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IL-18、ICE在人卵巢癌组织中的表达
目的:分析卵巢癌组织中白细胞介素18(IL-18)及白细胞介素1β转化酶(ICE)的基因及蛋白表达水平,探讨其与卵巢癌临床特性之间的关系.方法:分别采用RT-PCR及免疫组化染色法检测正常卵巢(n=10)、卵巢良性肿瘤(n=6)、卵巢癌(n=32)组织中IL-18、ICE的mRNA及蛋白表达;分析卵巢癌不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间表达是否具有差异.结果:①正常、良性肿瘤及卵巢癌组织中均有IL-18 mRNA表达(分别为1.30±0.48、1.02±0.17、0.77±0.35);ICE mRNA在正常及良性肿瘤组织中均有表达,卵巢癌组织中有29例(90.63%)表达(分别为0.96±0.51、0.73±0.34、0.63±0.34).②IL-18及ICE蛋白均表达于卵巢上皮细胞浆内.正常、良性肿瘤及卵巢癌组织的IL-18阳性表达率分别为83.3%、80.0%和31.3%;ICE阳性表达率分别为80.0%、50.0%和37.5%.③卵巢癌组织中IL-18、ICE mRNA及蛋白表达均较正常及良性肿瘤组织明显减少(均P＜0.05),良性与正常组织之间相比差异均无显著性(均P＞0.05).卵巢癌组织中IL-18与ICE的mRNA、蛋白表达之间呈显著正相关(分别为r=0.37,P=0.036;r=0.45,P=0.009).④IL-18、ICE mRNA及蛋白表达在不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间均未见显著性差异(均P＞0.05).结论:卵巢癌患者局部癌组织IL-18、ICE表达减弱,可能与卵巢癌的发生发展有着一定的关系.
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鸡IL-18真核表达载体的构建及其对IBD灭活疫苗免疫增强作用的研究
目的:探讨鸡IL-18的功能活性及对鸡用疫苗的免疫增强作用.方法:将鸡IL-18编码区cDNA定向克隆至pcDNA3载体构建了鸡IL-18真核表达质粒,与传染性法氏囊病(IBD)灭活疫苗联合应用,通过中和抗体的检测、胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA增殖反应的观察,研究了其对IBD胚毒灭活疫苗的免疫增强效果.结果:同时接种IBD灭活疫苗和IL-18真核表达质粒的免疫鸡所产生的中和抗体效价在接种第28天后明显高于单纯疫苗组(P<0.05);其T、B淋巴细胞的增殖反应也强于单纯疫苗组,尤其是T淋巴细胞的增殖反应从接种后第21天开始即明显强于单纯疫苗组(P<0.05);接种后第42天时进行的攻毒试验结果表明,同时接种IL-18表达质粒的试验组鸡获得93.3%的保护,而单纯疫苗接种组的保护率只有86.7%.结论:鸡IL-18真核表达质粒在鸡体内得到了良好表达,表达产物不但具有明显的增强IBD灭活疫苗诱导细胞免疫的作用;同时,对于中和抗体水平的提高、B淋巴细胞增殖反应的加强也具有明显的作用.
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两种MHC-B单倍型鸡群在发育过程中四种细胞因子转录水平的变化
目的:从分子水平探讨鸡免疫系统的个体发生学.方法:利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术,对14～35日龄主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸡品系G2(B15单倍型)和G5系(B5单倍型)鸡群的肺组织(包括气管)、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的mRNA含量进行定量检测.结果:随日龄增长,两鸡群脾脏中IFN-γ转录水平升高,PBL中IL-18和IL-10整体下降.G5系鸡群脾脏中IFN-γ转录水平始终高于肺组织和PBL.两鸡群脾脏中IL-18转录水平均高于肺组织和PBL,脾脏中IL-4在孵化后早期转录水平较高,而肺组织中则出现较晚.两鸡群肺组织、脾脏和PBL中IL-10均在35日龄降到低.结论:14～35日龄无特定病原体(SPF)鸡脾脏中IFN-γ转录水平随生长发育而增多,而肺组织和PBL中未见明显随生长发育变化的规律;PBL中IL-18和IL-10转录水平随生长发育而下降;18～35日龄,肺组织、脾脏和PBL中IL-10转录水平均随日龄增长而降低;不同MHC-B单倍型鸡群细胞因子转录水平受日龄调节相似.
