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内毒素致病机制的研究进展
自 Pfeiffer从革兰阴性菌(GNB)中发现了具有生物学活性的对热稳定的内毒素以来,人们对内毒素的化学本质、生物学活性方面的认识不断深入,随着抗生素的广泛应用, GNB的感染发生率及其特征均较以往发生了明显的变化.近年的研究发现,内毒素(LPS)一方面可视为 GNB的致病因子,在 GNB感染的发病机制中起着十分重要的作用;另一方面, LPS对机体亦可表现出显著的有益的作用 [1].由于 LPS在 GNB感染中起着重要的作用,因此了解 LPS的致病机制及其作用特点,对指导临床上选择有效防治 GNB感染的方法具有重要的意义.现将内毒素致病机制的研究进展作一个扼要的介绍.
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重组人IL-10融合蛋白的表达及其生物学活性测定
目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL-10.方法限制性内切酶Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切目的基因IL-10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL-10/pET32a,测序正确后转化E.coli BL21(DE3),不同温度、低浓度IPTG诱导工程菌表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达,ELISA和MC/9细胞增殖法分别测定IL-10的含量及生物学活性.结果构建的表达重组载体IL-10/pET32a经酶切鉴定和序列测定表明完全正确,诱导工程菌可以表达可溶性的融合蛋白IL-10-Trx,同时也存在包含体融合蛋白,经Western blot鉴定存在有目的蛋白IL-10,MC/9细胞增殖法测定可溶性的融合蛋白具有生物学活性.结论成功表达了具有生物学活性的融合蛋白IL-10-Trx,有助于下游纯化和制备hIL-10基因工程药物.
关键词： 重组人白细胞介素10 融合蛋白 可溶性 生物学活性 -
血小板生成素糖基化与其体内生物学活性关系的研究
为探讨血小板生成素(TPO)糖基化与其体内生物学活性的关系,给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系统表达的人TPO成熟肽或大肠杆菌表达的人TPO N-端结构域蛋白,连续给药5d,每天一次,末次给药后3d,比较两种TPO组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位(CFU-Meg)、骨髓有核细胞DNA含量.结果高、中、低剂量的TPO成熟肽组动物的血小板数、巨核细胞集落数和骨髓DNA含量均明显高于TPO N-端结构域蛋白的相应组(P＜0.01).显示酵母系统表达的TPO成熟肽比大肠杆菌表达的TPO N-端结构域有明显的生物学活性,这可能与它们的糖基化程度及半衰期有关.
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小鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学活性评价
目的 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体,并对其生物阻断活性进行评价.方法 利用重组人源PD-1/PDCD1蛋白作为免疫蛋白,免疫接种Balb/c小鼠,分离并提取小鼠脾淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合培养,经过多次克隆化培养筛选出稳定分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株.鉴定单抗IgG类别及亚类,并分析其特异性和细胞毒性;建立HepG2细胞和Jurkat细胞共同培养体系,ELISA法检测PD-1单抗对Jurkat细胞分泌抗肿瘤细胞因子的影响,MTT法分析PD-1单抗对Jurkat细胞杀伤HepG2细胞能力的影响.结果 获得了1株新的小鼠抗人PD-1单克隆抗体,命名为2H7.单抗2H7能够特异性识别T细胞表面的PD-1蛋白;高浓度长时间处理对Jurkat细胞有一定毒性作用;低浓度单抗2H7可阻断PD-1/PD-L1信号通路,使Jurkat细胞对HepG2细胞杀伤能力显著增强(P＜0.01),且Jurkat细胞分泌的IL-2和IFN-γ等细胞因子水平显著高于对照组(P＜0.01).结论 成功制备了1株具有良好生物阻断活性的小鼠抗人PD-1单克隆抗体2H7,该抗体能够显著提高T细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤能力.
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白细胞介素18研究进展
1995年Okamura等报道从中毒性休克的小鼠肝脏克隆到了一种由应激诱生的蛋白.该蛋白的生物学活性与白细胞介素12非常相似,但其诱生干扰素γ的能力要强于白细胞介素12,因而将其命名为干扰素γ诱生因子(interferon gamma inducing factor,IGIF)[1].随后的研究表明该因子与白细胞介素1α和白细胞介素1β在结构上有一定的相似性,因而认为该因子可能是白细胞介素1家族的成员,有人将其称为白细胞介素1γ[2].1996年将其命名为白细胞介素18.研究表明该因子在抗肿瘤、抗过敏以及抗感染方面有一定的作用,也可能是一种神经免疫调节因子.现将这一因子的研究进展作一综述.
