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蜂胶酊在抑制腹泻仔猪大肠杆菌的作用研究
本研究对猪场腹泻情况进行调研,对腹泻仔猪粪便进行采样,用麦康凯琼脂培养基(MacC)和伊红美蓝琼脂培养基(EMB)多次实验分离出大肠杆菌,用普通LB液体培养基扩大培养后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定本研究分离菌种的类型,同时进行菌种保存,并利用蜂胶酊对所分离的大肠杆菌进行抑菌实验,结果表明20%浓度的蜂胶酊对大肠杆菌的抑制效果较好.
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SDS 和2-ME在HCV重组抗原包被工艺中的应用
为提高间接ELISA法检测抗-HCV诊断试剂盒的灵敏度,将含有十二烷基硫酸钠(SDS)与巯基乙醇(2-ME)的包被液对HCV重组抗原的固相化,与不加入上述上述两种化学物质的包被液进行对比.结果发现,在包被液中加入适宜浓度的SDS和2-ME,有效的提高了间接ELISA检测抗-HCV试剂的灵敏度,而试剂的特异性则保持不变,优化了临床标本的反应模式.在包被液中同时加入SDS和2-ME,有效的改变了HCV重组抗原的包被效果,优化了抗-HCV诊断试剂盒的生产工艺.
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标本处理方法对聚合酶链反应检测结核分支杆菌结果的影响
目的探讨应用十二烷基硫酸钠（SDS）处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应（PCR）中的价值。方法从186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本266份，标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR-反相膜杂交试验检测结核分支杆菌，并将结果进行比较。结果用SDS和常规方法处理的标本，PCR-反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为65.0%（173/266）和51.5%（136/266）。通过配对计数资料卡方检验，SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义（χ2=35.03，P<0.001）。结论 SDS法可以应用于临床标本结核分支杆菌PCR检测，提高结核分支杆菌PCR的检出率。
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结核中心结核分支杆菌Ag85A蛋白的克隆、表达及其血清学诊断价值的研究
10多年来国内、外学者一直从结核分支杆菌培养滤液中提纯蛋白质抗原进行多方面的研究,由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时,因此,近年来许多研究者应用大肠杆菌来表达结核分支杆菌基因,简便地获得了大量结核分支杆菌单一的蛋白抗原.Ag85复合物是结核分支杆菌主要的分泌性蛋白,在结核分支杆菌H37Rv株中占分泌蛋白总量的30%,可从早期培养物中分离,是一种热不稳定的蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦分析可分为Ag85A、Ag85B和Ag85C三个组分[1].因此本研究通过基因工程技术构建结核分支杆菌Ag85A表达株,获得重组Ag85A(rAg85A)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定了基础.
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抵抗素样分子α与动脉粥样硬化关系的研究进展
一、抵抗素样分子α概况1.抵抗素样分子α的发现及命名:Steppan等[1]于2000年首次在卵清蛋白诱导的鼠肺部炎症模型中,用十二烷基硫酸钠·丙烯酰胺凝胶分析支气管肺泡灌洗液时发现的一个暗带区域,被命名为FIZZ1蛋白,又被命名为抵抗素样分子α或缺氧诱导的致有丝分裂分子.
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分离胶法与十二烷基硫酸钠法在血培养阳性瓶基质辅助激光解析电离飞行时间质谱病原菌直接鉴定中的应用
目的 评估分离胶促凝管法和十二烷基硫酸钠(SDS)法两种阳性血培养瓶前处理方法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定病原菌的临床应用.方法 收集2016年11月至2017年5月首都医科大学宣武医院微生物室阳性血培养需氧瓶120例和厌氧瓶80例(经革兰染色镜检确认为单一菌),利用分离胶促凝管和0.5％SDS前处理后与转种纯培养菌落MALDI-TOF MS鉴定比较,评价两种方法的鉴定准确率.结果 分离胶法和SDS法质谱鉴定与培养鉴定的符合率为86.0％和87.0％;分离胶法鉴定需氧瓶和厌氧瓶中病原菌的准确率为86.7％和85.0％,SDS法为85.0％和90.0％,两者鉴定需氧瓶中病原菌的鉴定率差异无统计学意义,SDS法鉴定厌氧瓶中细菌的准确率显著高于分离胶法(χ2=11.13、P<0.05);分离胶法和SDS法对革兰阴性杆菌的鉴定准确率(94.3％和94.3％)显著高于革兰阳性球菌(80.6％和83.3％)和真菌(50.0％和63.6％),差异均有统计学意义(χ2=24.7、40.3、15.1,P均<0.01);分离胶法和SDS法鉴定革兰阴性菌和阳性菌的准确率差异无统计学意义,而SDS法鉴定真菌和厌氧菌的准确率显著高于分离胶法(χ2=11.05、P<0.01,χ2=14.05、P<0.05);分离胶法和SDS法鉴定分值>2.0分者分别占37.5％和45.0％(χ2=20.48、P<0.05),1.6～2.0分者分别占33.0％和25.0％(χ2=11.14、P<0.05),差异均具有统计学意义;而<1.6分者分别占15.5％和17.0％,差异无统计学意义(χ2=5.9、P>0.05).结论 分离胶法和SDS法均可快速直接鉴定阳性血培养瓶中常见病原菌,显著缩短鉴定时间,在真菌和厌氧菌鉴定时以SDS法前处理MS鉴定效果较好.
