公司)两种制剂用于5剂系列的DTaP疫苗,批准另外两种疫苗Infanrix(suithklin Beecham Biologicals)和Certiva(North American VaccineInc)为该组疫苗的前4剂,2,4和6个月开始初级接种,并且在开始接种白喉破伤风和全细胞百日咳疫苗的这些孩子中完成DTaP组接种.本报告补充了CDC免疫实践咨询委员会的有关使用无细胞百日咳疫苗的声明,并概述了有关当实施第4剂第5剂顺序剂量时,无细胞百日咳疫苗反应性的咨料.这种疫苗在接种后,注射部位局部反应的频率和大小随剂数的增加而增加,这种现象存在于当前所有批准的DTaP疫苗中.在接受了第4剂和第5剂DTaP疫苗后,注射肢体的有时产生整条大腿或上臂的广泛肿胀,这种情况已从各公司制造商的多种制品中得到了证实.因为有关在混合系列不同厂家的DTaP药安全、免疫原性及疫苗效果的资料不足,ACIP推荐,但可能的话要尽可能使用同一品牌的DTaP疫苗.当疫苗提供者不知道或未得到以前给予类型的DTaP疫苗时,任何一种所批准的DTaP疫苗都可使用,以完成该疫苗系列的接种.
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杜邦:病原菌快速检测技术发展的推动者——访杜邦公司Qualicon产品开发经理George Tice
近年来,病原菌检测已经由传统的培养基方法向分子检测方法转变,如亲和剂检测和基因检测;同时,样品的制备方法也向使用浓缩技术的方向发展,如采用亲和试剂进行的全细胞浓缩和核酸浓缩.
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在食品微生物检测和鉴定中应用的一种质谱新技术
基质辅助激光解析电离(MALDI)是近年来发展的一种新的软电离技术,常与飞行时间质谱(TOF-MS)联用,称为基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS).它具有快速、灵敏和高通量等特点,被广泛应用于生命科学及其他领域.全细胞或细胞裂解产物经MALDI-TOF-MS分析得到的指纹图谱可完成对细菌、真菌及病毒的检测及鉴定.
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以百白破疫苗为基础的联合疫苗研究进展和展望
百日咳、白喉和破伤风联合疫苗( DTP)作为早纳入WHO扩大免疫规划(EPI)的疫苗,已经在预防和控制这3种传染病方面发挥了重要作用.20世纪70年代,由于接种灭活全细胞百白破疫苗(DTwP)后出现了严重的不良反应,日本及荷兰等国家出现了抵制疫苗接种甚至停用的现象,导致接种率下降,致使百日咳的发病率出现反弹[1].目前,绝大多数发达国家,如美国、日本及欧盟成员国等,均已采用以副反应较小的无细胞百白破疫苗(DTaP)为基础的联合疫苗,作为常规免疫用疫苗[2].笔者就国内外以DTP为基础的联合疫苗的研究进展进行总结,并对我国未来联合疫苗的研发方向和前景进行展望.
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灵长类动物模型研究表明:无细胞百日咳疫苗不能有效预防百日咳感染和阻断细菌的传播
疫苗预防接种不仅仅保护个体,而且能通过清除细菌的定植,切断细菌在人群中的传播。目前,无细胞百日咳疫苗(aP)替代全细胞百日咳疫苗(wP)是否是导致“百日咳再现”的原因,是全球关注的热点。研究者通过灵长类动物模型狒狒开展了aP和wP对于预防百日咳感染、清除百日咳定植、阻断百日咳杆菌传播的研究。研究发现,接种aP后主要诱导产生Th1/2记忆细胞,接种wP和自然感染百日咳杆菌后,则诱导产生大量的Th17记忆细胞和Th1记忆细胞。与接种wP和自然感染百日咳杆菌相比,接种aP能诱导产生免疫抗体,可以减轻百日咳感染的严重症状,但不能有效清除百日咳杆菌在呼吸道表面的定植能力,即不能有效切断百日咳杆菌的传播。该研究从一个侧面阐述了aP不能有效阻断百日咳杆菌在人群中的传播可能是导致“百日咳重现”的原因。
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超极化激活阳离子电流的电生理特性及其在DRG神经元中的分布
运用全细胞膜片电压钳和电流钳技术研究超极化激活阳离子电流(hyperpolarization-activatedcurrent,Ih)的电生理学特性及其在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞上的分布,结果发现:①当膜电位超极化时可以记录到一种内向的电压依赖性电流--Ih,电流的反转电位为-32.34±2.56 mV(n=4),半激活电位(potential at half activation,V1/2)为-100.6(n=8);Ih可特异地被胞外Cs2+(2 mM)阻断,而不受胞外Ba2+(1.0 mM)的影响;cAMP是Ih的特效激动剂,胞内施加100μM的cAMP可使Ih激活曲线向左平移9.5 mV(-91.4 mV,n=5);Ih为Na+、K+混合阳离子流,Na+、K+通透比为0.25,改变胞外K+浓度能有效地改变Ih大小,但不影响其Na+、K+选择通透比.
