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伊曲康唑区域和几何异构体的合成及结构阐明
以顺式或反式-[2-溴甲基-2-(2,4-二氯苯基)-1,3-二氧戊环-4-基]甲醇苯甲酸酯为原料,经与三唑缩合、水解、柱色谱纯化、甲磺酰化,后与4[4-[4-(4-羟基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-2-(1-甲基丙基)-3H-1,2,4-三唑-3-酮缩合,可分别得到抗真菌药物伊曲康唑(1)的区域异构体2或几何异构体3.比较1、2和3的1HNMR谱学特征.2和3可作为1质量控制的对照物.
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2,6-二氯苯酚合成的改进
2,6-二氯苯酚(1)是双氯芬酸钠等药物的重要原料[1].其合成方法已有许多报道[2~5],但都有不足之处,如原料成本高,异构体多、分离困难、产率低、纯度低等问题.我们参考文献[2,3,5],以苯酚(2)为原料、四氯乙烯为溶剂,加入复合催化剂[二异丙胺-三乙胺(10∶1)],经氯化制得1.以GC跟踪反应,研究了反应温度、通氯速度对收率的影响,并采用"冰盐低温”分离技术,结果满意,产品纯度高,收率达到78.5%.工艺简单,易于操作,有一定的实用价值.
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选择性剪接调控的研究进展
选择性剪接是剪除未成熟mRNA中的内含子、保留外显子后生成成熟mRNA的过程.在各类疾病发生和发展过程中,异常的选择性剪接起着重要作用.该文就选择性剪接的发生与调控机制、功能及其与疾病关系的研究进展进行综述.
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基因新异构体的剪接特征及其生物学意义
目的探讨基因新异构体的剪接特征及生物学意义.方法对人肾上腺组织cDNA文库作大规模EST分析及全长cDNA克隆.结果发现7条由不同剪接方式形成的新的异构体,其中4个剪接特点不符合经典的gt-ag规律,且剪接方式多样,人类固醇5a还原酶跨越两个外显子,KIAA0971的异构体与KIAA0971比较,有两段缺失,且造成编码框架移动,均按gt-ag方式.人17.9kd蛋白与从基因组序列预测的cDNA比较增加一个新外显子,人甲状腺激素受体相互作用蛋白15的第5号外显子端具有2个-ag的接点.结论表明体内mRNA成熟过程中剪接方式呈现多样性及复杂性.
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反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统分析维生素D3软胶囊(油性基质)
目的 开发维生素D3软胶囊(油性基质)在反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)系统中的含量测定和杂质分析方法.方法 RP-HPLC系统的色谱柱为AgilentZorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5t上m),检测波长265 nm,柱温25℃,流速1 mL/min.以乙腈混合不同比例的甲醇、水、乙醇为流动相,探究这4种流动相组分对维生素D3及其3种同分异构体在C18柱上保留行为的影响.根据保留行为研究选择合适的流动相进行含量测定和杂质分析.结果 以纯乙腈为流动相时,含量测定方法回收率仅为80.55%~84.37%;而以V(乙腈)∶V(水)=90:10为流动相时回收率显著改善(98.07%~103.23%,RSD<1.69%),同时可改善峰形,适用于含量分析.该方法呈现良好的线性[(o.52~5.2)×10-4 t mol/L,R2>0.999]和精密度(RSD<2.32%).以V(乙腈)∶V(水)=95:5为流动相能够排除空白油性基质峰对杂质峰的干扰,可用于杂质分析.结论 本方法 能在RP-HPLC系统中简单而准确地进行维生素D3软胶囊(油性基质)的含量测定和杂质分析.
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糖尿病大鼠肾脏内皮素-1基因表达研究
内皮素(ET)包括ET-1、ET-2、ET-3三种异构体.其中ET-1为迄今所知体内强的缩血管多肽.人体内,首先由前内皮素原(preproET)经前内皮素剪切成39个残基组成的大内皮素,后再经内皮素转化酶作用形成活性形式的内皮素[1~4].