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IL-12和IL-18在实验性自身免疫性神经炎中的协同作用机制
目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用.方法:建立P0180-199特异性T细胞系.分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建立过继免疫的EAN动物模型.应用国际分级标准和临床评分对发病鼠进行临床评定;通过免疫组化检测不同组EAN鼠坐骨神经淋巴细胞浸润;ELISA法检测相关细胞因子的变化.结果:①在IL-12和IL-18共同干预的条件下,特异性T细胞TNF-α和IFN-γ的产生均增加;②与IL-12或IL-18组相比,IL-12+IL-18组大鼠临床发病明显加重,发病时间提前;③在坐骨神经标本中,与对照组相比,IL-12+IL-18组CD4+淋巴细胞浸润数量较多,而IL-12和IL-18组CD4+淋巴细胞浸润较少.结论:经IL-12和IL-18体外干预的P0180-199特异性T淋巴细胞,通过过继免疫给正常大鼠后,诱导出严重的EAN动物模型,表现出协同增强作用.
关键词： 实验性自身免疫性神经炎 IL-12 IL-18 协同作用 -
IL-1β和IL-18在鼠巨细胞病毒播散性感染中的表达及意义
目的 在整体水平观察鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染时脏器病毒载量、caspase-1的活化及其下游因子IL-1β和IL-18的表达状况.方法 建立MCMV播散性感染模型,MCMV Smith株接种后第0、3、7和14天各处死4只小鼠;同时设模拟感染小鼠作为对照.标准空斑试验检测唾液腺、肺和肝组织病毒滴度;Western blot法检测脾细胞中procaspase-1及其活化形式caspase-1的表达强度;双抗体夹心ELISA法检测血清IL-1β和IL-18水平;免疫组化法检测唾液腺、肺和肝组织中IL-1β和IL-18表达状况.结果 肝组织病毒滴度于MCMV感染后3天升高,其后迅速减低,感染2周内肺组织中未检测到病毒,而唾液腺组织病毒滴度呈逐渐增高趋势;与模拟感染对照组比较,播散性感染组感染后3天脾细胞中procaspase-1和caspase-1的表达明显升高(相对吸光值均P<0.01);同时,血清IL-1β和IL-18水平升高达峰值(均P<0.01).结论 MCMV感染后炎性体活化,caspase-1表达升高;其下游信号IL-1β和IL-18成熟释放增加,并呈组织差异性表达.
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IL-18、IL-1β在原发性肾病综合征的激素抵抗患儿中的诊断价值
原发性肾病综合征(PNS)是肾内科常见的免疫炎症性疾病,临床上早期诊断和治疗对患儿肾功能的恢复至关重要,临床上PNS患儿治疗仍以糖皮质激素(glucocorticoid)为主[1],但在此过程中部分出现了对糖皮质激素的敏感,其具体机制目前仍不甚清楚.白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎性因子在肾小球病变发病中起着非常重要的作用[2],但其具体与肾病综合征患儿的激素抵抗相关性目前仍不甚清楚,本研究通过检测PNS患儿IL-18及IL-1β水平,以探讨IL-18及IL-1β在激素抵抗的肾病综合征患儿中的诊断意义,现报道如下.
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代谢综合征患者胰岛素抵抗的检测及其影响因素研究
代谢综合征(MS)是患者体内多种代谢成分异常聚集而形成的一种病理状态,胰岛素抵抗是2型糖尿病、糖耐量减低(IGT)、肥胖、血脂异常的发病基础.代谢综合征的发病率的升高与年龄相关[1].代谢综合征发病的核心机制是胰岛素抵抗.本研究拟通过测定一组代谢综合征患者的血清瘦素水平、IL-18、血清淀粉样蛋白、胰岛素(FINS) 、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR等指标,并与正常对照组互相比较,探讨代谢综合征患者测定血清瘦素、IL-18、血清淀粉样蛋白 A和胰岛素抵抗的关系.
