首页 > 文献资料
-
pAFP-P53-EGFP靶向诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡
目的 研究pAFP-P53-EGFP对AFP阳性肝癌细胞的靶向促凋亡作用.方法 将SD大鼠AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2kb的AFP基因调控序列,导入pEGFP-N1质粒的启动子处,构建pAFP-EGFP同时引入P53基因片段,构建pAFP-P53-EGFP重组质粒.转染HepG2、SMMC7721、HeLa细胞,流式细胞术分析各细胞凋亡情况.分别将质粒pAFP-EGFP和pAFP-P53-EGFP转染HepG2细胞进行DNAladder分析及电镜观察细胞超徽结构.结果 pAFP-P53-EGFP重组质粒转染HepG2、SMMC7721、HeLa细胞,各组细胞凋亡率分别为:HepG2组%gate=2.65±0.08;HeLa组%gate=0.42±0.025;SMMC7721组%gate=0.39±0.018.AFP阳性的HepG2细胞凋亡率明显高于SMMC7721、HeLa细胞(P<0.05).且转染pAFP-P53-EGFP质粒的HepG2细胞出现明显的DNA ladder,细胞超微结构亦显示出现凋亡.结论 pAFP-P53-EGFP可以在AFP阳性细胞中相对专-表达,且pAFP-P53-EGFP可通过诱导细胞凋亡从而达到抑制肿瘤作用.
-
8-硝基白杨素诱导HL-60细胞生长抑制和凋亡
目的:研究8-硝基白杨素(8-nitrochyrsin,NOChR)对HL-60细胞生长和凋亡的影响.方法:MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;PI染色流式细胞术分析细胞周期和凋亡率.结果:NOChR呈浓度依赖性对HL-60细胞增殖具有抑制作用;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;PI染色流式细胞术结果表明以浓度依赖方式诱导HL-60细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期.结论:NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关.
-
组蛋白脱乙酰化酶抑制剂对炎性细胞因子表达的影响
组蛋白脱乙酰化酶(HDACs)抑制剂因其可诱导细胞周期阻滞、诱导肿瘤细胞的分化和凋亡,而且重要的是对机体的不良反应小,因此被广泛地用于各种恶性肿瘤的治疗.近年来,出现了诸多关于HDACs抑制剂被用作抗炎药物的研究,不过也有一些关于HDACs抑制剂促进某些炎性细胞因子表达的报道.本文就HDACs抑制剂对炎性细胞因子表达的影响作一综述.
-
5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人肝癌细胞生长抑制和凋亡
目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肝癌(SMMC-7721)细胞生长和凋亡的影响.方法:平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色荧光显微镜观察凋细胞亡形态,计数细胞凋亡;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡率.结果:平皿克隆形成法显示:ADFMChR抑制人肝癌(SMMC-7721)细胞生长,且呈浓度依赖性.AO/EB染色荧光显微镜观察发现随着ADFMChR浓度的增加SMMC-7721细胞凋亡率依次增加.PI染色FCM结果表明ADFMChR以浓度依赖方式诱导SMMC-7721细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期.结论:ADFMChR具有诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关.
-
东亚钳蝎氯毒素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 研究东亚钳蝎氯离子通道毒素(BmK CT)对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其机制. 方法 制备融合蛋白GST-BmK CT,体外检测GST-BmK CT对胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响.以GST-BmK CT处理组为实验组,以GST处理组为阴性对照,PBS处理组为空白对照.MTT法分析各处理组U251细胞的增殖速度;流式细胞术分析U251细胞周期变化;蛋白免疫印迹法检测MAPKAPK-2的蛋白的磷酸化及其上游蛋白p38的磷酸化.预先使用p38α特异性抑制剂SB203580处理细胞,检测p38α活化对细胞周期阻滞的影响. 结果 MTT结果表明,融合蛋白GST-BmK CT体外处理U251细胞48 h和96 h,增殖抑制率分别为(25±1.9)％和(33±2.3)％,与GST处理组相比差异有统计学意义(P＜0.001).流式细胞检测结果表明,处理U251细胞96 h,GST-BmK CT组比空白对照组S期和G2/M期比例增多,差异有统计学意义(P＜0.005),GST阴性对照组相比空白组细胞周期各时相差异均无统计学意义(P＞0.05).蛋白免疫印迹结果显示GST-BmK CT能激活p38α丝裂原活化蛋白激酶(p38αMAPK),而用p38α特异性抑制剂SB203580能反转GST-BmK引起的细胞周期阻滞.结果进一步表明,BmK CT通过活化p38α激活下游丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(MAPKAPK-2,MK2)从而引起细胞S期和G2/M期的阻滞. 结论 GST-BmK CT是通过p38αMAPK信号通路激活MK2来引起U251细胞周期在S期和G2/M期的阻滞,从而抑制细胞增殖.