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四氟苯菊酯的气相色谱分析
四氟苯菊酯是一种高效广谱低毒杀虫剂,分子式为C15H12CL2F4O2,只含一个光学活性异构体,是由d-反式二氯菊酰氯与2,3,5,6-四氟苄醇酯化而成,它对多数害虫有快速击倒作用,致死能力强,还具有较长的残留活性,能有效地防治卫生害虫和贮藏害虫.
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关于差向异构化合成高效氯氰菊酯产品标准的问题
拟除虫菊酯类的化学结构包含多个异构体,有些是无效体或低效体.只有少数异构体是高效体,具有高效杀虫活性.70年代后期国外先后开展了立体选择性合成高效异构体,如溴氰菊酯[1R-cis,α-S]、高效氰戊菊酯(仅含[S,S]).我国自20世纪90年代开始在这一领域取得成绩,首先由南开大学元素有机化学研究所采用差向异构化立体有机合成了高效顺反式氯氰菊酯.例如以10%氯氰菊酯经异构化可取得不低于1.9倍的5%高效氯氰菊酯,大大降低了使用成本,提高了生产利润.氯氰菊酯经高压液相检测出现4个成分(4对异构体):cisα、cisβtransα、transβ(图略),其含量分别为23.8、25.4、22.1、28.7,其中α体为高效体,占46%.经差向异构化使β体向α体转化,可获得α体>98%,其中包括顺式α体(cisα)和反式α体(transα),在现行的产品标准中,两者均作为高效氯氰菊酯的有效成分.
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布托啡诺复合罗哌卡因用于术后硬膜外病人自控镇痛
罗哌卡因属含单一异构体S-罗哌卡因的长效酰胺类局麻药,中枢神经系统及心血管系统毒性小[1~3],小剂量应用具有感觉-运动神经阻滞分离[4]以及高清除率[5]等特点.近年来已被推荐作为硬膜外连续输注术后镇痛的局麻药[6].阿片类受体激动剂与局部麻醉药联合应用于术后病人自控硬膜外镇痛(PCEA)可产生协同作用,减少各自用药量,从而降低两类药物所产生的不良反应.
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等比重左旋布比卡因腰麻效果
左旋布比卡因(1evobupivacaine)是消旋布比卡因的纯S-(-)异构体,为新型长效局麻药.其心脏、中枢神经系统毒性显著低于布比卡因[1].目前已有LB硬膜外、臂丛、术后镇痛的临床研究,但国内尚无腰麻临床对比研究报道.本研究旨在通过与布比卡因的对比,观察不同剂量等比重左旋布比卡因的腰麻效果.
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脑脊液中特殊蛋白的检测与Creutzfeldt-Jakob病
Creutzfeldt-Jakob病(CJD)是一种罕见的、致命的人类神经变性疾病.确诊只能通过尸检或脑组织活检发现朊蛋白的病理性异构体(PrPSc).脑组织活检患者不易接受,而且容易造成医源性传播.目前的研究发现一些脑特殊蛋白与CJD的关系密切,尤其是脑脊液中特殊蛋白的检测对诊断CJD更有临床价值.
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环氧化酶-2在皮肤肿瘤中的表达及其临床意义
研究发现,在长期使用非甾体抗炎药(NsAIDs)治疗的类风湿性关节炎患者中结肠癌的发病率下降40%~60%[1].体内外及动物模型等研究[2]表明,NSAIDs的作用靶点是环氧化酶(cyclooxygenase,COX).COX有两种异构体:COX-1和COX-2,已证明COX-2在多种内脏肿瘤中存在过表达[3],因此,COX-2与肿瘤的关系得到了普遍关注.我们应用免疫组化方法检测了COX-2在几种常见皮肤肿瘤组织中的表达,并探讨其临床意义.