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Nestin的结构及生物学活性研究
Nestin是一种由胚胎期神经前体细胞一过性表达的Ⅵ型中间丝蛋白,作为神经前体细胞的特异性蛋白,能使神经元有较强的生理活性和可塑性.近年来Nestin发现与干细胞增殖、分化、迁移联系密切,调控着神经干细胞的定向诱导分化.本文复习近年来国内外有关文献,对Nestin的结构及生物学活性研究综述如下.
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两种中药多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究
血管内皮细胞(EC)是造血诱导微环境的重要组成成分.文献报道EC能分泌多种造血生长因子来调控造血.人参与当归是祖国传统医学的"补气"和"补血"要药,人参多糖(G PS)和当归多糖(APS)为其主要药物成分之一.近10年来我们课题组对APS以及G PS促进血细胞生成的调控机理进行了系统的研究,我们既往研究证明:APS对造血干/ 祖细胞增殖分化有显著刺激作用,GPS也可促进人粒单系造血祖细胞的增殖和分化,但其现代生物学机理尚不甚清楚.本研究采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术 ,探讨APS和GPS诱导人内皮细胞表达GM-CSF、IL-3、IL-6与促进人造血祖细胞增殖分化的相互关系.材料与方法:(1)GPS:重庆中药研究所分离、提取、纯化,纯度＞90%;APS:兰州医学院血液病研究所惠赠,纯度＞85%.(2)人脐静脉内皮细胞株(Ecv304).(3)EC培养上清液的制备:分别制备对照组(不加任何刺激物,常规培养)、IL-1、GPS与APS体外诱导组(IL-1:100u/ml ,GPS:50μg/ml,APS:200μg/ml)的Ecv304细胞培养上清液 .(4)造血生长因子活性检测:以每种植5×104个骨髓有核细胞所生成的CFU-M ix、CFU-GM集落数评价各种Ecv304细胞培养上清液中造血生长因子的活性. (5)SP免疫细胞化学检测经IL-1、GPS和APS诱导和对照组Ecv304细胞的G M-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达.实验结果表明:(1)经IL-1或GPS、A PS诱导制备的Ecv304细胞培养上清液能显著促进CFU-Mix、CFU-GM的增殖,其集落产率与对照组相比有显著的统计学意义(CFU-Mix:GPS组:52. 89±9.67,APS组:54.33±10.39,IL-1组:61.13±9.2 6,对照组:36.24±10.74;CFU-GM:GPS组:40.36±8.92 ,APS组:44.17±9.53,IL-1组:43.37±8.56,对照组:30 .78±11.45).(2)免疫细胞化学检测显示正常静止状态下EC胞浆内有棕黄色的 GM-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达的阳性颗粒,但表达阳性率及强度均很低,经过IL-1或GPS、APS诱导后Ecv304细胞的GM-CSF、IL-3、IL- 6蛋白表达阳性细胞率和表达强度均明显提高.结果表明:经GPS、APS或IL-1诱导制备的内皮细胞培养上清液对CFU-GM和CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用 ,提示其中造血生长因子(HGF)含量或活性有所增加.我们推测GPS和APS对内皮细胞表达HGF具有明显的刺激作用.现代研究认为:HGF与造血细胞膜上相应的HGF 受体结合,启动调控信号向核内转导,引起核内某些基因转录增强或其他基因转录抑制,终表现出蛋白合成改变,而导致细胞行为等变化.可见研究HGF的蛋白表达及调控能深入阐明造血调控的分子生物学机理.HGF生物学活性检测仅反映了内皮细胞条件培养液所含 HGF的生物学活性,HGF有其多效性和丰富性的特点,为进一步阐明GPS和APS能诱导和影响哪些HGF表达,本研究采用免疫细胞化学SP法对内皮细胞的GM-CSF、 IL-3和IL-6蛋白表达进行检测,结果表明:IL-1或GPS、APS诱导后内皮细胞的GM-CSF、IL-3和IL-6蛋白表达阳性率和强度积分值均显著高于对照组 ,这与生物学活性检测的结果相吻合.我们研究结果提示:GPS和APS调控造血的机理之一是上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血调控因子来调节血细胞的生成.这或许是人参和当归"补气""补血"的现代生物学机理之一.