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神经源性痛诱发大鼠背根神经节细胞电生理学变化
动作电位的异常爆发和编码是痛觉信号传递的电生理学基础.越来越多的证据表明,外周感觉神经元的敏化是慢性痛发生的重要机制之一.本次实验通过结扎大鼠单侧L5和L6脊神经诱发神经源性痛,经Von Frey Hair机械痛敏测量法筛选后,运用全细胞膜片电流钳技术研究急性分离的背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞电生理学特征,结果发现:①对照组大鼠背根神经节小直径神经元(细胞直径<30μm)的动作电位阈值为-11.12±1.06 mV(n=11),神经源性痛后小直径神经元动作电位阈值降低了7.82 mV(-18.98±0.69,n=9),二者有显著性差异(P<0.01);与对照组相比,神经源性痛后中等直径DRG神经元(30 μm≤细胞直径≤40μm)兴奋性升高,其动作电位爆发阈从-14.55±1.81 mV(n=8)降低至-19.44±2.22 mV(n=9),差异显著(P<0.05).
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接种无细胞百白破联合疫苗诱发类中毒反应1例报告
临沂市河东区自2003年以来用无细胞百白破联合疫苗(DTaP)取代全细胞百白破联合疫苗(DTwP)进行常规免疫,累计达4万余人次,未见异常反应.2005年1月,在接种DTaP后发生类中毒反应(又称类毒血症休克)1例,现报告如下.
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无细胞与全细胞百白破联合疫苗接种副反应调查
为了解无细胞百白破联合疫苗(DTaP)和全细胞百白破联合疫苗(DTwP)的接种副反应发生情况,于2004年8~10月,在仙居县8个接种点共调查了1 595名3月龄~2岁分别接种DTaP和DTwP的儿童进行副反应观察.
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接种吸附全细胞和无细胞百白破联合疫苗临床反应观察
为了观察接种吸附全细胞百白破联合疫苗(DwPT)和无细胞百白破联合疫苗(DaPT)后的临床反应,选取了吉林市≥3月龄足月分娩的健康婴儿342名,分成2组,分别接种DwPT和DaPT,观察接种后的局部和全身反应.现将观察结果分析如下.
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计算机图像分析技术在胸水腺癌细胞和反应性间皮细胞鉴别中的应用
能够快速而准确地对胸水中脱落细胞做出良恶性判断,是目前临床对病理医师的迫切要求。在致病因子刺激下,大量增生的反应性间皮细胞( reactive mesothelial cell, RMC)脱落到胸水中与腺癌细胞( adenocarcinoma cell, ACC)形态相似,单靠显微镜通过肉眼观察很难做出正确的诊断[1]。计算机医学图像处理与分析技术通过对细胞形态、组成成分等进行定量分析,在临床诊断和研究工作中越来越多的得到实际应用[2],其中细胞形态结构和颜色的变化[3]无论在主观观察还是在定量分析中都是重要的参考指标。我们前期的研究结果显示,基于全细胞色度学参数所建立函数的判别符合率明显优于细胞质和细胞核色度学参数,并且与结合细胞质和细胞核色度学参数所建立函数的符合率相当[4-5],提示全细胞的色度学参数综合了细胞质和细胞核的色度学特点,更能反映ACC的色度学特征,对于胸水中ACC和RMC的分类与判别更具有鉴别价值,但是其判别效果仍不理想,考虑是否引入形态学参数,在不同形态学参数分类下进行判别分析,探索全细胞色度学参数的应用范围。因此我们借助计算机图像分析技术对巴氏染色胸水ACC和RMC的细胞核和细胞质面积进行定量测试,计算核质比( nuclear ;to cytoplasmic ratio,Rnp ),比较不同Rnp中基于全细胞色度学参数所建立函数在胸水ACC的判别符合率,探讨全细胞色度学参数在不同Rnp对胸水ACC临床病理诊断分类的价值,从而为临床计算机自动识别细胞的应用奠定基础。
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缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的作用
