VEGF-C蛋白与妇科肿瘤关系的研究进展

血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族,也称为血管通透性因子(vascular pemrebaility factor,VPF)或促血管因子(vasculotropin,VAS),是特异性地直接作用于血管内皮细胞,上调血管生成的重要因子.其基因转录的mRNA以不同的剪切方式形成4种异构体,共5大成员:VEGF-A(vascularendothelial growth factor-A)、VEGF-B(vascularendothelial growth factor-B)、VEGF-C(vascularendothelial growth factor-C)、VEGF-D(vascularendothelial growth factor-D)和胎盘生长因子(placental growth factor,PGF),均是分泌型糖蛋白,可调节血管的生成、血管的通透性以及促进血细胞和淋巴管的生成.VEGF-C大约与VEGF有30%的共同序列.

左旋布比卡因与布比卡因腰硬联合麻醉用于剖宫产的临床应用分析

布比卡因作为一种长效酰胺类局麻药,是左旋(S-)和右旋(R+)等量混合的消旋体,用于腰硬联合麻醉具有镇痛完全、作用时间持久等优点,故在临床上被广泛应用.但布比卡因对中枢神经系统和心脏的毒性较大,较低血药浓度布比卡因就能诱发中枢神经系统毒性症状、室性心律失常、心室纤颤,甚至引起心搏停止[1].左旋布比卡因是布比卡因S型异构体,效能与布比卡因相仿,但心脏和中枢神经毒性较低.

手性固定相高效液相色谱法测定(S)-N-乙基-2-氨甲基吡咯烷中右旋异构体

目的 建立手性固定相HPLC法检查左舒必利起始原料(S)-N-乙基-2-氨甲基吡咯烷中右旋异构体.方法 采用Chiralpak IA(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以正己烷,乙醇,乙醇胺(97.5∶2.5∶0.1)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长225 nm.结果 实现了N,乙基-2-氨甲基吡咯烷左旋体与右旋体的基线分离,右旋体在4.82～48.19 μg·mL-1内与峰面积线性关系良好.结论 本方法适用于(S)-N,乙基-2-氨甲基吡咯烷的内在质量控制.

血管内皮生长因子基因在成人肝组织中的表达

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一类具有高度特异性的促血管内皮细胞分裂原,通过促进新生血管的形成,参与胚胎发育、创伤组织的修复、缺血、炎症及肿瘤的发生等多种病理生理过程[1].但在正常组织中VEGF基因的表达,文献报道较少.为此,本研究通过了解其在正常成人肝脏组织中的表达,探讨VEGF的基因表达调控及其生物学意义.

"一肾一夹"高血压大鼠下丘脑钠泵α亚单位的基因表达

目的:拟探讨"一肾一夹(1K1C)"高血压大鼠下丘脑(对水盐代谢的调节起着重要的作用)钠泵α亚单位(催化亚单位)各异构体基因表达的改变,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据.方法:选择雄性Sprague-Dawley大鼠制备1K1C高血压模型,设立假手术对照组,术后4周处死动物采集下丘脑,进行以下实验:(1)应用相应计算机软件,设计并合成针对钠泵α1、α2、α3亚单位及G3PDH(内参照)的4对特异性引物,应用分子生物学RT-PCR及图像分析方法探讨1K1C高血压大鼠及假手术组下丘脑钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA水平的改变;(2)应用针对钠泵三种α亚单位的特异性单克隆抗体及免疫组化技术,在蛋白水平探讨该模型及假手术组下丘脑钠泵α1、α2及α3亚单位基因表达的改变.结果:术后四周1K1C大鼠血压明显升高(与术前比较,164.7±16.9 mmHg vs 104.3±12.3 mmHg, P＜0.001),而假手术组大鼠血压变化不明显.与假手术组比较,无论在mRNA或蛋白水平,1K1C高血压大鼠下丘脑钠泵α3亚单位表达均减弱,而α1与α2亚单位表达无改变.结论:1K1C高血压大鼠作为高血压研究的重要模型之一,水盐平衡紊乱及血容量扩张是其血压升高的主要原因,而细胞膜上钠泵(Na+-K+-ATP酶)对水盐代谢的调节及机体的多种生理与病理过程起着重要的作用,与多种疾病的发生有关.引起1K1C高血压大鼠钠泵α亚单位基因表达异常改变的分子生物学机制可能是因为该模型体内存在着明显的水盐代谢紊乱以及血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮等体液因素的改变.钠泵α亚单位基因表达的改变可能具有重要的病理意义,研究表明,钠泵α亚单位各异构体与Na+、K+等离子以及强心甙类物质的亲和力不同,其功能各异,因此,这种基因表达的改变可能会直接或间接地引起相关组织细胞生物学效应的改变,并参与了高血压的发病机制.