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血清IL-18测定对肝硬化诊断的临床价值
肝硬化是一种常见的慢性、进行性、弥漫性肝病,由一种或多种病因长期反复作用引起,在我国主要以肝炎为主要致病因素,其发病与免疫及炎症反应密切相关.
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NLRP3、IL-18、IL-1β与牙周炎的相关性分析
目的 探讨NLRP3炎症小体、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)与牙周炎的关系.方法 选取2016年2月至2017年2月在我院治疗的慢性牙周炎患者58例为病例组,选取同期健康志愿者60例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清和龈沟液IL-18和IL-1β,采用RT-PCR检测血清NLRP3 mRNA表达.结果 病例组血清NLRP3 mRNA相对表达量、IL-18和IL-1β分别为(1.472±0.331)、(57.93±15.49)pg/ml和(34.29±8.99)pg/ml,明显高于对照组(P<0.05);病例组龈沟液IL-18和IL-1β分别为(49.04±12.22)pg/ml和(33.92±6.06)pg/ml,明显高于对照组(P<0.05);病例组菌斑指数(PLI)、出血指数(BI)、牙周袋深度(PD)和附着丧失(AL)分别为(1.72±0.21)、(2.79±0.44)、(3.61±0.20)mm和(5.01±0.74)mm,明显高于对照组(P<0.05);血清NLRP3 mRNA相对表达量、血清及龈沟液IL-18和IL-1β分别与PLI、BI、PD、AL呈正相关(P<0.05);血清NL-RP3 mRNA相对表达量与血清及龈沟液IL-18、IL-1β呈正相关(P<0.05).结论 牙周炎患者NLRP3炎症小体mRNA、血清及龈沟液IL-18、IL-1β表达明显升高,可能在疾病的发生发展中有一定的作用.
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寻常型银屑病患者血清MMP-2、IL-18和IL-2的检测及临床意义
目的 探讨MMP-2、MMP-9和IL-18在寻常型银屑病发生发展过程中的作用.方法 以寻常型银屑病患者共73例(包括进行期48例、静止期25例)和健康对照58例样本为试验材料,采用双抗体夹心酶联免疫技术测定血清中MMP-2、MMP-9和IL-18浓度.结果 进行期患者血清MMP-2、MMP-9和IL-18浓度均高,分别为411.57±123.48 ng/mL、681.42±297.31 ng/mL和421.73±41.30 ng/mL,显著高于静止期组和对照组(P<0.05).治疗后血清中MMP-2、MMP-9和IL-18浓度分别为273.54±91.85 ng/mL、431.65±120.81 ng/mL和287.34±19.41 ng/mL,均显著低于治疗前水平(P<0.05).结论 MMP-2、MMP-9和IL-18因子在银屑病的发生、发展过程中起着重要作用,观察其浓度变化对探讨其发病机理,预防和指导用药均有重要的临床价值.
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慢性乙型肝炎患者IL-12,IL-18测定的意义
研究证实,机体免疫功能紊乱,尤其是T淋巴细胞亚群与细胞因子的调节失调与慢性肝病的发生发展密切相关[1].本文探讨慢性乙型肝炎患者IL-12、IL-18测定的意义,现报道如下.
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IL-18表达水平与HBV感染相关性的临床研究
为了探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒感染中的作用,应用流式细胞免疫学方法,对58例HBV感染者及10名正常对照外周血单个核细胞(PBMC)IL-18的诱生活性进行检测.结果表明:各临床类型之间IL-18诱生活性均有显著差异,病情愈重,活性愈高(P＜0.01).肝组织炎症活动度不同的慢性乙型肝炎患者诱生活性有显著差异(P＜0.05),随炎症程度的加重而上升.慢性乙型肝炎组中诱生活性与血清ALT水平呈正相关(r=0.63,P＜0.01).