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关键词：
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布洛芬/羟丙基-β-环糊精体系的Caco-2细胞转运研究
目的:考察羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)超分子体系对布洛芬细胞转运的影响.方法:运用相溶解度法考察超分子体的表观稳定常数(K);运用Caco-2细胞模型考察各类超分子体中布洛芬的表观渗透系数(P<,app>)以及跨膜电阻(TEER)的变化.结果:随HP-β-CD的浓度增加,布洛芬的溶解度不断提高;在0%～5%HP-β-CD的范围内,布洛芬的表观渗透系数随HP-β-CD的浓度增加逐渐下降;布洛芬三元体系表观稳定常数的变化趋势与布洛芬的表观渗透系数变化趋势相反.结论:布洛芬的细胞转运与体系中HP-β-CD浓度、超分子体系的稳定常数有密切关系.HP-β-CD浓度升高可显著增加布洛芬的溶解度,但过量的HP-β-CD不利于布洛芬的渗透转运;布洛芬、HP-β-CD通过与适量泊洛沙姆188(Poloxamer 188)、聚山梨酯-80(Tween-80)、十二烷基硫酸钠(SDS)组成的三元体系,可影响布洛芬、HP-β-CD之间的相互作用,改善布洛芬的表观渗透系数.
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酮康唑乳剂的制备
酮康唑(ketoconazole,KTZ)是广谱抗真菌药物，对多种浅表真菌具有强效的抗菌活性。故可外用于治疗花斑癣、脂溢性皮炎和头皮糠疹引起的脱屑和瘙痒。为此，制备了2%酮康唑乳剂。 1 处方与制备 1.1 处方 (1)酮康唑20 g，(2)硬脂酸40 g，(3)十六醇40 g，(4)白凡士林50 g，(5)液体石蜡130 mL，(6)蓖麻油30 mL，(7)十二烷基硫酸钠(SDS)50 g，(8)PEG-400 20 mL，(9)丙三醇50 mL，(10)尼泊金乙酯3 g，(11)亚硫酸氢钠5 g,(12)枸橼酸3 g，(13)水加至总量1000 g。
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胶束纸色谱分离和鉴别槲皮素、金雀异黄素及其硫酸酯衍生物的研究
目的：探讨胶束纸色谱法在分离、鉴别黄酮类及其水溶性衍生物中的应用。方法：采用高于临界胶束浓度(CMC)的十二烷基硫酸钠SDS溶液作展开剂，通过纸色谱分离和检测槲皮素、金雀异黄素及其硫酸酯衍生物，考察了SDS胶束浓度、有机改性剂及浓度、荧光强度对分离效果的影响。结果：0.01～0.02mol.L-1的SDS胶束水溶液为适宜的胶束浓度，加入体积分数为2%～4%的异丙醇或正戊醇可以显著地改善样品分离效果；SDS溶液也使样品的荧光强度得到肯定的增强。结论：SDS胶束纸色谱法可以简便、快速、准确、定性地检测和分离黄酮类及其水溶性衍生物。
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乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌的杀灭作用研究
目的 研究消毒剂乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠(levulinic acid,sodium dodecyl sulfate,LVA-SDS)对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.方法 按照2002年版卫生部《消毒技术规范》要求,同时参照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI) M07-A9的试验方法,在96微孔板上采用微量培养法和悬液定量杀菌试验,分别检测LVA-SDS的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)以及不同浓度的LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.结果 LVA对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA,对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA.LVA-SDS对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA+0.03％ SDS,而对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA+0.06％SDS,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA+0.0075％ SDS.一定浓度范围的LVA-SDS随着时间(1～10 min)的延长,对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭作用逐渐增强.5％LVA+0.5％SDS作用3 min对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭率均达到100％.结论 LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv均有较好的杀灭作用,具有较强的实际应用前景.
