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肿瘤坏死因子抗鼻咽癌细胞实验研究进展
应用生物反应调节剂对肿瘤进行免疫治疗是近十几年来发展较快的一项新型抗瘤疗法,也是对临床手术、化疗、放疗等常规治疗肿瘤手段的有效补充.肿瘤坏死因子(TNF)的多种生物学活性如诱导分化、细胞调亡(apoptosis)和细胞毒/细胞静止(cytotoxic)等效应,特别是对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用,具有重要的病理生理学意义和肿瘤治疗价值,其作用机制研究很多,但尚无定论.本文仅就TNF-α介导的鼻咽癌细胞毒效应、不同鼻咽癌细胞株对TNF-α反应差异的分子机制作一综述.
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EGb761的生物学效应及神经保护作用研究进展
EGb761为标准银杏叶提取物,是银杏叶制剂的第4代产品,主要有效成分为 2 4 %类黄酮和 6 %萜内酯[1].在临床上已被广泛应用于防治心血管疾病.随着对EGb761多种生物学活性作用的不断研究,近年来人们发现它同时具有保护神经细胞结构、代谢和功能的明显作用,在防治神经细胞变性、脑血管等疾病中具有令人欣喜的应用前景.EGb761保护神经细胞的作用机制有以下方面.
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乙型肝炎病毒变异株与临床
乙型肝炎病毒变异广泛存在于基因组的不同部位,其变异后常有重要生物学活性的改变,如e抗原合成缺失、病毒持续复制、免疫逃逸等.乙型肝炎病毒变异株致慢性持续感染,病变经久活动,肝细胞损伤加重,甚至引起重型肝炎.本文就与肝损伤有关的HBV变异株和临床病情变化作一综述.
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原虫感染与细胞因子
胞因子是由致敏或活化的淋巴细胞及某些组织细胞合成与释放的一类具有多种生物学活性的小分子多肽,对多种重要的生物过程都有调节作用,能调节细胞的生长分化、调节免疫功能、参与炎症发生和创伤愈合等.细胞因子主要包括白细胞介素(interleukin, IL)、干扰素(interferon ,IFN)、集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF)、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)及趋化因子家族(chemokine family)等.这些细胞因子交互作用构成一种免疫网络, 参与多种免疫过程的调节. 1968年Jahiel经实验证实细胞因子参与寄生虫免疫[1]以来, 人们越来越多地观察到寄生虫感染过程中宿主体内存在多种细胞因子水平的变化.现已明确, 细胞因子参与了寄生虫感染状态下宿主的细胞免疫和体液免疫并在其中发挥着复杂而重要的功能, 宿主的免疫防御反应和病理损害过程都受细胞因子的调控.
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细胞因子与慢性心力衰竭
慢性心力衰竭(CHF)是多种心血管疾病所致的一种临床综合征,多项研究证实,细胞因子介导的免疫应答在CHF的发展中起重要的致病作用.细胞因子是具有生物学活性的可溶性多肽,通过细胞表面受体介导细胞与细胞之间相互作用,调节细胞活动、分化、增殖、死亡或者使免疫细胞获得效应器的功能;大多数细胞因子通过自分泌或旁分泌的作用方式在局部发挥生物学效应.
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各型病毒性肝炎外周血可溶性白细胞介素2受体及白细胞介素6检测的临床意义
1985年Rubin等[1]发现可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)存在于人的细胞表面和体液中来,相继发现某些疾病,尤其是引起机体免疫平衡失调的疾病,sIl-2R的水平与病情变化密切相关[2].白细胞介素6(IL-6)是由多种免疫活性细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,它在机体免疫应答及炎症反应中起着重要作用,并参与了多种疾病的病理发展过程[3]但sIL-2R和IL-6在病毒性肝炎病程中的临床意义仍不十分清楚,为探讨这一问题,我们检测了148例各型病毒性肝炎患者血清总胆红素(TB)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)、白细胞介素6(IL-6)水平,现报告如下:
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干细胞因子研究概况
干细胞因子(SCF)是一种新型多功能细胞因子,它以可溶型和膜结合型两种形式存在,通过与其受体C-Kit结合发挥生物学作用.现就SCF的理化性质、生物学活性及临床应用作一综述.
