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复发性流产患者血清IL-12和IL-18的变化与临床意义
目的:探讨复发性流产患者血清中IL-12、IL-18水平与流产的关系,为临床工作提供客观依据.方法:选取复发性流产孕妇(研究组)63例、健康早孕妇女(对照A组)和健康未孕妇女(对照B组)各50例,采用ELISA法测定血清中IL-12与IL-18浓度.结果:测定研究组患者血清中IL-12与IL-18的水平显著高于对照A组及对照B组,差异有统计学意义(P＜0.05).对照A组与对照B组血清IL-12与IL-18水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).血清IL-12质量浓度在44.34 pg/ml时,预测复发性流产的灵敏度为86.00％、特异度为60.60％; IL-18质量浓度在59.45 pg/ml时,灵敏度为90.90％、特异度为91.10％.结论:复发性流产患者血清IL-12与IL-18的水平不同于正常妊娠妇女,且IL-12和IL-18与复发性流产的发生具有相关性,有望成为新的判定流产发生几率的参考指标.
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人参二醇皂苷对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas基因表达的影响
目的:研究人参二醇皂苷(PDS)对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为实验对照组(CTRG)、内毒素休克组(LPSG)、地塞米松组(DEXG)和人参二醇皂苷组(PDSG).以内毒素(4 mg/kg)复制内毒素休克模型,平均动脉压降至基础血压的2/3为休克状态.取肝脏组织提取总RNA和蛋白以RT-PCR检测IL-18、Fas mRNA表达,应用Western blotting检测IL-18的蛋白表达.结果:(1)肝脏组织IL-18mRNA和蛋白表达丰度以LPSG高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性(P＜0.01);DEXG、PDSG IL-18mRNA和蛋白表达丰度高于CTRG(P＜0.01);PDSG IL-18mRNA和蛋白表达水平与DEXG接近(P0.05).(2)肝脏组织Fas mRNA表达丰度以LPSG高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性(P＜0.01);DEXG、PDSG Fas mRNA表达丰度仍高于CTRG(P＜0.01);PDSG Fas mRNA表达水平与DEXG接近(P0.05).结论:PDS与DEX预治疗对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、FasmRNA和IL-18蛋白过度表达产生了一定的抑制作用,在某种程度上抑制了IL-18通过Fas/FasL途径介导的肝细胞凋亡,削弱了内毒素休克对肝脏的损伤,保护了肝脏组织.
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乙型肝炎肝硬化患者外周血骨桥蛋白与IL-18水平变化的临床意义
目的:探讨慢性乙型肝炎、肝硬化患者外周血细胞因子骨桥蛋白与IL-18水平变化的临床意义.方法:应用gIJSA法对102例慢性乙型肝炎、3-4例乙型肝炎肝硬化、95例HBV携带者及20名健康献血者(对照组)外周血细胞因子骨桥蛋白与IL-18表达水平进行了测定.结果:慢性乙型肝炎、肝硬化患者组外周血骨桥蛋白及Ⅱ,18表达水平明显高于对照组(P<0.05);肝硬化患者组骨桥蛋白、IL-18水平明显高于慢性乙型肝炎组(P<0.05);慢性乙型肝炎重型组骨桥蛋白、[L-18水平明显高于慢性乙型肝炎轻型组(P<0.05);慢性乙型肝炎患者血清总胆红素水平与骨桥蛋白和IL-18表达水平呈正相关关系(r=0.71,P<0.05;r:0.78,P<0.05).结论i乙肝病毒感染性慢性肝脏疾病发生发展与细胞因子骨桥蛋白及IL-18水平变化相关,慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化患者外周血骨桥蛋白与IL-18表达水平呈正相关关系(r=0.74,P<0.05).
