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在组织芯片上利用量子点技术进行抗原的检测
在组织培养和组织切片上,可利用放射性和非放射性方法检测抗原的定位.而在传统的免疫荧光分析技术中,有机荧光基团存在激发波长范围很窄、发光时间短,容易猝灭等缺点,限制了它们在蛋白定量上的使用.荧光半导体纳米颗粒量子点(quantum dots)提供了一种潜在的方法去克服有机荧光基团的这些缺陷,开始在免疫荧光分析中初步应用,并取得了令人满意的效果.
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实时定量PCR技术（real-time PCR，RT-PCR）
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 Ct值扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。此时扩增是呈对数期增长根据样品扩增的Ct值就可计算出样品中所含的模板量。
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定量PCR的误差分析
定量PCR是在传统PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,目前应用多的是荧光定量PCR (FQ-PCR)[1].它是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号来实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析.
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同时检测WT1和mdr1基因多重荧光实时定量PCR标准品的构建
绝大多数急性白血病患者存在WT1基因异常高表达,其异常表达程度也与难治复发白血病有关,并可作为"泛白血病"标志检测指标监测微量残留病(MRD)[1-3].近有研究发现急性白血病mdr1和WT1基因表达水平有明显的相关性[4],但目前国内外研究一般是分别对WT1和mdr1基因进行单独检测,操作繁琐且不能准确了解同一标本两者的关系.多重荧光实时定量PCR是指在PCR体系中加入多个荧光基团,设计不同的引物在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增,通过连续监测不同荧光信号强度的变化来实时监测不同待测基因的表达量,后通过标准曲线对不同未知起始模板进行定量分析的方法.
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荧光定量聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用价值探讨
结核病是由结核分枝杆菌（ MTB）感染引起的慢性传染病，对疑似结核病人进行痰抗酸杆菌涂片染色镜检及分枝杆菌培养，直接找到病原菌，对诊断结核病具有重要意义。但上述两种方法也有其局限性：涂片镜检法总的敏感性为22％～80％［1］，并且无法在镜下区分与MTB形态、染色相同的非结核分枝杆菌（ NTM ），而NTM 与MTB一样严重威胁人类健康［2-3］。分枝杆菌培养法是临床诊断结核病的“金标准”，但该方法灵敏度也不够高，阳性率约为40％～60％［4］，并且该法检测周期长，从培养至菌种鉴定一般需要8周甚至更长，且对早期结核菌感染者、药物治疗后细胞壁缺损L型细菌难以检出。为此，找到一种适合基层医疗单位应用，并能快速、灵敏诊断结核病，有效区分MTB与NTM的实验室诊断方法，在临床上有重要应用价值。荧光定量聚合酶链反应（ FQ-PCR）是一种在聚合酶链反应（ PCR ）体系中引入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR扩增进程的方法，可对标本中起始 DNA 模板进行定量，提高检测灵敏度，同时省去了电泳步骤，减少污染机会，特异性更好。 FQ-PCR结果以循环阈值（ Ct值）表示， Ct值越小，说明起始模板核酸浓度越高。本研究试图应用FQ-PCR法检测痰标本中MTB，以为临床提供一种快速、灵敏、特异的结核病辅助诊断方法。
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绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)来源于海洋生物水母,是近年来细胞生物学中应用为广泛的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA全长约2.6kb,编码238个氨基酸残基,分子量为27×103u.无需加外源性分子,在395 nm、470 nm波长光线激发下,GFP肽链内部第65～67位的氨基酸残基通过自身环化和氧化形成一个绿色荧光基团,性质稳定,使用普通荧光显微镜即可观察到[1,2].改进后的GFP突变型,所发荧光强度高,吸收峰单一,极大地提高其应用价值.目前,GFP在肿瘤的发病机制、生物学行为、药效评价和基因治疗等方面得到了广泛的应用.
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自发荧光成像在消化道疾病诊断中的应用
一、自发荧光成像(auto fluorescence imaging,AFI)原理在生物体内某些物质不需外源荧光染料即可受激发发出荧光的现象称自发荧光.在人体组织细胞内富含多种荧光基团,这些荧光基团如胶原蛋白、弹力蛋白、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)等主要聚集胃肠道黏膜下层.正常组织和病变组织所透过的自发光强弱不等,影响自发荧光强弱的主要原因与组织内生化成分及其比例有关.
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荧光蛋白在肿瘤的发生和发展方面的研究与应用
荧光示踪技术是激发光通过激发荧光基团到达高能量状态，而后产生发射光，并利用生物荧光影像分析技术直接检测活体生物体内的细胞活动和基因行为。常用的是绿色荧光蛋白（ green fluorescent protein ，GFP），随后发现的红色荧光蛋白（ red fluorescent protein ，RFP）在灵敏度和信噪比方面均比GFP高，此外还有黄色荧光蛋白（ yellow fluorescent protein，YFP）等，这为基于GFP的体内研究提供了一个很好的互补工具。随着荧光蛋白在细胞生物学上的广泛应用，使活体细胞显像问题得以解决，并且获得了空前的发展。尤其是荧光蛋白可以对各种细胞过程进行显像示踪，这些蛋白可作为报告基因，独特的荧光光谱能在体内外对尚未明确的细胞过程进行示踪。比如肿瘤发生发展过程中的各个阶段在细胞水平有何异常？荧光蛋白的活体成像能观察各种肿瘤模型中肿瘤细胞的生长和发展，包括肿瘤初的发生，肿瘤细胞随后的迁移和入侵，转移播种，生成血管以及肿瘤和宿主微环境间的相互作用等。荧光蛋白作为报告基因已被广泛应用于肿瘤各个阶段的研究中，本文就近些年来荧光示踪技术在肿瘤细胞发生和发展过程中的研究和应用作一综述。
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荧光共振能量转移技术及其在医药学中的应用
综述了荧光共振能量转移的原理、测量仪器、及其应用.
关键词： 荧光共振能量转移(FRET) 荧光基团 荧光显微镜