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白细胞介素-23的研究进展
白细胞介素-23(IL-23)是造血细胞因子家族成员,它是由p19和p40两个亚基组成的活性复合体,IL-23受体由IL-12β1和IL-23R构成,IL-23的信号途径与白细胞介素-12(IL-12)有相同的Jak-Stat信号分子,IL-23的功能与IL-12也存在许多相同之处,但也有其独特的功能.IL-23可作用于活化的T细胞、记忆性T细胞和树突状细胞,产生γ干扰素(IFN-γ)和IL-12等细胞因子,在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用,有望成为新的免疫治疗因子.
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生长抑素抑制肝癌增殖的研究进展
生长抑素(somatostatin,SST)对肿瘤细胞的增殖抑制尤其受到关注.研究SST对肝癌细胞的增殖抑制作用,将对肝癌的临床治疗具有重要意义.一、SST及其受体1.SST及其结构特性:SST是一种由神经内分泌细胞、炎性细胞、免疫细胞所产生,针对离子、营养素、神经肽、神经递质、甲状腺和类固醇激素、生长因子、细胞因子起作用的调节多肽,其分布主要在中枢和周围神经系统,对多种生物学活动具有广泛的抑制作用[1].天然SST主要指14肽的SST-14和28肽的SST-28,其中SST-14是主要的生物活性形式.SST-28则是SST-14的N端向外伸展而成,也具有生物学活性.
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大鼠肝再生增强因子在酵母菌中的表达及生物活性研究
目的构建大鼠肝再生增强因子(rALR)酵母重组表达质粒,在毕赤酵母菌GS115中进行表达.表达产物经超滤方法纯化后在体外进行生物活性研究. 方法以重组质粒pcDNA3.1-rALR为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增rALR编码区的DNA,构建重组质粒pPIC9K-rALR,然后电转化至毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下进行表达.表达产物经1.5% SDS-PAGE电泳和western blot鉴定后进行超滤纯化.用3H-TdR掺入法检测重组大鼠ALR(rrALR)体外刺激QGY和HepG2人肝癌细胞株和原代大鼠肝细胞的增殖情况. 结果重组质粒经酶切及PCR证实rALR编码区DNA正确插入质粒载体中.重组大鼠ALR被GS115菌以外分泌方式表达,其DNA分子量约为1.5×104,与理论预期值相符,western bolt鉴定发现rrALR能与抗人ALR多克隆抗体发生特异性反应,说明人和大鼠ALR抗原性上存在部分交叉.超滤纯化获得大量高纯度的rrALR.在所测定的剂量范围内,rrALR在体外以剂量依赖方式刺激QGY和HepG2肝癌细胞株增殖,但对原代大鼠肝细胞无刺激增殖作用. 结论 rrALR在毕赤酵母菌GS115中获得分泌性高效表达,rrALR在体外以剂量依赖方式刺激QGY和HepG2肝癌细胞株增殖,但对原代大鼠肝细胞无刺激增殖作用,表明肝癌细胞和正常肝细胞表达的ALR受体不同.人和大鼠ALR在生物学活性和抗原性上存在交叉.
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维生素A与儿童支气管哮喘关系研究进展
维生素A(vitamin A,VA)是指具有全反式视黄醇生物学活性的一组类视黄醇(retinoids)物质,对机体的生长发育、组织细胞增殖与分化具有广泛的调控作用.