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干扰素的临床应用现状简述
干扰素(interferon,IFN)是哺乳动物的细胞受病毒的一种名叫"有丝分裂原"的刺激后分泌的一组糖蛋白,按生物学活性与抗原结构分为αβ和γ三大类,具有较为广泛的生物学作用.本文就近年来IFN在临床上的应用现状作一综述.
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淫羊藿苷的免疫调节及抗肿瘤作用研究进展
近年来,有关肿瘤的免疫治疗,即恢复宿主肿瘤与防御系统之间的动态平衡,此中尤以建立肿瘤生物反应调节剂备受关注.淫羊藿苷(Icariin,ICA)是从小檗科草本植物淫羊藿中提取的一种黄酮苷类化合物,具有多种生物学活性,据认为是一种新型的生物反应调节剂和诱导分化剂.现就有关资料综述如下.
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几种白细胞介素的研究进展
白细胞介素(IL)又称白介素，是细胞因子这个庞大体系中的一个家族，近年来对这个家族的研究，报导甚多。所谓细胞因子网络(Nekwork cytoking)是指细胞因子的生物学活性及受体表达均具有网络的特点，即一种细胞因子可与多种靶细胞作用，一种靶细胞又可受多种细胞因子的调节。不同细胞因子之间彼此可以诱生，增减受体的表达，相互协同或拮抗，以进行调节并影响生物学效应。下面就白介素家族中若干成员的生的学作用及其在一睦疾病中的发病机理进行综述。
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重组人IL-11的原核表达、纯化和鉴定
以本实验室构建的pET24a-hrIL-11表达载体为模板,PCR扩增重组人白细胞介素11 (hrIL-11)的基因,克隆入pET21a表达载体,转化BL-21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生hrIL-11/His融合蛋白,并经Western blot实验确认.原核表达的hrIL-11/His融合蛋白经变性后,利用亲和层析纯化,目的蛋白纯度达95％以上.纯化后蛋白经尿素梯度复性后,比活达到1×106 IU/mg.研究结果为进一步研究该蛋白在促进血小板增殖等方面的作用奠定了基础.
关键词： 重组人白细胞介素11 原核表达 纯化 生物学活性 -
人白细胞介素4的原核表达、复性、纯化及生物学活性鉴定
用PCR方法从pORF-hIL4质粒中扩增重组人白细胞介素4(hIL-4)的基因,构建PQE60原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达.对表达的目的蛋白的可溶性进行鉴定,发现hIL-4基因表达产物在大肠杆菌中主要以不溶性包涵体形式存在, 经过超声波破细菌、包涵体提取、洗涤处理后,用5 mol/L盐酸胍变性溶解包涵体沉淀,上清稀释复性后透析,再经镍亲和层析进行纯化.纯化后的hIL-4进行TF-1细胞体外增生实验检测其生物学活性后,可用于人外周血树突状细胞的体外诱导培养.
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白细胞介素17及其与多种疾病的关系
白细胞介素17(IL-17)是近年来发现的一种前炎性细胞因子,主要由辅助性T细胞17(Th17)特异性分泌,也可由多种固有免疫细胞等分泌.虽然IL-17的作用至今仍未完全明确,但已发现其具有强大的招募中性粒细胞、诱导多种细胞分泌炎症细胞因子和趋化因子等多种生物学功能,并与人体多种疾病有着密切的联系.本文对IL-17的来源、生物学活性及其与人体各系统临床常见疾病的关系作一简要综述.
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具有生物学活性血管移植物的研究进展
实行血管外科手术治疗的病例中多需要血管移植物.目前,自体血管移植物缺乏,人造移植物则因不具备良好的生物活性而不能满足临床需要.利用组织工程可望构建有生物学活性的血管移植物.