WT1基因异构体比例转变对白血病细胞株NB4增殖的影响

背景与目的:WT1基因编码一个锌指转录因子,在白血病细胞中高表达并与预后呈负相关.WT1基因mRNA通过2个可变性的剪切位点产生4种不同的拼接异构体,4种异构体在表达WT1的不同组织中各以其相对稳定的比例表达,白血病细胞中WT1不同异构体表达的意义尚不清楚.本研究拟用WT1基因异构体WTA转导急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4,以探讨WT1基因异构体对NB4细胞增殖的影响及其分子机制.方法:用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的细胞株并用有限稀释法进行单克隆化.采用台盼蓝拒染法、MTT比色法、甲基纤维素集落形成实验及细胞周期动力学检测,了解WT1基因异构体表达比例改变对NB4细胞生长的影响.用半定量RT-PCR检测NB4细胞中p53、p21、Cyclin E、Cyclin D1、Cyclin A1基因表达的改变.结果:WT1基因异构体能够通过电穿孔方法成功转染NB4细胞,外源基因在NB4细胞中稳定整合及表达,并通过有限稀释法将永久表达细胞株单克隆化.用台盼蓝拒染法绘制细胞生长曲线,提示转染WT1基因异构体的细胞NB4/WTA生长明显慢于对照组NB4/CMV细胞及未转染的NB4细胞,NB4/WTA细胞生长曲线平缓,在第3天达平台期(78.7±18.0)×104/ml,对照组NB4/CMV细胞及NB4细胞在第4天出现生长平台期达(146.0±21.0)×104/ml.MTT法检测细胞增殖活性,结果显示,NB4/WTA细胞在各个时间段的抑制率均高于对照组,P＜0.005.甲基纤维素集落形成试验中NB4/WTA克隆形成率明显下降,集落形成抑制率为46.9%.在As2O3(终浓度0.2 μmol·L-1)作用后集落形成抑制更加明显.细胞周期动力学检测提示,NB4/WTA组S期细胞比例升高.RT-PCR检查提示,NB4/WTA细胞p21、Cyclin A1基因的表达较对照组升高.结论:增加外源性WT1基因异构体WTA的表达将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能抑制NB4细胞的增殖,使其克隆形成能力明显下降.这可能与p21、Cyclin A1基因表达上调,细胞周期阻滞于S期有关.