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甲状腺癌患者外周血及肿瘤组织中IL-8的表达及其作用的初步研究
目的:通过分析甲状腺癌患者IL-18的表达探讨IL-18对甲状腺癌的作用.方法:本研究共纳入2015年6月~2017年1月我院收治的123例甲状腺癌患者作为研究对象.另选取20例同期在我院进行体检的健康者作为对照.采用ELISA法(酶联免疫吸附法)检测甲状腺癌患者和健康者的血清IL-18水平.采用Western blot和免疫组化分析甲状腺癌患者癌组织及癌旁组织中IL-18、IFN-γ 及p-STAT1的表达.建立小鼠模型,采用TRK-T1转基因小鼠诱导甲状腺癌,构建TRK-T1单转基因与TRK-T1/IL-18双转基因小鼠模型,将单转基因与双转基因后代小鼠进行比较.记录两组小鼠的甲状腺癌发生率,绘制小鼠的生存曲线.采用Western blot和免疫组化分析各组小鼠甲状腺癌组织中IL-18、IFN-γ 及p-STAT1的表达水平.流式细胞术检测各组小鼠甲状腺癌组织中CD4+T细胞、CD8+T细胞与CD56+CD16+NK细胞数量.分离正常C57BL/6J小鼠的外周血单核细胞(PBMC),分别转染IFN-γ 及对照siRNA,使用IL-18处理后检测NK细胞的活性水平.结果:ELISA结果显示,甲状腺癌患者的血清IL-18水平显著高于健康者(P<0.05).Western blot和免疫组化分析显示甲状腺癌患者癌组织中IL-18、IFN-γ 及p-STAT1的表达水平均显著高于癌旁组织(P<0.05).TRK-T1单转基因与TRK-T1/IL-18双转基因小鼠的甲状腺癌发病率分别为27.3%和7.5%,两者相比差异具有统计学意义(P<0.05).TRK-T1/IL-18双转基因小鼠的生存率显著优于TRK-T1单转基因小鼠(P<0.05).Western blot和免疫组化分析显示TRK-T1/IL-18双转基因小鼠甲状腺癌组织中IL-18、IFN-γ 及p-STAT1的表达水平均显著高于TRK-T1单转基因小鼠(P<0.05).流式分析显示TRK-T1/IL-18双转基因小鼠甲状腺癌组织中CD4+T细胞、CD8+T细胞与CD56+CD16+NK细胞数量均显著高于TRK-T1单转基因小鼠(P<0.05).IL-18处理能显著增加正常PBMC中NK细胞的活性(P<0.05),而不影响转染IFN-γsiRNA的PBMC中NK细胞的活性(P>0.05).结论:甲状腺癌患者癌组织中IL-18、IFN-γ 及p-STAT1的表达水平均显著增高,IL-18可能通过调控IFN-γ/JAK-STAT1信号通路激活肿瘤免疫从而发挥抑制甲状腺癌的作用.
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根除幽门螺杆菌治疗对类风湿关节炎患者血清 IL-8、IL-18水平的影响
目的：：探讨根除幽门螺杆菌治疗对类风湿关节炎血清IL-8、IL-18水平的影响。方法：采用14-C尿素呼气试验对140例活动期类风湿关节炎患者进行Hp检测，依据14-C尿素呼气试验结果分为Hp(＋）组和Hp(-）组。 Hp(＋）组的患者依据是否进行抗Hp治疗分为对照组和抗Hp组。于治疗前及治疗后12周记录患者关节肿胀数、关节痛／压痛数、晨僵时间、双手握力，并监测血沉、C反应蛋白、类风湿因子、IL-8、IL-18水平。结果：治疗12周后，Hp(-）组、抗Hp组的有效率均高于对照组(84.09％vs 62.50％，χ2＝5.41，81.25％vs 62.50％，χ2＝4.17，P＜0.05），三组患者的关节肿胀数、关节痛／压痛数、晨僵时间、双手握力及血沉、C反应蛋白、类风湿因子、IL-8、IL-18水平均较治疗前显著改善(P＜0.05）。 Hp(-）组、抗Hp组患者的晨僵、关节压痛数、关节肿胀数、双手握力等临床症状较对照组改善更为明显，Hp(-）组、抗Hp组患者ESR、CRP、IL-8、IL-18水平较对照组低，但三组患者RF水平相比较差异无统计学意义。结论：根除HP治疗可从一定程度上提高类风湿性关节炎的临床疗效。
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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗在小鼠体内诱导特异性免疫应答能力的研究
目的:观察已构建的pcIL-18一MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况.方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次.末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性.结果:pclL-18、pcMAGE-1、pcIL-l8+pcMAGE-1及pcIL-18-MAGE免疫组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及MAGE-1抗体的产生均高于pcDNA3免疫组(P＜0.05),且pcIL-18-MAGE共表达免交组高于pcIL-18+pcMAGE-1共同注射组(P＜0.05).pcIL-18-MAGE免疫组对SMMC-7721的杀伤活性高.结论:pcIL-18-MAGE共表达基因疫苗接种小鼠与其它实验小鼠相比,可以有效产生更好的特异性免疫应答.