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人肝再生增强因子真核表达及其对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响
目的:构建人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR) 15kD亚型的真核表达系统,并探索ALR对顺铂(Cisplatin,DDP)诱导的人肝癌细胞株QGY凋亡的影响.方法:用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法和基因重组技术,从重组质粒pPIC9K-rhALR中扩增出编码rhALR基因片段,将其克隆入pPICZαA质粒中构建重组质粒pPICZα-A-rhALR.重组质粒SacⅠ酶切线性化后电转入酵母GS115中,并在1%的甲醇诱导下表达.表达上清蛋白经Western blot(ALR多克隆抗体和His-tag标签抗体)鉴定和镍柱亲和层析纯化.MTS试剂检测rhALR体外对人肝癌细胞(HepG2、QGY)的促增殖活性,及流式细胞仪检测rhALR在顺铂诱导QGY细胞凋亡中的抗凋亡作用.结果:PCR、双酶切、DNA测序均鉴定重组质粒构建与预期一致.分泌表达的rhALR约占上清总蛋白的70%,目的分子量约17 kD,Western blot均可见单一条带.纯化后的rhALR对HepG2和QGY的体外促增殖作用呈浓度依赖性增强(HepG2组:F=246.729,P=0.000;QGY组:F=246.004,P=0.000),且在QGY细胞顺铂诱导凋亡时也发挥着浓度梯度式抗凋亡作用(F=101.061,P=0.000).结论:成功构建高效分泌表达rhALR的pPICZα-A-rhALR GS115真核表达系统;体外实验证实rhALR对顺铂诱导人肝癌细胞有呈浓度依赖性的抗凋亡作用.
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T-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测
目的 构建携带T-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性.方法 采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出T-bet和c-FLIP cDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建T-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP.采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞,观察T-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达,并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及Th1/Th2细胞偏移.结果 成功构建pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP质粒,运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞,其转染率为34.6%.流式细胞仪分析未经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24 h后,细胞的凋亡率分别为(50.12±8.02)%;经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理1 d的淋巴细胞,其细胞凋亡率分别下降到(5.73±0.37)%;双基因表达的淋巴细胞的Th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组(P<0.01),且Th2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低(P<0.01),差异有统计学意义.结论 转染T-bet和c-FLIP共表达基因后的T淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向Th1细胞分化.
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抗氨基端脂多糖结合蛋白单链抗体的生物学活性研究
目的观察制备的抗NH-LBP单链抗体的体内外生物学活性.方法采用流式细胞术观察抗NH-LBP单链抗体阻断LPS与U937细胞的结合能力;采用ELISA法检测抗体干预后不同时相点的烧伤合并内毒素血症小鼠血浆中炎性细胞因子TNF-α、IL-6含量的变化;同时观察小鼠部分内脏器官的病理形态学改变.结果经抗NH-LBP单链抗体干预后,U937细胞表面的荧光强度明显下降.烧伤合并内毒素血症小鼠经scFv抗体干预后,与模型组相比肝、肺组织的炎性改变明显减轻、浸润的炎细胞减少;肾组织的炎性改变不明显;小鼠血浆中TNF-ot浓度在烧伤合并内毒素处理后即显著增高,模型组与对照组相比,差异有显著性(P<0.01,P<0.05),干预组与相应时相点的模型组相比,在初3 h内差异有显著性(P<0.05).IL-6含量在建模3 h以后与对照组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05);干预后IL-6的含量下降比较明显.结论抗人源化氨基端脂多糖结合蛋白的单链抗体对内毒素血症有一定的保护作用;进一步明确了LBP在内毒素生物学效应中的作用.