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hVEGF_(165)及hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体的体外生物学活性研究
目的 通过体外实验探讨hVEGF_(165)和hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated virus,rAAV)体外生物学活性,为体内应用其进行骨坏死的基因治疗奠定理论基础. 方法 分别采用rAAV-hVEGF_(165)-内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site,IRES)-hBMP-7(实验组)、绿色荧光蛋白(green fluores-cent protein,GFP)标记的rAAv-IRES-GFP(对照组)转染体外培养的第3代兔BMSCs,于转染后1、2、3、7及14 d应用ELISA法及转染后14 d应用Western blot法鉴定两组hVEGF_(165)和hBMP-7表达;转染后14 d行细胞免疫荧光染色观察hVEGF_(165)和hBMP-7表达一致性.应用第3代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)管状血管形成实验检测hVEGF_(165)蛋白活性.取第3代BMSCs行诱导成骨实验,Gomori钙钴法ALP染色及茜素红法钙盐染色检测hBMP-7蛋白活性. 结果 ELISA检测示随转染时间延长,两组hVEGF_(165)和hBMP-7表达逐渐升高;实验组各时间点hVEGF_(165)和hBMP-7表达量均明显高于对照组(P＜0.05).Western blot检测示实验组可见hVEGF_(165)和hBMP-7表达,对照组未见阳性表达.细胞免疫荧光染色观察示实验组hVEGF_(165)和hBMP-7染色呈阳性,表达部位和强度具有较好一致性;对照组未见阳性表达.HUVEC管状血管形成实验示实验组HUVEC拉长变形、出芽且相互交联成管状样结构;与对照组相比,管状血管数比较差异有统计学意义(P＜0.05).ALP染色见实验组细胞出现深染颗粒,对照组细胞内浅着色;与对照组相比,矿化结节数比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 双基因共表达rAAV-hVEGF_(165)-IRES-hBMP-7体外具有良好的生物学活性.
关键词： 重组腺相关病毒载体 hVEGF_(165) hBMP-7 共表达 生物学活性 -
吉西他滨联合顺铂治疗非小细胞肺癌的观察及护理
吉西他滨（GEM）系具抗癌作用的核苷类似物，是近几年用于治疗非小细胞肺癌（NSCLC）有效的化疗药物之一，吉西他滨加顺铂（PDD）为治疗NSCLC较新的方案，其目的在于大限度地缩小肿瘤，降低肿瘤细胞的生物学活性，提高患者的生存率和生活质量。该方案以其安全、有效、副作用小而为患者接受。我院近2年用该方案治疗12例NSCLC患者，现就吉西他滨、顺铂联合化疗中的护理要点进行了分析。
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粪肠球菌和变异链球菌脂磷壁酸的生物学活性
粪肠球菌是难治性根尖周炎根管内的主要致病菌。变异链球菌是引起龋齿的主要致病菌。粪肠球菌和变异链球菌的毒力因子脂磷壁酸（LTA）皆可促进细胞分泌炎症因子，引发炎症反应，促进根尖周牙槽骨吸收；有助于细菌黏附于牙体表面和生物膜的形成。粪肠球菌和变异链球菌LTA在细菌致病性方面起着重要的作用，但其机制尚不清楚。因此，研究LTA的致病机制及分子结构，旨在实现阻断其致病通路、降低其致病性。
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人中性粒细胞肽-1~3及其与患龋风险的关系
人中性粒细胞肽（HNP）-1~3是人体内的一种天然防御蛋白混合物，对诸多细菌、真菌和病毒以及癌细胞有强烈的杀灭或抑制作用。HNP-1~3在宿主儿童唾液中的表达水平的高低与儿童自身的患龋风险明显相关，其在唾液中的质量浓度也直接影响着宿主口腔生态环境的变化，对口腔主要致龋菌也有明显的抑制作用。在未来开展的儿童龋病风险预测工作中，以HNP-1~3作为一种重要的检测指标，不仅可使儿童龋病风险预测工作更为准确，还能使有限的医疗资源得到高效合理的利用。
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唾液富组氨酸阳离子多肽的研究进展
人体唾液腺分泌的富组氨酸阳离子多肽与口腔健康关系密切,从20世纪80年代初发现唾液富组氨酸阳离子多肽以来,学者们对其进行了大量的研究,研究结果证实唾液富组氨酸阳离子多肽对口腔真菌、龋病和牙周相关细菌都有广谱抗菌活性.本文就有关唾液富组氨酸阳离子多肽的种类和来源、生物学活性、作用机制的研究进展作一综述.
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环孢素的生物学活性及其衍生物的研究进展
自环孢素作为高效免疫抑制剂应用于临床以来,在其免疫抑制作用机制和构效关系、抗HIV、逆转肿瘤多药耐药及抗炎等生物活性方面进行了深入的研究、在环孢菌素同系物及其衍生物的研发方面也取得许多进展.本文综述了这些方面的研究和进展.