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IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性免疫应答的影响
目的:观察IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法:用肌肉注射法将HBV核心区DNA疫苗、IL-12质粒和IL-18 质粒接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc(IgG)及IgG亚类(IgG1、IgG2a);LDH释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果:免疫6周后,HBcAg DNA疫苗联合IL-12质粒、IL-18质粒和IL-12+IL-18质粒组小鼠的血清抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠(P＜0.05),抗HBc IgG亚类以IgG2a占优.DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤率均高于对照组(P组),其中C+IL-18组和C+IL-12+IL-18组中CTL值明显高于C组,尤以C+IL-12+IL-18组中的CTL杀伤率高.结论:IL-12和IL-18基因与HBcAg DNA疫苗联合免疫,不仅能增强HBcAg特异性体液免疫应答,而且能增强HBcAg特异性CTL的杀伤活性.
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HSV-2gD模拟抗原表位、HBsAg与IL-18融合蛋白DNA疫苗的免疫效果观察
目的:研究串联重组核酸疫苗pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-P6-IL18和pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-NP6-IL18对机体的免疫效果,P6是我们前期采用噬菌体展示技术筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6相似的天然抗原表位序列.方法:分别将空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)和构建的真核表达质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周.末次免疫后2周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,用刀豆蛋白A刺激淋巴细胞,采用MTT法测定脾淋巴细胞增殖率.结果:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体(抗HBsAg抗体和抗HSV-2gD模拟表位抗体)的产生,与阴性对照组相比可诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖.结论:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,可用于今后预防HBV和HSV-2感染的研究.
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IL-18与HSV-2gD模拟抗原表位DNA疫苗的免疫效果观察
目的:研究串联重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6和pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6对机体的免疫效果.NP6为与HSV-2gD模拟抗原P6相似的天然抗原表位序列(Accession Number:E00394).方法:将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-18、pcDNA3.1-IL-18-HSV P6和pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周.末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率.结果:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18.可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖.结论:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础.
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞产生IL-1β和IL-18
目的：探讨沙眼衣原体（ Chlamydia trachomatis，Ct） pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用，并初步分析其分子机制。方法：用0、3、6、12、24、36μg／ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞，并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞，ELISA检测IL-1β和IL-18的含量；Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平，Western blot鉴定Caspase-1活化状态；分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA 转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂（ Z-YVAD-FMK）预处理THP-1细胞30 min后，再用24μg／ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h，ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果：pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg／ml时，IL-1β和IL-18的表达水平高，分别为491 pg／ml、186 pg／ml；同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18，两者分别在24 h和16 h达到峰值。 pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC 和Caspase-1 mRNA的表达，促进Caspase-1的活化；NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组（ P＜0.05）。结论：pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
关键词： 沙眼衣原体 pORF5质粒蛋白 NALP3炎性复合体 IL-1β IL-18 -
IL-18对9 L胶质瘤细胞表面分子表达影响的体内外研究
目的：探讨IL-18转染大鼠胶质瘤细胞9L后，对其表面MHCⅠ、Ⅱ类分子及共刺激分子CD80、CD86表达的影响，以明确IL-18对胶质瘤细胞免疫原性及抗原递呈能力的影响。方法：以逆转录病毒为载体将外源性IL-18基因转染至9L细胞内，建立能够稳定表达IL-18的细胞（9L/IL-18），同时建立只转空病毒载体的对照细胞9L/LXSN。用流式细胞分析技术检测9L/IL-18、9L/LXSN及9L细胞表面MHCⅠ、Ⅱ类分子及共刺激分子CD80、CD86的表达；用立体定向仪将9L/IL-18、9L/LXSN及9L细胞分别接种到F344大鼠颅内，建立大鼠胶质瘤模型，建模14天后处死大鼠，用流式细胞分析技术检测肿瘤组织细胞表面MHCⅠ、Ⅱ类分子及CD80、CD86的表达。结果：在体外，IL-18转染后（9L/IL-18）细胞表面MHCⅠ、Ⅱ类分子及CD80、CD86的表达分别为（10.9±1.44）％、（0.61±0.14）％、（1.01±0.14）％、（0.57±0.11）％与其他两组（9L/LXSN及9L）相比无显著差异（P＞0.05）；在体内，接种9L/IL-18细胞组大鼠肿瘤组织细胞表面MHCⅠ类分子及CD80、CD86的表达分别为（67.51±1.40）％、（12.51±1.57）％、（6.95±0.56）％，均高于其他两组，差异有统计学意义（P＜0.05），MHCⅡ类分子表达（3.76±0.26）％与其他两组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：在体外，IL-18不影响9L细胞免疫原性；在体内，IL-18可提高9L细胞免疫原性及抗原递呈能力，增强机体对胶质瘤的免疫反应性。
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IL-18BP阻断由IL-18诱导大鼠胶原性关节炎对滑膜细胞凋亡表达的影响
目的:探讨IL-18BP阻断由IL-18诱导的大鼠胶原性关节炎(Collagen-induced-arthritis,CIA),对滑膜细胞凋亡表达的影响及可能的作用机制.方法:采用弗氏完全佐剂建立大鼠胶原性关节炎模型,实验共分为5组:正常对照组、CIA模型组、IL-18-CIA模型组、甲氨喋呤治疗组、IL-18BP治疗组,每组10只大鼠,共50只.通过免疫组化检测分析各组大鼠左后踝关节的滑膜组织中Fas、FasL的表达水平.结果:IL-18BP治疗组与模型组比较,大鼠关节肿胀程度得到抑制,Fas、FasL的表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P<0.01);IL-18BP治疗组与正常对照组比较,无显著性差异(P>0.05),疗效较好.结论:IL-18BP可通过调控细胞凋亡基因Fas、FasL的表达,促进滑膜细胞的凋亡,有助于类风湿关节炎的治疗.