目的:观察缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的直接作用,以探讨其可能的抗心律失常作用.方法:采用Langendorff主动脉逆行灌流酶解分离法分离单个心室肌细胞.采用全细胞膜片钳记录,电流钳模式记录单个心室肌细胞的动作电位.实验分3组:对照组(n=5),普通细胞外液灌流,不含缬沙坦;缬沙坦5 μM组(n=5);缬沙坦100 μM组(n=5).结果:缬沙坦5 μM对豚鼠心室肌细胞静息膜电位、动作电位幅度、动作电位时程均无明显影响.缬沙坦100μM可延长心室肌细胞动作电位时程,尤其是APD50从(334.2±14.4)ms延长至(375.2±12.0)ms(P<0.01)及APD90从(395.4±13.3)ms延长至(451.4±9.5)ms(P<0.01),对细胞静息膜电位、动作电位幅度无显著影响.结论:高浓度缬沙坦延长心室肌细胞动作电位时程APD50及APD90,而不影响动作电位的静息膜电位及动作电位幅度.适度延长动作电位时程,从而延长心室有效不应期,有助于折返引起的快速室性心律失常的防治,类似Ⅲ类抗心律失常药物的作用.提示缬沙坦可能通过此机制起抗心律失常的作用.
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一氧化氮对被动致敏人气道平滑肌细胞钾通道的作用
一氧化氮(NO)是一种重要的细胞信号分子,参与多种病理生理过程.既往动物实验发现硝普钠 (SNP)能通过开放钾通道松弛大鼠气道平滑肌,并且在单细胞水平上SNP(NO的供体)能使支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型的气道平滑肌细胞的大电导依赖性钾通道(BKCa)和电压依赖性钾通道(Kv)开放[1],但一氧化氮对哮喘患者的气道平滑肌细胞(HASMC)钾通道作用尚不十分清楚.我们采用全细胞膜片钳技术,通过哮喘患者血清致敏培养的人气道平滑肌细胞,观察SNP对BKCa和Kv电流及细胞兴奋性的影响.
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钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌电压依赖性钾通道的作用
采用膜片钳技术探讨哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钾离子通道(Ik)特性的变化和钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞膜Ik的作用。 材料与方法健康豚鼠25只,雌雄不限,体重约300~400 g,分为(1)哮喘组5只(25例细胞);正常对照组7只(28例细胞),行外向峰值钾电流测定;(2)哮喘组6只(24例细胞);正常对照组7只(25例细胞),应用钾通道开放剂(Cromakalim)前后钾通道动力学特性变化测定。 支气管平滑肌细胞分离:将两肺组织中3~4级支气管剪成碎块,加入0.25% 胰蛋白酶,洗涤后再加入0.1% 胶原酶消化,用尖端抛光的Pasteur吸管吹打,用200目不锈钢网滤过,用DMEM培养液反复冲洗,即可得到富含支气管平滑肌细胞的细胞悬液。将细胞悬液分装到涂有多聚赖氨酸的小平皿内,静置20 min,选择细胞膜完整、有立体感,胞体呈梭形的细胞用作通道记录。 离子通道记录:采用膜片钳技术的细胞贴附式和全细胞记录式。细胞外液(mmol/L):NaCl 135、KCl 5、MgCl2 l、CaCl2 l、HEPES缓冲盐水10。记录用微电极电阻约为3 MΩ,单通道电流经膜片钳放大器放大,探头反馈电阻为10 MΩ。低通滤波器滤波频率为3 KHz。全细胞式记录采用负压抽吸式打通膜片。
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人HCN2基因编码的心脏起搏通道的电生理
目的将人超极化激活的阳离子通道基因2(human hyperpolarization-activated cation channel 2,hHCN2)表达于HEK293细胞系上,观察其表达的通道的电生理特点.方法利用全细胞膜片钳技术,记录转染了hHCN2的HEK293细胞上的超极化激活的阳离子流(If).结果转染hHCN2的HEK293细胞上表达If样内向电流,在超极化时激活,随刺激电压的延长而增大,半数大激活电压为(-109.1±0.7)mV,曲线斜率为(-12.7±0.7)mV.刺激电压变负时,激活变快.-100mY和-160mV时,激活时间常数分别为(2.5±1.1)s和(217±29)ms.此电流是细胞外钾离子浓度依赖性的,对钠离子和钾离子的相对通透性为0.67.2mmol/L的Cs+可明显抑制此电流.结论目的基因hHCN2在HEK293细胞上成功表达,表达的蛋白能形成有功能的通道,产生If样电流.