关键词： 蝎氯毒素 神经胶质瘤 细胞周期阻滞 p38αMAPK信号通路 -
热适应对热应激肝癌细胞周期影响
目的 探讨热适应对热应激细胞周期的影响.方法 将人肝癌细胞系7 721细胞随机分为对照组、直接热暴露组、热适应组和热适应后热暴露组,分别给予不同的热处理,用流式细胞分析法检测细胞周期.结果 热适应后43℃,暴露组G0/G1期细胞所占比例明显低于其他组(P＜0.05),直接43℃暴露组G2/M期细胞所占比例明显低 于热适用后暴露组和对照组(P＜0.05),热适应后43℃暴露组S期细胞所占比例明显高于单纯热适应组和对照组(P＜0.05).结论 热适应处理不仅可有效阻止热应激诱导的G0/G1细胞周期阻滞的发生,而且可增强热应激诱导的G2/M期和S期细胞周期阻滞的发生.
-
虫草素对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响
目的:研究虫草素在体外对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响;方法:以噻唑蓝法(MTT)测定虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的影响;用流式细胞术测定虫草素对TCA-8113细胞周期的影响情况以及是否诱导TCA-8113发生凋亡作用;采用蛋白免疫印迹检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达情况;结果:虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的抑制作用具有浓度依赖性,能够引起TCA-8113细胞发生G2期细胞周期阻滞,并诱导TCA-8113细胞发生凋亡作用;CyclinB1和Bc1-2表达减少,Cdc2和Bax表达量没用明显变化.结论:虫草素有效的引起TCA-8113发生细胞周期阻滞,诱导TCA-8113细胞凋亡,从而抑制TCA-8113细胞的增殖活性,为进一步应用于临床治疗舌癌等肿瘤疾病提供了依据.
-
β-榄香烯抑制甲状腺癌细胞增殖及其作用机制体外实验研究
甲状腺癌是常见的内分泌肿瘤,目前主要靠手术切除和术后<'131>Ⅰ治疗.甲状腺癌对化疗不敏感,目前尚缺乏对该肿瘤有效的化疗药物.β-榄香烯(1-甲基-1-乙烯基-2,4-二异丙烯基.环己胺)是我国自行研制的新型抗肿瘤药物,已经证实β-榄香烯对脑肿瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌等组织的肿瘤细胞具有抑制作用[1～2].本研究拟进一步验证β-榄香烯对甲状腺癌细胞的抑制作用,为治疗甲状腺癌寻找新的化疗药物.
-
shRNA干扰长链非编码RNA PVT对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响
目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1对甲状腺乳头癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响.方法:慢病毒转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT-PCR检测PVT1的表达,CCK8检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测细胞Ki67、Caspase-3和Cyclin A的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot检测肿瘤组织Ki67、Caspase-3和Cyclin A的表达.结果:sh-PVT1转染细胞24 h后,IHH-4细胞PVT1的表达水平明显降低(P<0.01);转染细胞4 d后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1能显著升高IHH-4细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3表达(P<0.01);此外,sh-PVT1还可诱导细胞G2/M期阻滞,抑制周期蛋白Cyclin A的表达(P<0.05,P<0.01).干扰PVT1表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67和Cyclin A的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3表达(P<0.01).结论:沉默PVT1表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4细胞增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞.
-
总状绿绒蒿醇提物对人白血病K562细胞DNA损伤及细胞周期的影响
目的:探讨传统藏药总状绿绒蒿体外对人慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖活性的影响,并阐明其相关作用机制.方法:不同浓度(30、60、90、120和150 mg· L-1)总状绿绒蒿醇提物作用于体外培养的白血病K562细胞,同时设置空白对照组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态学改变,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期时相变化.结果:作用于K562细胞24、48和72 h后,不同浓度总状绿绒蒿醇提物组K562细胞生长受到明显抑制,与空白对照组比较,其增殖抑制率明显增加(P＜0.05),并呈浓度和时间依赖性.倒置显微镜下观察,随着总状绿绒蒿醇提物浓度增加,K562细胞数量减少,细胞形态不规则,轮廓模糊,细胞碎片增多.单细胞凝胶电泳(SCGE)检测,与空白对照组比较,60、90和120 mg·L-1总状绿绒蒿醇提物组K562细核内DNA片段化、TailDNA％升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).细胞周期检测,60、90和120 mg·L-1总状绿绒蒿醇提物作用于K562细胞24 h后,G0/G1期、S期细胞所占比例逐渐下降,G2/M期细胞所占比例逐渐升高,分别为(1.88士0.30)％、(5.46±0.57)％和(19.80±1.03)％,各浓度组与空白对照组[(1.10±0.12)％]比较差异均有统计学意义(P＜0.05),总状绿绒蒿醇提物组K562细胞周期发生了G2/M期阻滞.结论:总状绿绒蒿醇提物对K562细胞有显著的增殖抑制作用,其机制可能与诱导DNA损伤引发G2/M期阻滞有关联.