Survivin及其异构体survivin-2B和survivin-△Ex3在膀胱癌中的表达及临床意义

背景与目的:研究发现survivin基因参与了包括膀胱癌在内的人类多种肿瘤的发生.近期研究表明survivin的异构体同样具有独特的亚分子定位和功能.本研究通过检测survivin及其异构体survivin-2B和survivin-△Ex3 mRNA在膀胱癌组织中的表达,探讨这两个异构体潜在的临床意义.方法:选取手术切除的原发膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)新鲜标本60例,膀胱良性疾病患者病变膀胱组织标本12例作为对照.应用实时定量PCR方法检测survivin、survivin-2B和survivin-△Ex3 mRNA的表达量,分析其表达与不同病理分级和临床分期膀胱癌的关系.结果:Survivin、survivin-2B和survivin-△Ex3 mRNA在BTCC组织中均存在表达.表达量分别为0.333±0.163、0.056±0.017、0.124±0.096;对照组12例均表达survivin-2B mRNA,其中分别有3例和4例标本存在survivin和survivin-△Ex3 mRNA的微量表达.Survivin和survivin-△Ex3 mRNA的表达与病理分级和临床分期呈正相关(0＜r'_s＜1,P＜0.05),survivin-2B呈负相关(-1＜r'_s＜0,P＜0.05).3例复发患者原膀胱肿瘤组织中survivin mRNA的表达较相同病理级别者明显高,而survivin-2B却低.结论:检测survivin及其异构体survivin-2B和survivin-△Ex3 mRNA在BTCC组织中的表达,对判断膀胱肿瘤的恶性程度以及术后复发具有潜在的临床应用价值.

高效毛细管电泳法分析库拉索芦荟中的多种成分

目的 建立分离芦荟苷同分异构体及同时测定不同库拉索芦荟样品中芦荟苷、异芦荟色苷D、芦荟大黄素含量的毛细管区带电泳法(CZE),并对各种影响电泳分离的因素进行了探讨.方法 以芦丁为内标,采用未涂层弹性熔融石英毛细管柱(57 cm×75 μm,有效长度50 cm),以20 mmol·L-1 硼砂+2 mmol·L-1β-环糊精(pH=9.65)为背景电解质溶液,分离电压为18 kV,重力进样5 s(高度15 cm),检测波长365 nm.结果 芦荟苷的一对同分异构体能够达到良好的分离,以芦丁为内标,库拉索芦荟样品中的芦荟苷、异芦荟色苷D、芦荟大黄素3种成分在7 min内得到良好的分离测定.结论 此方法简便,快速,成本低,可用于芦荟样品的质量控制.

HPLC法测定水飞蓟素胶囊中水飞蓟素异构体的含量

目的建立水飞蓟素胶囊中水飞蓟素异构体的含量测定方法方法采用HPLC法,C18色谱柱(125 mm×4.0mm,5μm);流动相为混合溶剂A[85%磷酸-甲醇-水(5:35:65)]和混合溶剂B[85%磷酸-甲醇-水(5:50:50)]梯度洗脱;流速:0.8 mL/min;检测波长为288 nm.结果水飞蓟宾在0.508 8～2.5440μg范围内呈良好线性关系;加样回收率为99.5%,RSD=2.2%.结论该方法采用水飞蓟宾为对照品,在同一流动相条件下能够同时测定6种水飞蓟素异构体的含量,可用于水飞蓟素胶囊的质量控制.

内皮素及其受体对肿瘤细胞生长的作用

内皮素(endothelin,ET)是一种由血管内皮细胞合成的生物活性肽.ET共有3种异构体,ET-1,ET-2和ET-3.ET通过细胞膜上的内皮素受体(endothelin receptor,ETR)产生生物学效应,ETR属G蛋白偶联受体,有ETA及ETB 2种亚型.ET及ETR不仅分布于血管内皮细胞和血管平滑肌细胞,还广泛分布于肺、肝、子宫、乳腺、前列腺等组织器官.ET-1除了有强烈的血管收缩作用外,还是强大的细胞促有丝分裂素,对血管平滑肌细胞、肾间质组织细胞、气道平滑肌细胞等正常组织细胞有促细胞生长的作用.近几年研究发现,ET-1及ETR与肿瘤细胞生长关系密切,许多肿瘤细胞能自身合成、分泌ET-1并表达ETR,ET1可通过ETR促进肿瘤细胞生长.