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Cu2+和十二烷基硫酸钠对裸项栉鰕虎鱼仔鱼急性毒性影响
目的 研究Cu2+和SDS对裸项栉鰕虎鱼仔鱼存活率的影响,了解裸项栉鰕虎鱼的毒性敏感性.方法 实验选取了五个不同日龄的仔鱼,设置了8个不同Cu2+浓度水平和7个SDS浓度水平,实验时间为96 h.结果 日龄、Cu2+浓度和SDS浓度均对裸项栉鰕虎鱼仔鱼的存活率产生影响,随日龄的增加,各处理组仔鱼存活率均升高.结论 实验结果表明裸项栉鰕虎鱼用于生物毒性检测,具有比同类生物更宽的适用范围、更适宜的毒性敏感性.
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饮用水中微量六价铬的萃取-分光光度测定法
目的 探讨生活饮用水中微量铬(Ⅵ)的简便、快速的测定方法.方法 在正丁醇存在的弱酸性溶液中,水中微量铬(Ⅵ)与二苯碳酰二肼和阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠反应形成紫红色三元离子缔合物,可被氯仿萃取,在波长550nm处比色定量.结果 方法的线性范围为1～50μg/L,低检测质量为0.1μg,低检测质量浓度为0.001 μg/L,方法的RSD为1.1%～1.4%,回收率为96%～113%.灵敏度是GB/T5750.6-2006<生活饮用水标准检验方法·金属指标>中的二苯碳酰二肼分光光度法的近3.8倍.结论 该方法简便、快捷,准确度能满足生活饮用水标准检验方法的要求.
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饮用水中六价铬2种测定方法的比较
目的 建立饮用水中微量六价铬的灵敏、快速的测定方法.方法 在弱酸性溶液中,水中微量铬(Ⅵ)与二苯碳酰二肼和阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠反应形成紫红色三元离子缔合物,正丁醇存在的可被氯仿萃取,在波长550 nm处比色定量.结果 方法的线性范围为1～40μg/L,低检测质量为0.1 μg,低检测质量浓度为0.001 mg/L,方法的RSD为1.1%～1.4%,回收率为95%～110%.灵敏度是GB/T 5750.6-2006<生活饮用水标准检验方法·金属指标>中的二苯碳酰二肼分光光度法的3.8倍.结论 该方法灵敏准确,能满足生活饮用水卫生标准检验方法的要求.
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基于Ussing Chamber技术的红景天苷大鼠肠黏膜透过性研究
[目的]研究红景天苷在大鼠离体肠黏膜中的透过情况。[方法]采用Ussing Chamber技术，考察不同浓度红景天苷于大鼠肠黏膜透过情况，并考察维拉帕米（Ver）和十二烷基硫酸钠（SDS）对红景天苷大鼠肠黏膜透过的影响。[结果]不同浓度红景天苷在大鼠不同肠段的单位时间转运速率（Flux）随浓度升高而增大，不同肠段表观渗透系数（Papp）无统计学差异（P>0.05）。Ver加入一定量的SDS后，红景天苷在回肠和结肠的Papp显著增加（P<0.01或P<0.05），当SDS浓度为2 g/L时，回肠Papp增加为对照组的2.76倍。[结论]红景天苷在大鼠全肠段均有吸收，且吸收具有浓度依赖性，以被动吸收为主，Ver对红景天苷大鼠各肠吸收无影响，SDS促进了红景天苷回肠和结肠吸收。
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工布乌头提取物提高果蝇肠道免疫功能的实验研究
目的 研究工布乌头提取物对果蝇肠道免疫功能的影响.方法 用标准的玉米粉酵母培养基饲养的果蝇作为对照组,标准培养基加入1.0％工布乌头提取物饲养的果蝇作为实验组,利用十二烷基硫酸钠(SDS)、葡聚糖硫酸钠(DSS)、过氧化氢(H2O2)和百草枯(PQ)等诱导肠道损伤,通过比较果蝇生存率、肠道上皮细胞凋亡情况、活性氧(ROS)量、肠道干细胞数量及肠道形态变化等,探讨工布乌头提取物对果蝇肠道的保护作用.结果 1.0％工布乌头提取物可以提高SDS、DSS、H2O2和PQ等致炎因子诱导的果蝇生存率;降低由SDS诱导的果蝇肠道细胞凋亡数量和肠道细胞内ROS量,减少肠道上皮细胞过度增殖,减少黑色素瘤的产生,并改善肠道形态.结论 工布乌头提取物对致炎因子诱导的肠道损伤具有较好的保护作用.