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慢性乙肝患者血清sICAM-1与IL-18的变化及相关性研究
检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)、白细胞介素18(IL-18)水平,探讨sICAM-1、IL-18变化规律及临床意义.采用ELISA法对慢性乙型肝炎患者血清sICAM-1、IL-18水平进行测定.慢性乙型肝炎患者血清sICAM-1、IL-18水平明显高于健康对照组;且二者呈正相关.sICAM-1、IL-18可能参与慢性肝炎的损伤过程.
关键词： 慢性乙型肝炎 血清可溶性细胞间粘附分子-1 IL-18 -
乙型肝炎肝硬化患者血清内毒素、IL-4、IL-18水平的研究
研究肝硬化患者病程中血清内毒素(LPS)和IL-4、IL-18水平变化.采用鲎三肽基质染色法和ELISA法分别检测35例肝硬化患者活动期和缓解期上述三项指标,并设健康人40例为对照组.结果为:肝硬化患者两期LPS、IL-4、IL-18水平均明显高于正常对照组(未检出LPS),缓解期较活动期显著降低.三指标均呈正相关.结论:LPS、IL-4、IL-18在HBV所致肝硬化发病中可能有重要作用.
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人IL-18基因克隆及表达
目的 克隆人IL-18编码区cDNA,研究其在大肠杆菌中的表达.方法 应用RT-PCR方法 从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出成熟(hIL-18)cDNA.利用基因重组技术构建IL-18的原核重组表达质粒pGEX-3X-hIL-18,转化E.coli JM109,以IPTG诱导培养,收集菌体直接进行SDS-PAGE分析.结果 经测序证实获得人IL-18的cDNA序列与文献报道的cDNA完全一致;携此重组质粒pGEX-3X-hIL-18的大肠杆菌经IPTG诱导,表达了分子量为43kD的重组融合蛋白.结论 克隆了人IL-18cDNA,利用大肠杆菌成功地表达了重组蛋白.为进一步探讨人IL-18的生物学作用及可能的临床应用打下基础.
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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建与体外表达
目的 构建MAGE-1与IL-18共表达质粒pcIL-18-MAGE并进行体外验证表达.方法 设计合成MAGE-1与IL-18引物,PCR扩增其基因片段,分别构建以pcDNA3为载体的小鼠IL-18重组质粒和人MAGE-1重组质粒,pcCMV-IL-18与MAGE-1的PCR产物酶切连接构建共表达质粒pcIL-18-MAGE.脂质体法将构建的重组质粒转染293细胞,RT-PCR和 Western 印迹法验证MAGE-1和IL-18在转化细胞中的表达.结果 成功获得共表达质粒pcIL-18-MAGE,RT-PCR可见目的条带,Western 印迹显示转染MAGE-1与IL-18的细胞在蛋白质水平上均有表达.结论 成功地构建出既表达mIL-18又表达MAGE-1的共表达质粒pcIL-18-MAGE.
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pcIL-18-MAGE-1基因疫苗免疫荷瘤小鼠抑瘤作用
目的：观察pcIL-18-MAGE-1基因疫苗对MAGE-1（＋）及MAGE-1（-）荷瘤小鼠的成瘤情况和生存时间的影响。方法将稳定表达MAGE-1基因的Hepal-6-MAGE-1细胞，接种于C57BL/6J小鼠，制备MAGE-1（＋）荷瘤鼠，利用 Hepal-6细胞制备 MAGE-1（-）荷瘤鼠，实验设为 pcIL-18-MAGE-1基因疫苗免疫组、阴性对照组及空白对照组，观察各组小鼠成瘤时间，肿瘤形成率、生长速率，抑瘤效果及生存期；应用 HE观察瘤体病理改变。结果 MAGE-1（＋）及MAGE-1（-）荷瘤小鼠的成瘤效果较一致，致瘤性检验差异无显著性（P＞0.05）；HE 结果显示瘤体肿瘤细胞排列不规则，可见核分裂；疫苗免疫组成瘤率，生长速率均小于对照组，差异显著（P＜0.05）。成瘤时间、生存时间长于对照组（P＜0.05），MAGE-1（＋）荷瘤鼠免疫组与MAGE-1（-）荷瘤鼠免疫组比较，抑瘤效果显著（P＜0.05）。结论 pcIL-18-MAGE共表达基因疫苗对荷瘤鼠具有一定抗肿瘤作用。