GLI1转录因子突变及异构体在恶性肿瘤的研究进展

Hedgehog(HH) 信号通路在胚胎发育、细胞分化等过程起核心调控作用.该信号传递障碍可导致发育缺陷,而异常激活可引起人体各种恶性肿瘤.核转录因子GLI 家族(GLI1、GLI2 及GLI3) 是经Hh 配体激活HH 通路的终底物,其中GLI1 是靶向阻遏该通路治疗肿瘤的有效靶点.已发现 GLI1 存在突变和包含5 种异构体,这些异构体呈不同的组织表达和功能模式.笔者就GLI1 突变及异构体与恶性肿瘤特性的关系作一综述.

急性早幼粒细胞白血病患儿PML／RARα融合基因罕见型2例

目前认为急性早幼粒细胞白血病（APL ）属于急性髓细胞白血病（AML ）的特殊类型［1］，由于 APL 细胞存在 t （15；17）（q22；q21），该易位使第15号染色体长臂2区2带的早幼粒细胞白血病基因（PML）和第17号染色体长臂2区1带的维甲酸受体‐α（RARα）基因形成 PML ／RARα融合基因，该基因在产生过程中因断裂点不同及 mRNA 的剪切、拼接不同会产生不同的异构体并在 APL 发病中起到重要作用［2］。本院收治2例APL 患儿出现新的 PML ／RARα融合基因变异体，现报道如下。

038 骨骼肌疾病患者心肌肌钙蛋白T异构体的RNA表达

普萘洛尔构象研究与临床应用进展

目的:了解普萘洛尔对映体的药理活性及临床应用情况,为其新型药物研发提供参考.方法:通过查阅国内外文献及专利,从该药的构象、特殊药理作用与目前在临床上的应用情况、不良反应等方面进行综述.结果与结论:普萘洛尔有S-(-)-普萘洛尔和R-(+)-普萘洛尔两种光学异构体,临床上使用的是左旋和右旋异构体等量混合的消旋品.其是一种非选择性β受体阻滞剂,可抑制交感神经活性,无其他自律神经系统活性,临床应用广泛,主要用于治疗各种心血管系统疾病、甲状腺机能亢进、精神疾病等.普萘洛尔口服后胃肠道吸收较完全,脂溶性好,与血浆蛋白结合率为85％～95％,主要在肝脏代谢.将外消旋普萘洛尔拆分为手性纯化合物,并作为两种不同的药物分别使用,以及将R和S型以不同比例混合应用于不同临床症状的患者,是创制具有我国自主知识产权的新药、提高我国普萘洛尔药品质量的有效方法.

HPLC-MS法测定甲磺酸多拉司琼原料药中有关物质和异构体含量

目的:建立甲磺酸多拉司琼原料药中有关物质和异构体含量测定的方法.方法:采用高效液相色谱-质谱法测定3批甲磺酸多拉司琼原料药中的有关物质和异构体含量.色谱柱为shim-pack VP-ODS;流动相A为0.01 mol·L-1甲酸铵溶液(用三乙胺调节pH至7.0)-乙腈(95:5),流动相B为0.01 mol·L-1甲酸铵溶液(用三乙胺调节pH至7.0)-乙腈(27:73),梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1；检测波长为210nm.质谱条件采用电喷雾电离源(ESI)、正离子检测模式.结果:有效分离了甲磺酸多拉司琼与有关物质及异构体(R＞1.5),甲磺酸多拉司琼的低检测限为0.5 ng,3批样品中单个杂质含量≤0.05％,总杂质含量＜0.1％,异构体未检出.结论:本方法准确、专属性好,适用于甲磺酸多拉司琼原料药中有关物质和异构体的检测.