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IL-37抑制IL-18在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义的探讨
目的:初步研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中IL-37、IL-18的表达水平,探讨其在PF发生、发展中的表达及意义.方法:将45只清洁级Wistar大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N组)、博来霉素组(B组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠各15只,B组及D组大鼠给予气管内注射博来霉素4 mg/kg制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米3 mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照.各组大鼠分别于造模后第7、14、28天处死,HE染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、IL-37含量,RT-PCR法测定肺组织中IL-18mRNA表达量.结果:①HE染色显示B、D组大鼠肺组织病理学改变由肺泡炎症逐渐发展为纤维化,B、D组HYP含量随时间推移逐渐升高,以第28天为著(P<0.05);②B、D组IL-37、IL-18mRNA表达于第7天升高至高点,后逐渐降低,至第28天均高于N组,差异有统计学意义(P<0.05);③D组IL-37、IL-18mRNA表达在同一时间均低于B组(P<0.05).结论:IL-37、IL-18在大鼠肺纤维化发病早期起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展.
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MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞诱导体内抗肿瘤作用研究
目的:研究MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染树突状细胞在体内诱导的抗肿瘤作用.方法:将重组质粒转入DC中构建DC疫苗,免疫肝癌荷瘤小鼠,观察被免疫小鼠的成瘤情况和生存时间.结果:DC疫苗免疫的荷瘤小鼠比对照组肿瘤生长受抑制,生存时间延长,其中共表达疫苗(pcmIL-18-MAGE)-DC组效果佳(P＜0.05),对MAGE(+)肝癌杀伤作用明显.结论:MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞疫苗在体内可产生抗肿瘤效果.
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幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18
目的：研究幽门螺杆菌（ H.pylori）对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧（ ROS）在其中的作用。方法：将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育，于不同时间点收集细胞及上清，ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量；流式细胞术（ FCM）检测胞内ROS的产生；实时荧光定量PCR（ Real-time PCR）检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA的表达；Western blot检测细胞中caspase-1活性亚单位p10的表达；检测ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸（ N-acetylcysteine，NAC）及NLRP3特异性小干扰RNA（ small interfering RNA，siRNA）预处理细胞后相关信号分子的表达。结果：H.pylori SS1能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-18和胞内ROS；H.pylori SS1刺激能使THP-1细胞NLRP3和caspase-1 mRNA转录水平显著升高；NAC及NLRP3-siRNA预处理THP-1细胞能显著降低H.pylori SS1诱导的NLRP3炎症复合体相关成份的表达及细胞因子的分泌。结论：H.pylori SS1株通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18，这可能与机体的先天免疫防御及细菌的致病作用相关。
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体外培养系统中IL-18诱导的快速肿瘤杀伤效应影响因素的研究
目的:应用rhIL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)中诱导快速肿瘤杀伤效应,并对这种快速杀伤效应的影响因素进行了探讨.方法:采用Stem SepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突状细胞(DCs),流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性.结果:rhIL-18在CCs中能够诱导快速肿瘤杀伤效应,这种杀伤效应与rhIL-18含量呈剂量依赖关系,DCs和T细胞的存在与否对这种杀伤效应无明显影响,同时这种快速杀伤效应无抗原特异性、不受MHC的限制.结论:在体外培养系统中只要有rhIL-18和NK细胞的存在,即能产生对肿瘤细胞的快速杀伤效应,即这种快速杀伤效应细胞为NK细胞.