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人参二醇皂甙对内毒素休克大鼠肾组织CD14和IL-18表达的影响
目的 探讨人参二醇皂甙对内毒素休克大鼠肾组织损伤保护作用的分子机制.方法 选用成龄Wistar大鼠为研究对象,随机分为空白对照组(CTR)、LP模型组(LPS)、人参二醇皂苷预防治疗组(PDS).以LPS 5 mg/kg舌下静脉注射复制内毒素休克模型,以平均动脉血压下降至基础血压的2/3判定为休克状态.LPS注射前10 min,PDS组腹腔注射人参二醇皂苷(20 mg/kg),于休克240 min时处死动物,提取肾组织,利用免疫组化方法观察人参二醇皂甙对内毒素休克大鼠肾脏病理组织学变化的影响,利用Westerm印迹检测各组大鼠肾脏中CD14和IL-18的蛋白表达差异.结果 免疫组化结果显示,PDS组肾脏CD14的阳性表达程度低于LPS组,CD14强表达的组织细胞少于LPS组.Westerm印迹结果显示,与对照组相比,模型对照组大鼠肾脏组织CD14、IL-18蛋白表达水平明显升高,而PDS组能显著降低两种蛋白的表达水平(P＜0.05).结论 PDS对内毒素休克大鼠肾损伤有保护作用,可能通过抑制LPS介导的CD14信号转导通路的过度激活,减少IL-18等炎症介质的分泌,实现对肾脏的保护作用.
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共表达pcIL－18／MAGE－1 DNA疫苗对JEG－3细胞HLA－G基因表达的影响
目的：观察共表达基因疫苗 pcIL－18／MAGE－1对绒癌 JEG－3细胞株 HLA－G 基因表达的影响，探究 pcIL－18／MAGE－1抗肿瘤作用机制。方法应用构建的共表达pc IL－18／MAGE－1 DNA疫苗免疫小鼠，同时设阴性对照组和空白对照组，免疫后分别收集脾细胞，作用于靶细胞 JEG－3，应用FCM检测小鼠T细胞亚群情况及NK细胞活性，MTT法检测肿瘤特异性 CTL 对靶细胞的杀伤率，RT－PCR法检测 HLA－G基因表达情况。结果免疫组HLA－G基因表达降低，且对JEG－3细胞杀伤活性增加，与对照组比较，差异显著（ P＜0．05）。免疫组 NK 细胞活性及 CD4＋／CD8＋、CD8＋、CD4＋值均高于对照组（P＜0．05）。结论共表达基因疫苗pcIL－18／MAGE－1通过降低HLA－G基因的表达，进而增加NK细胞活性以及诱导肿瘤特异性 CTL直接杀伤肿瘤细胞，发挥抗肿瘤作用。
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白介素-18促动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡的作用
目的 探索白介素-18( IL-18)促进动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用30只老年同龄雄性动脉粥样硬化模型新西兰大白兔制成60个动脉粥样硬化板块标本,采用析因设计,给予IL-18进行刺激,以不同的IL-18刺激时间和刺激浓度组合作为新处理组,将60个动脉粥样硬化斑块标本随机分入新处理组中(n=5),测量在不同刺激时间和刺激浓度下,纤维帽的厚度与脂核横截面厚度的变化,TUNEL法检测斑块内细胞凋亡的改变.结果 帽/核比值与斑块内细胞凋亡指数随着IL-18的浓度及刺激天数的改变而变化(P＜0.01).帽/核比值随着IL-18的浓度及刺激天数增加而降低(P＜0.01),斑块内细胞凋亡指数随着IL-18的浓度及刺激天数增加而升高(P＜0.01)；斑块内细胞的凋亡指数与帽/核比值呈显著线性负相关(r=-0.776,P＜0.001).结论 IL-18诱导斑块内细胞凋亡可能是其促易损斑块形成的重要机制.