HPLC法测定恩替卡韦分散片的异构体

目的:建立以HPLC法检测恩替卡韦分散片中异构体的方法.方法:色谱柱为Chiralpak AD-H手性柱,柱温为30℃,流动相为正庚烷-乙醇-甲醇-三乙胺(55:42.5:2.5:0.1),检测波长为254 nm,流速为0.6 mL·min-1,进样量为20μL.结果:所用手性柱对恩替卡韦手性异构体有良好拆分能力,相邻2种成分之间的分离度分别为1.9、1.9、4.0,恩替卡韦及其异构体的分离度符合要求.结论:该方法操作简便,可用于恩替卡韦分散片中异构体的检测.

高效液相色谱法分离与测定盐酸多塞平顺反式异构体的含量

目的：建立盐酸多塞平乳膏中盐酸多塞平顺反式异构体分离与含量测定的高效液相色谱法。方法色谱柱采用Kromasil 100A C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为含0.1%三乙胺的0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液－甲醇（65：35），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为50℃。结果盐酸多塞平质量浓度在7.90~12.66μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（ r=0.9999），平均回收率为98.88%，RSD为1.32%( n=9)。结论该方法能良好地分离盐酸多塞平顺反式异构体，可作为盐酸多塞平乳膏中盐酸多塞平的质量控制方法。

高效液相色谱法测定佐米曲普坦中D型异构体的含量

目的建立佐米曲普坦中D型异构体的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,紫外检测波长为280nm,以正己烷-异丙醇(40:60)为流动相,Chiralpak AD-H手性柱为色谱柱.结果佐米曲普坦与其D型异构体达到基线分离;D型异构体浓度线性范围为1.5～1 200μg/mL,检测限为0.5μg/mL,定量限为1.5μg/mL,平均回收率为99.2%,RSD为1.2%.结论该方法简便、快速、准确、可靠,适合佐米曲普坦生产的质量控制.

模拟高原运动大鼠心肌重塑与肌球蛋白重链的适应性变化

目的观察缺氧及缺氧复合运动条件下大鼠心肌重塑与肌球蛋白重链(myosin heavy chain ,MHC)异构体组成的变化.方法 Wisatar大鼠随机分为4组:平原对照组、缺氧组、平原运动组和缺氧复合运动组.缺氧复合运动组大鼠持续暴露于模拟海拔5 000 m高原5周,每天降至4 000 m高原进行游泳运动1 h(6 d/周),运动结束后回升至5 000 m;缺氧组大鼠同时在低压舱内相同海拔高度饲养,但不进行游泳运动;平原运动组和平原对照组在舱外同时饲养,其中平原运动组每天进行游泳运动1 h(6 d/周).在末次运动结束后24 h处死大鼠,分离左、右心室,称重并计算左、右心室重量指数.用含10%甘油的SDS-PAGE电泳分离左、右心室MHC异构体,观察心室肌MHC异构体组成变化.结果缺氧35 d大鼠右心室重量指数增加,缺氧复合运动组大鼠左、右心室重量指数均增加.缺氧组右室MHC异构体组成比例与平原对照组相比无显著变化,平原运动组右室α-MHC异构体比例显著高于平原对照组,缺氧复合运动组右室α-MHC异构体比例显著高于平原对照组和缺氧组,低于平原运动组.左室MHC异构体组成比例变化趋势与右心室相似.结论缺氧复合运动条件下,心肌纤维MHC异构体由β-MHC向α-MHC转换,可能是缺氧条件下适度运动促进机体对高原习服适应的机制之一.

LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法

目的确认固相合成多肽P14分子是否存在异构体.方法通过HP 1100与ESI离子源PEAPI2000液质联用(LC/MS)分离P14肽,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计分子量前提下,应用PE SCIEX Analyst 1.0b3质谱分析软件分析子离子流色谱图.结果从总离子流色谱图中精确提取P14肽Q1正离子双电荷质量数,形成P14肽质量数子离子流色谱图,其中有散在的不同保留时间的质量数存在.结论P14肽有异构体存在,与结合理论上分析P14氨基酸组成发现(P14组成中有6个胱氨酸,其存在无疑增加了分子内二硫键形成的可能性)一致.