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白血病抑制因子与胚胎着床
白血病抑制因子(Leukmia inhibitory factor,LIF)是一具有多种生物学活性的分泌型糖蛋白,LIF调节多种细胞的生长与分化,如胚胎干细胞,原始生殖细胞,成骨细胞,脂肪细胞,肝细胞,内皮细胞等.着床是生殖过程的关键步骤,其过程包括正常发育的胚泡脱去透明带,胚泡在子宫内膜的迁移、定位和粘附,胚泡滋养层向子宫内膜的侵入和子宫内膜的蜕膜化反应以及胎儿的免疫保护等.近年的研究表明,LIF与小鼠胚胎植入有密切关系,LIF表达的高峰在妊娠第四天,正好与胚胎着床时间一致,在妊娠第七天,LIF的表达停止,这表明小鼠子宫内膜LIF基因表达是胚泡成功植入的关键因素.现就LIF与胚胎着床关系的有关文献报道的研究进展介绍如下:
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脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析
目的:构建含有脑源性神经营养因子(BDNF)的原核表达质粒pET28a(+)/BDNF及相应的原核表达菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后研究其生物学活性。方法按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,人工合成大鼠BDNF的基因序列并构建原核表达质粒pET28a(+)/BDNF。经限制性内切酶(Bam HI ,Hind Ⅲ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,用SDS‐PAGE检测重组蛋白的表达情况,以BDNF特异性抗体采用Western blot法鉴定BDNF蛋白抗原性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测BDNF蛋白对 PC12细胞活力的影响。结果构建的pET28a(+)/BDNF经双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致;工程菌经IPTG诱导后在相对分子质量17×103左右有1条明显蛋白条带,Western blot显示目的蛋白能够与特异性BDNF抗体反应;不同浓度BDNF蛋白处理组与对照组比较细胞活力均有不同程度的增加,其中50 ng/mL BDNF处理组效果优。结论成功构建原核表达质粒pET28a(+)/BDNF及相应的原核表达菌,该工程菌表达的BDNF蛋白具有良好的生物学活性。
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对NO/NOS、TNF三种检测观察食管癌患者手术治疗前后的临床意义
众所周知,一氧化氮(N0)是一种有多种生物学活性的物质,它具有松弛血管平滑肌、舒张血管、抑制血小板聚集以及抑制内皮细胞的增殖作用[1].一氧化氮酶(NOS)为其催化酶.肿瘤坏死因子(TNF)是种有效的肿瘤细胞杀伤因子,而且是机体炎症反应和免疫应答的重要调节因子,本文报道食管癌患者手术治疗前后血NO/NOS和TNF含量.旨在探讨该项检查在食管癌手术治疗前后的临床价值,现将结果分析如下.
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冬虫夏草多糖的药理学研究进展
虫草多糖(Cordyceps.Polysacchride,CP)是冬虫夏草的主要活性成分之-,具有抗肝纤维化、免疫调节、抗肿瘤、降血糖等多方面的作用.本文对CP的生物学活性及其可能的药理机制进行综述.
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白藜芦醇苷对多器官功能障碍综合征重要脏器功能影响的研究进展
多器官功能障碍综合征 (multiple organ dysfunction syndrome, MODS)是严重感染、创伤、烧伤等急性生理损害 24小时后,两个或两个以上器官同时或序贯性继发功能障碍或衰竭.近年来对 MODS的发病机制有了进一步的认识,但 MODS的防治和预后仍未得到令人满意的结果,因此探讨有效的防治措施具有重要意义.白藜芦醇苷( polydatin,PD)是从多年生草本植物蓼科蓼属-虎杖( Polygonum Cuspidatum Sieb.et Zucc)的根茎叶中提取的第四种单体,具有多种生物学活性.
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转化生长因子β的丝裂原激活蛋白激酶通路与组织器官纤维化
转化生长因子β(TGF-β)是一类具有多种生物学活性的细胞因子,其超家族是一类结构相关的多肽类调控蛋白,由多种细胞产生.TGF-β在参与组织的修复过程中对其它细胞因子起协同或抑制作用,刺激细胞外基质(ECM)的产生,促进ECM的沉积,抑制纤维蛋白溶酶原活化因子的产生,增加纤维蛋白酶原活化因子抑制因子(PAI-1)的生成.对大多数间充质细胞及几乎所有的上皮细胞、T细胞、B细胞及内皮细胞,TGF-β是一种效力很强的生长促进剂.在正常组织内仅有微量的TGF-β,而纤维化组织中的含量明显升高.已有资料证实:TGF-β在组织器官的纤维化中发挥了十分重要的被公认为纤维化形成与发展的启动枢纽,是关键性细胞因子[1].