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穿心莲内酯对人PBMC/PBM表达IL-18相关细胞因子的影响
目的:研究穿心莲内酯对外周血单核细胞表达IL-18相关细胞因子的影响.方法:不同浓度穿心莲内酯处理LPS刺激的PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)和LPS+IFN-γ/IL-4激活的磁珠分选PBM(Peripheral Blood Monocytes,外周血单核细胞),利用real-time RT-PCR法检测IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,ELISA法检测PBM上清中的IL-18、IL-18BP和IL-1β、IL-1Rα.结果:穿心莲内酯呈剂量和时间依赖地调节PBMC IL-18和IL-18BP的表达.穿心莲内酯处理使LPS刺激的PBMC IL-18BP转录增加,IL-18BP/IL-18比值升高;使LPS+IFN-γ激活的PBM表达IL-18BP/IL-18比值从9.60倍升高至214倍;IL-4激活的PBM表达IL-1Rα/IL-1β比值从9 200降低至6 520.结论:穿心莲内酯可调节激活的外周血单核细胞IL-18相关基因转录和表达,抑制炎症时IL-18的高表达.
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紫草多糖抑制LPS活化PBMC表达炎症相关因子的基因转录
目的:研究紫草多糖对LPS活化外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表达TNF-α、IL-10、IL-18相关因子的影响及其可能的信号通路.方法:LymphopreTM(1.077 g/ml)淋巴细胞分离液离心分离正常健康人PBMC,紫草多糖处理正常健康人的PBMC或LPS活化的PBMC,利用Real-time RT-PCR法检测TNF-α、IL-10、IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,通过Western blot检测PBMC中ERK磷酸化水平.结果:紫草多糖可增强PBMC TNF-α、IL-10、IL-18Rα、IL-18Rβ的转录,与LPS处理的PBMC相近.紫草多糖处理LPS活化的PBMC,在处理早期(4小时)可抑制LPS活化的PBMC TNF-α及IL-18的表达,抑制率达15%～50%(P<0.05);并可抑制LPS诱导的ERK磷酸化,抑制率达27%～61%(P<0.05).结论:紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关因子TNF-α等高表达.
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“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-12和IL-18表达水平的影响及其作用机制
目的：观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（ EAMG）大鼠血清中IL-12、IL-18表达水平的影响，分析针灸治疗重症肌无力（MG）的作用机制。方法：采用乙酰胆碱受体α1（AchRα1）129～145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠，建立EAMG模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只，分为针灸治疗组10只、药物对照组10只及模型对照组10只，并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗，30 min／次，1次／d，7 d为1疗程，疗程间休息1 d，连续治疗2个疗程；药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗，18.5 mg／（ kg· d），连续治疗15 d；其余2组不予任何特殊处置，仅作对照观察。治疗后抽取大鼠尾根静脉血，采用ELISA法测定大鼠血清中IL-12和IL-18的表达水平。结果：经治疗后，针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平，均明显降低（ P＜0.05或P＜0.01）；针灸治疗组和药物对照组的组间比较显示，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平无显著性差异（ P＞0.05）。结论：“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清IL-12和IL-18的表达水平，从而达到治疗MG的作用，且其治疗效果与溴吡斯的明相近。
关键词： 针灸 实验性自身免疫性重症肌无力( EAMG) IL-12 IL-18 -
IL-18在大鼠抗肾小球基底膜肾炎凋亡中作用的研究
目的:探讨IL-18在大鼠抗肾小球基底膜肾炎细胞凋亡中的作用.方法:复制大鼠抗GBM肾炎模型,分别于实验第2、7、14、21和28天,行以下处理:收集24小时尿、血清样本检测大鼠24小时尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察肾组织病理变化;采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况;RT-PCR、免疫组织化学和Western blot法分别检测肾组织中IL-18、Fas mRNA和蛋白表达情况.结果:与正常对照组相比,肾炎模型组24小时尿蛋白、血肌酐和血尿素氮含量均明显升高(P＜0.01);光镜和电镜观察到肾小球内可见新月体形成、GBM不规则增厚、足突融合等病变;肾小球内凋亡细胞于第2天开始轻度增加,随后继续增加,于第28天有所减少,但仍维持较高水平;血清IL-18含量第2天开始升高,此后一直维持较高水平;肾组织中IL-18、Fas mRNA和蛋白表达均显著增加(P＜0.01);且肾炎模型组血清、肾组织IL-18表达与Fas表达均呈正相关(P＜0.01).结论:IL-18在大鼠抗GBM肾炎凋亡中发挥重要的促进作用.