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过表达BCOR-short基因抑制根尖牙乳头干细胞成骨分化功能
目的:研究BCL6共抑制因子(BCOR)异构体(BCOR-short)对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成骨分化能力的影响.方法:利用HA-BCOR-short 逆转录病毒载体在 SCAPs 中过表达 BCOR-short,Western Blot 检测过表达效果;通过碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色及钙离子定量分析研究SCAPs体外成骨分化能力;实时定量RT-PCR检测SCAPs中骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)和转录因子AP2A的表达.结果:Western Blot结果显示HA-BCOR-short可以在SCAPs有效的过表达;ALP活性结果显示过表达HA-BCOR-short抑制SCAPs的ALP活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示HA-BCOR-short明显抑制SCAPs体外矿化能力;实时定量RT-PCR结果显示过表达HA-BCOR-short明显抑制SCAPs中BSP、OCN和AP2A的表达.结论:过表达BCOR异构体BCOR-short可以抑制转录因子AP2A的表达,并且抑制SCAPs体外成骨分化功能.
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应用LC-MS鉴定头孢呋辛酯的同分异构体
头孢呋辛酯具有热和光不稳定性,可产生多种同分异构体,本研究采用LC-MS法,对其异构体的结构进行解析,它们按LC出峰的顺序依次为:头孢呋辛酯(6R,7R,1R)、头孢呋辛酯(6R,7R,1S)、头孢呋辛酯△3-异构体、头孢呋辛酯反式异构体(6R,7R,1R)、头孢呋辛酯反式异构体(6R,7R,1S).
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应用LC-MS鉴定头孢呋辛酯的同分异构体
头孢呋辛酯具有热和光不稳定性,可产生多种同分异构体,本研究采用LC-MS法,对其异构体的结构进行解析,它们按LC出峰的顺序依次为:头孢呋辛酯(6R,7R,1R)、头孢呋辛酯(6R,7R,1S)、头孢呋辛酯Δ3-异构体、头孢呋辛酯反式异构体(6R,7R,1R)、头孢呋辛酯反式异构体(6R,7R,1S).
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HPLC法检查酒石酸布托啡诺原料药中右旋异构体
目的:采用HPLC法对酒石酸布托啡诺进行手性拆分并检测其中右旋异构体含量.方法:采用Astec Cyclobond Ⅱ手性柱(β-CD polymer, 250 mm×4.6 mm,5 μm),以2%的三乙胺醋酸盐溶液(pH 6.80)-甲醇(48∶52)为流动相.柱温:25 ℃,流速:1.0 mL/min,检测波长:280 nm.结果: 本法对左、右旋酒石酸布托啡诺异构体的分离度为1.9,检测限为5 ng.结论:该方法操作简便,分离效果好,可用于酒石酸布托啡诺的质量控制.
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50例初诊急性早幼粒细胞白血病患者6种PML/RARα异构体定量分析
目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)初诊患者6种PML/RARα特异性异构体bcr1(长型)、bcr2(变异型)、bcr3(短型)、P4R3、P46R3、P2R3的临床意义.方法:应用实时定量PCR法对50例APL初诊患者骨髓单个核细胞的PML/RARα转录本各异构体进行检测,并以看家基因ABL的表达量进行标准化.结果:50例APL初诊患者中,长型和变异型患者35例,其bcr1/2相对表达量为0.86% ~208.01%(中位数11.44%),P4R3相对表达量为0.71% ~266.19%(中位数19.10%),P46R3的相对表达量为0.53% ~222.90%(中位数8.82%).15例短型患者bcr3的相对表达量为11.91% ~326.55%(中位数58.04%),P2R3的相对表达量为0.02% ~57.71%(中位数0.94%).bcr1/2、P4R3及P46R33种特异性异构体的表达水平差异无统计学意义(P=0.364).bcr1/2及P4R3的表达水平均与P46R3相关(r=0.73,P<0.01;r=0.50,P=0.04),但bcr1/2与P4R3表达水平没有相关性(r=0.34,P=0.063).P2R3的表达水平明显低于bcr3(P<0.01),但无相关性(r=0.11,P=0.714).患者年龄、外周血细胞计数、骨髓异常早幼粒细胞比例、初次血液学完全缓解时间和分子学完全缓解时间与几种融合基因的表达水平无明显相关性.结论:长型和变异型患者PML/RARα融合基因bcr1/2、P4R3和P46R3异构体的表达水平无统计学差异,短型患者bcr3的表达水平明显高于异构体P2R3.各异构体的表达量与初诊患者的年龄、外周血细胞计数、骨髓异常早幼粒细胞比例、患者初次达到血液学缓解和分子生物学缓解的时间无相关性.
