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核糖核酸酶抑制因子与整合素连接激酶的相互作用以及对体外血管生成的影响
目的 研究核糖核酸酶抑制因子(RI)与整合素连接激酶(ILK)的相互作用以及对体外血管生成的影响.方法 用LV5-RNH1 homo、LV5NC、pCMV-3 × flag-ILK和pCMV-3×flag分别转染EJ细胞后,筛选稳定转染细胞系,分为EJ-RI、EJ-LV5、EJ-ILK、EJ-FLAG和EJ组;构建ILK与红色荧光蛋白融合表达载体YFP-ILK,与CFP-RI质粒共转染293细胞和EJ细胞,用荧光显微镜观察RI和ILK蛋白在细胞内的共定位;构建真核表达质粒pCMV-3×flag-ILK,用GST蛋白沉降技术检测RI和ILK蛋白在体外的结合作用;用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测蛋白RI和ILK在真核细胞内的结合作用;用小管形成实验探索RI和ILK的相互作用对体外血管形成的影响.结果 真核表达载体YFP-ILK和pCMV-3×flag-ILK构建成功;细胞内绿色荧光蛋白融合表达的RI和红色荧光蛋白融合表达的ILK在荧光显微镜下存在共定位现象;RI和ILK蛋白在原核细胞反应体系中存在相互作用;RI和ILK蛋白在真核细胞反应体系内也存在相互作用;RI和ILK的相互作用能抑制血管生成(P<0.05).结论 RI和ILK蛋白在原核细胞防御体系和真核细胞反应体系中均存在相互结合作用,并对体外血管生成有抑制作用.
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lncRNA与miRNA相互作用对疾病的影响
长链非编码RNA(lncRNA)与微小RNA(miRNA)之间存在相互调控关系.lncRNA可作为一种竞争性内源性RNA(ceRNA)与miRNA相互作用,参与靶基因的表达调控,反之,miRNA可通过RNA诱导沉默复合物(RISC)调控lncRNA发挥生物学功能,两者共同参与多种疾病的发生.
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凋亡素选择性抗肿瘤的分子机制
凋亡素(apoptin)是一种来源于鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)的小分子量蛋白.CAV是一种无囊膜的DNA病毒,其基因组为2300 bp的单链环状DNA分子,含有3个完全或部分重叠的开放读码框,分别编码3个蛋白质:VP1、VP2和VP3[1].VP1为主要的衣壳蛋白,相对分子质量51 600.VP2为非结构蛋白,相对分子质量24 000,其具有双重性质的磷酸酶活性并且主要与VP1相互作用.VP1与VP2为CAV复制所必需[2].VP3亦称为凋亡素,相对分子质量13 600,能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡,如骨肉瘤、肝癌、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等,而不杀伤正常细胞[1,3-5].
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Prostasin基因与高血压关系的研究进展
原发性高血压是环境因素与遗传因素相互作用所引起的多基因、多因素疾病.1990年Yang等[1]从分子水平揭示了原发性高血压可能的发病机制,认为人类可能存在多种原发性高血压易感基因,这些基因的突变、缺失、重排和表达水平的差异可能是导致原发性高血压的基础.
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免疫组化技术(二)
2 免疫组化理论2.1 免疫组织化学免疫组织化学是一项用抗原-抗体相互作用鉴别细胞或组织成分(抗原)的技术,抗体连接的位点可通过抗体直接标记或使用二级标记法鉴别.
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分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析
目的 检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用. 方法 克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达.提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用.利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建HpHsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸. 结果 构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238. 结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能.这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础.
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刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白结合作用的研究
目的 研究刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白之间的结合特性. 方法 采用PCR方法扩增弓形虫RACK1基因,双酶切后与pGEX 4T-1连接,构建原核表达载体pGEX-4T-1-RACK1,转化入BL21大肠埃希菌中,用0.8mmol/L IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE检测并进行Ni-IDA亲和层析纯化,采用Western blot分析RACK1蛋白与PKC蛋白的结合作用. 结果 PCR扩增出966 bp的RACK1基因开放读码框,成功构建pGEX4T-1-RACK1原核表达载体,转化BL21后用IPTG诱导4h~6h,SDS-PAGE检测到约36 ku的表达产物,Western blot检测RACK1蛋白能与PKC蛋白结合. 结论 成功构建了pGEX-4T-1原核表达载体,表达产物RACK1蛋白能与PKC蛋白结合.