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大黄对十二烷基硫酸钠损伤的果蝇肠道干细胞活性的影响
目的 探究大黄Rheum officinale提取物(ROE)对果蝇肠道干细胞(ISC)活性的影响.方法 对照组果蝇食用正常玉米粉-酵母培养基,实验组果蝇食用含有0.05 g/mL或0.1 g/mL ROE的玉米粉-酵母培养基.对果蝇喂食有毒化合物诱导肠道损伤.分别检测分析果蝇的生存率、肠道前体细胞形态数目、ISC的增殖与分化、活性氧自由基(ROS)水平、肠上皮死亡细胞数目以及果蝇的寿命.结果 0.05 g/mL和0.1 g/mL ROE均可以提高肠道损伤后果蝇的生存率,0.1 g/mL ROE可以降低十二烷基硫酸钠(SDS)诱导后ROS的水平,减少死亡细胞的数目,抑制ISC的过度增殖与分化,缓解前体细胞的过度积累,维持肠道内稳态.此外ROE还可以延长果蝇寿命.结论 ROE可以抑制ISC的过度增殖和分化,增强果蝇肠道免疫功能,延长果蝇寿命.
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表面活性剂对大黄总蒽醌提取率的影响
大黄具有清热解毒、抗菌消炎、泻热通肠等功效.其主要化学成分为结合和游离的大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌类化合物.游离蒽醌难溶于水,溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂.结合蒽醌易溶于水和乙醇,难溶于氯仿和乙醚等有机溶剂.大黄总蒽醌的提取多采用70%～80%乙醇回流提取[1,2],但所使用的乙醇体积分数高,回收耗能高.利用表面活性剂能够提高姜黄中姜黄素提取率[3],因此本实验研究了不同表面活性剂对大黄中总蒽醌提取率的影响,结果表明十二烷基硫酸钠(SDS)可大幅度提高大黄中总蒽醌的提取率.
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β-环糊精和促透剂对辣椒碱经皮透过特性的影响
研究不同浓度β-环糊精及促透剂对辣椒碱体外经皮渗透的影响.[方法]采用改良的Franz扩散池法,以离体鼠皮为透皮屏障,用高效液相色谱法测定接受液中辣椒碱的含量,计算药物的累积透过量,采用滞留时间法求算经皮渗透参数,考察不同浓度β-环糊精以及不同浓度十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、尿素与辣椒碱-β-环糊精包合物对辣椒碱的促透作用.[结果]β-环糊精与辣椒碱形成包合物后透皮速率提高；添加SDS或尿素的辣椒碱-β-环糊精包合物透皮速率进一步增高,其中0.1％SDS的促透效果为明显,而不同浓度的尿素促透效果相近.[结论]β-环糊精包合的辣椒碱经皮透过量增加,选择10 g/L β-环糊精制备辣椒碱β-环糊精包合物较适宜,SDS或尿素可进一步促进包合物中辣椒碱的透皮吸收.
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无细胞真皮基质的研制
目的 研制人同种脱细胞真皮基质,用于大面积深度烧伤后真皮成分的替代、美容医学中的填充及皮肤组织工程中的支架材料. 方法 获得的正常人新鲜尸体皮肤,用高渗盐溶液去除表皮,十二烷基硫酸钠、胰蛋白酶等处理以去除真皮中的细胞成分,得到人同种脱细胞真皮基质,经光镜、电镜和免疫组织化学分析. 结果 经处理后得到的人无细胞真皮基质,完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,保留了完整的基底膜复合物,胶原束结构和排列正常,弹力纤维结构正常. 结论 用此方法制备无细胞真皮基质,能完全去除表皮和真皮中的细胞成分,不改变真皮中胶原纤维和弹力纤维结构,其制备工艺操作性强,是一种简单有效的制备方法.