关键词: 超极化激活的阳离子通道 HEK293细胞 全细胞 -
心力衰竭家兔左心室瞬间外向钾通道重构及氯沙坦干预研究
本研究应用膜片钳全细胞记录方法记录左心室心肌瞬间外向钾电流(Ito);应用半定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测左心室瞬间外向钾通道a亚单位KV1.4、KV4.2和KV4.3 mRNA表达,观察心力衰竭家兔左心室瞬间外向钾通道重构情况以及氯沙坦的干预作用,进一步探讨血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)降低心力衰竭心律失常的机制.
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自发性高血压大鼠肥大心室肌细胞膜离子通道
肥大左心室肌细胞的电重塑也许是室性心律失常发生的基础之一。本研究以正常血压Wistar 大鼠为对照,观察自发性高血压大鼠(SHR)左心室肌细胞膜离子流是否有别于正常心肌细胞,以探讨肥大心室肌细胞电重塑的特征及产生室性心律失常的细胞电生理机制。一、材料和方法 选用16~20周龄雄性Wistar大鼠及SHR,行腹腔麻醉后称取体重及心脏重量,应用酶解技术分离获得单个左心室肌细胞。采用膜片钳(美国Dagan 8900)全细胞记录技术记录膜离子流并测量细胞膜电容,电压钳制脉冲和数据采集由Pclamp软件(美国Axon Instrument,5 .5)控制,记录不同膜离子流应用不同的电极内液和外液。实验数据以均数±标准差([A Kx-D]±s)表示,差异采用组间t检验,P<0.05为差异具显著性。
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甘松提取物对家兔心室肌细胞钠、钙通道的影响
目的研究甘松提取物对家兔单个心室肌细胞钠通道和L-型钙通道的电生理作用.方法采用全细胞膜片钳技术(Whole cell patch clamp),观察不同浓度的甘松提取物对钠通道电流和L-型钙通道电流的影响.结果5g/L和10g/L的甘松提取物使兔心室肌细胞ⅠNa峰值(Ⅰ Namax)从(66.48±6.44)pA/pF分别降至(50.95±4.78)pA/pF和(39.64±3.87)pA/F(n=8,P<0.05和P<0.01);使LCa-L峰值(ⅠCa-Lmax)由(6.485±0.78)pA/pF分别减至(3.644±0.39)pA/pF和(2.455±0.21)pA/pF(n=8,P<0.01).甘松提取物使ⅠNa和LCa-L的电流-电压曲线上移,但均不改变其激活电位、电位峰值和反转电位.甘松提取物还减慢钠通道灭活后的恢复过程以及抑制钙通道的激活过程.结论甘松提取物对ⅠNa和LCa-L具有浓度依赖性阻滞作用.这可能是其抗心律失常的重要机制.
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小鼠耳蜗螺旋神经节细胞瞬时外向钾电流的研究
螺旋神经节细胞膜上的瞬时外向钾电流通道,对于听觉动作电位的形成和调节具有重要的作用.本实验以小鼠耳蜗螺旋神经节细胞为材料,应用全细胞构型电压钳制技术对此通道电流进行了研究,拟为听觉形成的离子机制提供可靠的电生理学实验依据.
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蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A抑制药对大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的影响
目的通过研究蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A特异性抑制药冈田酸对大鼠三叉神经元电压依赖性钠电流的影响,探讨磷酸酶在细胞信号转导中的作用.方法在成年大鼠三叉神经元上进行全细胞膜片钳记录.结果1 μmol*L-1冈田酸显著抑制总钠电流(INa-T),仅轻微抑制毒素不敏感型钠电流(INa-TTX-R),其抑制率分别为(20±13)%(n=9, P<0.05)和(4±3)%(n=6, P<0.05).冈田酸对INa-T的激活曲线产生明显的超极化位移,半激活电压从给药前的-(13±8)mV升至给药后的-(16±7)mV(P<0.05), 但是对INa-TTX-R的激活曲线没有影响.结论①蛋白丝/苏氨酸磷酸酶参与了大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的调节.②大鼠三叉神经元存在多种电压依赖性钠通道,它们对冈田酸具有不同的敏感性.