-
D609对Neuro-2a脑神经瘤细胞增殖和细胞周期的影响
目的:探讨小分子化合物D609对脑神经瘤细胞Neuro-2a的生长抑制及诱导细胞周期阻滞的效应,并初步研究其机制.方法:采用CCK-8法检测D609对Neuro-2a细胞的生长抑制作用;利用流式细胞术(FACS)检测D609处理对细胞周期进程的影响;利用免疫印迹实验(Western blot)检测不同浓度的D609处理后,细胞裂解液中细胞周期蛋白抑制因子p27的表达水平.结果:CCK-8的实验结果显示,加入150 μmol/L D609处理72小时后,细胞生长受到明显地抑制,且伴有剂量依赖效应;流式细胞术的结果表明,D609处理使细胞周期阻滞在G0/G1期;免疫印迹的结果表明药物处理提升了p27的表达,且随药物浓度升高其表达亦增强.结论:D609可以有效地抑制Neuro-2a细胞的生长;进一步研究表明药物处理可以提升p27的表达水平并可以诱导将细胞阻滞在G0/G1期.因此,此研究将为脑神经瘤的治疗提供借鉴.
关键词： D609 neuro-2a细胞 生长抑制 细胞周期阻滞 p27 -
蟾酥抗肿瘤有效成分的作用研究
蟾酥(Venenum Bufonis)一词源自《本草衍义》,为我国名贵的传统中药.其含有多种化学成分,具有镇痛、强心、升压、局麻、抗炎和抗肿瘤等药理活性,临床应用广泛.蟾酥中抗肿瘤的有效成分为蟾毒配基类化合物,包括脂蟾毒配基、华蟾毒配基和蟾毒灵等.抗肿瘤活性主要包括诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化等.近年来,有关蟾酥中活性成分在抗肿瘤方面的作用越来越成为国内外学者研究的热点.
-
P73基因与人类肺癌研究的新进展
肿瘤的发生发展过程是由于癌基因和抑癌基因的异常改变导致的结果,其中抑癌基因失活是常见的导致实体肿瘤发生的重要的分子基础.目前许多研究证实,P53基因是迄今止发现的广泛存在的,与人类恶性肿瘤相关性高的抑癌基因.据报道近50%的肺癌中存在P53基因表达的异常或基因的突变[1-2].P73基因作为P53家族的新成员,它在结构和功能上都与P53有高度的同源性,其全长表达的蛋白可激活P53相关靶基因,诱发细胞周期阻滞和细胞凋亡,因而被认为可能成为一种新型候选的肿瘤抑制基因.本文就P73基因的结构,功能及在肺癌中的表达研究进展综述如下.
-
雷公藤红素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡和周期的调控作用及机制
目的 研究雷公藤红素对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡的影响及机制.方法 应用CCK8试剂检测雷公藤红素对SMMC-7721细胞的毒性和增殖影响,用软琼脂克隆形成试验检测药物对肝癌细胞的克隆形成能力的干预,通过核染色及检测活化caspase-3水平观察细胞凋亡情况,用流式细胞术检测药物干预对细胞周期分布的影响,并用Western blot检测细胞周期相关蛋白细胞周期素B1 (cyclin B1)及细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle protein 2,cdc2)水平.结果 雷公藤红素以剂量依赖性方式使SMMC-7721细胞的增殖下降和克隆形成减少,使细胞凋亡增加及细胞周期阻滞在G2/M期,同时增加失活cdc2表达,并导致cyclin B1的积聚.结论 雷公藤红素可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进细胞凋亡,对分裂周期相关蛋白调控导致的分裂阻滞可能是影响其对细胞凋亡和增殖作用的机制之一.
-
细胞稳态失调与衰老以及肿瘤发生
细胞稳态(cellular homeostasis)是机体重要的生命特征之一,是由内环境恒定概念引伸和发展而来的,早期强调的是生物机体内环境的稳定.随着系统学和生命科学的发展,现如今这一概念已经扩展到了机体内不同层次或水平(分子、细胞、组织器官、系统)的稳定状态.生物体在进化过程中获得了DNA损伤修复反应、细胞周期检测点、细胞周期阻滞、细胞衰老、细胞凋亡和细胞自噬等生理功能,担负着维护细胞稳态的作用,是保证生物有机体正常新陈代谢和发挥生物学功能的基本保障.从细胞稳态机制来研究健康的维系与疾病的发生已成为当代医学发展的一个重要方面.
-
三羟异黄酮诱导人肝癌细胞周期阻滞及凋亡的研究
三羟异黄酮是大豆等植物经加工、微生物发酵或体外酸水解而释放,可被肠道有效吸收的物质.