关键词: 聚合酶链反应 PML/RARα 异构体 急性早幼粒细胞白血病 -
建立RQ-PCR方法检测急性早幼粒细胞白血病患者6种不同PML/RARα异构体
目的:建立检测急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者PML/RARα融合基因6种特异性异构体(bcr1/2、P4R3、P46R3、bcr3及P2R3)的实时定量PCR(RQ-PCR)技术,并评价其特异性.方法:设计不同异构体的特异性引物和探针,建立异构体特异性RQ-PCR方法对6种特异性异构体PML/RARα阳性模板进行扩增,评价异构体定量检测的特异性,并检测10例APL患者中不同异构体的含量.结果:所建立的各异构体特异性RQ-PCR法大敏感性均达10拷贝/μL,但其重复性较差,108~ 102拷贝/μL阳性模板的重复性良好,正常对照及空白对照无扩增信号,每个异构体特异性RQ-PCR均不能扩增其他异构体.5例长型(bcr1)和1例变异型(bcr2)阳性APL患者中bcr1/2异构体表达量为7.71% ~89.71%(中位数13.70%),P4R3异构体表达量为0.71% ~16.26%(中位数4.48%),P46R3异构体表达量为3.57% ~ 14.09%(中位数6.33%).4例短型(bcr3)患者中bcr3异构体表达量为21.43% ~ 197.04%(中位数100.69%),P2R3异构体表达量为0.34% ~ 9.07%(中位数2.45%).1例短型患者经诱导治疗缓解后bcr3和P2R3异构体转录本明显下降,复发时又明显升高.结论:检测PML/RARα异构体特异性RQ-PCR方法敏感、可靠,可用于APL患者不同异构体的定量检测和微小残留病灶的随访监测.
关键词: 聚合酶链反应 急性早幼粒细胞白血病 PML/RARα 异构体 -
伊曲康唑4种异构体在大鼠体内的药代动力学比较
采用LC-MS/MS法研究伊曲康唑4种异构体在大鼠体内的药代动力学差异.大鼠分别灌胃伊曲康唑4种异构体后,用LC-MS/MS法测定血浆中伊曲康唑4种异构体的代谢及主要代谢产物羟基伊曲康唑的生成情况.采用乙腈直接沉淀蛋白,色谱柱为Durashell HILIC柱(100 mm ×2.1 mm,5.0 m),流动相中有机相为甲醇-乙腈(1∶1),水相为含5 mmol/L乙酸铵和0.2%乙酸的超纯水,以0.5 mL/min的流速进行梯度洗脱,总洗脱时间为5.5 min.扫描方式为选择反应监测(MRM),采用正离子方法检测.大鼠单次灌胃给予15 mg/kg伊曲康唑4种不同异构体后,2S,4R,2R型伊曲康唑和2S,4R,2S型伊曲康唑在大鼠体内的羟基代谢物的生成量明显高于(2R,4S,2R)型伊曲康唑和(2R,4S,2S)型伊曲康唑(P <0.001).此外,伊曲康唑在大鼠中存在明显的雌雄差异,雌性大鼠体内的峰浓度(cmax)和药时曲线下面积(AUC0-∞)明显高于雄鼠,半衰期(t1/2)明显长于雄鼠,消除较雄鼠慢.通过检测伊曲康唑4种异构体原药及相应的羟基代谢物在大鼠体内的经时过程,表明不同异构体在大鼠体内的药代动力学行为存在明显的代谢差异和性别差异.
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血小板β-淀粉样肽前体蛋白异构体比率对老年期痴呆的诊断意义
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,其主要病理特征是胞外老年斑和胞内神经纤维缠结以及血管壁β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积,而老年斑以Aβ沉积为核心.Aβ是由其β淀粉样肽前体蛋白(amyloid precurosor protein,APP)经过β和γ分泌酶介导的蛋白裂解而成.