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乳杆菌与白念珠菌相互作用的研究进展
乳杆菌和白念珠菌均为人体常见寄生菌,两者相互依存,又相互抑制.乳杆菌可通过细胞间相互接触及其分泌的代谢产物作用于白念珠菌,而同时白念珠菌又可拮抗乳杆菌对其的抑制作用.本文从乳杆菌对白念珠菌黏附性、芽管、菌丝、生物膜形成的影响及白念珠菌对乳杆菌的拮抗作用等方面进行综述,以探讨乳杆菌与白念珠菌之间的相互作用及可能的作用机制.
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抑郁个体情绪加工与认知控制的相互作用
目的:探讨抑郁个体情绪加工与认知控制的相互作用特点.方法:从重庆某两所高校120名学生中,用Beck抑郁问卷和自评抑郁量表筛选出20名抑郁情绪个体和26名正常被试参与情绪干扰任务.结果:两组被试在注视悲伤面孔时的正确率差异无统计学意义(P=0.115),而在忽视悲伤面孔时,抑郁情绪组的正确率低于正常对照组[(0.69±0.19)vs.(0.81±0.15),P=0.030];两组被试在注视高兴面孔时的正确率边缘显著(P=0.062),而在忽视高兴面孔时的正确率差异有统计学意义,抑郁情绪组的正确率低于正常对照组[(0.68±0.20)vs.(0.80±0.17),P=0.033].呈现时间为500ms时的正确率高于呈现时间为250 ms和375 ms时的正确率[(0.75±0.03)vs.((0.68±0.03),(0.69±0.02);均P<0.001],而呈现时间为250 ms与375 ms时的正确率差异无统计学意义(P=0.950).结论:抑郁个体的情绪(不管正性还是负性)加工过程对认知控制过程会造成干扰,其认知控制功能可能受损;抑郁情绪个体的认知控制功能受损可能会引起正性情绪加工能力下降,而对负性情绪加工没有影响.
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药用植物次生代谢影响因素研究进展
植物次生代谢的概念早于1891年由Kossel明确提出,它是相对于初生代谢或基本代谢而言的.植物的次生代谢是植物在长期进化中与环境相互作用的结果,次生代谢产物在植物提高自身保护和生存竞争能力、协调与环境关系中充当着重要角色[1].药用植物的化学成分多数是其次生代谢物,特别是一些微量成分往往具有重要的生理作用和药理活性,如生物碱具有抗菌、抗炎、平喘、扩张血管、强心、抗癌等作用[2];黄酮类化合物具有抗菌、抗过敏、抗炎、抗氧化、抗癌、抗艾滋病等多种生理活性及药理作用,且无毒副作用,对人类的肿瘤、衰老、心血管疾病的防治具有重要意义[3].但由于这些化学成分的含量较低,研究与应用大大受限,因此提高其含量或诱导新化合物合成意义重大.
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血小板促进肿瘤转移的研究进展
肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因,也是肿瘤难以治疗的关键所在.肿瘤转移过程包括肿瘤细胞穿越肿瘤组织的血管内皮细胞从原发部位迁出、肿瘤细胞随血液运行以及肿瘤细胞在转移部位的植入三个主要环节,转移过程涉及多种细胞黏附分子、细胞外基质以及其他血细胞间的相互作用.研究发现血小板能够促进肿瘤转移,血小板数目增多与肿瘤转移具有正相关性[1-2],而降低血小板数目或者抑制其功能可以明显抑制肿瘤转移[3-4].
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激活蛋白1信号通路对肿瘤实质和间质相互作用的调控
肿瘤和正常组织的一个重要区别就是失控性生长,在这个过程中,转录因子的持续激活起着重要的作用.激活蛋白(AP)-1是转录因子中的一种,它参与调节机体内多种基因的表达,在正常组织的发育、增殖及肿瘤的发生、发展、浸润、转移中起重要作用[1].肿瘤的发生是肿瘤实质和其间质相互作用的结果,在这个相互作用中,AP-1信号通路控制着肿瘤的发展.
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磷脂酶Cε1基因与肿瘤关系研究进展
磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)是近年来发现的磷脂酶家族C的新成员,其分子结构和功能均较复杂,在细胞信号转导过程中可能起重要作用.PLCE1的激活可引起一系列的生化反应,如调节细胞生长、增殖、分化等.此外,小G蛋白的ras超家族和PLCE1之间存在相互作用,且小G蛋白家族成员绝大部分都是癌基因编码的蛋白,它们在细胞内过度表达或激活与肿瘤的发生发展关系密切,因此,PLCE1可能作为ras的直接下游效应因子影响细胞骨架改变、细胞运动、凋亡、肿瘤生成及发展等.研究表明,PLCE1基因与皮肤肿瘤、头颈部鳞癌、膀胱癌及部分消化道肿瘤的发生和发展密切相关.现对PLCE1基因及其在肿瘤中的发生机制进行综述.