-
丁酸钠对人卵巢癌KK细胞和子宫内膜癌HHUA细胞生长的抑制作用
目的:探讨丁酸钠(NaB)对人卵巢癌KK细胞和子宫内膜癌HHUA细胞生长的影响和分子机制及其作为新型抗肿瘤药物的潜力.方法:NaB作用于体外培养的人卵巢癌细胞系KK和人子宫内膜癌细胞系HHUA,用HE 染色及DNA荧光染色观察细胞形态学及染色质改变,用流式细胞仪定量分析细胞周期分布及细胞凋亡,用2% 琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder,用Western blot 分析 PARP、Fas、Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:NaB处理两种细胞24小时后,低浓度(≤2 mol/L)出现细胞周期停止,G1期细胞百分率达70%以上;中浓度(4 mol/L和10 mol/L)出现典型凋亡细胞的形态学和染色质改变,高浓度(>10 mol/L)则引起细胞坏死.Western blot 分析显示NaB能上调HHUA细胞Fas蛋白表达,而Bcl-2和Bax蛋白表达水平不变.结论:NaB通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡而抑制HHUA和KK 细胞生长,浓度不同细胞的反应性也不同,低浓度诱导细胞周期G1期阻滞,中浓度诱导细胞凋亡,NaB对细胞生长的抑制作用具有药物浓度和时间依赖关系,其诱导HHUA细胞凋亡的机制可能与上调Fas蛋白表达有关.NaB对HHUA 和KK细胞生长的影响提示其有可能成为一种新型抗肿瘤药物.
-
DNA损伤与肿瘤发生的研究进展
生物体基因组时刻都暴露在体内外各种应激因素的作用下,即使在非常健康的细胞其基因组DNA的完整性也持续受到威胁.DNA在细胞内外各种因素的作用下可不断产生损伤,如体内代谢过程中产生的自由基和其它活性化合物,DNA在复制和重组过程中自发的错误;环境中的紫外线和离子辐射以及一些化学物质均能损伤DNA.细胞能通过周期阻滞修复DNA或者细胞凋亡对DNA损伤产生反应.细胞对DNA损伤反应的异常将导致肿瘤的发生.本文综述当前对DNA损伤修复和凋亡的分子调控以及它与肿瘤发生的研究进展.
-
MS-275对胃腺癌细胞抑制作用及其机制研究
目的采用分子靶向药物治疗胃癌是近年研究热点。探讨组蛋白去乙酰化酶抑制因子MS-275通过多种途径选择性杀伤人胃低分化腺癌细胞株SGC-7901的机制。方法10～100μmol/L 药物浓度梯度的MS-275分别与SGC-7901、人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1共培养24 h后，采用WST-1法检测SGC-7901及GES-1细胞存活率，流式细胞仪检测分析SGC-7901细胞线粒体膜电位变化，Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应（RTQ-PCR）分别检测处理后胃癌细胞中p21、p27、p57、cyclin B1、cyclin D1基因及相应蛋白表达情况。结果 MS-275可使SGC-7901细胞存活率降低（P＜0.05），其作用随药物浓度增大更明显，对GES-1细胞无显著影响；MS-275可降低SGC-7901细胞线粒体膜电位（P＜0.05）；MS-275显著提升p21、p27、p57基因及相应蛋白相对含量，同时降低cyclin B1、cyclin D1基因及其蛋白相对含量（P＜0.05）。结论 MS-275可选择性杀伤胃腺癌细胞SGC-7901，这一作用可能是通过线粒体凋亡途径及调控细胞周期相关基因和蛋白表达实现的。
-
北冬虫夏草水提物对人肺腺癌细胞A549的作用
目的 探讨北冬虫夏草水提物(CME)对人肺腺癌细胞A549的作用.方法 以不同质量浓度的CME处理A549细胞24、48、72 h,CCK8法检测细胞生长抑制率.以0.5 mg/mL CME处理A549细胞(干预组)12、24和48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Western blotting检测A549细胞增殖相关蛋白(p-ERK和p-Akt)和凋亡相关蛋白(caspase-3)的表达；以未予CME处理的A549细胞作为对照组.结果 A549细胞生长抑制率随CME质量浓度的升高和处理时间的延长而上升,呈明显的浓度-时间依赖性(P＜0.01).与对照组比较,干预组G2/M期细胞比例明显增加(P＜0.01)；干预组细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.995,P＜0.01)；干预组p-ERK和p-Akt表达明显低于对照组,且与CME处理时间呈显著负相关(r=-0.881,P＜0.01；r=-0.932,P＜0.01)；干预组caspase-3表达显著高于对照组(P＜0.05),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.681,P＜0.01).结论 CME对A549细胞生长的抑制作用可能与其使细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡有关；CME有望成为肺腺癌辅助治疗药物.