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慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤可转化为指状树突细胞肉瘤
指状树突细胞位于淋巴结副皮质区,是一种抗原递呈辅助细胞,可以与T细胞相互作用,并且在淋巴结反应性病变中呈增生表现.指状树突细胞肉瘤(IDCS)是起源于指状树突细胞的一种罕见肿瘤,曾有报道慢性淋巴细胞白血病//小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)患者可伴随发生IDCS,但是尚未证实这两类肿瘤之间存在克隆关系.近,Fraser等分析了1例伴随发生IDCS的CLL/SLL病例,并且证实两者之间存在一定的克隆关系.
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乙型肝炎病毒X蛋白与线粒体延长因子G1相互作用
目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与线粒体延长因子G1(EFGI)在酵母细胞及肝癌细胞内的相互作用.方法 CytoTrap酵母双杂交法验证HBx蛋白与EFG1蛋白发生相互作用后,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增EFG1基因,并克隆于真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A,确定测序正确并确认EFG1蛋白可在Huh7肝癌细胞表达后,将HBx及EFG1真核表达载体共转染Huh7肝癌细胞,48 h后裂解细胞,免疫共沉淀法(CO-IP)确证HBx蛋白与EFG1蛋白的相互作用.结果 CytoTrap酵母双杂交法证明HBx蛋白与EFG1蛋白存在相互作用;此外成功构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A-EFG1,与真核表达载体pFLAG-CMV-2-HBx共转染Huh7肝癌细胞后,HBx蛋白与EFG1蛋白可以相互沉淀.结论 本研究证实HBx蛋白与EFGI蛋白存在直接相互作用,为研究HBx蛋白对线粒体蛋白表达的影响提供理论基础,为研究HBx蛋白在肝癌发生过程中的作用提供依据.
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酵母双杂交系统用于TPO分子间相互作用的研究酵母双杂交系统用于TPO分子间相互作用的研究
目的探索促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)分子间相互作用及其存在位置。方法 构建了含有不同TPO区段的酵母双杂交系统融合表达质粒,转化酵母菌SFY526,分析β- 半 乳糖苷酶活性以推测TPO分子间的相互作用。结果 全长TPO-Pgbt9与全长TPO-Pgad42 4、全长TPO-Pgad424与TPO(N)-Pgbt9、TPO(N)-Pgbt9与TPO(N)-Pgad42 4之间有相互作用,全长TPO-Pgbt9与TPO(C)-Pgad424、TPO(N)-Pgbt9与TPO( C)-Pgad424、TPO(C)-Pgbt9与TPO(C)-Pgad424之间无相互作用。结论 自然状态下TPO在N端结构区可能存在相互作用,C端结构域不 参与此过程。
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检测人APOBEC3G与HIV-1病毒感染因子的新方法及原理
自2002年人APOBEc3G蛋白被发现以来,HIV-1 Vif与人APOBEC3G已作为抗HIV-1药物新的治疗靶点被越来越多的抗AIDS研究人员所关注.在抗HIV治疗日趋困难的今天,人们希望从这个HIV-1的非结构蛋白和与它相对的人内源性保护因子中找到答案.新的检测Vif与APOBEc3G相互作用的方法则为找到答案提供了更快、更准确的技术手段.
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荚膜在新型隐球菌黏附和侵袭肺泡上皮细胞中的作用
在对新型隐球菌与肺泡上皮细胞相互作用的研究中,发现隐球菌可以与肺泡上皮细胞发生黏附,诱导自身进入肺泡上皮细胞即对细胞发生侵袭,同时对细胞的活性造成损伤,并对其过程进行了显微结构上的观察.本文利用这一模型,对荚膜在隐球菌黏附和侵袭肺泡上皮细胞中的作用做进一步的研究.
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登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化
目的 克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A,分离纯化与其相互作用的细胞蛋白.方法 用特异性引物PCR扩增出FLAG-NS4A-HA基因片段,克隆至真核表达载体pSG5中,将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞,并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况.利用串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与NS4A相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况.结果 成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段.结论 成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白,为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础.
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C型凝集素糖基识别结构域的结构功能研究进展
蛋白质与蛋白质糖链的相互作用在固有免疫和适应免疫中发挥重要作用,涉及病原微生物的识别和免疫细胞之间的相互作用,参与这种作用的分子称为凝集素分子(lectins),其中依赖钙离子的(C-type)凝集素家族(lectin family)为其主要成员.